Actividades de ATPasa mitocondrial y microsomal en tres especies de mangle : Influencia de un gradiente salino natural sobre la actividad de ATPasa en Rhizophora mangle, Avicennia germinans y Laguncuria racemosa

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(1)UNIVERSIDAD NACIONAL AUTONOMA DE MEXICO ESCUELA NACIONAL DE ESTUDIOS PROFESIONALES IZTACALA. ACTIVIDAD DE ATPasa MITOCONDRIAL Y MICROSOMAL EN TRES ESPECIES DE MANGLE INFLUENCIA DE UN GRADIENTE SALINO NATURAL SOBRE LA ACTIVIDAD DE ATPasa EN Rhizophora mangle, Avicennia germinans Y Laguncularia racemosa. Que. T. E. S. s. para. obtener el. Título. de. BIOLOGO. presenta. SERGIO ROSALES LEDEZMA. México, D. F.. 1989.

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(3) A MI MAESTRO SERGIO GONZALEZ MORENO. CON PROFUNDO AGRADECIMIENTO..

(4) El trabajo experimental de esta Tesis, se -llevó a cabo en el laboratorio de Bioquímica de la Unidad de Morfofisiolofía de la Escuela Nacional de Estudios Profesionales Iztacala - U.N.A.M.. Bajo la asesoria y. supervisión del. M. en C. SERGIO GONZALES MORENO..

(5) CONTENIDO:. RESUMEN. INTRODUCCIÓN. .JUSTIFICACIÓN V OBJETIVOS. MATERIAL V MtTODOS. RESULTADOS. ANÁLISIS DE RESULTADOS. DISCUSIÓN V CONCLUSIONES. APtNDICE. AGRACE CIMIENTOS. BIBUOGRAFIA.

(6) INDICE l.. RESUMEN---------------------------------------------- 1. H.. INTRODUCCIÓN ------------------------------------------ -. t.t. GENERALIDADES -- ---------------------------------------- 3. t.2. ANTECEDENTES -- ---------------------------------------- - 4. 2.. EL ATP ------------------------------------------------- 11. 2. t. Fis . t ESTRUCTURA DEL ATP ------------------------------- 13. 3.. FOSFORILACION OXIDATIVA CUn resumen.:>. --- - -------------- 14. 3.t. Fis. 2 DIBUJO ESQUEHATICO DE UNA ffITOCONDRIA ------------ 15. 3.2. Fis . 3 ESQUEHA DE LA ffEffBRANA INTERNA HITOCONDRIAL Y EL. 3. GRADIENTE E. LECTROQUIHICO ---------------------------- 16. 4.. COHPLEJO Fo -. F1. 4. t. PROPIEDADES FUNCIONALES DE LAS SUBUNIDADES DEL COHPLEJO Fo -. F1. ATPasa -------------------------------- 17. ATPasa ----------------------------------------- 18. 4.2. Fis.4 ESQUEHA DE LA ATPasa ffITOCONDRIAL ---------------- 21. 11.. JUSTIFICACIÓN V OBJETIVOS ------------------------------ 22. t.. Fis.5 ZONA DE ESTUDIO. TECOLUTLA - VERACRÚZ ------------ 23. f.t. Fis.6 ESTERO DE TECOLUTLA - VERACRÚZ ------------------- 24. IV.. MATERIAL V M(:TODOS ----------- - ---- -- ------------- -- - -- - 25. t.. TRABAJO DE CAHPO --------------------------- -- ---------- 25. f.t. PROCEDIHIENTO. PARA. EL. AISLAHIENTO. DE. HITOCONDRIAS. VEGETALES ---------------------------------------------- 26 t .2. F1 S· 7. ESQUEHA. GENERAL. QUE. ILUSTRA. LA. HETODOLOGI A. UTILIZADA ------------------ - -- - -------- - - - - ----- - ------ 27.

(7) t. 3. Fi..tJ. 8. ESQUEHA. QUE. ILUSTRA. LAS. CONDICIONES. NECESARIAS. PARA EL AISLAHIENTO DE HITOCONDRIA5 VEGETALES ---------- 28 2.. DETERHINACION DE PROTEINA ------------------------------ 29. 3.. ESTUDIO POLAROGRAFICO DE HITOCONDRIAS DE HOJAS DE HANGLE. 4.. CONDICIONES PARA EL ENSAYO DE LA ACTIVIDAD DE ATPasa --- 29. 5.. SECUENCIA. DE. FORHULAS. ESTADISTICAS. DE. LA. ANOVA. 2. FACTORES Y ANOVA 3 FACTORES ---------------------------- 31. V.. RESULTADOS. t.. ACTIVIDAD Avicennia. DE. germinans. ATPasa (FRAC.. DE. HOJAS. DE. HITOCONDRIAL>. HANGLE EN. DE. FUNCION. DEL TIEHPO --------------------------------------------- 34. t.t. Fi..8.10. ACTIVIDAD. Avicennia. DE. germinans. ATPasa. DE. HOJAS. DE. (FRAC.. HICROSOHALJ. HANGLE EN. DE. FUNCION. DEL TIEHPO --------------------------------------------- 35 2.. Fis. tf. ACTIVIDAD. Rhizophora. mangle. DE. ATPasa. (FRAC.. DE. HOJAS. HITOCONDRI AL). DE. HANGLE. DE. EN FUNCION DEL. TIEHPO ------------------------------------------------- 36 2.f. Fis.. te. ACTIVIDAD. Rhizophora. mangle. DE. ATPasa. (FRAC.. DE. HOJAS. HICROSOHALJ. DE EN. HANGLE FUNCION. DE DEL. TIEHPO 3.. Fi..6. t3. 37. ACTIVIDAD. Avicennia. DE. germinans. ATPasa (FRAC.. DE. HOJAS. DE. HITOCONDRIAL>. HANGLE EN. DE. FUNCION. DE INCREHENTAR LA CNaCtl ------------------------------- 38 3.t. Fi..8.14. ACTIVIDAD. Avicennia. DE. germinans. ATPasa. DE. HOJAS. (FRAC.. HICROSOHALJ. DE. HANGLE EN. DE. FUNCION. DE INCREHENTAR LA [NaCtl ------------------------------- 39.

(8) 4.. Fi6 . f5. ACTIVIDAD. Rhizophora. mangle. DE. ATPasa. <FRAC.. DE. HOJAS. DE. HANGLE. DE. HITOCONDRIAL). EN. FUNCION. DE. INCREHE!fl"AR LA CNaCll --------------------- ------------- 40 4.f. Fi.6.16. ACTIVIDAD. Rhizophora. DE. ATPasa. <FRAC.. mangle. DE. HOJAS. HICROSOHAL). DE EN. HANGLE. DE. FUNCION. DE. INCREHENTAR LA CNaCll ---------------------------------- 41 5.. Fi.6 .. 17. ACTIVIDAD. DE. ATPasa. Laguncularia racemosa <FRAC.. DE. HOJAS. DE. HANGLE. DE. HITOCONDRIAL) EN FUNCION DE. INCREHE!fl"AR LA CNaCl) -------------------------- -------- 42 5. l. Fi.6.. 18. ACTIVIDAD. DE. ATPasa. Laquncularia racemosa <FRAC .. DE. HOJAS. HICROSOHAL). DE. HANGLE. DE. EN FUNCION DE. INCREHE!fl"AR LA CNaCl) ---------------------------------- 43 6.. Fi.6 .. 19 ESTUDIO COHPARATIVO DE LA ACTIVIDAD DE ATPasa. DE HOJAS. h·. DE. racemosa. HANGLE <FRAC .. DE. f!i.. germ1nans. HITOCONDRIAL). ,g.. EN. mangle. FUNCION. Y DE. INCREHENTAR LA [NaCll ---------------------------------- 44 6.f. Fi.6 . 20 ESTUDIO COHPARATIVO DE LA ACTIVIDAD DE HOJAS DE HANGLE DE f!i.. germinans. ATPasa DE. ,g. mangle Y b· racemosa. <FRAC. HICROSOHAL) EN FUNCION DE INCREHE!fl"AR LA CNaCll - 45. 7.. Fi.6 . 21 CURVA PATRON PARA CUANTIFICAR PROTEINA ---------- 46. 8.. Fi.6.22 CURVA PATRON PARA CUANTIFICAR FOSFORO INORGANICO- 47. 9.. Fi.6.23. ACTIVIDAD. Avicennia. DE. germinans. ATPasa <FRAC .. DE. HOJAS. DE. HITOCONDRIAL>. DE INCREHENTAR LA CONCE!fl"RACION . DE NaCl. HANGLE EN. DE. FUNCION. Y DE SACAROSA. <CO!fl"ROL DE TONICIDAD) --------------------------------- 48.

(9) 9.t. Fie.24. ACTIVIDAD. Rhizophor a. mangle. I NCREHENT AR. LA. DE. ATPasa. CFRAC.. DE. HOJA S. DE. HANGLE. DE. HITOCONDRI AL ). EN. FUNCION. DE. CONCENTRACI ON. DE. NaC l. DE. Y. SACAROSA. (CONTROL DE TONICIDAD> --------------- - --------------- - - 49. to .. Fie.25. ACTIVIDAD. Avicennia. DE. gerrninans. ATPasa CFRAC.. DE. HOJAS. DE. HANGLE. HITOCONDRIAL). EN. DE. FUNCION 50. DE INCREHENTAR LAS UNIDADES DE pH 10 . t Fie.26. ACTIVIDAD. Avicennia. DE. qerrninans. ATPasa. DE. HOJAS. CFRAC.. HICROSOHAL>. DE. HANGLE EN. DE. FUNCION. DE INCREHENTAR LAS UNIDADES DE pH ---------------------- 51 ti.. Fie . 27. CONSUHO. DE. HITOCONDRIAS DE HOJAS DE té .. Fíe .. HITOCONDRIAS. POR. HANGLE CTRAZO POLAROGRAFICO) - 52. 28 ESQUEHA COHPARATIVO DE LA ACTIVIDAD DE ATPasa. DE HOJAS b_.. DE. OXIGENO. racemosa. DE. HANGLE CFRAC.. DE. ~-. germinans. HITOCONDRIAL. Y. ,g.. FRAC.. mangle. Y. HICROSOHAL). EN FUNCION DE INCREHENTAR LA [NaClJ - - - - ---- ------------ 53 13.. Fi~ . 29 CUANTIFICACIONDE Na+ Y K+ DE AGUA INTERSTICIAL DE. LA ZONA DE ABUNDANCIA DEL HANGLE. ~-. germinans --------- - 54. 13.I Fie . 30 CUANTIFICACION DE Na+ y K+ DE AGUA INTERSTICIAL DE LA ZONA DE ABUNDANCIA DEL HANGLE g. 14 .. mangle ---------- 55. Fie.31 CUANTIFICACION DE LA [Na+]% DE HOJAS DE HANGLE DE ~-. germinans ------------------------------------------- 56. 14.I Fie.32 CUANTIFICACION DE LA [Na+]% DE HOJAS DE HANGLE DE. g. mangle ---------------------------------------------- 57.

