• No se han encontrado resultados

Efecto in vitro de la exposición al humo lateral de cigarrillo en la susceptibilidad de staphylococcus aureus a la vancomicina

N/A
N/A
Protected

Academic year: 2020

Share "Efecto in vitro de la exposición al humo lateral de cigarrillo en la susceptibilidad de staphylococcus aureus a la vancomicina"

Copied!
50
0
0

Texto completo

(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. na. ESCUELA DE MEDICINA. ici. “EFECTO in Vitro DE LA EXPOSICIÓN AL HUMO. ed. LATERAL DE CIGARRILLO EN LA. SUSCEPTIBILIDAD DE Staphylococcus aureus A LA. M. VANCOMICINA”. de. TESIS:. ca. PARA OPTAR EL GRADO DE. lio te. BACHILLER EN MEDICINA AUTOR:. Bi b. JHON EDWIN RODRÍGUEZ VÁSQUEZ. ASESOR (A):. Dra. ELVA MANUELA MEJÍA DELGADO. Trujillo – Perú 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. na. AGRADECIMIENTOS. ed. ici. A DIOS, por guiarme, iluminarme y darme la fortaleza día a día.. de. M. A MIS PADRES Y HERMANOS, por su incondicional compañía y apoyo.. A MI ASESORA, por su paciencia, tiempo y enseñanzas para la realización de. lio te. ca. esta investigación.. Bi b. A MIS AMIGOS DE LA PROMOCIÓN LI, por su colaboración y consejos.. A LA FACULTAD DE MEDINA – UNT, mi alma mater, en cuyas instalaciones pasé la mejor etapa de mi vida.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. RESUMEN ..............................................................................................................4 ABSTRACT ............................................................................................................5 INTRODUCCIÓN ..........................................................................................6. na. I.. ici. II. MATERIALES Y MÉTODOS ....................................................................10. ed. III. RESULTADOS .............................................................................................18 IV. DISCUSIÓN ..................................................................................................22. M. V. CONCLUSIONES.........................................................................................26. de. VI. RECOMENDACIONES...............................................................................26 VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ........................................................27. Bi b. lio te. ca. VIII. ANEXOS ...................................................................................................32. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. El objetivo del presente trabajo fue analizar el efecto in Vitro de la exposición al humo lateral de cigarrillo en la susceptibilidad de Staphylococcus aureus a la vancomicina. Se usó una cepa ATCC 25923 y dos cepas silvestres de. na. Staphylococcus aureus, determinándose mediante el método de Kirby Bauer la. ici. susceptibilidad (sensible ≥ 15 mm y resistente < 15 mm) a la vancomicina antes y después de la exposición al humo lateral de cigarrillo. Para someter a la bacteria al. ed. humo de cigarrillo se innovó una técnica consistente en la colocación de las placas. M. Petri conteniendo las colonias bacterianas y sometiéndolas al humo desprendido de tres cigarrillos encendidos, todo esto dentro de un depósito cerrado. Se obtuvo un. de. patrón de sensibilidad a la vancomicina en el 100% de las cepas en la pre y post prueba de la exposición al humo lateral de cigarrillo, no encontrándose diferencia. ca. estadísticamente significativa. Sin embargo, existió disminución en el promedio. lio te. final de los diámetros de los halos de inhibición de vancomicina. Concluyendo que la exposición al humo lateral de cigarrillo disminuye el diámetro de los halos sin ocasionar cambios en la susceptibilidad de las cepas Staphylococcus aureus a la. Bi b. vancomicina.. PALABRAS CLAVE: humo lateral de cigarrillo, Staphylococcus aureus, susceptibilidad, vancomicina. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The objective of the present study was to analyze the in Vitro effect of exposure to sidestream cigarette smoke on the susceptibility of Staphylococcus aureus to vancomycin. A strain ATCC 25923 and two wild strains of Staphylococcus aureus. na. were used and the susceptibility (sensitive ≥ 15 mm and resistant <15 mm) to. ici. vancomycin was determined by the Kirby Bauer method before and after exposure to sidestream cigarette smoke. To submit the bacteria to the cigarette smoke was. ed. innovated a technique consisting of placing the Petri dishes containing the bacterial. M. colonies and submitting them to the smoke released from three lit cigarettes, all this inside a closed tank. A sensitivity pattern to vancomycin was obtained in 100% of. de. the strains in the pre and posttest of exposure to sidestream cigarette smoke, with no statistically significant difference found. However, there was a decrease in the. ca. final mean of the vancomycin inhibition halo diameters. Concluding that exposure. lio te. to sidestream cigarette smoke decreases the diameter of the halos without causing changes in the susceptibility of the strains Staphylococcus aureus to vancomycin.. Bi b. KEYWORDS: sidestream cigarette smoke, Staphylococcus aureus, susceptibility, vancomycin.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. El tabaquismo es una de las mayores amenazas para la salud pública que afronta el mundo.1 Cada año mueren aproximadamente 6 millones de personas en el mundo a causa del tabaco, de las cuales más de 5 millones son consumidores directos y más. na. de 600 000 son personas expuestas al humo lateral de cigarrillo (HLC).1 Estas cifras según el MINSA, en el Perú, oscilan alrededor de 10 mil muertes al año causadas. ici. por el HLC; por ello, el tabaquismo es considerado uno de los principales problemas. ed. de Salud Pública a nivel mundial.2. M. Se estima que para los años 2020 y 2030, se incrementarán entre 7.5 y 8 millones de personas, respectivamente, que morirían a causa de la exposición al humo de. de. cigarrillo anualmente.3 El tabaquismo causa una alta carga de salud, no sólo en los fumadores, sino también en los que están expuestos al HLC.4 Se cree que los. ca. resultados adversos para la salud asociados con el HLC, no solo incluyen la carcinogénesis, la aterosclerosis y la enfermedad pulmonar crónica, sino también el. lio te. aumento del riesgo de varias enfermedades infecciosas.5, 6 Se ha demostrado que el HLC afecta la capacidad inmune de las células epiteliales. Bi b. de las vías respiratorias debido a una alteración en la producción de citocinas proinflamatorias, tales como IL-6 e IL-8, produciendo una falta de respuesta por parte de los neutrófilos;7 también produce cambios en la carga de la superficie bacteriana, volviéndola más positiva, lo que altera la interacción con los péptidos antimicrobianos y con las células fagociticas.6,. 8. Estos cambios facilitan la. colonización bacteriana y exacerban las respuestas inflamatorias.6, 7. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Asimismo, la exposición directa y lateral al humo de cigarrillo alteran la composición normal de la microbiota de la nasofaringe, abriendo una puerta de entrada a patógenos oportunistas tales como Staphylococcus aureus 6, 9 Staphylococcus aureus es una bacteria Gram positiva que coloniza la piel y los. común.10,. 11. na. espacios mucosos de huéspedes humanos, siendo el vestíbulo nasal el lugar más Se estima que el 20-30% de la población esta colonizada. ici. persistentemente y el 20% es colonizada de manera intermitente.12 Además, se ha. ed. visto que Staphylococcus aureus meticilino resistente (SAMR) está presente en un. M. 0,3% a 18,9% de las personas, quienes son portadores nasales.13 Los mecanismos subyacentes de la transición de Staphylococcus aureus de ser un. de. colonizador asintomático hasta convertirse en un patógeno humano siguen sin estar claros y pueden implicar mecanismos de supervivencia bacteriana y posiblemente. ca. factores ambientales, como la exposición al humo de cigarrillo.5 Se ha demostrado. lio te. que en los cultivos nasofaríngeos de fumadores existe un alto número de patógenos y una baja cantidad de microbiota que puede actuar en contra de ellos. Y que tal situación puede revertirse al suspender la exposición al humo de cigarrillo.14. Bi b. Los fumadores tienen mayores tasas de colonización por SAMR que los no fumadores, lo que aumenta el riesgo de infecciones graves y difíciles de tratar,15 como la neumonía, bacteriemia y endocarditis.16 Estos datos clínicos son apoyados por resultados in Vitro, donde el Staphylococcus aureus expuesto a humo de cigarrillo incrementa su unión a células humanas y causa la formación de biopelículas, mecanismos de resistencia que adopta esta bacteria. Demostrando que. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. el humo del cigarrillo aumenta la capacidad de SAMR para colonizar y persistir en el huésped humano.5,17 También, se ha experimentado que los SAMR tratados con extracto de humo de cigarrillo tienen mayor resistencia de ser fagocitados por macrófagos, invaden con. na. más facilidad células humanas cultivadas en el laboratorio y causan neumonía con una tasa de mortalidad más alta en ratas.18. ici. En suma, el SAMR al colonizar la fosas nasales y demás partes de las vías. ed. respiratorias está expuesto a las sustancias que se inhalan, dentro de las cuales está el HLC, por lo tanto, causa modificaciones que conllevaría a cambios en la. M. susceptibilidad del microorganismo a los antibióticos.5 El fumar, así como la. de. exposición al HLC, alteran las propiedades de susceptibilidad a antibióticos del SAMR, causando una mayor severidad de infecciones en las vías respiratorias.16. ca. Es por eso que surge la necesidad de analizar el efecto in Vitro que causa la. lio te. exposición al humo lateral de cigarrillo en la susceptibilidad de Staphylococcus aureus a la vancomicina, y contribuir con información de que el humo de cigarrillo no solamente causa cáncer de pulmón, sino también se relaciona con la evolución. Bi b. de este microorganismo hacia una cepa resistente a los antibióticos.. 1.1.. PROBLEMA ¿Cuál es el efecto in Vitro de la exposición al humo lateral de cigarrillo en la susceptibilidad de Staphylococcus aureus a la vancomicina?. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.2.. HIPÓTESIS La exposición al humo lateral de cigarrillo hace resistente al Staphylococcus aureus frente a la vancomicina.. 1.3.. OBJETIVO GENERAL. na. Evaluar el efecto in Vitro de la exposición al humo lateral de cigarrillo en. OBJETIVOS ESPECÍFICOS. Determinar la susceptibilidad a la vancomicina de cepas de. M. -. ed. 1.4.. ici. la susceptibilidad de Staphylococcus aureus a la vancomicina.. cigarrillo. -. de. Staphylococcus aureus antes de la exposición al humo lateral de. Determinar la susceptibilidad a la vancomicina de cepas de. ca. Staphylococcus aureus después de la exposición al humo lateral de. lio te. cigarrillo. -. Determinar la variación de la susceptibilidad a la vancomicina de cepas de Staphylococcus aureus antes y después de la exposición al humo. Bi b. lateral de cigarrillo.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. 2.1.. MATERIALES Y MÉTODOS. MATERIAL 2.1.1. Unidad de análisis. Una cepa ATCC 25923 y dos cepas silvestres de Staphylococcus aureus, dispuestas en placas Petri conteniendo agar Müller Hinton y. ici. na. discos de vancomicina de 30 ug.. 2.1.2. Tamaño de muestra. ed. Por ser un trabajo cuasi-experimental, se determinó el tamaño de. M. la muestra que equivale al número de repeticiones de la prueba de sensibilidad por cada cepa de Staphylococcus aureus. Se hizo uso. de. de las siguientes fórmulas:. lio te. ca.  Para muestra preliminar:. Donde:. Bi b.  n = tamaño de la muestra (número de repeticiones necesarios por cepa de Staphylococcus aureus).  Zα/2 = 1.96 para α = 0.05.  Zβ = 0.84 para β = 0.20  Asumiendo S = X1 – X2 por no haber encontrado estudios previos.  Para muestra ajustada o final:. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Donde:  gl = n-1. ici. nf = 16. na.  Reemplazando se obtuvo. ed. Se realizó 16 repeticiones de la prueba de susceptibilidad a la. M. vancomicina, por cada una de las cepas utilizadas.. . de. 2.1.3. Criterios de selección. Criterios de inclusión. Una cepa ATCC 25923 de Staphylococcus aureus sensible. ca. -. a la vancomicina. Dos cepas silvestres de Staphylococcus aureus sensibles a. lio te. -. la vancomicina.. Bi b. . Criterios de exclusión - Placas. con. cultivos. contaminados. por. otros. microorganismos diferentes a Staphylococcus aureus, después de la incubación.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.1.4. Operacionalización de variables TIPO DE VARIABLE. INDICADORES. UNIDAD DE MEDIDA. INSTRUME NTO DE MEDICIÓN. Nominal. -. -. Exposición al humo lateral de cigarrillo. Exposición in Vitro al humo lateral de cigarrillo. Variable Cualitativa. VARIABLE DEPENDIENTE. TIPO DE VARIABLE. INDICADORES. Variable Cualitativa. Diámetro del halo de inhibición. na. No exposición al humo lateral de cigarrillo. UNIDAD DE MEDIDA. ed. ESCALA. M. Continua. Milímetros. INSTRUME NTO DE MEDICIÓN. Regla milimetrada. de. Susceptibilidad de Staphylococcus aureus a la vancomicina. ESCALA. ici. VARIABLE INDEPENDIENTE. Definiciones operacionales de las variables.. ca. 2.1.4.1.. Humo lateral de cigarrillo. También llamado corriente. lio te. . secundaria de humo de cigarrillo, es el humo que se. Bi b. desprende hacia el ambiente desde la punta encendida del cigarrillo.19. . Exposición in Vitro al humo lateral de cigarrillo. Someter en condiciones de laboratorio al humo que se desprende desde la punta encendida del cigarrillo.20. . Susceptibilidad de Staphylococcus aureus a la vancomicina. Es el grado de inhibición del crecimiento de bacteriano por antibiótico y que comprende dos. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. términos: resistencia y sensibilidad. En el este caso del Staphylococcus aureus frente a la vancomicina, considerándolo sensible cuando el halo de inhibición es ≥ 15 mm y resistente cuando es < 15 mm.21. na. 2.1.5. Diseño de estudio. ici. Diseño cuasi-experimental, longitudinal con pre y post prueba. MÉTODOS. M. 2.2.. ed. (antes y después de la exposición al HLC). de. 2.2.1. Instrumento de recolección de datos Los datos se registraron en la tabla (ver anexo N° 1) que contiene. ca. los siguientes parámetros: diámetros de los halos de inhibición, las. lio te. cepas de Staphylococcus aureus y el número de repeticiones. 2.2.2. Material biológico. Bi b. Una cepa ATCC 25923 y dos cepas silvestres de Staphylococcus aureus sensibles a la vancomicina obtenidas del cepario de la sección de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. Las cepas silvestres fueron nombradas como silvestre A y silvestre B, sin tener en cuenta algún criterio en especial.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.3. Preparación del inóculo De cada una de las cepas se procedió a obtener cultivos jóvenes en agar soya tripticasa. Se incubó a temperatura de 37° C por 24 horas. Luego se tomó una muestra con asa bacteriológica y se preparó el. na. inóculo que consitió en una suspensión en caldo de Müller Hinton hasta alcanzar una turbidez semejante al tubo estándar 0.5 de la. ici. escala del Nefelómetro de Mc Farland (1.5 x 108 UFC/ml), esta. ed. comparación se llevó a cabo visualmente. Los tubos, conteniendo las bacterias, se agitaron durante 30 segundos, antes de proceder al. M. sembrado (ver anexo N° 2 y 3).. de. 2.2.4. Sembrado. Con el inóculo previamente preparado se procedió a sembrar 8. ca. placas Petri por cepa, cuatro para antes de la exposición al HLC y. lio te. cuatro para después de la exposición al HLC. Luego, las placas sembradas se incubaron en una estufa a 37° C durante 24 horas (ver. Bi b. anexo N° 2 y 3).. 2.2.5. Determinación. de. la. susceptibilidad. bacteriana. a. la. vancomicina antes de la exposición al humo lateral de cigarrillo. Para determinar la susceptibilidad bacteriana, se empleó el método de difusión de discos de Kirby Bauer, consistente en la colocación. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de sensidiscos de vancomicina de 30 ug sobre la superficie del agar con la bacteria sembrada. De las ocho placas Petri para cada una de las cepas se escogieron cuatro, de las cuales se colocaron cuatro sensidiscos distribuidos. na. uniformemente, 15 minutos más tarde se efectuó la incubación a 37° C por 24 horas.. ici. Posteriormente se midieron y registraron los diámetros de los halos. ed. de inhibición del crecimiento de cada cepa de Staphylococcus. M. aureus.. de. 2.2.6. Exposición al humo lateral de cigarrillo. En base a lo reportado en investigaciones realizadas por Li X y Cao. ca. X 22, 23 se innovó una técnica para la exposición de las bacterias al HLC consistente en la exposición de las unidades formadoras de. lio te. colonias de Staphylococcus aureus al HLC dentro de un depósito cerrado, la jarra Gaspak, de tal manera que la bacteria está expuesta. Bi b. a los componentes del humo de manera similar a lo que pasaría en los seres humanos. Cada una de las cuatro placas Petri que contenían la bacteria, fueron colocadas sin la cubierta dentro de la jarra Gaspak junto a tres cigarrillos encendidos (cada cigarrillo con la siguiente composición: 0,6 mg de nicotina, 8 mg de alquitrán y 9 mg de monóxido de carbono), contabilizándose una hora de exposición. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. desde que todos los cigarrillos estaban encendidos. La cantidad y el tiempo de exposición se tomó como base lo reportado en otras investigaciones.5 (Ver anexo N° 2 y 3) 2.2.7. Determinación de la susceptibilidad bacteriana a vancomicina. na. después de la exposición al humo lateral de cigarrillo. Luego de una hora de exposición de las cepas de Staphylococcus. ici. aureus al humo lateral de cigarrillo, se procedió a realizar el. ed. inóculo joven de las bacterias expuestas en agar Soya Tripticasa a. M. 37° C por 24 horas. Posteriormente con este inóculo joven se sembraron en agar Müller Hinton a 37°C por 24 horas con los. de. discos de vancomicina de 30 ug, mediante la técnica de difusión de discos de Kirby Bauer.. ca. 2.2.8. Interpretación de resultados. lio te. Luego de la incubación se hizo la lectura de los diámetros de cada. Bi b. cultivo de Staphylococcus aureus antes y después de la exposición De cada cepa se obtuvo en total 16 diámetros de halos de inhibición del crecimiento bacteriano, determinándose luego el promedio. El valor obtenido se utilizó para la interpretación del perfil de susceptibilidad. bacteriana. a. la. vancomicina. (sensible. a. vancomicina si el valor es ≥ 15 mm y resistente si es < 15 mm).. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.3.. ASPECTOS ÉTICOS Se tuvo en consideración los principios de bioseguridad correspondientes a trabajos in Vitro, a fin de no contaminar los ambientes de trabajo. Así mismo el principio ético adoptado en el capítulo 6 del código de ética del Colegio Médico del Perú titulado “Del trabajo de investigación”,. na. específicamente en el artículo 48, en el que se menciona sobre la. ici. presentación de la información proveniente de la investigación, independientemente de los resultados, sin incurrir en falsificación ni plagio. M. 2.4.. ed. en el estudio.24, 25. PROCESAMIENTO DE DATOS. de. Los datos consignados en las correspondientes hojas de recolección de datos (ver anexo N° 1) fueron procesados utilizando el paquete estadístico. ca. SPSS Statistics v21.0.0 y analizados con la prueba de McNemar,. Bi b. lio te. considerándolos estadísticamente significativos si el valor p es <0.05.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. Se incluyeron tres cepas de Staphylococcus aureus (una cepa estándar ATCC 25923 y dos cepas silvestres A y B), para su evaluación de susceptibilidad a la vancomicina antes y después de la exposición al humo lateral del cigarrillo.. na. En cuanto a la determinación de la susceptibilidad a la vancomicina, las cepas de Staphylococcus aureus fueron sensibles en el 100%, antes y antes y después de la. ed. ici. exposición al humo lateral de cigarrillo.. No hay variación estadísticamente significativa en la sensibilidad de. M. Staphylococcus aureus frente a la vancomicina. Sin embargo, se encontró disminución de los diámetros de los halos de inhibición del crecimiento bacteriano. Bi b. lio te. ca. de. en las 3 cepas de Staphylococcus aureus, como se muestran en las Tablas 1, 2 y 3.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 1. Efecto in Vitro en la susceptibilidad a la vancomicina de la cepa ATCC 25923 de Staphylococcus aureus, antes y después de la. ici. Después de la exposición Diámetro del Promedio de halo de los inhibición diámetros (mm) (mm) 25 26 28 26 20 23 25 25 25.31* 26 28 25 25 26 26 26 25 Sensible. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. Antes de la exposición Diámetro del Promedio Número de halo de de los repeticiones inhibición diámetros (mm) (mm) 27 1 30 2 30 3 30 4 25 5 25 6 32 7 27 8 28.81* 30 9 30 10 30 11 28 12 28 13 28 14 28 15 33 16 Sensible Susceptibilidad Fuente: datos obtenidos por el investigador. na. exposición al humo lateral de cigarrillo.. *Susceptibilidad. S: sensible a la vancomicina (≥15 mm), R: resistente (<15 mm). 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 2.. Efecto in Vitro en la susceptibilidad a la vancomicina de la cepa silvestre A de Staphylococcus aureus, antes y después de. ici. Después de la exposición Diámetro del Diámetro del halo de halo de inhibición inhibición (mm) (mm) 19 18 22 20 19 23 20 25 20.18* 16 20 22 23 18 18 22 18 Sensible. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. Antes de la exposición Diámetro del Promedio Número de halo de de los repeticiones inhibición diámetros (mm) (mm) 20 1 28 2 22 3 28 4 22 5 25 6 22 7 20 8 22.12* 18 9 19 10 22 11 23 12 21 13 25 14 20 15 19 16 Sensible Susceptibilidad Fuente: datos obtenidos por el investigador. na. la exposición al humo lateral de cigarrillo. *Susceptibilidad. S: sensible a la vancomicina (≥15 mm), R: resistente (<15 mm). 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla N° 3.. Efecto in Vitro en la susceptibilidad a la vancomicina de la cepa silvestre B de Staphylococcus aureus antes y después de. ici. Después de la exposición Diámetro Diámetro del del halo de halo de inhibición inhibición (mm) (mm) 18 18 18 18 21 22 20 20 18.56* 16 18 18 18 18 18 18 18 Sensible. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. Antes de la exposición Diámetro del Promedio de Número de halo de los repeticiones inhibición diámetros (mm) (mm) 19 1 21 2 20 3 24 4 19 5 20 6 22 7 20 8 21.00* 24 9 25 10 21 11 23 12 19 13 19 14 20 15 20 16 Sensible Susceptibilidad Fuente: datos obtenidos por el investigador. na. la exposición al humo lateral de cigarrillo. *Susceptibilidad. S: sensible a la vancomicina (≥15 mm), R: resistente (<15 mm). 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN. En el presente trabajo se evaluó si la exposición al humo lateral de cigarrillo tiene efecto en la susceptibilidad de Staphylococcus aureus a la vancomicina, determinando si se vuelve resistente frente a este antibiótico, utilizando el método. na. de Kirby Bauer. De acuerdo a los resultados se encontró disminución de los halos de inhibición del crecimiento después de la exposición al HLC, sin embargo, esta. ici. variación no es estadísticamente significativa, todas las cepas utilizadas fueron. ed. sensibles a la vancomicina.. M. Esta diferencia en los diámetros de inhibición de crecimiento bacteriano, con. de. tendencia a la disminución que se ven reflejados en las Tablas N° 1, 2 y 3. Esta poca variación del diámetro de los halos frente a la vancomicina, puede deberse a la. ca. diferencia en los modelos de exposición al HLC. McEachern EK et al. quienes usaron extracto de humo de cigarrillo, con un tiempo de exposición de 24 horas.18. lio te. Mientras que, Kulkarni R et al. haciendo uso también del extracto de humo, pero con exposición de una hora, encontraron aumento de la resistencia, reflejado en la. Bi b. formación de biopelículas.5 En el presente trabajo se necesitaría más tiempo de exposición al estímulo (HLC) para generar mayores cambios.. Sin embargo, las investigaciones antes citadas usaron modelos de exposición en base a extracto de humo de cigarrillo, a diferencia del presente trabajo en que se diseñó un método de exposición del Staphylococcus aureus al HLC, procurando que la bacteria absorba los componentes que contiene el humo de manera similar a lo que sucedería en los seres humanos. Esto se respalda con las revisiones e 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. investigaciones realizadas por Li X y Cao X et al, respectivamente, quienes encuentran que la exposición al HLC refleja real y completamente sus efectos biológicos sobre la bacteria, en comparación con las pruebas de extracto de humo de cigarrillo.22, 23. na. En referencia al método usado en la identificación de la susceptibilidad de la. ici. bacteria a la vancomicina, la difusión en discos de Kirby Bauer, es el procedimiento más comúnmente empleado por los laboratorios microbiológicos y hospitales en. ed. todo el mundo para determinar la resistencia antimicrobiana frente a los. M. antibióticos, además de haberse demostrado su fiabilidad y viabilidad con resultados comparables con el patrón de oro, la dilución en agar.26-28 A diferencia. de. de otras investigaciones que hacen uso de la formación de biopelículas, de la susceptibilidad a la muerte por macrófagos e incluso mayor gravedad de neumonía. ca. causada por la bacteria en modelos murinos, para evaluar el aumento de la. lio te. resistencia bacteriana.5, 17, 18, 29. A diferencia de la presente investigación, numerosos son los trabajos que. Bi b. encuentran que la exposición al HLC aumenta significativamente la resistencia del Staphylococcus aureus y del SAMR. McEachern K et al, hallaron que el SAMR sometidos al HLC fueron cuatro veces más resistentes a la fagocitosis que los controles. Asimismo, el SAMR disminuyó su crecimiento, que sería un mecanismo de defensa que adopta la bacteria para volverse más resistente.18,. 30. Crotty. Alexander LE et al. demostraron que SAMR tras su exposición al humo de cigarrillo, adquirían una carga superficial más positiva, disminuyendo su. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. susceptibilidad a péptidos antimicrobianos, formaban biopelículas y estimulaba su secreción de ácido, aumentando su virulencia.17. De la misma forma, se ha demostrado que el humo del cigarrillo y la exposición al humo de segunda mano causan cambios hereditarios en ratones y ratas.31,. 32. na. Sabiendo que el HLC origina cambios de larga data en las células de mamíferos, es. ici. consistente que la exposición al humo también podría conducir a cambios. ed. heredables y persistentes en las células bacterianas, como el SAMR.. M. Estos cambios como: la formación de biopelículas, la resistencia a la fagocitosis, el cambio de cargas en la superficie, la alteración de inmunidad innata, entre otros,. de. son consistentes con los múltiples cambios inducidos en el SAMR a través del estrés de estar expuestos a algunas de las 4 000 sustancias químicas presentes en el humo. ca. del cigarrillo.33-36 Las sustancias como el monóxido de carbono, los radicales de. lio te. oxígeno y la nicotina causan cambios directamente proporcionales a la dosis que se aplique a las bacterias.18. Bi b. Aun cuando no se encontró cambios significativos en la susceptibilidad antimicrobiana de Staphylococcus aureus frente a vancomicina en el presente trabajo, el presente trabajo propone un nuevo y mejor método, respaldado en investigaciones,22, 23 con el que se logra la exposición de la bacteria al HLC como sucede en los fumadores pasivos. Asimismo, se contribuye y se amplía el conocimiento sobre los efectos que tiene el HLC no solamente sobre la salud, sino también en la contribución de la evolución del Staphylococcus aureus hacia una. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. cepa resistente a los antibióticos, aún más cuando hoy en día existe una creciente farmacorresitencia que se propaga a nivel mundial y ponen en peligro la capacidad de tratar las infecciones con el consiguiente aumento de la morbimortalidad.37 Además de saber que no solo el uso indiscriminado de antibióticos causa esta resistencia,38 sino también la exposición de las bacterias que nos colonizan a. na. estímulos ambientales como el HLC, lo cual se necesita tener en consideración para. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. seguir con futuras investigaciones al respecto.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. -. CONCLUSIONES. Las cepas de Staphylococcus aureus antes de la exposición al humo lateral de cigarrillo fueron sensibles a la vancomicina.. -. Las cepas de Staphylococcus aureus después de la exposición al humo lateral de cigarrillo fueron sensibles a la vancomicina. Se encontró disminución del diámetro del halo de inhibición, pero sin. na. -. ici. variación en la susceptibilidad, después de la exposición de las cepas de. -. RECOMENDACIONES. M. VI.. ed. Staphylococcus aureus al humo lateral de cigarrillo.. Realizar estudios con el método propuesto, pero con un mayor tiempo de. de. exposición de las bacterias al humo lateral de cigarrillo Ensayar con otras especies bacterianas que colonizan las vías respiratorias. -. Emplear otros métodos de medición de susceptibilidad bacteriana frente a los. ca. -. Bi b. lio te. antibióticos.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VII. 1.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Organización Mundial de la Salud (OMS). Tabaco [internet]: OMS; 2015 [Consultado. el. 21. de. enero. de. 2017].. Disponible. en:. http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs339/es/ Ministerio de Salud. Ambientes Libres de Humo de Tabaco. Lima: MINSA; 2011.. [Consultado. el. 21. de. enero. de. na. 2.. 2017].. Disponible. en:. World Health Organization. WHO Report on the global tobacco epidemic,. ed. 3.. ici. http://www.minsa.gob.pe/portada/Especiales/2011/antitabaco/index.htm. 2011: 1: warning about the dangers of tobacco. Italy: WHO Library. Ebbert JO, Croghan IT, Schroeder DR, Murawski J, Hurt RD. Association. de. 4.. M. Cataloguing-in-Publication Data; 2011.. between respiratory tract diseases and secondhand smoke exposure among. 2007; 6:28.. Kulkarni R, Antala S, Wang A, Amaral FE, Rampersaud R, LaRussa SJ, et. lio te. 5.. ca. never smoking flight attendants: a cross-sectional survey. Environ Health.. al. Cigarette Smoke Increases Staphylococcus aureus Biofilm Formation via Oxidative Stress. Infect Immun. 2012; 80(11):3804-11. Garmendia J, Morey P, Bengoechea JA. Impact of cigarette smoke exposure. Bi b. 6.. on host-bacterial pathogen interactions. Eur Respir J. 2012; 39:467-77.. 7.. Kulkarni R, Rampersaud R, Aguilar JL, Randis TM, Kreindler JL, Ratner AJ. Cigarette smoke inhibits airway epithelial cell innate immune responses to bacteria. Infect Immun. 2010; 78(5):2146-52.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 8.. Ak S, Gürses SA, Eser BE. Effect of cigarette smoke extracton phagocytosis of Staphylococcus aureus by macrophages. Mikrobiyol Bul. 2016; 50(2):20514.. 9.. Arcavi L, Benowitz NL. Cigarette smoking and infection. Arch Intern Med. 2004; 164:2206-16. Lowy FD. Staphylococcus aureus infections. N Engl J Med. 1998;. na. 10.. 11.. ici. 339(8):520-32.. Murphy TF, Bakaletz LO, Smeesters PR. Microbial interactions in the. Neyra J, Ellis M, Rocha C, Silvera J, Apolaya M, Bernal M, et al. Prevalence. M. 12.. ed. respiratory tract. Pediatr Infect Dis J. 2009; 28(Supl 10):121-6.. of Nasal colonization with Staphylococcus aureus in 4 cities in Peru. Trop. 13.. de. Dis Travel Med Vaccines. 2016; 2(12):1-9. Ko KS, Lee JY, Baek JY, Peck KR, Rhee JY, Kwon KT, et al.. ca. Characterization of Staphylococcus aureus nasal carriage from children. lio te. attending an outpatient clinic in Seoul, Korea. Microb Drug Resist. 2008; 14(1):37-44.. 14.. Brook I, Gober AE. Effect of Smoking Cessation on the Microbial Flora.. Bi b. Arch Otolaryngol Head Neck Surg. 2007; 133(2):135-8.. 15.. Durmaz R, Tekerekoğlu MS, Kalcioğlu T, Ozturan O. Nasal carriage of methicillin-resistant Staphylococcus aureus among smokers and cigarette factory workers. New Microbiol. 2001; 24(2):143-7.. 16.. Rodríguez EA, Jiménez JN. Factores relacionados con la colonización por Staphylococcus aureus. IATREIA. 2015; 28(1):66-77.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 17.. Crotty Alexander LE, Enany S, Hwang H, Sladewski K, Nizet V. Electronic cigarette vapor (ECV) exposure decreases. Staphylococcus. aureus. susceptibility to macrophage and neutrophil killing. AJRCCM. 2014; A6624. 18.. McEachern EK, Hwang JH, Sladewski KM, Nicatia S, Dewitz C, Mathew DP, et al. Analysis of the Effects of Cigarette Smoke on Staphylococcal. Stanković A, Nikolić M, Arandelović M. Exposure to environmental tobacco. ici. 19.. na. Virulence Phenotypes. Infect Immun. 2015; 83(6):2443-52.. Health. 2012; 20(1):24-8.. Bello S, Michalland S, Soto M, Contreras C, Salinas J. Efectos de la. M. 20.. ed. smoke and absence from work in women in Nis, Serbia. Cent Eur J Public. exposición al humo de tabaco ambiental en no fumadores. Rev Chil Enf. 21.. de. Respir. 2005; 21:179-92. Clinical and Laboratory Standards Institute. Performance standards for. ca. antimicrobial susceptibility testing twenty-first informational supplement. 22.. lio te. M100–S21. Wayne, PA: CLSI; 2012. Li X. In Vitro toxicity testing of cigarette smoke based on the air-liquid interface exposure: A review. Toxicol In Vitro. 2016; 36:105-13. Cao X, Muskhelishvili L, Latendresse J, Richter P, Heflich RH. Evaluating. Bi b. 23.. the Toxicity of Cigarette Whole Smoke Solutions in an Air-liquid-interface Human in Vitro Airway Tissue Model. Toxicol Sci. 2017; 1-11.. 24.. Colegio Médico del Perú. Código de Ética y Deontología. Lima (Perú): CMP; 2007.. 25.. Organización Mundial de la Salud. Manual de bioseguridad en el laboratorio. Ginebra: OMS; 2005.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 26.. Liu H, Taylor TH, Pettus K, Johnson S, Papp JR, Trees D. Comparing the disk-diffusion and agar dilution tests for Neisseria gonorrhoeae antimicrobial susceptibility testing. Antimicrob ResistInfect Control. 2016; 5:1-6.. 27.. Jorgensen JH, Ferraro MJ. Antimicrobial susceptibility testing: A review of general principles and contemporary practices. Clin Infect Dis. 2009;. Liu H, Taylor TH, Pettus K, Trees D. Assessment of Etest as an alternative to. ici. 28.. na. 49:1749-55.. J Clin Microbiol. 