Efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de Myrciaria dubia “camu camu” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. IC. IN. A. -U. NT. ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA. ED. TESIS. Efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de Myrciaria dubia. M. “camu-camu” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente. DE. PARA OPTAR EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. FA. CU. LT. AD. MÉDICO CIRUJANO. AUTOR. Socorro Gamboa, Bryan Donny. ASESORES Dra. Mejía Delgado, Elva Manuela Dra. Soto Vásquez, Marilú Roxana. TRUJILLO-PERÚ 2018. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. DEDICATORIA. A Dios, por ser mi guía y brindarme las fuerzas y sabiduría necesaria durante. NT. estos 6 años para seguir adelante y. A. -U. superar los retos de la vida.. IN. A mis padres José y Ana, por todo el amor. IC. y apoyo incondicional que me han. ED. brindado siempre, por ser mi mayor. luchar por mis metas.. AD. DE. M. fortaleza y mostrarme con su ejemplo a. A mis hermanos Michel y José, por. LT. enseñarme a ser paciente y por siempre. FA. CU. confiar en mí.. A mi abuelita Elia (mamá Elia), por criarme desde pequeño y por todo el amor que me brindo siempre.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. A todos mis tíos, primos y demás familiares por siempre estar pendientes de mí y mi avance en las distintas etapas. NT. de mi vida.. A todas las grandes amistades que forjé. -U. en la Facultad de Medicina y en La. A. Pastoral Universitaria Medicina – UNT.. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. Por su apoyo y por alegrar mis días.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. AGRADECIMIENTO. A la Dra. Elva Mejía Delgado, mi asesora, por brindarme su apoyo y orientación. NT. durante la realización del presente trabajo de investigación.. -U. A la Dra. Marilú Soto Vásquez, por su apoyo y trato amable en el Laboratorio de. A. Farmacognosia- Farmacobotánica de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la. IC. IN. UNT. ED. Al personal técnico del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina. DE. M. de la UNT, por su gran apoyo y servicio durante la ejecución de la investigación.. A Leydi García Rodríguez, por brindarme su apoyo incondicional y por sus. FA. CU. LT. AD. consejos en los momentos más difíciles.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. ÍNDICE I.. RESUMEN…………………………………………………………… 5. II.. ABSTRACT…………………………………………………………. 6. III.. INTRODUCCIÓN……………………………………………………. 7. NT. 3.1. Justificación……………………………………………………. 14. -U. 3.2. Problema………………………………………………………. 15 3.3. Hipótesis………………………………………………………... 15. MATERIAL Y MÉTODOS. IN. IV.. A. 3.4. Objetivos………………………………………………………. 15. IC. 4.1. Material………………………………………………………… 17. ED. 4.2. Métodos y técnicas...………………………………………….. 19. M. 4.3. Definición y operacionalización de variables ...………………. 26. DE. 4.4. Recolección de datos...…………………………………………. 28 4.5. Análisis estadísticos...…………………………………………. 28. AD. 4.6. Aspectos éticos……...…………………………………………. 28. RESULTADOS………………………………………………………. 30. CU. V.. LT. 4.7. Diseño experimental...…………………………………………. 29. VI.. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN…………………………………………. 35. FA. VII. CONCLUSIONES…………………………………………………… 42 VIII. RECOMENDACIONES…………………………………………….. 43. IX.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………. 44. X.. ANEXOS…………………………………………………………….. 50. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. I.. RESUMEN. NT. OBJETIVO: Evaluar el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de Myrciaria dubia “camu-camu” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente. -U. (SAMR).. A. MATERIAL Y MÉTODOS: Estudio experimental, prospectivo y transversal del. IN. efecto inhibitorio de las concentraciones al 25%, 50%, 75% y 100% del extracto. IC. etanólico de Myrciaria dubia sobre SAMR, utilizando vancomicina como control. ED. positivo y suero fisiológico como control negativo. Se empleó el método de Kirby. M. Bauer para determinar la sensibilidad al extracto y la macrodilución en caldo para. DE. establecer la concentración mínima inhibitoria (CMI). En el análisis estadístico se calculó la desviación estándar, se hizo un análisis de varianza y se empleó la prueba. AD. de Duncan; con un nivel de significancia del 5% (p < 0,05).. LT. RESULTADOS: La sensibilidad de SAMR al extracto etanólico de Myrciaria dubia al 25%, 50%, 75% y 100% fue de 14,4 ± 0,516 mm; 15,3 ± 0,483 mm; 16,4. CU. ± 0,516; 16,8 ± 0,632 mm, respectivamente. La CMI fue en la concentración del. FA. 25% (250mg/ml) del extracto etanólico de Myrciaria dubia. CONCLUSIONES: El extracto etanólico de Myrciaria dubia “camu-camu” tiene. efecto inhibitorio in vitro sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente.. PALABRAS CLAVE: Myrciaria dubia, Staphylococcus aureus meticilino resistente, extracto etanólico, camu-camu. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. II.. ABSTRACT. NT. OBJECTIVE: To evaluate the in vitro inhibitory effect of the ethanolic extract of Myrciaria dubia "camu-camu" on methicillin-resistant Staphylococcus aureus. -U. (MRSA).. A. MATERIAL AND METHODS: Experimental, prospective and cross-sectional. IN. study of the inhibitory effect of 25%, 50%, 75% and 100% concentrations of the. IC. ethanolic extract of Myrciaria dubia on MRSA, using vancomycin as a positive. ED. control and physiological saline as a negative control. The Kirby Bauer method was. M. used to determine the sensitivity to the extract and macrodilution in broth to. DE. establish the minimum inhibitory concentration (MIC). In the statistical analysis, averages and standard deviation were calculated, an analysis of variance was made. AD. and the Duncan test was used; with a level of significance of 5% (p <0.05).. LT. RESULTS: The sensitivity of MRSA to the ethanolic extract of Myrciaria dubia at 25%, 50%, 75% and 100% was 14.4 ± 0.516 mm; 15.3 ± 0.483 mm; 16.4 ± 0.516;. CU. 16.8 ± 0.632 mm, respectively. The MIC was at the 25% concentration (250mg /. FA. ml) of the ethanolic extract of Myrciaria dubia. CONCLUSIONS: The ethanolic extract of Myrciaria dubia "camu-camu" has inhibitory effect in vitro on methicillin-resistant Staphylococcus aureus.. KEY WORDS: Myrciaria dubia, Methicillin-resistant Staphylococcus aureus, ethanolic extract, camu-camu. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. III. INTRODUCCIÓN En la actualidad, la resistencia a los fármacos antibacterianos (RAB) es considerada un problema de salud mundial, que afecta a las personas y la economía de las naciones1,2. La RAB se produce cuando los medicamentos utilizados para. NT. curar las infecciones dejan de ser eficaces, generando enfermedades más largas, mayor mortalidad, estancias hospitalarias prolongadas, mayor riego en los. -U. procedimientos quirúrgicos e incremento de los costos de la atención sanitaria3-5.. A. El factor más importante para la aparición de RAB es el uso inadecuado de los. IN. fármacos antibacterianos, que ocurre cuando: se emplean en situaciones que no lo. IC. ameritan, se usan antimicrobianos con espectro de acción diferente al. ED. microorganismo sospechado o aislado, se utilizan una dosis o duración. DE. M. incorrecta2,5,6.. AD. Staphylococcus aureus (SA), es una bacteria Gram positiva potencialmente patógena para el humano, pudiendo causar desde infecciones en la piel y los tejidos. LT. blandos hasta enfermedades sistémicas muy graves que amenazan la vida. Sus. CU. mecanismos de virulencia son propios de la estructura de su pared celular, además. FA. se adapta rápidamente a los cambios ambientales y tiene una gran capacidad para adquirir resistencia a los agentes antimicrobianos; tal es así que, a los pocos años de la introducción de las cefalosporinas de primera generación y los betalactámicos (meticila), se empezaron a aislar cepas resistentes, denominándose Staphylococcus aureus meticilino resistente (SAMR)7,8.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. En Colombia en el 2014, en un estudio multicéntrico, se recolectaron 123,789 aislamientos microbiológicos, y se reportó una frecuencia de Staphylococcus spp. de 11.4% (segundo más frecuente), del cual, el 42% fueron cepas de SAMR9. Por otro lado, Londoño también en Colombia, encontró que Staphylococcus aureus. NT. desarrolló resistencia a antibacterianos con una frecuencia del 22%, mayor que las enterobacterias (E. coli, Klebsiella pneumoniae)10. Togneri A, en el 2017 en. -U. Argentina, encontró que la frecuencia de SAMR aumento de 28% al 78% en la. A. población pediátrica; mientras que, en la población adulta se mantuvo una media. ED. IC. IN. de 50%, en todos los cultivos en donde se aisló SA11.. El método empleado para la identificación fenotípica de SARM suele ser el. M. cultivo bacteriano y el estudio de sensibilidad a oxacilina o cefoxicitina: método de. DE. Kirby-Bauer y concentración mínima inhibitoria (CMI)12,13. Microbiológicamente se define resistencia a meticilina cuando la cepa tiene CIM a oxacilina > 4µg/mL y. AD. a meticilina > 16µg/mL14. Actualmente, también se pueden emplear métodos. LT. moleculares, tales como: la ribotipificación, los patrones de macro-restricción de. CU. ADN cromosómico por electroforesis de campo pulsado (PFGE), las técnicas. FA. basadas en PCR y, más recientemente, las basadas en el secuenciamiento de ADN8.. La resistencia a la meticilina está vinculada con el gen mecA, que se traduce en una Proteína Ligadora de Penicilina mutada (PBP2a), alterando su unión a los betalactámicos y evitando su mecanismo de acción (inhibición de la formación de peptidoglicanos)14-17. El gen mecA está localizado en la isla genómica denominada. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. casete cromosómico estafilocócico mec (SCCmec) que incluye a los genes ccr (responsables de la movilidad del casete cromosomal) y los genes de la región J (resistencia a otras familias de antibióticos; gen Tn554: resistencia a macrólidos, clindamicina, estreptograminas y gen pT181: resistencia a tetraciclinas)16,17.. NT. Además, posee genes de virulencia (LukF-PV o LukS-PV que codifican la enzima Panto Valentin Leucocidina [PVL]) o genes para la síntesis de toxinas (enterotoxina. IN. A. -U. B y C, toxina de choque tóxico)16.. IC. Las distintas estructuras genéticas de los complejos de genes mec y genes ccr. ED. determinan el tipo de SCCmec, por otro lado, las diferencias en las regiones J determinan los subtipos dentro de un mismo casete cromosomal; es así, que a la. M. fecha se han descrito 11 tipos de casetes cromosomales estafilocóccicos17. Los. DE. SCCmec I, IV, VI y VII codifican resistencia exclusivamente a betalactámicos;. CU. LT. antibióticos16.. AD. mientras que los SCCmec II, III, VIII les confieren resistencia a múltiples clases de. Existen dos tipos de SAMR, uno asociado a la atención hospitalaria (SAMR-. FA. AH) y el otro adquirido en la comunidad (SAMR-AC). El SAMR-AH es frecuentemente responsable de las neumonías y sepsis intrahospitalarias; además, posee. resistencia. a. múltiples. antibióticos. (gentamicina,. ciprofloxacina,. eritromicina, etc), conferido a través de SCCmec de tipo II, III, VIII15,16.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Por otro lado, SAMR-AC causa infecciones de piel y partes blandas tales como celulitis, forúnculos y abscesos, que en casos severos pueden llegar a producir neumonía necrotizante, empiema, sepsis, bacteremia, piomiositis, osteomielitis, fascitis necrotizante, púrpura fulminante y émbolos sépticos15,16. Las cepas de. NT. SAMR-AC poseen resistencia a todos los betalactámicos, pero son sensibles a otros antimicrobianos, debido a los genes del SCCmec tipo I y IV. Las cepas SAMR-AC. -U. poseen genes que codifican PVL, exotoxina que induce necrosis y apoptosis sobre. A. los leucocitos y ha sido involucrada en las infecciones graves de piel y tejidos. ED. IC. IN. blandos, así como fascitis y neumonía necrotizante15,18.. En 2015, Rosanova buscó determinar la frecuencia de SAMR-AC en. M. infecciones osteo-articulares en niños ≥ 3 meses con menos de 2 semanas de. DE. evolución, realizó cultivos de líquido articular, hemocultivos y/o biopsias óseas y. AD. aisló SAMR-AC en el 75% de los casos19. En el 2017, Martínez en un estudio descriptivo con muestras clínicas, empleando el método de difusión de Kirby Bauer. CU. LT. identifico SAMR-AH en el 55% y SAMR-AC en el 45% de pacientes20.. FA. La OMS, a través del Sistema de Vigilancia Global de Resistencia. Antimicrobiana (GLASS) 2015, reportó al SARM como la tercera bacteria más frecuente en cultivos de pacientes con sospecha de infección bacteriana21. Por ello en el 2017, Staphylococcus aureus fue incluida dentro del grupo de 8 bacterias (Acinetobacter spp., E. coli, K. pneumoniae, Neisseria gonorrhoeae, Salmonella spp., Shigella spp., Streptococcus pneumoniae), frente a las cuales se necesita la. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. implementación temprana del sistema de vigilancia5. Asimismo, SARM fue incluida en el listado de bacterias para las cuales se necesita urgentemente el desarrollo de nuevos antibióticos, incluyéndola dentro del grupo con prioridad. NT. elevada22.. -U. En este sentido, se vienen investigando diversas plantas y sus constituyentes químicos como potenciales agentes antimicrobianos; tal es el caso de Myrciaria. IN. A. dubia (Camu-camu). Myrciaria dubia, es un arbusto frondoso perteneciente a la. IC. familia Myrtaceae, especie botánica Myrciaria dubia (H.B.K) Mc Vaugh y sus. ED. frutos se denominan comúnmente “camu-camu”23,24. Es oriunda de la región. DE. Ecuador, Perú y Venezuela25.. M. amazónica encontrándose principalmente distribuida en Bolivia, Brasil, Colombia,. AD. La principal característica del fruto es el elevado contenido en vitamina C que. LT. posee en la pulpa y la cáscara, llegando a considerarlo como el fruto con mayor. CU. contenido de vitamina C a nivel mundial, con una concentración de 6.112%23-25. Además, presenta otros compuestos como antocianinas, carotenoides, fenoles,. FA. vitaminas, antioxidantes, entre otros24-26, elementos que le confieren poderosas propiedades antioxidantes, antiinflamatorias, antimicrobianas, así también efectos positivos frente a las enfermedades cardiovasculares, obesidad, diabetes e hipertensión27-31.