(10) VI.. ANALISIS DE RESULTADOS. f.. TABLA No. CFRAC.. f.. ACTIVIDAD DE ATPasa DE HOJAS DE á- germinans. HITOCONDRIAL> A DOS CONCENTRACIONES DIFERENTES DE. NaCl Y EN DIFERENTE ESTACION DE HUESTREO --------------- 58 t.. f. APLICACION. DEL. ESTADISTICO. ANOVA. REPETICION PARA á- germinans CFRAC. e.. TABLA No.e. CFRAC.. FACTORES. 2. HIT.>.. CON. TABLA No.t -- 59. ACTIVIDAD DE ATPasa DE HOJAS DE. A·. germinans. HICROSOHAL> A DOS éONCENTRACIONES DIFERENTES DE. NaCl Y EN DIFERENTE ESTACION DE HUESTREO --------------e.. f.. APLICACION. DEL. ESTADISTICO. ANOVA. FACTORES. 2. REPETICION PARA á- germinans CFRAC . HICRO>. 3.. TABLA No. 3.. 64. CON. TABLA No.e - 65. ACTIVIDAD DE ATPasa DE HOJAS DE R_.. mangle. CFRAC. HITOCONDRIAL> A DOS CONCENTRACIONES DIFERENTES DE NaCl Y EN DIFERENTE ESTACION DE HUESTREO --------------- 70 3. f. APLICACION. DEL. ESTADISTICO. ANOVA. REPETICION PARA R_.mangle CFRAC . HIT.>. 4.. TABLA No. 4 . CFRA .. 2. FACTORES. TABLA No.3------- 71. ACTIVIDAD DE ATPasa DE HOJAS DE R_.. HICROSOHAL>. CON. mangle. A DOS CONCENTRACIONES DIFERENTES DE. NaCl Y EN DIFERENTE ESTACION DE HUESTREO --------------- 76 4.. 5.. f. APLICACION. 2. FACTORES. REPETICION PARAR_. mangle CFRAC. HICRO>.. TABLA No.4. TABLA No.5.. DEL. ESTADISTICO. ANOVA. CON 77. ESQUEHA COHPARATIVO QUE HUETRA LA ACTIVIDAD. DE ATPasa DE á.germinans, g.mangle. y. h·. racemosa CFRAC.. HIT.> EN FUNCION DE INCREHENTAR LA [NaCll Y EN DIFERENTE ESTACION DE HUESTREO ----------------------------------- 82.

(11) 5.1. APLICACION DEL ANALISI S DE VARIANZA PARA 3 FACTORES CON REPETICION CTABLA No . 5> ----- - -------------------------- 83. 6.. TABLA No.6 . ESQUEHA COHPARATIVO QUE HUETRA LA ACTIVIDAD DE ATPasa DE HICRO . >. EN. ~ . germinans,. g . mangle. FUNCI ON. INCREHENTAR. DE. y~-. racemosa CFRAC.. LA. fNaCLJ. Y. EN. DIFERENTE ESTACION DE HUESTREO ------------------------- 84 6. 1. APLICACION DEL ANALISIS DE VARIANZA PARA 3 FACTORES CON REPETICION CTABLA No.6> -------------------------------- 86. 7.. PROBLEHAS QUE SE TUVIERON DURANTE EL AISLAHIENTO DE LAS HITCCONDRIAS DE HOJAS DEL HANGLE. ~-. racemosa .. ---------- 86. VI.. DISCUSIÓN V CONCLUSIONES ------------------------------- 88. VW. APtNDICE -----------------------------------------------94. IX.. AGRADECIMIENTOS ------------------------------ - --------- 102. X.. BIBLIOGRAFIA ----------- - ------------------------------- 103.

(12) ABREVIA TURAS.

(13) ADP -. Di:fosfato. ATP -. Trifosfato. ATPasa -. Adenosina.. de. Adenosina.. ATPhidrolasa .. ATPsistetasa.. Control. C. R. CaCl 2 -. trifosfatasa.. Cloruro. Respiratorio . de. Calcio.. Calor1a .. -. Cisteina.. Cys DCCD -. Diciclo-hexilcarbodimida.. EDTA -. Etilendiaminotetraaceta to.. kcal. Adenos1n. Albumina de suero bobino .. BSA -. Cal. de. -. Kilocalor1a . Kilodal tones.. kDa -. Hidroxido. E:OH -. PVP -. de. potasio.. Poli vinilpirrolidona . Potasio.. E:+ -. Ha+ - Sodio.. HaCl. -. OSCP -. Cloruro Prote1na. Pi -Fosforo TCA -. Tris -. Otras. Acido. de. Sodio.. que. confiere. sensibilidad. a. la. oligomicina .. inorganico. tricloro. acetico .. Tris(hidroximetil)aminometano. abreviaturas. explicacibn.. aparecen. en. el. texto. con. su. respect1 va.

(14) • RESUMEN.

(15) Entre. las. especies. vegetales. dominantes. del. manglar. encuentran Rh1zoph o ra mangle, Avicennia germ1nans y racem osa.. Las. gr a~~ e n te. salino. largo. del. más. productivos. del. medio Son. del. actividad. halÓfi tas. es. en. del. de. que. contínuos. trabajo. mas de de. y. Tecolutla,. se. reportes. adición. ,. litoral. un a. lo. capacidad. de. conjunto. con. los. ecosistemas. tipo. de. a. plantas. gUcÓfitas. concentración. y. de. sales. la. en. la. actividad. de. )il~-_g~~c;5mocen. prácticamente. adaptación. tres en. tierra. el. de crecimiento.. de. de. ATPasa. las. a. y. de. especies. manglar. firme. de. en. lo. un. largo. los los Este. fracción halÓfi tas gradiente. del. estero. Veracrúz .. de. raíces. NaCl. reacc1on. enzimática. especies. glicÓf itas. especies. de. otro. y. en. y. uno. plasmalema. y. distribuidas. cuali ta ti vas en. de. gran. salinidad. implicados. explicar. y. firme. en. desarrollan.. resultados de Horovitz. microsomales. .. de del. mi tocondrial. salinidad del. diferencia s. La. de. abundantes. Los. una. medio ambiente salino natural. trata. microsomal. distribuÍdas. tierra. constituyen. ATPasa. m~~-~nismos . bioquímicos. su. de. Laguncularia. planeta .. ést as. los. a. Poseen. 6) .. dependiente. escasos. mangles a. litoral. m~nglar. del. ~~-Óf. llas. plantas. (Fig.. cambios. especies. La y. a. son. natural. est e ro. adaptación otras. tres. se. halÓfitas. en el. la de. que. Waisel. actividad dos. ~ ndican. (31). de. ATPasa. glicÓfitas. y. medio de crecimiento y. estimuló en. y. la. actividad. contraste fue. con. inhibÍda.. de la. que. en dos. existen. fracciones halÓfitas.. en la ¡nezcla de ATPasa ATPasa. en de. las las.

(16) Se. m1d1erón. microsomal. de. Laguncularia. (NaCl). las. actividades. Avicennia. en. el. medio. actividades. de. la. naturalmente. en. medios. Tecolutla Se. Los. los. resultados. especies. actividad. una. su. nos. de. de. la. la. y. co ncentración. misma. de. sodio. ' compararon. se. y. una. fracción. especie. diferentes. (35,. función. importante. salinos. mecanismo. y. que. especies. que. en. de. el. las. creciendo estero. ATPasa. en. en. de. de. dos. se. una. diferencias. mi tocondrial. y. observan sÓla. entre. diferencias. especie. en. de. de. función. estero.. que la. la. básico glicÓfitas. actividad. adaptación. pos_!12_! ement_'.". 2. existen. microsomal. del. sugirió. bioquímico en. actividad. también. enzíma. dentro 36). de. muestran. mangle;. misma. localización. salinidad. mangle. un ciclo anual.. Jennings. medios. de. salinidad. cambios. act1 vi dad de ATPasa en. de. de. de. y. Rhizophora. incubación. enzíma. mitocondrial. Veracrúz.. muestran. tres. función. de. especies de mangle en. las. ATPasa. germ1nans,. en. racemosa. de. de. pueda. de. de. las. halÓfitas.. tiene. plantas. participar. resistencia y. ATPasa. a. en. un. contra. la.

(17) INTRODUCCION.

(18) Los el. manglares s o n. ci nturón. mat o rrales l os. tropical,. anfÍbios ,. margenes. f o rman. en. Es. del los. un. faunÍstica,. en. suelos ,. su. de. formando. que. materia. del. y. estuari os. los. (1 ,. en. Tecolutla. -. racemosa. de. de. presentan 11 torales,. en. a. interior. desarrollan hidro-s_alino mecanismos. su. ciclo. canales. que. continua. energia '. de. y. de. síntesis. y. vida. que. cambiante,. reprodu cci ó n. y. cuatro. germ.inans,. Se ha. la. especies. de. Laguncular.ia. observado que los mangles. a. largo lo , mas próxima y. Laguncular.ia. playa,. por. lo. de. los. al. mar. Conocar pus. general. en. la. 68).. de. los. litorales. normalmente. (hidrohalÓfi tas). bioquím ico s. particular en el estero. Rh.izopl20ra. de 58,. de. en. y. tÍpica. propios. fluctuante. ecológico. competencia,. (5 3 ,. árboles. verdes. floristica. transformación. Av .icenn.ia. Av.icenn.ia,. indicada. Estos. sistema. al. de. estructura. pueden encontrar. erectus.. encon trandose. más. secuencia. mangle ,. que. siempre. sistema. fijación. dis tr ibuciÓn. una. tanto. crecen. se. Conocar pus. y. tonos. dilatados. y. (11) .. Veracrúz,. mangle:Rh.izophora. sus. su. Dentro de las costas mexicanas de. bosques. 13).. procesos. capa c idad. con. complicado. dinámico. orgánic;:a. inmensos. adornan. oceano. sistema. en. comunidades vegetales extendidas por todo. les. en. gracias. permiten. mejorando. un. asi. sobrevi vencia. tropicales. medio a. una. adaptarse. sus (8,. ambiente serie a. este. oportunidades 18,. 20,. 42,. de. de. 54).. En varias revisiones se ha observado que bajo condiciones de salinidad,. en. un. rango. de. 200. 3. a. 500. mM. de. NaCl ,. algunas.