2014; 52:1435-40.. Ni I, Ji C, Vij N. Second-hand cigarette smoke impairs bacterial phagocytosis. M. 29.. ed. agar dilution for antimicrobial susceptibility testing of Neisseria gonorrhoeae.. in macrophages by modulating CFTR dependent lipid-rafts. PLoS One. 2015;. 30.. de. 10(3):1-16. Kristian SA, Timmer AM, Liu GY, Lauth X, Sal-Man N, Rosenfeld Y, et al.. ca. Impairment of innate immune killing mechanisms by bacteriostatic. 31.. lio te. antibiotics. FASEB J. 2007; 21:1107-16. Maritz GS, Mutemwa M. The effect of grand maternal nicotine exposure during gestation and lactation on lung integrity of the F2 generation. Pediatr. Bi b. Pulmonol. 2014; 49:67-75.. 32.. Marchetti F, Rowan-Carroll A, Williams A, Polyzos A, Berndt-Weis ML, Yauk CL. Sidestream tobacco smoke is a male germ cell mutagen. Proc Natl AcadSci USA. 2011; 108:12811-4.. 33.. Li C, Schuetz JD, Naren AP. Tobacco carcinogen NNK transporter MRP2 regulates CFTR function in lung epithelia: implications for lung cancer. Cancer Lett. 2010; 292:246-53.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 34.. Holzman DC. Cigarette Smoke May Increase Microbial Virulence. Environ Health Perspect. 2013; 121(3): a75.. 35.. Goldstein-Daruech N, Cope EK, Zhao K-Q, Vukovic K, Kofonow JM, Doghramji L, et al. Tobacco Smoke Mediated Induction of Sinonasal Microbial Biofilms. PLoS ONE. 2011; 6(1):1-7. Hwang JH, Lyes M, Sladewski K, Enany S, McEachern E, Mathew DP, et al.. na. 36.. ici. Electronic cigarette inhalation alters innate immunity and airway cytokines while increasing the virulence of colonizing bacteria. J Mol Med (Berl). 2016;. Alós JI. Resistencia bacteriana a los antibióticos: una crisis global. Enferm. M. 37.. ed. 94(6):667-79.. 38.. de. Infecc Microbiol Clin. 2015; 33(10):692-9.. Chaudhary AS. A review of global initiatives to fight antibiotic resistance and. Bi b. lio te. ca. recent antibiotics‫ ׳‬discovery. Acta Pharmaceutica Sinica B. 2016; 6(6):552-6.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VIII. ANEXOS. ANEXO N° 1: TABLA DE RECOLECCIÓN DE DATOS “Efecto in Vitro de la exposición al humo lateral de cigarrillo en la susceptibilidad de Staphylococcus aureus a la vancomicina”. na. Cepa:………………………………………. Fecha:………………………………………. 14 15 16 1 2 3 4 . . . 14 15 16. Bi b. POST-PRUEBA. M. SUSCEPTIBILIDAD*. S. . . .. ca. . . .. de. 1 2 3 4. lio te. PRE-PRUEBA. NÚMERO DE REPETICIONES (discos de vancomicina). PROMEDIO DE LOS DIÁMETROS DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN (mm). ed. DIÁMETRO DEL HALO DE INHIBICIÓN (mm). ici. Hora de registro de datos:………………... R. S . . . R. *Susceptibilidad. S: sensible a la vancomicina (≥ 15 mm), R: resistente a la vancomicina (<15mm). 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N° 2: ESQUEMA DEL PROCEDIMIENTO Cepas. Obtener cultivos jóvenes en agar soya tripticasa (x 24 h / 37° C). X8. ed. ici. Cultivo en agar Müller Hinton (x 24 h / 37° C). na. Suspensión en caldo Müller Hinton. Bi b. lio te. ca. de. PRE-PRUEBA: determinación de la resistencia bacteriana antes de la exposición al HLC. Técnica de difusión de discos de Kirby Bauer (dejarlo x 24 h/ 37°C). M. 4 PLACAS PETRI. 4 PLACAS PETRI. Inspección visual de cada placa. Registro del diámetro del halo de inhibición.. X4. Exposición al humo lateral de cigarrillo (HLC) (3 cigarrillos) por una hora. Obtener colonias jóvenes en agar soya tripticasa (x 24 h / 37° C). Suspensión en caldo Müller Hinton (x 24 h / 37° C). X4. Cultivo en agar Müller Hinton (x 24 h / 37° C). POST-PRUEBA: determinación de la resistencia bacteriana posterior a la exposición al HLC.. Inspección visual de cada placa. Registro del diámetro del halo de inhibición.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N° 3: FOTOGRAFÍAS DE LA EXPERIMENTACIÓN Figura N° 1. Obtención de cultivos de Staphylococcus aureus jóvenes. . Figura N° 2. Suspensión de las cepas en caldo Müller Hinton. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. . 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Figura N° 3. Comparación de la turbidez con el estándar 0.5 de la escala del. . ca. de. M. ed. ici. na. Nefelómetro de Mc Farland. Figura N° 4. Cultivo de las cepas de Staphylococcus aureus en agar Müller. Bi b. lio te. Hinton. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Figura N° 5. Colocación de los discos de vancomicina para la determinación. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. de la resistencia bacteriana antes de la exposición al HLC.. . 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.        . . Figura N° 6. Inspección visual y medición del diámetro del halo de inhibición de las 3 cepas de Staphylococcus aureus a la vancomicina antes de exposición. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. al HLC.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Figura N° 7. Exposición de las cepas de Staphylococcus aureus al humo lateral de cigarrillo. Bi b. lio te. ca. . de. M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. . Figura N° 8. Cultivo de las cepas de Staphylococcus aureus después de la. . de. M. ed. ici. na. exposición del HLC. Figura N° 9. Colocación de los discos de vancomicina para la determinación. Bi b. lio te. ca. de la resistencia bacteriana después de la exposición al HLC.. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) . M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura N° 10. Inspección visual y medición del diámetro del halo de inhibición. Bi b. lio te. ca. exposición al HLC.. de. de las 3 cepas de Staphylococcus aureus a la vancomicina después de. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N° 4: CRITERIOS DE EVALUACIÓN DEL INFORME FINAL DE LOS TRABAJOS DE INVESTIGACIÓN EN LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT. c. El título no refleja el contenido del trabajo.. ici. 2. RESUMEN. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave.. ed. a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave.. M. c. Tiene más de 200 palabras o no tiene palabras clave. 3. ABSTRACT. Puntajes. na. Aspectos 1.TITULO a. Contiene las variables del problema de investigación. No es mayor a quince palabras. b. El título refiere de manera general las variables del problema. Tiene más de 15 palabras. de. a. Tiene no más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma inglés.. 1 0.5 0.1. 0.5 0.3 0.1. 0.5 0.3. c. Tiene más de 200 palabras en idioma inglés o no tiene palabras clave o uso incorrecto del idioma inglés.. 0.1. 4. INTRODUCCIÓN. ca. b. Tiene más de 200 palabras y palabras clave con correcto uso del idioma inglés.. lio te. a. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, presenta el problema con sustento, la hipótesis es coherente con el problema y objetivos. b. Se basa en antecedentes de conocimientos previos, el problema no está bien sustentado o la hipótesis no es coherente con el problema y/o objetivos.. Bi b. c. Se basa en antecedentes de conocimientos previos. No presenta problema y/u objetivos.. 