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Existen variaciones morfológicas y genéticas dentro de las poblaciones cultivadas y silvestres. Smid en el 2017 en un estudio en la Amazonia peruana encontró que no había diferencias estadísticamente significativa en cuanto a las características morfológicas entre las poblaciones cultivadas y silvestres, pero si. -U. NT. hubo una gran diversidad genética que podría cambiar sus propiedades32.. Con el afán de conocer la actividad antimicrobiana de M. dubia se han. IN. A. realizado algunas investigaciones como las que se muestran a continuación. En. IC. Brasil, Fujita en el 2015, identificó los compuestos fenólicos asociado a la pulpa de. ED. “camu-camu”: elagitanino, ácido elágico, glucósido de quercetina, ácido siríngico y miricetina. Al evaluar la actividad antimicrobiana de estos compuestos, se. M. encontró una gran actividad contra Staphylococcus aureus, incluso mayor que la. DE. producida por ampicilina; además, el camu-camu mostro un alto potencial para la. LT. AD. protección celular redox y el rejuvenecimiento28.. CU. Para Langley, los frutos son una fuente importante de polifenoles (flavonoides, ácidos fenólicos, taninos, estilbenos y lignanos); sin embargo, los. FA. compuestos dependen del estado de madurez de la planta y del método de extracción utilizado, concluyendo que el contenido fenólico total es más alto en las semillas y la cáscara27. Asimismo, Arellano en una revisión sistemática en el 2016, encontró que la semilla y la cáscara de camu-camu contienen significativamente más fenoles que otras frutas tropicales25.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. En Perú, Mori, estudió el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto etanólico de las hojas y la corteza de M. dubia contra S. aureus, Pseudomona aeruginosa y E. coli, observando un mayor halo de inhibición en S. aureus (promedio: 15 mm) en comparación con las otras bacterias (P. aeruginosa: 6.6 mm. -U. NT. y E. coli: 1,93mm) en concentraciones de 800 mg/ml, 700mg/ml y 600 mg/ml33.. Camere en el 2016, evaluó la actividad antimicrobiana “in vitro” del extracto. IN. A. metanólico de la pulpa y las semillas del “camu-camu” sobre bacterias Gram. IC. positivas, encontrando mayor efecto antibacteriano con el extracto metanólico de la. ED. semilla34. En Tokio, Kaneshima en el 2017 evaluó el efecto antibacteriano “in vitro” del extracto n-hexano de la cáscara y la semilla de camu-camu frente a bacterias (Bacillus. subtili,. Streptococcus. M. grampositivas. mutans,. Bacillus. cereus,. DE. Micrococcus luteus, S. epidermidis, S. aureus), bacterias gramnegativas (E. coli, P.. AD. aeruginosa, Salmonella typhimurium) y levaduras (Candida albicans y Saccharomyces cerevisiae), mostrando actividades antimicrobianas contra las. CU. LT. bacterias grampositivas, pero no contra bacteria gramnegativas ni hongos24.. FA. La crisis mundial por el surgimiento de bacterias resistentes a. antimicrobianos, motivo a que la OMS adopte un plan de acción contra la resistencia, dentro del cual se propone aumentar la inversión en la investigación de nuevos medicamentos y de recursos naturales de la biodiversidad y biobancos, como fuentes para el desarrollo de nuevos antibióticos, con el fin de evitar las consecuencias graves y directas de la infección4.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Siendo SAMR una de las principales bacterias causantes de infecciones resistentes a antibacterianos, es urgente la investigación y desarrollo de nuevos medicamentos. Si bien la actividad antimicrobiana de Myrciaria dubia, frente a Staphylococcus aureus es reportada en varias literaturas, no hay evidencias de la. NT. eficacia frente a S. aureus resistente a meticilina, por lo que es importante realizar este estudio, con el fin de evaluar el efecto inhibitorio “in vitro” del extracto. IN. 3.1. JUSTIFICACIÓN DEL PROYECTO:. A. -U. etanólico de M. dubia “camu-camu” sobre S. aureus meticilino resistente.. IC. El uso inadecuado de los fármacos antibacterianos ha generado una crisis. ED. mundial, por el surgimiento de bacterias resistentes a antimicrobianos, que. M. obligan el empleo de medicamentos de última línea, que no solo pueden ser. DE. menos efectivos y seguros; sino que también, consumen más recursos y no están disponibles en todos los países, particularmente en países en vías de. LT. AD. desarrollo.. CU. Frente a esta crisis, la Organización Mundial de la Salud (OMS) en la Asamblea Mundial de la Salud del 2015, adoptó un plan de acción contra la resistencia a. FA. los antimicrobianos con 5 objetivos, dentro de los cuales se propone aumentar la inversión en la investigación de nuevos medicamentos y de recursos naturales de la biodiversidad y biobancos como fuentes para el desarrollo de nuevos antibióticos.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. El Staphylococcus aureus meticilino resistente es una de las principales bacterias causantes de infecciones resistentes a antibacterianos, para la cual es urgente la investigación y desarrollo de nuevos medicamentos. Es así que se viene estudiando la actividad antimicrobiana de Myrciaria dubia “camu-. NT. camu”, frente a diferentes bacterias. Si bien la actividad antimicrobiana de M. dubia contra Staphylococcus aureus es reportada en varias literaturas, no hay. -U. evidencias de la eficacia frente a S. aureus resistente a meticilina, por lo que es. A. importante realizar este estudio, con el fin de evaluar el efecto inhibitorio “in. IN. vitro” del extracto etanólico de M. dubia “camu-camu” sobre S. aureus. ED. IC. meticilino resistente.. M. 3.2. PROBLEMA:. DE. ¿Tiene efecto inhibitorio in vitro el extracto etanólico de Myrciaria dubia. AD. “camu-camu” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente?. LT. 3.3. HIPOTESIS:. CU. El extracto etanólico de Myrciaria dubia “camu camu” si tiene efecto. FA. inhibitorio in vitro sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente.. 3.4. OBJETIVOS 3.4.1. OBJETIVO GENERAL Evaluar el efecto inhibitorio in vitro del extracto etanólico de Myrciaria dubia “camu-camu” sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 3.4.