(19) halÓfi tas. terre s tres. numularia. asi. tienden. a. mayor. medida. este. a. crecer. rango. que. (24,. También. se. que. vegetales. 21,. 56,. 62,. y. 25,. 64,. que. (NaCl). sales. sobre. involucradas. se. _e l. Av icen n la. es. crecimiento. incrementa. 28,. 67,. 31,. 70),. de. sodio. la. actividad. en. la. dentro. 34. energ1a. 40,. 42. en. de. de. mangles. ciertas de. los. 9,. 15,. 16,. 49,. 52,. 54,. 55,. información. es. 48,. la. y. 7,. (3. 45,. calcio. captación,. la. en. ,. de. aunque. potasio ,. adaptación. ambiente),. medio u tilizaciÓn. 27 ,. 66,. las. influencia. su. (a. 22,. salinidad. con oce. están. almacenamiento 20,. la. ma,n_gJ,_~--. de , mas,. el. Atri p le x. 26).. tienen. magnesio enzimas. género , Óptimamente, aun como. y. mar1t i ma. Suaeda. escasa. De. ésta. plasmalema. de. dependiente éstas 25, 66,. información. del. especies. 27,. 28,. 31,. 70).. Los. resultados diferencias. fracciones (Phaseolus monoica. la. efecto medio. y. de. de. 43. Atriplex. la. se. Zea. h:Ilimus). estimuló. concen traciÓn. crecimiento. y. en. actividad y. sales. 7,. 45,. cualitativas. y. de. (3. Horovitz. microsomales. enzima de. 40,. la. glicÓfitas. desarrollan. vulgaris. que. concentracibn. y. 34. 67,. existen. de. se. sabe. plantas. en tipo. se. 48,. y. 9,. 49,. Waisel. 15,. (31). medio. 16,. 54,. 20,. 55,. nos. en. dos. y. mays. 56,. es. en. que. 21,. 22,. 62,. 64,. indican. la actividad de , raices de dos. de. ATPasa. ha1Óf1tas del. 52,. de. ATPasa. que en. glicÓfitas. halÓfitas. (Suaeda. ya que en el primer caso la actividad y. en. de. el. cloruro. la· mezcla. 4. segundo de de. se. inhibió. por. sodio (NaCl) en el , reacc1on enzimáti c a ..

(20) diferente,. manera. De. VaKhmistrov,. Til<haya. los. Natalia. y. obtenidos. resulta dos Mishustina. (66),. que. por. habiendo. comparado las actividades de ATPasa en fracciones microsomales de ralees una. de. una. planta. glicÓfita. casos. la. halÓfita. (Hordeum. actividad. vulgare. de. la. incrementar. la. reacción. enzimática.. Porath. PoljaKoff. oxida ti va. en. raices. dos. de. sales(. tipos. de. de. sodio; en tanto que. la. fosforilaciÓn. de. Li vne. oxida ti va. en. que. estimuló y/o. en. por. y. L.). ambos. efecto. de. mezcla. de. KCl. en. la. que. la. fosforilaciÓn. (una. glicÓfi ta) se inhibe con , siendo mas sensible al cloruro. ),. Levin. y. strobi.laceum. indican. reportan. (51!¡-,. v i.tro. se. NaCl. chicharo. In. nos. L.). enzíma. concentración. y. (Halocnemun. hojas. observarón. (50). de. chicharo. estimulada ef~cto. por. incrementar la concentración de cloruro de sodio en el. de. medio de. crecimiento. Los efecto los. resultados de Porath. de. la. niveles. sol u ble. estimulaciÓn. proceso. de. ADP,. la. inhibición podr1a. y. la. sobre. la. actividad. microsomal). muestran en. (NaCl). ATP. (fracción. chicha ro. como. salinidad. Poljal<off-Mayber (51!),. y. y. actividad de. también. la. ATPasa. en en. fosforilaciÓn. estar. fosforilaciÓn de. los. 5. oxida ti va, en. en. ni veles. ambas. por. fracción. raices de. fracciones,. oxida ti va,. influenciado. NAD.. ATPasa. mi tocondrial. dismimuciÓn. acerca del. los. de ATP, as1. aunque. el. niveles. de.

(21) Al parecer la a ctividad de ATPas a depende de mu c h os factore s incluyendo. el. Vakmistrov, algunas. ambiente. Kuiper. y. LászlÓ. medio. Dominy. y. (66). glicÓfitas). menos. uno. de. de. acuerdo. et-al. exhiben sus. un. (16),. alto. 5,. 6),. A TPasa. (de. (4,. las. grado. de. actividad. sodio y. muestran una menor actividad cuando ambos si ti os están. punto. la. información. no. 66,. es. 67,. ocupado. (67),. al. (20,. está. Waisel. cuando. o.c;;_u p_p. dos .P-2.!:_ ~~n~ __!' otas ~ o. sitios. a. Pool e. y. Briskin. 45),. et-al. plantas. iÓnico;. 70),. precisa,. sin. por. embargo. mensionándose. el. iÓn. en. este. que. se. requieren de mayores estudios. Jenning una. (35,. función. superiores. halÓfi tas. medios en. son. la. E.. LászlÓ, Lindberg.. y. y S. actividad. de. salinidad. en. Algunos de. un. datos. participación. membrana en la. Natalia. y. Hodges. (21,. P.. (45).,. Wingstrand,. mecanismo. plantas. ATPasa. G.. y. las. las. entre. tiene. plantas. diferencias glicÓfitas. y. Skou,. J.. (35,36) .. Mishutina Kylin. 22) . ,. Kylin Lindberg,. (66).,. y. Gee. (39).,. y. Han son. (27).,. S.. (70). postulan. potasio por una ATPasa activada porbásico. de. resistencia. con tra. la. superiores.. anteriormente. señalados. de. mi tocondriales. procesos. apoyan. resistencia de estos mangles a. natural que impera y. ATPasa. de. que. y. cuan ti ta ti vas. que el transporte de sodio y K +-es. actividad. adaptación. salinos. Kuiper,. (49).,. la. la. ambientes. Tinkhaya. Fisher. (62).,. que. en. unicamente. Vakhimistrov,. c.. sugirió. importante. a. encontradas. 36),. fluctua en el estero.. 6. y. la. sugerencia. asociados. a. la salinidad (NaCl).

(22) De sabe. que. (NaCl) y. las. especies. tienen. dentro. que. del. es. la. marginales. en. los. aproximadamente entre. 4. salinidad. agua. Además de. sales. los. y. los a. estudios. la. mangles,. estas. y. o. de. de. sea. mar). exclusiva en. y. (8,. 10,. en. base. sido. adáficas. de. ambientes donde. (NaCl),. sal y. 2.5. a. la. los. veces. la. 11).. morfofisiolÓgicas han. y. áreas. 1.2. que. tolerante. de. entre. Scholander. halÓfitas. Rhizophora. climáticas. o. se. salinidad. ' mas. concentraciones 9%. de. salinidad. la. a. género. el. trabajo. especies. toleran tes. diferencias. éstas. presente bruscos. tres. la t1 t udinales. altas. del. el. cambios. dominante. limites. "normal". en. condiciones. a. especie. contienen. suelos. a. Av icennia. mangles. rigurosas,. De. menos. 10).. estos. entre. estudian. sobrevivir. son. (8,. se. manglar.. Laguncularia. Av icennia. que. que. secreción. existen. clasificadas. entre. en. dos. grupos: un. grupo secretor de sales en el cual se pueden citar al género se. incluye. a. un. y. Av icennia. grupo. no a. y. Rhizophora. secretor otros. de. sales. géneros. en. más. el (59,. cual 60,. 61).. Según los datos de Scholander dentro del grupo secretor de sales. se. reportan. altas. aproximadamente 30 a. presiones. negativas. en. el. xilema. de. 60 ATM. La concentración salina dentro del. grupo no secretor de sales es de aproximadamente 10 veces menos en. comparación Asl. en. la. habita ts. para. con. el. tolerancia. grupo. secretor.. de. Av icennia. hiper salinos,. Rhizophora. y. que. • serian. Laguncularia. 7. (8,. le. permite. sobrevivir. potencialmente 59,. 60,. 61).. dañinos.

(23) Por otra parte se presupone generalmente que el primer paso de. absorción. acumulación paso de. es las. el. de. sal. o. iones. vi vas. tres. hacia. las. 2.-. células. de. la s. radicales. iÓnes. hacia. hacia. el. xi lema. (12,. posibles. de las. para. ra1z '. la. el. la. segund o. dentro 41,. es. un. Y. a. travé s. 57).. movimiento. de. del. dentro. hacia. raices. iÓnes. xilema. y. hojas.. Movimiento de. 1.-. través. de. caminos. posteriormente. a. radical y. superficie. la. sales. en. movimiento. células. Hay desde. de. Movimiento. vacuola en. a. través. vacuola.. del. simplasto. rodeando. las. vacuolas. Movimiento. 3.-. entre. el. a. espacio. combinación Una. vez. epidérmica deben que de. los. Un iÓnes. iones. según. los. tres. xilema. para. al. los. organos. iÓnes. al. primer en. funcionando por. los. lo. paso. estos. ser. en. enzimas,. como. vertederos. de. caminos pelo. se. hacia. en. nivel. es. el. la. el. movimiento. (19,. 60).. Sin. embargo. algunas. los mangles secretores de sal pueden absorber del. 8. señalados, las. hojas,. asimilación. (57).. acumulación. la. sal. salino. mangles dentro del grupo no secretores de sal) y para. célula. de. probablemente. para. contenido. o. metabolismo. etc /. ra1z),. desviación. la. alguna. 57).. radicál. efectúa. sal. o. (41,. anteriormente. la. bajo. (movimiento. paredes),. moléculas. evadir. de. las. gl ucoproteinas. (a. plantas. al. apoplasto. transportados. donde. vacuolas. en. tres. caminos. las. menos. de. entran. vegetales. para. del. libre. incorporarlos. (nutrientes,. foliar. de. que. llegar. son. través. (sales). (como. los. no como camino plantas 10. al. 20. como t.. de.