3.5. 2 1. 5. MATERIAL Y MÉTODO a. La muestra recolectada es representativa, adecuada y plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema.. 3. b. La muestra recolectada es representativa, adecuada y no plantea un diseño experimental apropiado a la solución del problema.. 2. c. La muestra recolectada no es representativa, ni adecuada.. 1. 6. RESULTADOS a. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del problema e incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo a las normas internacionales.. 4. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. b. Presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del problema. No incluye pruebas estadísticas, figuras y tablas de acuerdo a las normas internacionales. c. No presenta los resultados en forma sistemática en función de las variables del problema. 7. ANALISIS Y DISCUSION. 2 1. 4. b. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. Busca generalizaciones y establecer las posibles implicancias de los nuevos conocimientos.. 2. na. a. Discute cada uno de los resultados para probar su validez y contrasta con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. Busca generalizaciones y establecer las posibles implicancias de los nuevos conocimientos.. 1. 8. CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES a. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra. Formula conclusiones lógicas y emite recomendaciones viables.. 2. ed. ici. c. Discute algunos resultados para probar su validez y no contrasta con las pruebas estadísticas mencionadas en los resultados. No busca generalizaciones.. 9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. M. b. Replantea sumariamente el problema y las características de la muestra. No formula conclusiones lógicas o no emite recomendaciones viables. c. No replantea sumariamente el problema, ni las características de la muestra.. de. a. Presentan citas justificables y asentadas de acuerdo a un solo sistema de referencia bibliográfica reconocido internacionalmente. ca. b. No presenta citas justificables que están asentadas de acuerdo a un solo sistema de referencia bibliográfica reconocido internacionalmente. lio te. c. Presenta citas que no se justifican o usa más de un sistema de referencia bibliográfica reconocido internacionalmente. 1 0.5. 1. 0.5. 0.2. 10. APÉNDICE Y ANEXOS.. 0.5. b. Presentar valores desordenados, pero de acuerdo a las normas internacionales.. 0.3. Bi b. a. Presentar valores ordenados sistemáticamente de acuerdo a las normas internacionales.. c. Presentar valores desordenados que no están de acuerdo a las normas internacionales. 0.1. CALIFICACIÓN DEL INFORME FINAL. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N° 5: CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA DEFENSA DE LA TESIS EN LA FACULTAD DE MEDICINA DE LA UNT Aspectos 1. EXPOSICIÓN a. Formalidad lógica, lingüística y metodológica y uso adecuado de medios audio/visuales b. Exposición con formalidad lógica lingüística y metodológica pero no hace uso adecuado de los medios audiovisuales c. Incongruencia en la formalidad lógica, lingüística y metoclol6gica y uso inadecuado de medios audiovisuales.. Puntajes 5 3. na. 1. M. ed. ici. 2. CONOCIMIENTO DEL TEMA a. Fluidez, dominio del tema y suficiente en responder preguntas b. Fluidez, dominio del tema pero lentitud e inseguridad en las respuestas c. No dominio del Tema, respuestas contradictorias o no responde 3. RELEVANCIA DE LA INVESTIGACIÓN a. Relevancia completa de las conclusiones en la salud. b. Relevancia parcial. c. Ninguna relevancia 4. ORIGINALIDAD a. Original. b. Repetitivo en nuevo ámbito c. Repetitivo 5. FORMALIDAD a. Presentación personal formal acorde con el acto académico. b. Presentación formal pero no acorde con el acto académico. c. Presentación informal CALIFICACION DE LA DEFENSA DE LA TESIS. de. ca. 4 2 1 4 2 1 2 1 0.5. CALIFICACION DEL INFORME FINAL (A):. x3=. CALIFICACION DE LA DEFENSA DE LA TESIS (B):. x1=. lio te. 5 3 1. Bi b. SUBTOTAL(A+B) / 4 = NOTA NOTA:. Jurado: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ _______________. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IDENTIFICACIÓN DE LA TESIS: Nombre: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ _______________. ici. na. Autor: ________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________ __________. M. (Promedio de las 03 notas del Jurado). ed. CALIFICACIÓN FINAL:. Nombre. Presidente:. Dr.……………………......... Código Docente. ……………. ca. ……………. Firma. ……………………………………………………. lio te. Grado Académico:. de. JURADO:. Dr.………………………….. Grado Académico:. ……………………………………………………. Bi b. Secretario:. ……………. ……………. …………….. Miembro:. Dr……………………........... ……………... Grado Académico:. …………………………………………………….. 46 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N° 6: EVALUACIÓN DE LA TESIS El Jurado deberá consignar las observaciones y objeciones pertinentes, si los hay, relacionados a los siguientes ítems:. Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. TESIS:…………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… TÍTULO:………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… RESUMEN:……………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ABSTRACT:……………………………………………………………………… …….……………………………………………………………………………… INTRODUCCIÓN:……………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… MATERIAL Y MÉTODOS: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………… RESULTADOS:…………………..……………………………………………… ….…………………………………………..……………………………………… ……….…………………………………………..………………………………… ANÁLISIS Y DISCUSIÓN: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES: ……………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………….. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ANEXOS: ……………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………… ………………………........ Nombre Firma 47. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXO N° 7: RESPUESTAS DE TESISTAS A OBSERVACIONES DEL JURADO El Tesista deberá responder en forma concreta de las observaciones del jurado a manuscrito en el espacio correspondiente: a) Fundamentando su discrepancia.. na. b) Si está de acuerdo con la observación también registrarla.. ici. c) Firmar.. TESIS:……………………………………………………………………………. ed. ……………………………………………………………………………………. M. …………………………………………………………………………………… FUNDAMENTACIÓN:. de. …………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………. ca. ……………………………………………………………………………………. lio te. …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… ……………………………………………………………………………………. Bi b. …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… ………………………………………………………………. ………………………........ Nombre Firma. 48 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Bi b. lio te. ca. de. M. ed. ici. na. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 49 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