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS - Determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico de Myrciaria dubia al 25%, 50%, 75% y 100% frente a. NT. Staphylococcus aureus meticilino resistente.. -U. - Comparar el diámetro del halo inhibitorio generado por el extracto etanólico de Myrciaria dubia al 25%, 50%, 75% y 100% frente a. IN. A. Staphylococcus aureus meticilino resistente.. IC. - Determinar la sensibilidad bacteriana del extracto etanólico. ED. de Myrciaria dubia al 25%, 50%, 75% y 100% frente a. FA. CU. LT. AD. DE. M. Staphylococcus aureus meticilino resistente.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. IV. MATERIAL Y MÉTODOS 4.1. MATERIALES: 4.1.1. Tipo de estudio:. NT. El presente estudio fue experimental, prospectivo, transversal.. -U. 4.1.2. Población y muestra. 4.1.2.1. Características generales:. al. extracto. etanólico. de. Myrciaria. dubia. en. IC. expuestas. IN. A. Se trabajó con cepas de Staphylococcus aureus meticilino resistente. ED. concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%.. M. 4.1.2.2. Criterios de inclusión y exclusión:. DE. A. Criterios de inclusión:. Placas petri con agar Müeller Hinton con macrodilución de SAMR la. concentración. AD. y. de. extracto. etanólico. de. M.. dubia. CU. LT. correspondiente.. FA. B. Criterios de exclusión: - Placas petri con agar Müeller Hinton con macrodilución de SAMR que, durante el proceso de incubación, presenten algún tipo de deterioro o daño en su estructura. - Placas petri con agar Müeller Hinton con macrodilución de SAMR contaminadas durante el proceso de la investigación.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. C. Criterios de eliminación: Placas petri con agar Müeller Hinton con maacrodilución de SAMR que sufra deterioro o daño durante la conservación y los procedimientos, que no permitan su medición posterior.. NT. 4.1.2.3. Unidad de análisis: La constituyeron los halos de inhibición in vitro. -U. generados por el efecto del extracto etanólico de M. dubia y las Unidades Formadoras de colonias (UFC) de cepas de SAMR a. IN. A. concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100% respectivamente.. ED. IC. 4.1.2.4. Tamaño muestral: Se usó la siguiente fórmula: 2. DE. M. (z∝/2 + zβ ) 2S2 n= (x̅1 − x̅2 )2. Donde:. AD. Zα/2 = 1.96 para α= 0.05 Zβ= 0.84 para un β= 0.20. Reemplazando:. FA. CU. LT. S= 0.8 (𝑥̅1 − 𝑥̅2 ), valor asumido por no haber estudios previos.. 𝑛=. (1.96 + 0.84)2 2(𝑥̅1 − 𝑥̅2 )2 (0.8)2 (𝑥̅1 − 𝑥̅2 )2. 𝑛 = 2.82 𝑥 2 𝑥 0.64 𝑛 = 10 repeticiones Luego, la muestra estuvo conformada por 10 repeticiones para cada tratamiento.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. La muestra total para el conteo de UFC estuvo constituida por 15 placas para cada uno de los 4 grupos, se eligió al azar 10 placas por grupo. Para la medición del halo inhibitorio, se realizó 20 repeticiones para cada grupo y se eligió al azar 10 repeticiones. Los grupos fueron. NT. expuestos a concentración de M. dubia de 25%, 50%, 75% y 100%. El grupo control estuvo conformado por 20 repeticiones, 10 para el. -U. control con vancomicina y 10 para el control sin fármaco (suero. IN. A. fisiológico).. IC. - Grupo 1: 10 repeticiones con extracto etanólico de M. dubia al 25%. ED. - Grupo 2: 10 repeticiones con extracto etanólico de M. dubia al 50% - Grupo 3: 10 repeticiones con extracto etanólico de M. dubia al 75%. M. - Grupo 4: 10 repeticiones con extracto etanólico de M. dubia al. DE. 100%. - Grupo 5: 10 repeticiones con vancomicina 100 mg/ml.. LT. AD. - Grupo 6: 10 repeticiones con suero fisiológico.. CU. 4.2. MÉTODOS Y TÉCNICAS 4.2.1. De la aprobación del proyecto:. FA. La aprobación del proyecto de investigación fue brindada por el Comité Permanente de Investigación de la Facultad de Medicina UNT y la correspondiente Resolución de Decanato (ANEXO Nº 07).. 4.2.2. De la autorización para la ejecución Se obtuvo la autorización del uso del Laboratorio de Microbiología de la Facultad de Medicina UNT (ANEXO Nº 08).. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 4.2.3. De la certificación del examinador: La presente investigación se desarrolló bajo la supervisión de las asesoras. El investigador se certificó, por su asesora experta en el tema, para lo cual realizó la lectura de 10 placas Petri para el conteo de las UFC mediante inspección. NT. visual de cada placa y también repitió la medición de los halos de inhibición. -U. con un vernier.. IN. A. 4.2.4. Extracto etanólico de Myrciaria dubia. IC. A. Recolección de Myrciaria dubia “camu-camu”. ED. Los frutos de M. dubia se recolectaron en Yurimaguas – Loreto, ubicado a. M. 104 m.s.n.m, los cuales fueron conservados a temperatura ambiente hasta. DE. la extracción del extracto etanólico.. AD. B. Identificación de Myrciaria dubia “camu-camu” Se envió un espécimen al Herbarium Truxillense de la Universidad. LT. Nacional de Trujillo (UNT) para su identificación y clasificación. FA. CU. taxonómica según el sistema filogénico de la especie (ANEXO Nº 10).. C. Obtención del extracto etanólico de Myrciaria dubia “camu-camu” Los frutos de M. dubia se llevaron al laboratorio de Farmacognosia de la Facultad de Farmacia y Bioquímica - UNT para la elaboración del extracto etanólico por un especialista (ANEXO Nº 11).. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Tratamiento del material vegetal: - Lavado de la muestra: Se seleccionaron los frutos de M. dubia en mejores condiciones, se lavaron con agua destilada e hipoclorito de sodio a concentración de 200 partes por millón por 5 minutos y se. NT. enjuagaron con agua destilada estéril para retirar los residuos. Luego. -U. los frutos se pelaron para obtener las cáscaras y las semillas.. A. - Secado: Las cáscaras y semillas se secaron primero a temperatura. IN. ambiente por 24 horas, luego en una estufa de circulación de aire por. IC. convección forzada a 40°C hasta completar el proceso. La duración de. ED. la exposición en la estufa se determinó mediante el pesado cada 24. M. horas hasta lograr valores constantes en 2 ocasiones.. DE. - Pulverización: Las cáscaras y semillas secas fueron fragmentadas en. AD. un molino hasta obtener un pulverizado homogéneo.. LT. - Tamizaje y almacenamiento: Se utilizaron tamices N° 2, 1.2 y 0.75.. CU. El producto resultante fue guardado en frascos color ámbar de boca. FA. ancha, durante 7 días, en ausencia de luz.. Preparación del extracto etanólico de Myrciaria dubia35: Se utilizó 1000 g de polvo de cáscara y semillas tamizadas, colocado dentro de un frasco color ámbar de boca ancha con 4 litros de capacidad y se añadió etanol de 70° G.L. Se maceró por 7 días, agitándose 15 minutos,. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. dos veces al día. El macerado se filtró 3 veces, con papel filtro Whatman N° 41, 4 y 2 obteniéndose un extracto purificado libre de gérmenes.. La solución resultante se llevó a una cámara de secado al vacío con presión. NT. reducida y temperatura de 40° C; luego se pesó el residuo seco y se guardó en refrigeración a 2° C. De este residuo seco se prepararon las. -U. concentraciones de 25%, 50%, 75% disueltas en etanol de 70° G.L.. A. respectivamente. Los extractos etanólicos se guardaron en frascos de. IN. vidrio color ámbar debidamente rotulados y en refrigeración (4°-8°C). ED. IC. hasta su utilización.. Concentración. %. 