(24) NaCl. presente. -·-. el. medio. excretarlo. y. natural (no. pasivo. uno. mec a nismos: (metabólico). en. por. de. crecimiento y. metabólico). "glandulas. por. uno. salinas". de. dos. activo. las. hojas. --.. ....... (lH, 60) ) '.;. La puede. hi_persalinidad estar. asociado. sin tesis. de. A TP,. 51,. 57,. 66,. 54,. utilizada xilema,. para. que. utilizada. a. a. negativo. una. este. evitar. un. as1. una. tonicidad. 26,. 35,. 41,. 26,. Ll1,. En. base. (mi tocondrial (género en. de. por. género. el. a. lo. energ1"!' de. el. de nivel. 50,. puede. solutos. potencial. energia. ser. en. osmótico. puede. de. el. ser. prolina,. la. quiza en el citoplasma. y. los. 10,. del. potencial. iones. sodio. celular. mantener. y. 10,. (8,. osmótico. 11,. 12,. 24,. para. el. 67).. puede. ser. vegetal;. esto. cloruro. de. anteri o r. además. explica sodio. se. esp_era. microsomal). y/o. secretor. de. sales. y. respectiva mente ; más. 31,. (8,. utilizada. como. en. el. crecimiento. algunas. halÓfi tas. (8,. 57).. Laguncularia. sales). 57,. A TP. adicional. estimulado. incremento. a. ATPasa. concentraciones. un. que. may o r. tal. vacuolas. crónico. respiratorios,. progresivo. las. tóxicos. tensor. esta. incrementar. altas. adecuada 5Ll,. de. también. de. da. un. gastos. resultado. foliar;. 51,. es. actividad. pueden. efectos. síntesis. crecimiento. 2Ll,. los. suelo. aumento. acumular en. sin. es. ves. sintesis. negativo,. Tal. menor. resulta do. 36,. el. mayores. como. nivel. para. a. 67),. su. cual se pue_de celular;. en. y. sea. más. h1droha1Óf1 to,. que en. 9. la .. actividad. menor. en. halotoleran te). Rhizophora ya. que. se. (género considera. tanto. que. no a. a. ATPasa. Avicennia. y. ' mas. alta. secretor Av icennia. de el. Laguncularia.

(25) Rhí.zo_p~hora. y. 26,. 59,. 60 ,. c:lel. se. microsomal). grac:liente. salino. estero. aquella. <le. especie. una. menor. que. se. consideran. espera de. una. "menos". condiciones. de. de. la. fÍsico-quÍmicos. que. la. sÓla. especie. natural. halÓfitas. que. actividad. es. que. una. por. su. (8,. 10,. 2'!,. mangle. (Fig.. ubicación. 6),. (mi tocondrial. en. sea. concentración. de. mayor. actividad. ATPasa. enzima. sean sea. bajas. e. al ta. se. N+a+ );. cuando. una. mayor. en. los. al. litoral en. registre es. decir,. cuando. inversamente. menor. registre. el. más. edafolÓgica. de. relación. en. (menor. salinidad. se. de. ATPasa. característico. Tecol u tla-Veracrúz. salinic:lac:l. espera. •actividad. le. 61).. También y /o. se. las. que. la. parámetros. salinidac:l. (mayor. [Na+) ). Por ultimo se espera que la actividad ATPasa mi tocondrial microsomal. (frac.. función. un incremento de NaCl en el. de. de. reacción. soluble). de. enzimática).. 10. hojas. de. mangle. disminuya. medio de ensayo. y. en. (mezcla.

(26) EL ATP La. energia. energ1a. puede. tomar. muchas. calor1f lea,. energ1a. energ1a. atomica,. osmot1ca,. formas.. electr lea, etc.,. Existe. energia. energ1a. pero. para. l um1nosa,. qui mica, que. energ1a. una. maquina. funcione se requiere que se le proporcione un determinado tipo d e Por. energ1a. disel'lados. ejemplo. para. qu1micos. de. utilizar. las. solar),. a. automoviles la. moleculas. ese automovil no la. los. energia que. de. almacenada. forman. la. seres. podemos. epoca. en. los. gasolina;. el. estan enlaces. motor. de. puede utilizar otro tipo de energ1a (por ejemplo. menos. que. se. modifiquen. drasticamente. de conversion de la energ1a qu1mica en los. nuestra. vi vos. somos. utilizar. un. semejantes. tipo. a. sus. sistemas. mecanica. En este sentido. una. particular de. maquina,. ya. energ1a. Solo. que. solo. hasta. hace. unas cuantas decadas se encontro cual era la forma que la energia deberia. tomar. para. que. sistemas. moleculares. de. realizar. todos. sus. (endergonicos),. los. dos. qu1micas. uniones. universalmente o. adenos1n El. los. seres. aceptada. seres. vi vos.. procesos, vivos que. conocida. se. como. Ahora. que. utilizan. utilizada. y. que. requieren. la. energ1a. encuentran A TP. sabemos. por. los para. energ1a. almacenada. en. una. (tri fosfato. de. en. molecula adenosina. trifosfato).. primer. obtuvieron. fuera. indicio. FisKe. y. de. la. Subbarow. existencia (23). al. de. esta. encontrar. molecula que. lo. ciertos. compuestos nitrogenados en homogeneizados de musculo precipitaban al. al'ladir calcio. detalle, formado. FisKe . y por. una. ca2+.. Al analizar estos compuestos con mucho mas. Subbarow adenina,. encontrarón un. que. carbohidrato. 11. uno y. de. tres. ellos. estaba. moleculas. de.

(27) fosfato ¡ mas adelante se establec ib la estru ct ura del ATP que se muestra. en. la. descubrimientos y. y. B,. se B. peculiaridades, y una. reaccibn. 1.. En. encontro. que. y. del. figura. y. los. afios. las. siguientes. uniones. entre. el. a. fosfato. presentan. ATP. est os. ciertas. que cuando estas uniones se rompen por medio de. hidrol1 tica,. se. desprende. una. cantidad. de. energ1a. mayor que cuando se rompe una un ion comun del fosfato con compuesto. a. un. organico .. De los cambios energéticos que ocurren durante la hidrblisis de. determinados. descrito. por. compuestos. Fritz. Después. energ1a.. Lipmann de. laboratorios. del. reacciones. o. procesos. energético,. la. uniones y. del. se. requiere. para. energ1a. evidente ,. llevarlos. entre. una forma. utiliza. hizo. u. (1q.,. los. otra, al. impulzar 23).. 12. uniones. -elegantemente. de. alta. observaciones. intracelulares para. concepto. de. (23). se. pirofosfato. ATP. En. energ1a que. de. el. numerosas. mundo,. energ1a. surgio. que a. en. que. en. requieren cabo. a. romperse. estas. cualquier. y. proceso. B. baja. muchos aquellas. un. proviene. fosfatos. y. aporte de o. las B. uniones,. y. su. intracelular.

(28) Fig.. fosfatos a se. liberan. éstas. Estructura. 1.. y. ~. del. unas. 7. del. ATP.. Cuando. la. unión. entre. los. ATP se rompe mediante una acción hidrolitica, 000. calorias.. En. la. terminologia. se llaman "uniones de alta energia".. bioquimica,.

(29) o t:;; i1: (j). o. lJ..... ~ cq_. (\J. ,. :r: (.,) -----:r:. o f. ?P 1. 1. O=o...-0. f. o. 1. 0=~-0 1. o1. >o O=a....-0 1. o. '. :e. o ::z::. o. .. o-:>. u...·-.

(30) En. la. mitocondria,. lo s. di versos. sus. electrones a. los. transfiere. energía para. sustratos. al. la. el. fosforilaciÓn. de. acción. hidrógeno de. molecular,. transporte. oxidativa. de. electrones,. reduciendolos de. de. eliminados. deshidrogenasa·s ,. transportadora. oxígeno en. átomos. por. la cadena. liberada. la. los. a. electrones. ADP. a. ATP,. de. donan la. cua l. agua .. La. es. utilizada. proceso. que. se. de. la. verifica en la membrana interna de la mitocondria. equivalentes. Los. deshidrogenaciÓn deshidrogenasa,. del. NADH,. que. son. los. ci tocromo. al. sucesivamente. requiere. 4. por. disminución. partir. de. energía. tres. respiratoria ¡. ADP. especificas. creación la. de. membrana. conduce ATPasa. a. la. un. transporte. antimicina libre. del. de. A. La. :fos:forila c iÓn. transporte ionÓ:foros. de. la. la. como. la. por de. matriz. de el. H+ , que. ATP. mediante. mitocondrial.. 14. oxida ti va. generado de la. ~. puede La. en. ser gran. la. es. cadena ATP. puede. por. oxida ti va. transporte. el. electrones. valinomicina.. es. a~. oxidasa. generar. electrones. :fos:forilaciÓn. gradiente. :formación. de. de. de. vez ,. citocromo. cianuro .. ' capaz. su. reducir. la energía. Pi.. a. citocromo. transporte. es. prostétic o.. electrones. y. NADH. transportados. al. para. ellos. interna. Fo-q en. La. de. por. quimio-osmÓtica. cobre .. uno. y. del o. llegar. H. la. que,. son. para. sitios , que conservan. cada. desacoplada. El. O.. rotenona,. de. por. He. dos. c. cuatro. y. ubiquinona. electrones. c1 y. a. grupo. como. la. contiene. electrones. completamente a. retenida. que. transferidos. a. Lo s. citocromo. oxidasa). inhibido. b.. provenientes. FMN. transferidos. por. (ci tocromo. son. contiene. Posteriormente dona. reductores. a. a ser. agentes La. teoría. propone. la. traves. de. electrones,. lo. participación. cual de. la.

(31) Fig .. La fosforilación oxidativa acopla la liberación de. C!.. energía procedente de moléculas derivadas de hidratos de carbono y de lípidos con la síntesis de ATP.. En las células nucleadas,. fosforilación oxidativa tiene lugar sólo en las mitocondrias. electrones. y. los. protones. procedentes. de. diversos. son conducidos através de la cadena respiratoria de . reacciones cierta forma. enzimáticas es. reducido a. hasta agua.. 15. alcanzar. al. por. la Los. sustratos una serie. oxigeno,. que. de.

