Efecto antibacteriano del aceite esencial de Tagetes minuta, sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Bacillus cereus

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Ó. N. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍAY PARASITOLOGÍA. ST. EM AS. DE. IN. Efecto antibacteriano del aceite esencial de Tagetes minuta, sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Bacillus cereus.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO Br. ARACELI VARGAS HUAMÁN TRUJILLO-PERÚ 2013. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M UN. Dr. ORLANDO VELÁSQUEZ BENÍTEZ Rector. IC. AC I. Ó. N. AUTORIDADES DE LAUNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. ÁT. IC. A. Y. Dra. VILMAJULIAMÉNDEZ GIL Vicerrectora Académica. DE. IN. FO. RM. Dr. SANTIAGO UCEDA DUCLOS Secretario General. Dr. CESAR JARA CAMPOS Secretario de la Facultad. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. Dr. HERMES ESCALANTE AÑORGA Decano de la facultad de Ciencias Biológicas. Ms. C. PEDRO ARNALDO ALVARADO SALINAS Director de la Escuela Académica Profesional de Microbiología y Parasitología. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AC I. Ó. N. PRESENTACIÓN. M UN. Señores miembros del jurado:. CO. En cumplimiento con las disposiciones reglamentarias vigentes de la escuela. A. Y. Académico Profesional de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias. ÁT. IC. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y. RM. criterio el presente informe de tesis: Efecto antibacteriano del aceite esencial de. FO. Tagetes minuta sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y. EM AS. DE. IN. Bacillus cereus.. Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por algunos errores u otras. DE. SI. ST. omisiones en su colaboración, me someto a vuestro dictamen.. RE. CC. IO. N. Trujillo, 17 de Mayo del 2013.. DI. Br. Araceli Vargas Huamán. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M UN. IC. AC I. Ó. MIEMBROS DEL JURADO. IN. FO. RM. ÁT. IC. Presidente. A. Y. Ms. C Pedro Arnaldo Alvarado Salinas. Secretario. Ms. C María Nelly Vásquez Valles Vocal. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. Ms. C Anibal Quintana Díaz. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. APROBACIÓN. IC. A. Y. CO. M UN. IC. Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que la presente tesis, ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales, siendo aprobado por UNANIMIDAD.. ÁT. Ms. C Pedro Arnaldo Alvarado Salinas. DE. IN. FO. RM. Presidente. Secretario. Ms. C María Nelly Vásquez Valles Vocal. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. Ms. C Anibal Quintana Díaz. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. CERTIFICACIÓN DEL ASESOR. AC I. Ó. El que suscribe, en calidad de profesora asesora de la tesis: Efecto antibacteriano. IC. del aceite esencial de Tagetes minuta sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus,. M UN. Salmonella typhi y Bacillus cereus; certifica que ésta ha sido desarrollada de. CO. conformidad con los objetivos propuestos en su perfil Académico, y que el informe ha. Y. sido revisado y acoge las observaciones y sugerencias alcanzadas.. IC. A. Por lo tanto autorizo a la alumna Araceli Vargas Huamán a continuar con el trámite de. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. reglamento correspondiente.. DI. RE. CC. IO. N. Ms. C María Nelly Vásquez Valles. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AGRADECIMIENTOS. AC I. Ó. Deseo expresar mi agradecimiento a todas aquellas personas que colaboraron en la. M UN. IC. realización de este trabajo y de manera especial:. A mi profesora Ms. C. María Nelly Vásquez Valles por su incondicional y valioso. CO. apoyo, siempre estuvo a mi lado apoyándome durante el presente proyecto, agradecerle. A. Y. por sus consejos, paciencia, buen trato y la confianza depositada en mí; siempre me. ÁT. IC. brindo su amistad, disponibilidad ante cualquier eventualidad y principalmente su ayuda. RM. incondicional.. FO. Mi gratitud al Ms. C. Pedro Arnaldo Alvarado Salinas por su orientación, amistad y. DE. IN. dedicación durante el proceso de formación académica y en el desarrollo del proyecto de. EM AS. tesis.. Gracias por brindarme la maravillosa oportunidad de trabajar al lado de ustedes y. ST. considerarme como un integrante del grupo de investigación, adquirí muchos. IO. N. hogar.. DE. SI. conocimientos, experiencias y vivencias en el laboratorio, al que considero mi segundo. CC. Gracias por su valeroso y apreciado tiempo, y por estar siempre dispuestos a. DI. RE. escucharme y aconsejarme. Gracias, Dios los bendiga a lo largo de sus vidas.. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. DEDICATORIA. AC I. Ó. A mi Dios, con todo mi corazón. camino del bien, por darme la salud, la fuerza y la fe.. CO. Por haberme permitido llegar hasta este punto y haberme. M UN. IC. Mi agradecimiento es a Dios por haberme orientado por el. dado salud para lograr mis objetivos, además de su infinita. A. Y. bondad y amor, me diste la oportunidad de vivir y me. RM. ÁT. IC. regalaste una familia maravillosa.. FO. A mi mamita Carmen. DE. IN. Por sus buenos consejos y apoyarme en todo momento, brindo. sentido. responsabilidad,. respeto,. EM AS. me. perseverancia y siempre me da esperanzas para lograr. que siempre me encaminó por el sendero del bien. Se dedicó en cuerpo y alma para velar por mi bienestar y por ello no la quiero defraudar. Aunque la distancia nos aleja, siempre pienso en ella; porque ella es y será mi fuerza.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. hazañas. Si ahora soy una persona de fe es gracias a ella. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. A mi papito Humberto. AC I. Ó. Porque siempre ha estado a mi lado y me ha. IC. apoyado en mis decisiones, siempre dio todo de sí. M UN. para hacer de mí una persona capaz, humilde y. CO. noble en la vida. Siempre recibí un consejo de. Y. perseverancia y constancia cuando él me hablaba.. IC. A. Me brindó la oportunidad de tener una carrera. ÁT. profesional, y todo lo que logré es también gracias. FO. A mis hermanos, Adela, Joel y Huber.. Que con su amor, claro a su manera, me han enseñado a salir adelante. Gracias por su paciencia, por preocuparse por su hermana mayor, gracias por compartir sus vidas, pero sobre todo, gracias por estar en otro momento tan importante en mi vida.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. confianza que siempre tuvo en mí.. RM. a él; sé que está orgulloso de mí y yo feliz por la. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. personas maravillosas de espíritu. AC I. Pedro, Nancy y Lisseth. N. A mis amigos. IC. encomiable con los que compartí gratos momentos y conservo. M UN. inolvidables recuerdos, amigos que brindan su apoyo incondicional y. CO. de los que siempre recibí una palabra de aliento para superar las. Y. adversidades, y así mirar el futuro con optimismo para alcanzar mis. IC. A. metas. Pasé momentos inolvidables junto a ellos, momentos que. ÁT. permanecen intactos en mi mente y mi corazón, pero que me hacen. RM. extrañarlos cada vez que los evoco en mi pensamiento.. FO. Agradezco a Dios por haberme dado la oportunidad de nacer en. IN. esta época y poder haberlos conocido, Dios me bendijo con una. DE. amistad pura y sin egoísmos.. EM AS. Siempre rezo por ustedes y todos mis amigos para que Dios les. ST. brinde la oportunidad de crecer como hijos de bien, como hermanos,. SI. como amigos y como profesionales; que haya salud para ellos y todas. Dios los bendiga, hoy y siempre!!. DI. RE. CC. IO. N. DE. sus familias.