2,5 g. 10 ml. 250 mg/ml. 25 %. 5,0 g. 10 ml. 500 mg/ml. 50 %. 7,5 g. 10 ml. 750 mg/ml. 75 %. 10,0 g. 10 ml. 1000 mg/ml. 100 %. CU. DE. Volumen alcohol 70°. LT. Peso de extracto seco. AD. M. D. Preparación de las concentraciones de extracto etanólico. FA. 4.2.5. Microorganismo utilizado Se utilizó cepas de SAMR intrahospitalaria, obtenidas del Laboratorio de Referencia Regional La Libertad, previamente identificada y certificada con una constancia que avaló su autenticidad (ANEXO Nº 09). SAMR creció en tubos de ensayo con tapa rosca a 25°C por 24 horas en Agar soya tripticasa, con el fin de obtener colonias jóvenes.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 4.2.6. Preparación del inóculo: Las cepas SAMR fueron diluidas en solución salina hasta obtener una suspensión semejante a la turbidez del tubo N° 0.5 del nefelómetro de MacFarland, que corresponde a 1.5 x 108 UFC/ml. Luego se preparó el patrón. NT. de turbidez con una distribución uniforme en tubos de ensayo (4 a 6 ml por. -U. cada tubo) y se incubaron a 37° C durante 4 a 6 horas y protegidos de la luz.. A. 4.2.7. Sembrado:. IN. El sembrado se realizó en agar Müeller Hinton dentro de placas Petri, con un. IC. hisopo estéril embebido en un tubo de cultivo preparado previamente, a una. M. ED. distancia máxima de 10 cm de la llama del mechero.. 4.2.8. Pruebas de sensibilidad antimicrobiana. DE. Se utilizaron los métodos de macrodilución en caldo y difusión con discos de. AD. Kirby-Bauer, siguiendo las recomendaciones del Comité Nacional de. LT. Estándares Clínicos de Laboratorio19.. CU. A. Método de Macrodilución en Caldo: Método cuantitativo para determinar la CMI del extracto etanólico de M.. FA. dubia que inhibe el crecimiento de SAMR.. 1. Se prepararon 6 tubos de ensayo. Los 4 primeros con 2.4 ml de extracto etanólico de M. dubia a concentraciones 25%, 50%, 75% y 100% respectivamente y 0.6 mL de cepas de SAMR, en concentraciones semejantes al tubo 0.5 de la escala de MacFarland. El quinto tubo fue. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. el control con 2,4 mL de Vancomicina y 0,6 mL de SAMR. El sexto tubo con 2,4 mL de cepas de SAMR y 0,6 mL de SAMR.. 2. Los tubos se incubaron a 37° C por 24 horas, luego del cual se observó. NT. la turbidez. El tubo que no presentó turbidez se consideró como la CMI.. -U. 3. Para las cuentas viables se sembró 0,1 mL de solución de cada tubo en. A. 15 placas con agar Müeller Hinton por cada concentración y 20 más. IN. para los controles, utilizando el asa de Drigalsky. Las placas se. IC. colocaron en la estufa por 24 h. a 37°C y se observó el crecimiento del. ED. microorganismo mediante el conteo de UFC, considerándose como. M. CMI a la menor concentración en la cual no se observaron UFC. Solo. DE. se seleccionarán 10 placas al azar por grupo.. AD. 4. Para el conteo de UFC, se utilizó la siguiente fórmula: UFC= N/4 x A x D. FA. CU. LT. N= número de colonias A= Área D= Dilución. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. B. Método por difusión con discos de Kirby-Bauer:. Se usó para determinar la capacidad del extracto etanólico de M. dubia de difundir en el agar creando un gradiente continuo de concentración.. NT. 1. Se sembraron cepas SAMR en placas Petri con agar Müeller Hinton,. -U. con un hisopo estéril embebido en cada tubo del cultivo preparados.. A. 2. Se prepararon 20 discos de papel filtro estériles sumergidos en las. IN. diferentes concentraciones de M. dubia y se colocaron sobre los cultivos. IC. de SAMR previamente preparados. También se utilizaron 10 discos. ED. sumergidos en vancomicina para el control positivo y 10 discos con. M. suero fisiológico para el control negativo. Posteriormente las placas se. DE. incubaron a 37°C durante 24 horas.. 3. Se seleccionaron 10 halos al azar por cada grupo y se midieron los halos. AD. de inhibición en milímetros, incluyendo el área del disco de papel de. LT. filtro con una regla milimetrada, tanto para los grupos como para el. CU. control. Se usó la escala de Duraffourd para la determinación. FA. cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 4.3. DEFINICIÓN Y OPERACIONALIZACIÓN DE VARIABLES. DIMENSION. INDICADOR. TIPO. ESCALA. -U. VARIABLE. NT. 4.3.1. Operacionalización de variables:. Concentración. Variable. Ordinal. Cuantitativa. De Razón. Cualitativa. Ordinal. 50%, 75% y. IN. etanólico. Cualitativa. 100%. IC. Extracto etanólico de. utilizada al 25%,. A. Extracto. independiente. M. ED. Myrciaria dubia. mínima. Formadoras de. inhibitoria. Colonias. DE. Unidades. AD. Variable dependiente. Concentración. Efecto inhibitorio in. LT. vitro sobre cepas. FA. CU. SAMR. Halo de Sensibilidad inhibición según bacteriana Escala de Duraffourd. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 4.3.2. Definiciones conceptuales: - Extracto etanólico de Myrciaria dubia: Extracto que contiene principios activos, obtenido a partir de las cáscaras y semillas de los frutos de M. dubia, por maceración en contacto con etanol, en concentraciones de 25%,. NT. 50%, 75% y 100%.. -U. - Efecto inhibitorio in vitro sobre cepas de Staphylococcus aureus. IC. IN. inhibitoria y la sensibilidad bacteriana.. A. meticilino resistente: Determinado mediante la concentración mínima. ED. - Concentración mínima inhibitoria: Concentración mínima del extracto. M. etanólico de M. dubia que inhibe el crecimiento de SAMR, considerando. DE. como efectiva a la que generó cero UFC.. AD. - Sensibilidad bacteriana: Determinación cualitativa in vitro mediante la medición de los halos de inhibición y su clasificación según la escala de. CU. LT. Duraffourd36, considerando:. FA. - Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm. - Sensibilidad límite (+) para un diámetro comprendido entre 8 a 14 mm. - Sensibilidad media (++) para un diámetro entre 14 y 20 mm. - Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 4.4. RECOLECCIÓN DE DATOS:. Los datos obtenidos fueron anotados en las fichas de recolección de datos (ANEXOS Nº 1 y 2) conteniendo el conteo de las UFC y la medida de los halos. NT. de inhibición en milímetros.. -U. 4.5. ANÁLISIS ESTADÍSTICOS:. A. Se construyeron tablas de frecuencia de una entrada, con sus valores absolutos,. IN. promedios, desviación estándar y gráficos. Para determinar si hubo diferencia. IC. de los diámetros de los halos y las UFC entre las diferentes concentraciones, se. ED. hizo un análisis de varianza de un diseño completamente aleatorizado, luego. M. una prueba de comparaciones múltiples utilizando la prueba de Duncan. Ambas. DE. con un nivel de significancia del 5%.. AD. 4.6. ASPECTOS ÉTICOS:. LT. Se tuvo en cuenta el principio de precaución en conformidad con el Principio. CU. 15 de la Declaración de Río sobre el Medio Ambiente y el Desarrollo, para el manejo del material obtenido. Además, se tuvo la aprobación del Comité. FA. Permanente de Investigación de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo (ANEXO N° 07).. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. FA. CU. LT. AD. DE. M. ED. IC. IN. A. -U. NT. 4.7. DISEÑO EXPERIMENTAL. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. V. RESULTADOS. En la presente investigación se encontró que SAMR fue sensible a todas las concentraciones del extracto etanólico de M. dubia, según la escala de Duraffourd,. NT. dado que los halos de inhibición generados fueron mayores de 8 mm, tal como se observa en la tabla N 1°. En éstas, se muestran los promedios y desviación estándar. A. -U. de los halos de inhibición producidos en cada concentración del extracto.. IN. En la tabla N° 2, se observan los resultados tras aplicar el análisis de varianza,. IC. hallándose que existe una diferencia estadísticamente significativa entre los. ED. diámetros de los halos de inhibición generados de acuerdo a la concentración del. DE. M. extracto etanólico de M. dubia (p < 0,05).. En la tabla N° 3 se muestran los resultados al aplicar la prueba de DUNCAN,. AD. y se halló que existe diferencia estadísticamente significativa entre todos los grupos. LT. de tratamiento, siendo de mayor eficacia (luego de vancomicina) el extracto. CU. etanólico a la concentración de 100%.. FA. En la tabla N° 4, se muestra que la efectividad en los cuatro grupos de. concentración del extracto etanólico de M. dubia, así como en el grupo de control con vancomicina, fue del 100% debido a que no se observó crecimiento de UFC en ninguna de las repeticiones de los 5 grupos mencionados.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) NT. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA N° 01: EFECTO INHIBITORIO IN VITRO DEL EXTRACTO DE. Myrciaria. dubia. SOBRE. aureus. N. Desv.. Promedio Estándar 14.4. 0.516. 10. 15.3. 0.483. Ext. Myrciaria dubia 75%. 10. 16.4. 0.516. Ext. Myrciaria dubia 100%. 10. 16.8. 0.632. Vancomicina. 10. 21. 0. 10. 6. 0. Ext. Myrciaria dubia 25%. AD. DE. Ext. Myrciaria dubia 50%. M. 10. LT. ED. Grupo de tratamiento. IC. IN. A. METICILINO RESISTENTE.. Staphylococcus. -U. ETANÓLICO. CU. Suero fisiológico. FA. Abreviaturas: N: Número de discos Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. NT. TABLA N° 02: ANÁLISIS DE VARIANZA DEL EFECTO INHIBITORIO IN VITRO DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Myrciaria dubia SOBRE. 1226.483. Error. 10.5. Total. 1236.983. CM. F. p. 5. 245.297. 1261.53. 0.0000. 54. 0.194. ED. Tratamientos. GL. M. SC. 59. DE. F de V. IC. IN. A. -U. Staphylococcus aureus METICILINO RESISTENTE. UNT - 2018.. AD. Abreviaturas: F de V: Fuente de Variación, SC: Suma de Cuadrados, GL: Grados de Libertad, CM: Media Cuadráticas, F: Prueba F.. FA. CU. LT. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. TABLA N° 03: COMPARACIÓN DEL EFECTO INHIBITORIO IN VITRO. NT. DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Myrciaria dubia SOBRE Staphylococcus. A. -U. aureus METICILINO RESISTENTE. UNT – 2018. Grupos de Tratamiento. N 10. Ext. Myrciaria dubia 25%. 10. Ext. Myrciaria dubia 50%. 10. M. Vancomicina. 10. AD. 10. 5. 6. 15.3. 10. Ext. Myrciaria dubia 100%. 4. 14.4. DE. Ext. Myrciaria dubia 75%. 3. 6. ED. Suero fisiológico. 2. IC. 1. IN. Subconjunto para α= 0.05. 16.4 16.8 21. LT. Abreviaturas: N: Número de discos. FA. CU. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2018. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. NT. TABLA N° 04: CONCENTRACIÓN MÍNIMA INHIBITORIA DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Myrciaria dubia FRENTE A Staphylococcus. UFC. IC. Desv. Estándar. 10. 0. 0. 10. 0. 0. Ext. Myrciaria dubia 75%. 10. 0. 0. Ext. Myrciaria dubia 100%. 10. 0. 0. Vancomicina. 10. 0. 0. 10. 1x106. 0. Ext. Myrciaria dubia 25%. AD. DE. Ext. Myrciaria dubia 50%. M. Grupo de tratamiento. ED. N. LT. IN. A. -U. aureus METICILINO RESISTENTE.. Suero fisiológico. CU. Abreviaturas: N: número de placas, UFC: Unidades formadoras de colonias. FA. FUENTE: datos obtenidos por el investigador, año 2018. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VI. ANÁLISIS Y DISCUSIÓN El S. aureus es una de las bacterias que ha adquirido mejor resistencia en los últimos años, incluyendo antibacterianos como los betalactámicos y sus derivados, dando origen a cepas SAMR. Clásicamente, SAMR causa infecciones a nivel. NT. nosocomial exclusivamente; sin embargo, en la actualidad, existe cepas adquiridas en la comunidad que generan infecciones con mayor frecuencia, agresividad,. -U. destrucción tisular y diseminación generalizada. SAMR-AC posee mecanismos de. A. replicación más ligeros, que le han permitido instalarse con mucha facilidad en la. IN. comunidad14, conllevando al uso de fármacos de segunda línea, más efectivos, pero. IC. con mayores efectos adversos, dentro de los que tenemos a los glucopéptidos,. M. ED. linezolid y daptomicina37.. DE. Por otro lado, SAMR-AH posee mecanismos de replicación más complejos que limitan su distribución en la población en general; sin embargo, tiene genes que. AD. le confieren resistencia incluso a los fármacos de segunda línea14. La resistencia a. LT. la vancomicina se asocia a la presencia del gen Tn1546 (vanA), que produce el reemplazo de D-alanina por D-lactato, inhibiendo la llegada del fármaco a su sitio. CU. de acción; pero en los últimos años también se ha descrito el engrosamiento de la. FA. pared celular como mecanismo empleado por los Staphylococcus para generar resistencia al impedir el ingreso de la vancomicina38,39. Por su parte, la resistencia al linezolid se debe al gen cfr que codifica a la metiltransferasa de ARNr 23S que altera el sitio de unión del linezolid a la subunidad 50s39. Por último, la resistencia a la daptomicina se debe a cambios en la composición de la membrana y la pared. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. celular, causando alteraciones en el potencial de membrana y disminuyendo la unión del antibiótico a la superficie celular39.. Todos estos mecanismos de resistencia, conllevan a la búsqueda urgente de. NT. nuevas moléculas con poder antibacteriano efectivas frente a SARM. Hoy en día, las plantas y sus frutos, son muy estudiados por sus diversas propiedades y. -U. componentes con mecanismos de acción antimicrobianos distintos a los ya. A. conocidos, uno de ellos es M. dubia “camu-camu”. En esta investigación, se buscó. IN. evaluar el efecto inhibitorio in-vitro del extracto etanólico de M. dubia frente a. ED. IC. cepas de SAMR.. M. La sensibilidad de SAMR frente al extracto etanólico de M. dubia fue. DE. determinada mediante el método de difusión en placa y macrodilución en caldo. En la difusión en placa de Kirby Bauer, se determinó que el extracto etanólico de M.. AD. dubia en las concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100%, según la escala de. LT. Duraffourd, tuvieron una sensibilidad media (Halos de inhibición promedio de 14.4 mm, 15.3 mm, 16.4 mm y 16.8mm respectivamente) (ANEXO N° 03 Y TABLA. CU. 1). Mientras que en el método de macrodilución en caldo, no se observó crecimiento. FA. de UFC en ninguna de las concentraciones estudiadas (TABLA Nº04), por lo que la CIM correspondería al grupo de 25% (250mg/ml).. El efecto antibacteriano del extracto del camu-camu depende del tipo de disolvente y la parte de la planta empleada en la elaboración del mismo. Es así que Myoda40 en el 2010, estudió el efecto antimicrobiano de las semillas y las cáscaras. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. de camu-camu por separado, a una concentración fija de 5,0 mg/ml, encontrando la actividad antimicrobiana fue mayor en el extracto metanólico de cáscara en comparación con el de semilla, generando halos inhibitorios de 2,7 mm y 3,1 mm respectivamente. En la presente investigación se empleó un extracto que combinaba. NT. las cascaras y las semillas del camu-camu, por lo que el efecto antimicrobiano. -U. podría ser sinérgico.. A. Castillo41, utilizó extracto etanólico solo de la cáscara de camu-camu a las. IN. concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100% y obtuvo halos inhibitorios mayores. IC. (15,07 mm, 17,01 mm, 18,42 mm y 23,69 mm respectivamente). Sin embargo, la. ED. CMI también fue mayor (75% - 750 mg/ml) a la encontrada en nuestra investigación. DE. M. (25% - 250 mg/ml).. Si bien, en nuestro estudio no se pudo determinar la CMI con exactitud, ya. AD. que el extracto etanólico mostró efecto incluso en la concentración más baja (25%); la concentración mínima de camu-camu necesaria para inhibir el crecimiento. LT. bacteriano sería menor, tal como lo reporta Camere42 en el 2016, al evaluar el efecto. CU. antibacteriano del extracto metanólico de semillas y pulpa de camu-camu en otras. FA. bacterias Gram positivas como Streptococcus mutans y S. sanguinis, los cuales presentaron halos de inhibición de 20,3 ± 1,1 mm para el extracto de semillas y 17,8 ± 1.6 mm en el extracto de pulpa y la CMI del extracto de pulpa fue de 62.5 µg/ml, mientras que para el de cascara fue menor (50 µg/ml).. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Silva43 en el 2014, buscó el efecto inhibitorio in vitro del extracto acuoso de la cáscara y semillas de camu-camu secados por congelación y con aire caliente contra S aureus, y determino que la CMI fue de 0,313 y 0,625 mg/ml respectivamente, coincidiendo con la hipótesis de que la actividad antibacteriana. NT. del camu-camu se da incluso a concentración tan inferiores como las encontradas.. -U. Otros investigadores como Fujita28 en el 2015, buscaron determinar el efecto. A. antibacteriano del extracto acuoso de la pulpa de camu-camu secada por. ED. IC. 0,08 mg/ml y 0,16-0,63 mg/ml en cada caso.. IN. congelación y con aire caliente frente a S. aureus encontrando que la CMI fue de. M. La actividad antibacteriana de M. dubia puede explicarse por la presencia de. compuestos. DE. compuestos fitoquímicos presente en camu-camu. Fujita28, reportó la presencia de fenólicos,. como. ácido. elágico,. quercetina,. ácido. gálico,. AD. proantocianidinas y antocinaninas. Myoda40, encontró que el extracto metanólico. LT. de semilla contenía más compuestos fenólicos que el extracto de cáscara. En el análisis cualitativo de nuestro estudio encontramos presencia de taninos, quinonas,. FA. CU. compuestos fenólicos, flavonoides y antocianinas con intensidad alta (ANEXO 04).. Los mecanismos por los cuales estos compuestos producen la inhibición. bacteriana son: por inhibición de la síntesis de ADN y ARN, dañando la membrana celular bacteriana (con perturbaciones en la membrana lipídica o disrupción de la función de barrera) y la inhibición del metabolismo energético (por inhibición de la NADH-citocromo reductasa)41.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. Kaneshima24 en el 2017, también identificó constituyentes antimicrobianos polifenólicos como los acilfloroglucinoles en cáscara (myrciarone A y rhodomyrtone) y semilla de camu-camu (isomyrtucommulone B y myrciarone B).. NT. Al evaluar el efecto antimicrobiano de estas moléculas frente a bacterias y hongos, se encontró elevada actividad frente a bacterias Gram positivas, de las cuales, la. -U. CMI para SA fue de 1.56 mg/ml para myrciarone A, B e isomyrtucommulone B y. IN. A. de 0.78 mg/ml para rhodomyrtone.. IC. Rhodomyrtone es un compuesto que viene siendo estudiado por sus efectos. ED. inhibitorios sobre cepas de SAMR. Su mecanismo de acción es la inhibición de la. M. síntesis de proteínas Dnak, el factor sigma-B y la inhibición de la enzima SA CrtN,. DE. las cuales están implicadas en la susceptibilidad a condiciones de estrés oxidativo y la síntesis de carotenos (estafiloxantina)24,44. Así mismo, la rhodomyrtone afecta. AD. la expresión de las proteínas del SAMR implicadas en la síntesis de la pared celular,. LT. la división celular, la degradación de proteínas, la respuesta al estrés oxidativo, el antígeno de superficie celular, el factor de virulencia y varias vías metabólicas como. FA. CU. el metabolismo de aminoácidos, carbohidratos, energía, lípidos y nucleótidos24,45.. Por otro lado, las moléculas de myrciarone A y B, que fueron aisladas por. primera vez en el estudio de kaneshima24, aún no han sido investigadas por completo y se desconoce su mecanismo de acción frente a las cepas SAMR, aunque su efecto antibacteriano es notable. A su vez, isomyrtucommulone-B que era considerado un producto de degradación sin actividad del myrtucommulone-B. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. (extraído de Myrtus communis) demuestra, en las nuevas investigaciones, una amplia actividad frente a las bacterias Gram positivas y Gran negativas46,47.. Al aplicar el análisis de varianza y la prueba de DUNCAN (TABLA N° 2 y. NT. TABLA N° 3), se determinó que el extracto etanólico de M. dubia posee un efecto. -U. dosis dependiente, siendo la concentración más efectiva contra SAMR la del 100%.. A. Las diferencias en los valores encontrados entre esta investigación y los otros. IN. autores se debería a otros factores como el agar empleado y el tipo de cepa. A. IC. diferencia de nuestro estudio en el que se usó agar Müeller-Hinton, en el estudio de. ED. Myoda40 utilizo agar nutritivo, el cual es un medio simple que puede alterar la. M. capacidad de sustancias o también causar interacciones con los principios activos. DE. del extracto etanólico41. Por otro lado, todos los artículos que se encontraron en las referencias, investigaron el efecto antibacteriano del camu-camu en cepas de S.. LT. del extracto.. AD. aureus sensibles a meticilina, lo que también influiría en la capacidad de inhibición. CU. Además, también se debe considerar la procedencia y estado de maduración. FA. de los frutos empleados. Para Sousa48, la concentración de compuestos fenólicos y antocianinas de la cáscara del camu-camu aumenta durante el proceso de maduración del fruto y las variaciones en las concentraciones de estos compuestos están influenciados por el lugar de procedencia, siendo mayores en las extraídas de zonas silvestres de Perú y Brasil. Según Langley27, los compuestos también. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. dependen del método de extracción utilizado, aunque no está claro cuál sería el ideal para la elaboración de extractos con fines medicinales.. Los compuestos orgánicos volátiles o disolventes residuales que se utilizan. NT. en la fabricación de sustancias, aditivos y productos farmacéuticos, constituyen el 50-90% del producto generado y representan la mayor parte de la toxicidad del. -U. proceso. Su presencia se evalúa según la guía de Farmacopea de los Estados Unidos. A. (USP), la cual clasifica a los residuos en 3 grupos según su nivel de toxicidad. Los. IN. residuos etanólicos pertenecen a la clase 3, siendo los de menor toxicidad49. Por. ED. IC. ello, en esta investigación, se utilizó el extracto etanólico.. M. De esta manera queda demostrado que el extracto etanólico de M. dubia tiene. DE. un efecto inhibitorio sobre las cepas de SAMR en todas las concentraciones estudiadas y que su utilización debería ser considerada como una nueva alternativa. AD. terapéutica, con estudios previos de experimentación in vivo, en el tratamiento de. FA. CU. LT. las infecciones causas por SAMR.. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VII. CONCLUSIONES. - La concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico de Myrciaria. NT. dubia frente a Staphylococcus aureus meticilino resistente fue 25% (250. -U. mg/ml). A. - El diámetro del halo inhibitorio in vitro generado por el extracto etanólico de. IN. Myrciaria dubia sobre Staphylococcus aureus meticilino resistente al 25%. IC. fue 14,4 ± 0,516 mm; al 50% fue 15,3 ± 0,483 mm; al 75% fue 16,4 ± 0,516. M. ED. mm y al 100% fue 16,8 ± 0,632 mm.. DE. - Las cepas de Staphylococcus aureus meticilino resistente mostraron una “sensibilidad media” a todas las concentraciones del extracto etanólico de. FA. CU. LT. AD. Myrciaria dubia.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. VIII. RECOMENDACIONES. . Realizar estudios con extracto etanólico de Myrciaria dubia a. . NT. concentraciones menores del 25%. Realizar más estudios experimentales con el extracto etanólico de Myrciaria. -U. dubia, para determinar su efecto sobre otras bacterias resistentes a. Realizar estudios experimentales in vivo con el extracto etanólico de. IC. . IN. A. medicamentos.. adversos.. Incrementar. las. investigaciones. DE. . M. ED. Myrciaria dubia, para determinar concentraciones efectivas y efectos. experimentales. para. determinar. mecanismos de acción específicos de las nuevas moléculas encontradas en. FA. CU. LT. AD. Myrciaria dubia.. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. IX. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS 1.. Olusoji A, Enis B, Olga J, Alec I, Franck B, Le Gall G, et al. Drug-resistant infections: a threat to our economic future. Washington: World Bank Group. 2017. 2.. Serra M. La resistencia microbiana en el contexto actual y la importancia del conocimiento y la aplicación en la política antimicrobiana. Revista Habanera. OMS. ¿Qué es la resistencia a los antimicrobianos? OMS [Internet] 2017. [Acceso. el. 20. de. octubre. -U. 3.. NT. de Ciencia Médicas. 2017;16(3):402-419. de. 2018].. Organización Mundial de la Salud. Plan de acción mundial sobre la resistencia. IN. 4.. en:. A. http://www.who.int/features/qa/75/es/. Disponible. a los antimicrobianos. OMS [Internet] 2016. [Acceso el 15 de octubre de 2018] en:. https://www.who.int/antimicrobial-. IC. Disponible. 5.. ED. resistance/publications/global-action-plan/es/. WHO. Global Antimicrobial Resistance Surveillance System. Early. M. Implementation 2016 - 2017. WHO [Internet]. 2017 [Acceso el 24 de octubre 2018].. Disponible. en:. DE. de. http://apps.who.int/iris/bitstream/handle/10665/259744/9789241513449eng.pdf?sequence=1. Arteaga K, Panduro V, Salvatierra J, Dámaso B. Adecuada prescripción. AD. 6.. LT. antimicrobiana en servicios de medicina interna en un hospital público de Perú. AMP. 2016; 33(4): 275-281 Sandrea L, Piña E, Paz A, Torres E. Determinación de la resistencia a. CU. 7.. meticilina y eritromicina de cepas de Staphylococcus aureus aisladas en un. FA. hospital del estado Zulia. Revista de la Sociedad Venezolana de Microbiología 2012; 32(1):88-94. 8.. Jiménez J, Correa M. Staphylococcus aureus resistente a meticilina: bases. moleculares de la resistencia, epidemiología y tipificación. Iatreia [Internet]. 2009 [acceso 24 de setiembre de 2018];22 (2). Disponible en: http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S012107932009000200006. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación UNT. 9.. Martínez E, Hernández C, Pallares C, Pacheco R, Hurtado K, Recalde M. Frecuencia de aislamientos microbiológicos y perfil de resistencia bacteriana en 13 clínicas y hospitales de alta complejidad en Santiago de Cali – Colombia. Infectio. 2014;18(1):3-11 10. Londoño J, Macías C, Ochoa L. Factores de riesgo asociados a infecciones por bacterias multirresistentes derivadas de la atención en salud en una institución hospitalaria de la ciudad de Medellín 2011-2014. Infectio. 2016;20(2):77-83. NT. 11. Togneri A, Podestá L, Pérez M, Santiso G. Estudio de las infecciones por Staphylococcus aureus en un hospital general de agudos (2002-2013). Rev. -U. Argentina de Microbiología. 2017;49(1):24-31. 12. Oteo J, Belén M. Caracterización de mecanismos de resistencia por biología. A. molecular: Staphylococcus aureus resistente a meticilina, B-lactamasas de. IN. espectro extendido y carbapenemasas. Enferm Infecc Microbiol Clin.. IC. 2015;33(2):27-33. ED. 13. Armas A, Suárez B, Crespo N, Suárez A. Resistencia de Staphylococcus aureus a la meticilina en aislamientos nosocomiales en un hospital. Gaceta Médica. M. Espirituana. 2015;17(3):1-11. 14. Echevarria J. El problema del Staphylococcus aureus resistente a Meticilina.. Disponible. DE. Rev Med Herediana [Internet]. 2010 [acceso 8 de septiembre de 2018];21(1). en:. 138/1164. AD. http://www.upch.edu.pe/vrinve/dugic/revistas/index.php/RMH/article/view/1. LT. 15. García C. Staphylococcus aureus meticilino resistente adquirido en la. CU. comunidad. Acta Med Per. 2011;28(2):159-162 16. Luján D. Staphylococcus aureus resistente a meticilina asociado a la. FA. comunidad: aspectos epidemiológicos y moleculares. Fac med. 2013;74(1):5762. 17. Aguayo A, Quezada M, Riedel G, Opazo A, Bello H, Domínguez M, et al. Bases moleculares de la resistencia a meticilina en Staphylococcus aureus. Rev Chil Infectol. 2018;35(1):7-14. 18. Sánchez L, Pavas N, Rojas G, Pérez N. Infecciones por Staphylococcus aureus resistente a la meticilina adquirido en la comunidad en pacientes de. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.