(32) Membrana. ..... -... .... .. •. •. ..' .' ' .. •. =·: Mem b r él na lntc.>rna. MUO CON ORI A. '. 1. • • ". #,. ~. 9./ ! ;. F.

(33) F'ig.. 3.. Durante el. tran:sporte. de. electrone:s. en. la. cadena. respiratoria se inician mecanismos que inducen la tranferencia de +. H. del. lado interno de las mi tocondr as hacia el De. intermembro.no.L).. oxidati vos. se. electroquimico. +. ATPasa de H. esta. forma. transforman. en. ext.er i or C••po.ci.o. la. energía. de. los. procesos. la. energia. de. un. gradiente. A esta última la capta la llamada ATPsintetasa o. y la utiliza para promover la unión entre el fosfato. inorgánico CPi) y ADP, y formar ATP.. 16.

(34)

(35) Fo - Ji - ATPasa Este. complejo. hidrófoba. enzimático. membranal,. interacción hidrofÍlica,. fácilmente. mitocondrial,. formado. denominada. Fo,. desprendible. denominada. El. F1 .. por. por. ser. de. la. una el. por. y. oligom1c1na,. 1nh1b1dor. del. está. sitio. F1 -Fo. de. parte. una. membrana. complejo. parte. interna. cataliza. la. reacción:. siguiente ADP. Pi. +. 4.µ.H. +. +. ATP. --------------------). H 2O. +. Fi -Fo La. F1. -ATPasa,. purificada. a. mam1feros. as1. E.. coli. y. molecular. partir. es. a2. B2. sexta. como. 3-4. de. X. las las. 1Ó. subunidad,. la. de. casi. no. varia y. Kdaltones. está. ª•. B,. disocia. de. El complejo pesos un. las. y,. por. motivo a2. 5. La. €.. son:. del. peso. especies. ó,. mamíferos. fácilmente. de. como. El. formada. ésta subunidad es conocida como el inh1b1dor de la tiene un. tejidos. toda v1a. es. sido. bacterias. entre. alternativas. mitocondrias. ha. Neurospora .. y. denominadas. se. diferentes. cloroplastos,. principales. cual. hidrofÍlica,. de. subunidades. En. -2€2.. y1-2ó1. parte. levadura. que. diferentes,. pero. la. también. enzima. de. estequiometria controversia,. es,. mitocondrias. hongos. ésta. subunidades. de. como. de. de. examinadas,. esto. de y. B3. existe. una. complejo. F1 ;. F1. -ATPasa. y. peso molecular de aproximadamente 10 000 daltones. sector F 11,. membrana! está. moleculares proteolÍpido. subunidades. es. hidrofÍlico. formado. de de 1:2.. 19. kDa, 7 .3. por. tres. 13.5. :KDA. kDA.. La. 4:3.4 .. 17. del. complejo. subunidades, y. una. ATPasa, que. subunidad. estequeometria. el. tienen N. pequena, de. estas.

(36) Entre. el. hidrofÍlico unión,. F. \Fig.. formado. formada al. sector. membranal. 3,. por. 4),. se. dos. encuentra. péptido. de. es. ATPasa,. por. (oligomycin. sen si ti vi ty. F1 al. sector. 21 !<Da. al. inhibidor. conferring. acoplamiento 6, que pesa 8KDa. distintas.. siglas. sus. el. y. puente. pesa. sensibilidad. conocido. Fo. un. subunidades. por 190 aminoácidos, que. sistema. hidrófobo. en. y. proteico. Una que. confiere. oligimicina.. y. de. proteína, le. inglés. protein),. sector. OSCP. como. el. Este. factor. de. se requiere para la unión de la. y. Fo.. Propiedades :funcionales de las subunidades del complejo Fo-F 1 -ATPasa El. conocimiento. que. se. tiene. del. papel. fisiológico. de. las. distintas subunidades del complejo FoF1 -ATPasa, ha sido obtenido gracias ATP, al. a. los. la. utilización. cuales. uso. de. no. de. pueden. reactivos. análogos. ser. transformados. marcados,. que. distintas regiones del complejo e. que se. Utilizando. un. derivado. se. la. subunidad. une. demostró. localizado Con se la. a. ha. que. el. es. sitio. reactivos. logrado. subunidad. conforman,. en. que. B. son. y. los. fijan. de. la. la. un. de. residuos. de ATP.. 18. y. enzimáticamente,. y. firmemente. a. las. del. ATP,. en. donde. el. Dial-ATP,. del. complejo,. se. encuentra. enzima. grupos. esquema. esenciales. ADP. porción 1 F. subunidad. de. del. inhiben su actividad .. B. modificadores. establecer. se. dialdehÍdico. esta. activo. estructurales. para. del de la. químicos sitio. :funcionales. ca talÍ tico. aminoácidos síntesis. e. que. de lo. hidrólisis.

(37) De. esta. aminoácido grupo del. -NH 3 +de. la. glutámico. o. La ADP. a. existen sirven. Con a. partir. región. y. también. estudios. del. cuando. probablemente. síntesis. entre El de. de. de. de. la. constituida molecular mediante. ATP. la. el. F. 1a. la. a. 4. marcaje. de. de. y. se. gl u támico. que. fijación. del. a. grupos fija se. a. a y. cabo. como. Ft -Fo. la. valvula. en consecuencia se ATP.. la. a. que. que. como. La. través. cierre. subunidad. de. apertura un. cambios del. trabajo. canal.. conjunto. B complejo,. ella.. el. Fo,. funciona. La. del. carboxilo,. las. localizado. tunel del. ha. t. C-DCCDJ.. tunel. de. peso. obtenida la. Fo. con. reactivo,. completamente. hacia. el. está. de. Este. de. servir para. sido. subunidades 4. bloquea. residuo. 19. como. de. proteolÍpido. estequiometr1a de. además. estructura. radiactiva. encuentra. complejo. establecido. formando. subunidades. un. ha. del. (y. membrana,. isotópico. subunidad. ATP.. se fuguen. y. del. del. H. a. estructura. nucleÓtidos,. sirve. está. lleva. la. 1-ATPasa. el. esta. 7000;. diciclo-hexilcarbodimida modificador. el. probablemente. en. F. responsable,. de 6. se. la. se. través. por de. del. tirosina,. la. en. reconstrucción. se. producir. que. sin tesis. no. membranal. H+ a. la. en. estos. aisladas,. subunidades. sector. unión. paso. del. las. de. semejantes. para. componente. conformacionales, de La. guanidino. carboxilo,. conocer. de. subunidades. energía). es. grupos. moléculas. selladora para impedir que los pierda. grupo. intervienen. las. regulación. en. ó. dos. y. el. aromática. fijación. de. la. de. subunidad. de. permitió. base. que. enzima ' .. sitios para. la. aspártico,. la. ATP,. sabe. lisina. utilización y. se. arginina,. substrato. a. manera. el. canal. aminoácido la. mitad. del. canal..

(38) La. oligomicina,. también impide. de. acCiÓn. tiene. su. sitio. paso. de +H. por. de. la. fosfor ilación en. el. fijarse. a. una. que se localiza aproximadamente a. 6. residuos. sitio. el. inhib1dor. de. fijación. del. proteolÍpido. región de. oxida ti va,. muy. e. hidrófoba,. aminoácidos del. CDDC .. Finalmente de todas estas observaciones lo que emerge es una imagen. muy. funcionar. compleja. entre. propÓcito. de. gradiente. a. las. de dos. un. sistema. fases. conservar. y. de. una. proteico. membrana,. transformar. ' . qu1m1ca.. 20. que. la. tiene. con. energ1a '. el. que Único. de. un.

(39) Fig. una. de. 4 . Esquema de la ATPasa mitocondrial .. las. ideas. de. cómo. estan. colocadas. las. El dibujo ilustra subunidades. que. componen a la enzima responzable de formar ATP con la energia del gradiente electroquimico.. La función de las distintas subunidades. se describe en el texto.. I. es la proteina inhibidora y que actúa. como regulador de la función de la enzima .. 21.

(40) o. 1.L. ttJ. 1 (J. .-..;.----. ------.

(41) JUSTIFI CACI ON. YOBJETIVOS.

(42) Todo. lo. anteri or. sabiendo que a. se. tradu ce. en. términos. lo largo de un manglar y. generales,. y. en particular dentro d e. un estero se propicia un gradiente de salinidad natural (Fig. 5 y Fig.. 6),. considerando. y. los. litorales. en. medio. tropicales,. distribución. en. propician. cuales 1.-. en. de. vista. esa. de a. en. éste. y. se. su. al. desconocimiento. son. las. así. una. ---· -. medio,. su. natural,. ante. los. como. principales los. poseer. --'l.~. así. adaptación. plantean. vida. salino. de. de. de. mismo. gradiente. de. propios. ciclo. el. (ha!Óf itas),. un. mecanismos. trabajo. Evaluar. desarrollan. productividad,. salinidad;. árboles. fotosistética ;. el. elevada. los. la. de. son. adaptación. prod ucti Vidad y. mangles. mangles. cuales. característica. información los. los. fl uct uan te. facultad. elevada. perspectiva que. los. hidrosalino. extraordinaria·. su. que. tal. mecanismos la. falta. de. bioquímica. de. razones. siguientes. por. las. objetivos:. comparar las actividades ATPasa mitocondrial y. microsomal de tres especies de mangle durante. un ciclo. anual. 2 .-. Comparar. el. microsomal salino 3 .-. Evaluar de. la. (mezcla. ester o. de. cada. natural las. del. de. estero. actividades. con (Fig .. de. reacción de. de. especie. concentración. diferencias espe c ie. comportamiento. ATPasa. en de. relación. de. ésta. NaCl. en. comportamiento. 6). 22. a. su. al. y. gradiente. Tecolutla-Veracrúz . enzíma el. enzimática). respecto. mi tocondrial. de. en. medio y. de. ensayo. observar. ATPasa. ubicación. función. de. dentro. las c ada del.

(43) Z. Q •. 4. Di. E S T UDI O. 11. 1. .1. 1. 1 ESTERO DI TECOLUTL.t 22º - 21 o -20° 30/ - 20°. i•c&l.a1 11 39 ,. 156 627 - 17°. Escala: 11 6,695 156. 23.