Referencias

Documento similar

que hasta que llegue el tiempo en que su regia planta ; | pise el hispano suelo... que hasta que el

dente: algunas decían que doña Leonor, &#34;con muy grand rescelo e miedo que avía del rey don Pedro que nueva- mente regnaba, e de la reyna doña María, su madre del dicho rey,

Entre nosotros anda un escritor de cosas de filología, paisano de Costa, que no deja de tener ingenio y garbo; pero cuyas obras tienen de todo menos de ciencia, y aun

6 Para la pervivencia de la tradición clásica y la mitología en la poesía machadiana, véase: Lasso de la Vega, José, “El mito clásico en la literatura española

d) que haya «identidad de órgano» (con identidad de Sala y Sección); e) que haya alteridad, es decir, que las sentencias aportadas sean de persona distinta a la recurrente, e) que

Ciaurriz quien, durante su primer arlo de estancia en Loyola 40 , catalogó sus fondos siguiendo la división previa a la que nos hemos referido; y si esta labor fue de

En este trabajo estudiamos la obra poética en español del escritor y profesor argelino Salah Négaoui, a través de la recuperación textual y análisis de Poemas la voz, texto pu-

Las manifestaciones musicales y su organización institucional a lo largo de los siglos XVI al XVIII son aspectos poco conocidos de la cultura alicantina. Analizar el alcance y