(44) .... ~ ~. TECOLUTLA. (Veracrúz). MANGLAR. !!!!. {GOLFO DE l!EXICO). 24. Fig .6.

(45) MATERIAL Y t-ETODOS.

(46) Se. ubicaron. análisis. previo. disimilitudes de. mangle En. del. de. estaciones. similitudes. cada del. en. (Fig.. 6). se. estero. corriendo. y. adentro .. aproximadamente. cuatro. mediante. el. florÍstica. y. especies. las. 72).. en. un. transecto. dirección. de. x. 10. partiendo. perpendicular. transecto. cada. cuadran tes. de. edáfica. estableció. En. muestreo. composición. (71,. estación. tierra. de. (ubicación. edáficas. estudiadas). borde. éste,. c uatro. delimi tarón. se. metros,. 10. a. separados. entre si por una distancia de 20 metros. En. cada. se. estación. tomarón. dos. intersticial, cada una correspondiente a vegetal. especie. cada. cuan ti f icaciÓn De. de. las. mismas. aproximadamente 2 de Las. los. extremos. hojas. con. t. se. colectarón. de. las. de. hielo,. para. ano. entre. tres. de. posterior. muestras. árboles mangle,. se. racemosa. como. plastico, ser. su. ).. Rhí.zophora. material las. donde. y. de. que. transportadas. (E.N. E.P-IZT A CALA),. refrigeración. K. ramas. Laguncularí.a. bolsas. agua. de. por especie. Las hojas se tomarón. especies. un. para. (Na+. de hojas. durente. en. escuela. las. y. mensualmente. charolas. Kg. zonas. apicales. de. germí.nans. colocarón. cationes. de. la zona de abundacia de. mangle),. (de. muestras. al. se. su. con. agua. suelo. y. Aví.cenní.a. colectarón estudio. y. pusierón. laboratorio. se. para. dif.erentes.. se en. de. guardarón. la en. procesamiento. y. análisis. Las. hojas. remover. las. la varón. al. colectadas. partículas menos. dos. se. lavarón. gruesas veces. de. con. 25. agua. de. la. llave. para. posteriormente. destilada. fria. f4. C).. se.

(47) A 75 cortarón. g de en. fracmentos. oper a c ione s Una. hojas se les. se. llevarón. cortadas. las. hom o geneización. (0 .3M. de. c i s t e.ina ,. PVP,. 0.05/.. 0 .3/.. Los. 7.4).. se. de. fracmento s. colocarón. en. homogeneización posteriormente. de. ésta. gasa. (Fig.. El. filtrado Fig.. y. 7. centrifugar. a. (Fig.. El. 8).. descartó pastilla. lavado. de. BSA. x. (0.3 pH. se. y. de. 6,000 · x en. (aproximadamente a. de. de. la. a. de. 750. a. 20. mezcla. de. a. 7.2. (volumen. de 15. através. 0.05 /.. entre. medio. de. de. 1:1). ml),. la. segundos ,. (tejido-medio),. ocho. centrifugaCÍn. 10 N.. El. capas. de. diferencial. la. 0.1. x. g. (15. de. minutos ).. cen tri fugaciÓn. celulares,. mM. de. después. baja. 500. (15. volumen. se. g. x. minutos).. agregó. ml), x. primera. 7 .4),. seguida. 6,000. 12,000. y. membranas. pequeno. 30. d ,espués. cole c tó. se. núcleos),. la. c en t rifugación alta (12,000 x g) , añadió mas o menos 30 ml de medio. a. g. se. la. velocidad. un en. de. 7 .2. velocidad. centrifugación. pH. minutos). Manitol,. a. 1:1),. (10. le. centrifugación. (volumen. el. rango. filtró. enteras,. entre. resuspendiÓ. ajustado. con. medio. EDT A,. por goteo adicional de KOH. sedimento. M. alta. el. de. Las. 4° C.. Y. añadi ó. (capacidad. sometió. g. (mitocondrias). de. juntos. mi tocondrial. (celulas. resuspendiÓ. BSA;. O. se. 8).. 500. se. pH. se. se. pastilla. La. de. y. centimetros.. entre. les. 1mM. en · un. 7 .4. resultante. cabo. Mani tol ,. etapa. se mantuvo entre 7 .2 a homogenizado. nervadura central. se. licuadora. realizó. en. a. hojas. hojas. una. se. la. de aproximadamente dos. posteriores vez. removió. y. (15. 26. se. EDTA,. 0.025 /.. se. realizó. g. (10. La. la. y. 0.1 %. nueva otra. resultante. a se. medio. de. lavado. medi o. de. lavado. realizó. munutos),. PVP,. una. minutos). pastilla con , mas. de. una. superficie. Última de. la.

(48) Fig. en en. 7.. Esquema general que ilus~ra l~ me~odologia u~ilizáda. presen~e. ~rabajo.. 27.

(49) MEDIO NATURAL DE CRECIMIENTO DE LOS MANGLES. l. AGUA rTERSTICIAL CUANTIFICACION DE CATIONES. (Na~ K ). 1. HOJAS DE MANGLE. l. PREPARACION DEL EXTRACTO. CUANTIFICACION. ~. DE PROTEINA. /\ V. AISLAMIENTO FRAC. MIT.. DE. AISLAMIENTO FRAC .. MICRO.. ACTIVIDAD DE A TPasa DE. CUANTIFICACION. ~. MEDICION DE LA. (CUANTIFICACION. DE. Pi.). DE. PROTEINA.

(50) CO NDI CI ONES NBCRSAR I AS P ARA EL. A I SLAf:I S~ T O. DE. MITOCO NDRIAS VE GE TALE S Cortar 75g de hojas sin nervadura c e ntral Lavar al menos dos vecea con agua de s tilada fria. (4°c>. l. Cortar en fragmentos de 2 cm y agregar medio d e hor:i oge nizaci6n (O.JH de Manitol, lmM de EDTA, 0.05" de CistÍna, 0.3fo dePVP, 0.1" de BSA -Volumen 1:1; pH 7.Z-7.4). l. Homogenizar en licuadora (alrededor de 15 segundos) Durante esta etapa mantenér el pH entre 7.z - 7.4 con KOH 10N. ¡. . con. ,. Filtrar atraves de. 1medio. 8 capas de gasa. Lavar el residuo 1/3 del de ' homogcniza ción combinar los filtrados: el primero y el de lavado. l. Someter a centrifugaci6n diferencial. i. Centrifugar a 500xg/1p rnin. a'f 0 c.. .,,.....,-. ""'. Sedimento descartar. sobrenadante centrifuga r 1ZOOOxg/15min.4°c.. 1. La pastilla resuspender eonot 30ml de medio de lavado (0.3M de Manitol, o.1mM de EDTA 0.1~ de BSA, o.025, de PVP pH:7.Z-7.4). Fracci6n soluble (Fracci6n microsomal),. ¡. Centrifugar a 5ooxvto min ltºc.. /. ~. Sedimento descartar. /. Sobrenadante centr!fugar 6000xg/15 min. · 4 c.. --------.........:ª. l. La pastilla ~itocondrial se resuspende en un peque ño volumen con medio de lavado, agragar unos 30 ral da .. de medio de lavado. Sobrenadante descartar. t. Centrifugar a 60óOxg/15 min. ~ºe~. /. ~. Enjuagar al menos dos veces la auperficie de la pastilla con medio de lavado.. ~. Resuspender la pastilla con el mi s mo medio (Fra c ciin mitocondrialJ,. 28. Sobrenadan te d e scartar.. Fig.. 8..

(51) pastilla. mitocondrial. "la vado". para. la. parte. remover. superior. finalmente (17,. La. determinación. consumo. agregarón M,. agregó. KH 2 P.o. La. 3. Mgc;i.. Las. Taussl<y. determinó 25mM. o.o. para. condiciones en. un. pH. 8.0. a. 400. -. el. se. completó. un se. de. periodo detuvo. volumen. reacción de por. 30. ensayo. de. •),. El. se. ml. de. incubó. de. de. agua. minutos. adición. por. de. de. el. man gl e con. un. mangle. se. (Sacarosa. posteriormente observar. repiraciÓn. la. se. relación. mitocondrial).. (mitocondrial. cuantificando del. y. el. ATP,. según. el. de. ATPasa. se. 0.2. y. actividad. cada. 29. fue. de. de. TCA. la. NaCl. (por. separado). un. mililitro,. de. reacción al. mM,. Posteriormente. temperatura. después. 2.5. ATP. fracción. total. Tri s -. contienenia :. mM,. destilada.. una. ml. que. CaCl 2 2.0. reacción. con. lavado). de. estandard. hidrolisis. sobre. (65).. el. 0.1. realizó. determinó. 6.5. y. se. fracciones. (pH. ·**·. mezcla. la. la. reacción. mM. (medio. (para. de. 8.5. medio. pH=7 .2)¡. de. mi tocondrial. mi tocondrias. sistema. obtenida cual. de. se. de. Shorr. mM. ambas. sol u ble) ,. y. rnM. 4. para. (Pi). paquete. reacción. 10. estado. ATPasa. frac.. de. ADP. y. el. 5. medio. sedimentó. mitocondrias. de. con. polarográficamente. Las. mM, mM. las. lealizÓ. medio. inorgánico. método. se. de. y. actividad. microsomal. desde. 10. estado. fÓsforo. por. que. El. proteína. oxigeno. veces. amarillo. mismo. el. (2).. ml. Succinato 50 el. en. o 2 ClarK.. 0.9. dos. pastilla.. de. mangle). a. menos. Bradford. de. para. electrÓdo. entre. por. escrito. (Rhizophora. HCl. la. resuspendiÓ. se. al. material. de. 33).. El. lavó. el. 32,. método. 0.25. se. 50%. fr1o. 30º. e. la por. enzimática (31 , 64)..

(52) Después durante. se. realizó. minutos. 12. espectrofotometr1a Taussl<y. y. el. reportan MEn. en. de. microsomal) es u. de. 2. La a. La también. se. inorgánico. a. x. 2,500. cuantif icÓ. por. el. g por. método. de. obtenidos son al menos de dos repeticiones y de. ATPasa a. mg. pH. de. para. de. 2. mg. hemos ambas. fin al. 5. Prot/. hr.. observado fracciones. (prote1na. por. mililitro. microsomal a. de. que. la. mayor. (mitocondrial. y. 6.5.. prote1na. fracción entre. Pi/. posteriores. suspenciÓn I!. posteriormente. fósforo. µmoles. ensayos. actividad. centrifugación. Shorr (65) .. Los resultados se. y. una. mg. de. (frac. proteina. 33).. 30. mi tocondr ial) 32,. (17,. 33).. soluble) por. con tenia. mililitro. con tenia (17,. 32,.

(53) Pa ra la int-erpret-ación y . análisis de result-ados se aplicarón dos. pruebas. estadist-icas:. anova. Una. 2. factores. y. una. anova. 3. fact-ores (71, 72). Ca). [NaCll-------------------------------------------A. Cb). Especies de mangle est-udiadas--------- - --- - ------B. Ce). Est-aciones edafológicas--------- - --------- - -- -- --C. Esto. se. refiere. a. las. variables. en. las. que. estamos. interesados como factor es C71, 72).. Para. el. Varianza. análisis factores. 3. de. Varianza. con. 2. factores. repetición. siguiente secuencia de fórmulas:. E E E j. i. 5. e. x2. iJk.. (Factores manejados).. k.. total. Ei Ej Ek.. 5 C A. 2 X ' ;' '• r<.. C.L:...:...> N. (:!':...:...:...> N ni. 5. C B nj. 31. 2. 2. se. y. análisis. utilizarón. de la.

(54) S C. A. jk. S C B ik. s e e ij. INTERACCION ENTRE FACTORES. s e. Et. AB. Ej. <Ek. 2. xijk>. 2. -Et. <Ej. Ek. xijk>. -Ei:.. <Ej. Ek. xijk>. <Ei E;,.. xijk>. 2. - Ej<EiEk. xijk>. -. Ek<EiEj. xijk>. E,._<E1.Ej. xijk>. kjlük. +. <!:..:...:...>. 2. N. s e. Ei:. Ek. AC. 2. <Ej xijk>. 2. 2. jjkij. +. <!:...:...:...>. 2. N. s e. BC. Ej. E,._ <Ei. 2 xijk> -Ej. iikij. + (T . . . )2. N. 32. 2. 2.

(55) TRIPLE INTERACCION. S CABC. Ei:E/:k x. 2. Ei: E1 CEJ<t. LJk -. 2 xiJk). -. Ei: EJ<t CE1. 2 xiJk). -. ki +. i. ij. 5 cerror. 5. s cerror. se. s e. e total -. 5. total -. e A -. se. 5 CB - 5 CAB. A - s CB - s ce -. CAB - s CAC -. BC - s e ABC. Los det.alles de cálculo para la anova 2 f'act.ores. s. con repet.ición. en. su. muest.ra en los Apendices C y O. forma. Cen. 33. más. f'act.ores. práct.ica. len8'Ua~e. basic) .. de. y. anova 3. cómput.o. se.

(56) RESULTADOS.

(57) Fig . 9 .. Actividad de ATPasa de hojas de mangle Cexpresada en. µmoles de Pi. /. mg d e. Prot . / hr.). de Avicennia. ~erminans. CFrac .. Mitocondrial) en función del tiempo CMeses); a dos concentraciones diferentes de NaCl ([0.0J mM y [400) mM de NaCl) .. 34.

(58) ACTIVIDAD DE ATPasa Avicennia germinans. Frac. Mitocondrial. µmoles de PI/ mg de Prot I hr. 5,--~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~-.,. 6. r ········--·-··········----------------------------------····-·····----------------·····--······-··-·····--··--·-----·--··---------------------------------······--------------1. 4. 1-····--········-··-····-··-··-······-·------------ -------······-··········----·-··-Í-. • 1r-····--............................ _................... ~. o~..__~~~--'~~~~-'-~~..__~_,_~__.~~~~_._~~...._~~__.. MAY. JUN. JUL. AUG. SEP. OCT. NOV. DEC. JAN. FEB. MAR. APR. MESES ~. kil.#1#. -+-. kii.#4#. ---*"- Avl.•1•. -a- kii.•4• # # IO.O)mM de NaCI. • • (400lmM de NaCI..

(59) Fig. 10. Actividad de ATPasa de hojas de mangle (expresada en µmoles de Pi. /. mg de Prot./ hr.) de Avicennia 8erminans. Microsomal) en función del. CFrac .. tiempo CMeses); a dos concentraciones. diferentes de NaCl C[O . OJ mM y [400J mM de NaCl).. 35.

(60) ACTIVIDAD DE ATPasa Avicennia germinans. Frac. Microsomal (Frac. Soluble). JJmoles de PI/ mg de Prot/ hr. a..--~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~----,. 6. f-----·--·--·----·-·-·--·--·-·-·--·-·-·-·-···-···-·--·--·-···-·-·-·---·------·-·-·------·····. 4. f-.·-·-·~·- ·-·-·····-···-···-·-·-·-·-·-·- ·-·----·- ·-·--·---·- ······ :\:·. 2. f- ·------ ·------ - ------- ------ ·- - -----·--·-·--· - -·-·-· ··- ~ ·-·- ·--·-·---·------·---·-·- - ·-- · - ·-···- ·- ·- ·- ·~·: _ .. __________________________ ..~~1- - -·----·---- - ·-· - -l. o~~~~~~~~~~~~_._~~~~~~_._~~~~~~~~. MAY. JUN. JUL. AUG. SEP. OCT. NOV. DEC. JAN. FEB. MAR. APR. MESES - - Avl.#1#. -+- 1911.#4#. -4E- Avl.•1•. -e- Alfl.•4• # # (0.0)mM de NaCI. • • (400(mM de NaCI..

(61) Fig. 11. Actividad de ATPasa de hojas de mangle Cexpresada en µmoles. de. Pi./. mg. de. Pr o t . /. Mitocondrial) en función d e l. hr.). de. Rh.izophora. man6le. CFrac.. tiempo CMeses); a dos concentraciones. diferentes de NaCl ([O.OJ mM y [400J mM de NaCl).. 36.

(62) ACTIVIDAD DE ATPasa Rhizophora mangle. Frac. Mitocondrial. µmoles de PI/ mg de Prot/ hr. s..--~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~-,. 6. 1 t---·--·-·-·-·---·--..-·------ ----------·-·---·--- --·---·- ·- -~·-·-·-·---·-·------·----·-·-·-·-·-·-·--·-·-·-·-·-·-·--·-·-·----·-·--·-- -----·--·--·--·--·--·- ·-·- ···-'l!l'.:·-·-·---···-·-·--·-·-·-1 0'--_.__~--'-~---'-~~-'--~-'-~--'-~~"--~-'-~---'--~~"--~-'-~---'----'. MAY. JUN. JUL. AUG. SEP. OCT. NOV. DEC. JAN. FEB. MAR. APR. MESES -. Rhlz.#2#. -+- Rhlz.#3#. Rhiz.•3•. ~. _.._ Rhlz.#4#. -e- Rhlz.•2•. Rhlz.•4• # # IO.O)mM de NaCI. • • (400lmM de NaCI..

(63) Fig . 12. Actividad de ATPasa de hojas de mangle Cexpresada en µmoles Mi. de Pi./ mg de Prot. /. cr osomal) en f'unci ón del. hr.). de Rh.izophora man11le. CFrac .. tiempo CMeses) ; a dos concentraciones. dif'erentes de NaCl ([0.0J mM y (400] mM de NaCl).. 37.

(64) ACTIVIDAD DE ATPasa Rhizophora mangle. Frac. Microsomal (Frac. soluble). µmoles de PI/ mg de Prot/ hr. 14.----~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~---,. 12 - ·--·--·---·-·-·-·-·-·-····--·--·-·-·-·-·---·. -·---·--·--------------·---------------·------·-------------·-·-·--·-·---·-·-·---·--------·-·-·--·-·-·-·-·-·-·-·-·--·-·-·--·--·--·-· 10. 1-·--·-·---·--·-···--·----·-·-·--·-·····-···--·-···-·--·--------·--·--·--·----- --------·-----------·-------·--·---·/·-~·-··'<-·-···--·------ ----·--·--·-·-·----·-·+·. 6 [--·-·-·---::;:-···---·- --------·-:\. --!-. 4. 2. -----------------~. f-----·---·---·-·--·--·-----------·---------- ·--·-·--·---·-·"'·-·-·-·--·---·--·-·-·-·-·-·-·--·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·--·---·-·-·-·--·------·-·-·--·--·-····-·-~·-·-·--·-·-- ·-·-·-·-···· -·~. 0'---'--~-'-~--'-~~..__~-'-~--'-~~.L-~-'-~-'-~~"--~-'-~-'----'. MAY. JUN. JUL. AUG. SEP. OCT. NOV. DEC. JAN. FEB. MAR. APR. MESES -. Rhlz.#2#. -+- Rhlz.#3#. -. Rhlz.•3•. ~. ~. Rhlz.#4#. -e- Rhlz.•2•. Rhlz.•4•. # # IO.O)mM de NaCI. • • l400lmM de NaCI..

(65) Fig.. Ef'ect.o. 13.. concent.raci6n. de. Na. +. observado Cdesde. [0.0). por a. el [400]. increment.o mM. de. la act.ivi dad de ATPasa (expresada en µmoles de Pi . / hr . ) de hojas de Avicennia serminans CFrac.. 38. NaCl). de. sobre. mg de Prot. .. Mit.ocondrial) .. la. /.

(66) ACTIVIDAD DE ATPasa Avicennia germinans. Frac. Mitocondrial. µmoles de PI/ mg de Prot/ hr.. 2.0.--~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~--,. 1.5~----- ----······--······-········-·· -------~~,------ ···-1.. ot ·····-----··-------.·-··-------... -·---------------··----------·-·--·----·-·---·---·-·---·-·-.-·-.....---------·-----·------~.0 CO/o. 54%. 77.4º/o. o.6 ¡.-....-----·--·----·----·-·-·-·---·--·-··--··-···---·-·-·-·-·-----·--·-·-·---·-·--·---·------·-·-·----------·-·---·--------·-·---·-··"--·-·-·--..--..··-·-·-·-·-·---·-·-·-·-·-·-···-·-... ·--·-·-·~. o.o~~~~~~;--~~-c-;~;--~~--;:::~~~~-'--~~~~. 100. 200. 300. [ ) mM de NaCI. - - Avi.1. -t-. Avi.4. 400. 500.

(67) Fig .. Efec t o. 14.. concentración. de. Na. +. observado (desde. [0.0J. por a. el [400). incremento mM. de. la actividad de ATPa sa ( expresada en µmoles de Pi . / hr.). de. hojas. de. Avicennia. eerminansCFrac .. soluble>).. 39. NaCl). la. de. sobre. mg de Prot .. Mi eros o mal. /. <Frac ..

(68) ¡. rl. Gl. 11. '"d. 11. ~. ~. -a. •. E.. ~. ~. l. +". 2.3. 2.4. 2.5. 2.6. 2. 7 1. 2.8. 2.9. 3.0. \.. 50 100. '\_. 200. ,,,... ( Jd. 300 de NaCl. 400. 88.2 O/o Avi 4. Frac. Microsomal (Frac. Soluble).. Avicennia germinans.. ACTIVIDAD DE ATPasa.

(69) Fig.. Efecto. 15.. concentración. de. Na. +. observado (desde. (0. OJ. por a. el [ 400). incremento mM. de. Na CD. de. sobre. la actividad de ATPasa (expresada en µmoles de Pi./ mg de Prot. hr.) de hojas de Rhizophora maneie CFrac. Mitocondrial).. 40. la. /.

(70) ACTIVIDAD DE ATPasa Rhizophora mangle Frac. Mitocondrial. )Jmoles de PI/ mg de Prot/ hr. 5,...-~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~--,. 4. 1-·-·-·--·-·-·····-···-------·---·-·-·--·-·----·-·--------·--·---·---·-----·-------·-----------·-·-···--·--·-·····-·---·-·-·-·-·-·-·-·----·--·--·---------·-·-·--·----·----···--·. 3. 1-·-·----·-···-·--·----·--·-·----·-·-·-..··--·------·-···-·--·-·-·-------·---------------·--·-·-·-·-----·-·-·---·-·-···-·-·---·-·---·-..··--·--·----·--·--·-·--·---------. 2. ~---- ----- _·____ ~±- --- --- --. 1. 1 ··-·-- - - - -- -- - ---- ---. ..., "'. ~-. """. ..., "'. 1 1-----·-----------·--------·-----·-··-·-·------·--·--·--·----·-----·--·-·-------···-·---·-----·--·--------·-·------·-----·----------·-·------·-·. O'--~~~~'--~~~~..__~~~~-'--~~~~""-~~~---'. o. 100. 200. 300. 400. [ ] mM de NaCI. - - Rhiz.2. -+-. Rhiz.3. ____._ Rhiz.4. 500.

(71) Fig.. Efect..o. 16 .. concent..ración. de. Na. +. observado Cdesde. [0 . 0J. por a. el [4001. increment..o mM. de. la act..ividad de ATPasa Cexpresada en µmoles de Pi . / hr . ). de. hojas. de. Rhizophora. <Frac . soluble>).. ~1. (Frac .. NaCl). de. la. sobre. mg de Prot . / Microsomal.

(72) ACTIVIDAD DE ATPasa Rhizophora mangle.. 100%. Frac. Microsomal (Frac. soluble).. != ~ o ~ CI). ~. ~. ............ 5. 90%. 1lhi 2. f:;; 86. %. P! CI). ~. C1l CI). rl. o. 90%. ~. 94% 50. 100. 200. 300 ( ] .mll de NaCl. 400. 1ih1 3. l!h1 -4.

(73) Fig.. Efecto. 17 .. concentración. de. Na. +. obser.v ado Cdesde. [0. Ol. por. a. el [4001. incremento mM. de. NaCl). de. sobre. la actividad de ATPasa (expresada en µmoles de Pi./ mg de Prot . hr.) de hojas de La61Jncularia racemosa CFrac. Mitocondrial).. 42. la. /.

(74) ACTIVIDAD DE ATPasa Laguncularia racemosa. Frac. Mitocondrial. µmoles de PI/ mg de Prot/ hr. 4..---~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~--,. ==---·-·--·-·--·-·---------. 2. •. . ·-·---·-. · ·------·-·--·--·-·----·-------·-·------·------~·78j(o/-;·-·----·-------·--. ~------ -="------- _ __!< ___________-- ------. ~:~ -----. 1 ~------------------------ ------·-·---------·--·---·---·--·-----·---·-·---·--·------·--------·----------·--------------·-·-·---·-·----·-·---·-·-·----. O'--~~~~..__~~~~_.._~~~~_.__~~~~_,_~~~____.. o. 100. 200. 300. [) mM de NaCI Lag.2. --+- Lag.1. -*-- Lag.4. 400. 500.

(75) Fig .. Efecto. 18.. concentración. de. Na. +. observado. Cdesde. [0. OJ. por a. el [ 4001. incremento mM. de. NaCl). de. sobre. la actividad de ATPasa (expresada en µmoles de Pi./ mg de Prot. hr.). de. hojas. de. La6Uncularia. <Frac. •oluble>).. 43. racemosa. CFrac .. la. /. Microsomal.

(76) ACTIVIDAD DE ATPasa Laguncularia racemosa.. "·ºt. Frac. Microsomal (Frac. Soluble).. 100%. 10.0. l!. 't... o. ". 'd. lf. ~ • • 'd. g.o a.o. ~. 1. -. 78.1% • Lac 2. ':il%. ...... Lag 1. l1nno, 7.0. 11. l. 6.0. 5.0. 50. 100. 200. 400. 300 ( ] d. de NaCl.

(77) Fig. 19. Actividad de ATPasa de hojas de mangle (expresada en. µmoles. de. Pi./. mg. de. Prot./. hr.). de. Avicennia. serminans,. Rh.izophora manele y Lasuncularia racemosa, CFrac. Mitocondrial) en función de incrementar la concentración de cloruro de sodio Cdesde CO.Ol. a. C400l. mM de NaCl). en la mezcla de reacción enzimática .. CVer . Material y Métodos) .. 44.

(78) ACTIVIDAD DE ATPasa Frac. Mitocondrial. ..umoles de PI/ mg de Prot/ hr.. 4.----~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~---,. 3 ºº~!.<?.____ _ _ ________ _ _ _ _ ________ . ... . . .·-·--·--·----·----····-···--·······---······-··-·· · ·------. -------.. ·-. --.·-... -... ---.·----·-----.---.... ·-... ~. ~- o ~. +:. 84.6% ······ ·-···--······--···· ········-········- ·-···· ·· ·· ·· ·--- .. 2 1-------------. 1JlQQ~[Q.... J.---···· 32%. "'. .... ······- ___ -····---· ..... ~~?(o·· ·- -· -·····---· 1 72.1%. •. .. ::+===- - - ,,, 87%. ...... O'--~~~---"'--~~~~'--~~~~'--~~~~-'--~~~--'. o. 100. 200. 300. 400. [ ] mM de NaCI. -. Laguncularia. -1- Rhizophora. --*-. Avicennia. 500.

(79) Pig. µmoles. 20.. de. Pi . /. Rhizophora <Frac.. Actividad de ATPasa de hojas de mangle (expresada en. man6le. soluble>). en. mg. y. de. Prot . /. hr . ). La8"Uncularia. función. de. de. Avicennia. racemosa,. incrementar. la. CPrac.. 6erminans, Microsomal. concentración. de. cloruro de sodio Cdesde [0 . 0J a [400] mM de NaCl) en la mezcla de reacción. enzimática. CVer.. Material y Métodos) .. 45.

(80) ACTIVIDAD DE ATPasa Frac. Microsomal (Frac. soluble). )Jmoles de PI/ mg de Prot/ hr. 12~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~~--,. 10. L=: =~:-~::~=:-:~=-: -:- ~:=~ ==~:- ~:~ :_:-:~ ~~:~-·. : :_:- : ~ ~00% o. 2. o ~. ~. ¿?:1_~---~--- ------ -~----------- --------- -~~---. o o. 100. --- ------------------ - ------------ ---- --------~QA_%__ _____________ _. 200. 300. 400. [ ] mM de NaCI. -. Laguncularia. --+-. Rhizophora. -e- Avicennia. 500.

(81) Fig. 21. CURVA PATRON PARA CUAN1TFICAR PR01EINA. Concentraciones bobino. se. solución. tomarón. 0 . 15 M de. y. se NaCl,. crecientes a j ustarón. a. de. Albúmina. un. volumen. posteriormente se. le. se de. suero. 100. agregó. 5. µl. de con. ml. de. reactivo de Bradford y la solución se mezcló. Después se midió cada uno de los tubos a 595. ~m.. utilizando. como blanco 100 µl de NaCl 0 . 15 M + 5 ml de reactivo Bradford y sé calculó la recta de regresión correspondiente. métodos).. 46. CVer.. Material. y.

(82) CURVA PATRON PARA CUANTIFICAR PROTEINA (MÉTODO DE BRADFORD) ABSORBANCIA (695 nm). 1.0 ~------~------------------,. 0.8. 1-·--·-----·---·--·--·-·------·------·---·--·-·-·------·- ·-·---------·------·-·-·-----·--·-·-----·-------·-- ------·---·----·---·-·------~--·-- ·-··------·----·--------·i. 0.6. f-·•""·-·-·-.. ·-----·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·-·----·---·-·-·--·--·- ·- ·-----------------------------------·----,,....C-·--------·--·------·--·-·---·-·--·--------·-·-·----·-·- -----·------ ·-·- ·-·~. 0.4. 1----·----·---·----·------·--------·------·-----·-·---·-·-----~--·-·-·--·------·-----·---·------------·------------------·-·------- - ·---·-·--·---·---·-·-------·-·-···-·-l. O.O'--~~~_.__~~~-L-~~~~~~~---'-~~~~-'--~~--'. o. 20. 40. 60. -. 80. 100. ALBUMINA DE SUERO DE BOBINO [µg]. 120.

(83) F'ig.. 22.. CURVA PATRON PARA CUANTIFICAR F'OSFOF'O INORGANICO.. Concentraciones utilizó KH Po 4 2 ajustarón. a. crecientes. de. fósforo. 1. O mM como solución estandard). un. volumen. de. 2. ml. con. inorgánico se. solución. tomarón. de. TCA. Cse y. se. 0.5. N,. posteriormente se le adicionarón 1.0 ml de reacctivo de Color y la solución se mezc ló. Después. se. midió. cada. uno. utilizando como bl aneo 2 ml de TCA O. 5 Color. y. se. calculó. la. recta. de. material y métodos).. 47. de. los. tubos. N + 1. O ml. regresión. a. 660. r¡m,. de reactivo de. correspondiente . (Ver.