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. CONTENIDO Pág.. M UN. IC. AUTORIDADES DE LAUNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE. ii. PRESENTACIÓN. iii. Y. CO. OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO MICROBIÓLOGO. iv. IC. A. MIEMBROS DEL JURADO. RM. ÁT. APROBACIÓN. FO. CERTIFICACIÓN DELASESOR. vi vii. IN. AGRADECIMIENTOS. v. viii. EM AS. DE. DEDICATORIA CONTENIDO. xv 1. II. OBJETIVOS. DE. 10 11. SI. I. INTRODUCCIÓN. N. ST. RESUMEN. xi. DI. RE. CC. IO. III. MATERIAL Y MÉTODOS Material biológico. 11. Métodos. 11. 1. Recolección y transporte de Tagetes minuta. 11. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 11. N. 2. Identificación taxonómica de Tagetes minuta. 12. AC I. Ó. 3. Extracción del aceite esencial de Tagetes minuta. IC. 4. Reactivación y purificación de las bacterias. M UN. 5. Preparación del inóculo. CO. 6. Preparación de las muestras. 13 13 13. Y. 7. Medición de la actividad antibacteriana: Método de Difusión en Agar. 12. IC. A. 8. Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria(CMI): Método de. RM. 8.1 Preparación del inóculo. ÁT. Dilución en Agar. IN. FO. 8.2 Preparación de la dilución doble seriada de aceite esencial. 14 15 15. DE. 8.3 Incorporación de la muestra. 14. 16. EM AS. 8.4 Incorporación del inóculo 8.5 Lectura de resultados. 16 17. ST. IV. RESULTADOS. SI. Tabla Nº 3. Promedio del diámetro del halo neto de inhibición del crecimiento de. DE. Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Bacillus cereus producido por el. cloranfenicol y oxacilina.. 18. DI. RE. CC. IO. N. efecto antibacteriano del aceite esencial de Tagetes minuta al 5% y 10% y del. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. Tabla Nº 4 Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial de Tagetes. AC I. Ó. minuta (μL/ ml) para Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Bacillus 19. M UN. IC. cereus en Müeller Hinton a pH (7.3). 20. CO. V. DISCUSIÓN. 26. Y. VI. CONCLUSIONES. 27. ÁT. 28. RM. VIII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. IC. A. VII.RECOMENDACIONES. 36. FO. Anexos. 37. Anexo Nº 2: Tabla Nº 2: Dilución seriada doble del aceite esencial de T. minuta. 38. EM AS. DE. IN. Anexo Nº 1: Tabla Nº 1: Concentración de aceite esencial T. minuta al 5% y 10%. Anexo Nº 3: Constancia del herbario de la Universidad Nacional de Trujillo. 39. ST. Anexo N° 4: Fig. 1: Equipo de destilación por arrastre de vapor para la obtención de 40. DE. SI. aceite esencial de Tagetes minuta.. N. Anexo N° 5: Fig. 2: Rendimiento de aceite esencial de Tagetes minuta por el método 41. DI. RE. CC. IO. de destilación por arrastre de vapor fue de 0.67 (V/P). xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. Anexo N° 6: Fig. 3: Efecto antibacteriano del aceite esencial al 5 % y 10 % de. AC I. Ó. Tagetes minuta y cloranfenicol (C 30 μg/mL) y oxacilina (1 μg/disco), sobre el. 42. IC. crecimiento de Staphylococcus aureus.. M UN. Anexo N° 7: Fig. 4: Efecto antibacteriana del aceite esencial al 5 % y 10 % de. CO. Tagetes minuta y cloranfenicol (C 30 μg/mL) y oxacilina (1 μg/disco), sobre el 43. A. Y. crecimiento de Salmonella typhi.. ÁT. IC. Anexo N° 8: Fig. 5: Efecto antibacteriana del aceite esencial al 5 % y 10 % de. RM. Tagetes minuta y cloranfenicol (C 30 μg/mL) y oxacilina (1 μg/disco), sobre el 44. FO. crecimiento de Bacillus cereus.. DE. IN. Anexo N° 9: Fig. 6: Concentración Mínima Inhibitoria del aceite esencial de Tagetes. EM AS. minuta, sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus.. 45. Anexo N° 10: Fig. 7. Concentración Mínima Inhibitoria del aceite esencial de. SI. ST. Tagetes minuta, sobre el crecimiento de Bacillus cereus.. 47 48. DI. RE. CC. IO. N. DE. Anexo N° 11: Medio de cultivo: Plate count agar Anexo N° 12: Medio de cultivo: agar Mueller-Hinton. 46. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. RESUMEN. AC I. Ó. El objetivo del presente trabajo fue determinar la actividad antibacteriana del aceite. IC. esencial de Tagetes minuta ―Huacatay‖ o ―Chinchu‖ frente a Staphylococcus aureus,. M UN. Bacillus cereus y Salmonella typhi. Las plantas de T. minuta fueron recolectadas de la. CO. provincia de Yungay, Región Ancash. El aceite esencial fue obtenido a partir de las hojas mediante la destilación por arrastre de vapor. La actividad antibacteriana se determinó por. A. Y. el método de difusión en agar, en el cual se observa que S. aureus a la concentración de. ÁT. IC. aceite esencial de 5% forma un halo de inhibición de 17.72 mm y al 10% de 22.97 mm; y. RM. para B. cereus el promedio del diámetro del halo de inhibición del crecimiento al 5% y. FO. 10% de aceite esencial de T. minuta son 28.55 mm y 39.62 mm respectivamente. Así. IN. mismo para S. typhi el halo de inhibición del crecimiento producido por el aceite esencial. DE. de T. minuta al 5% es de 17.78mm y 24.28 mm al 10%. Para los tres microorganismos. EM AS. ensayados a medida que se incrementa el porcentaje de aceite esencial aumentan los halos. ST. de inhibición. La concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de Tagetes minuta. SI. se determino por el método de dilución en agar, siendo para S. aureus de 1.25 μL/mL,. DE. mientras que para B. cereus y S. typhi es de 2.5 μL/mL.. DI. RE. CC. IO. N. Por lo tanto; el presente estudio permite afirmar que el aceite esencial de Tagetes minuta, obtenido mediante el método de destilación por arrastre de vapor; posee efecto antibacteriano sobre S. aureus, B. cereus y S. typhi.. Palabras clave: Tagetes minuta, aceite esencial, efecto antibacteriano, concentración mínima inhibitoria.. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCION. N. Las enfermedades causadas por el consumo de alimentos contaminados (ETA). AC I. Ó. constituyen uno de los problemas más importantes de salud pública, debido a que son la. IC. mayor causa de morbilidad y mortandad tanto en países industrializados como en vías de. M UN. desarrollo; además, afectan negativamente a la productividad económica en todo el. CO. mundo[1, 2, 3].. Y. Entre los factores asociados a estos problemas se pueden señalar el crecimiento de la. IC. A. población, la pobreza, la urbanización en países subdesarrollados, el comercio internacional. ÁT. de alimentos para humanos y animales, así también la aparición de nuevos agentes. RM. productores de ETA o nuevos mutantes con una mayor patogenicidad [4, 5, 6]. Por otro lado,. IN. FO. existe un creciente interés relacionado con las malas prácticas sanitarias en la preparación. DE. de alimentos y su relación con la producción de brotes alimentarios, siendo el 24% de los. EM AS. brotes de enfermedades en países desarrollados causada por manipulación de individuos infectados [2, 4].. SI. ST. Aunque la mayoría son leves y se asocian a síntomas gastrointestinales agudos tales. DE. como diarrea y vómito, en algunas ocasiones la ETA es mucho más severa y peligrosa para. N. la vida, especialmente en niños, y la infección puede ocasionar enfermedades crónicas. Los. CC. IO. datos de la Organización Mundial de la Salud (OMS) estima que solo en el año 2000, un. RE. total de 2.1 millones de personas fallecieron por causa de enfermedades diarreicas; una gran. DI. proporción de esos casos se atribuye a la contaminación de los alimentos y del agua. También se informa que en los países industrializados el porcentaje anual de personas aquejadas de enfermedades transmitidas por los alimentos asciende a 25 % o más [7].. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Se han descrito más de 250 ETA, la mayoría son infecciones ocasionadas por. N. distintas bacterias, virus y parásitos [2,3]. Dentro de las bacterias causantes cabe destacar a. AC I. Ó. Staphylococcus aureus y Clostridium botulinum como agentes causantes de intoxicación,. IC. Bacillus cereus y Clostridium perfringens como agentes causantes de toxoinfección, y. M UN. diversos géneros causantes de infección, como la Listeria monocytogenes, Salmonella sp. y Escherichia coli 0157: H7, bacterias descritas por la OMS como "una nueva y significativa. Y. CO. amenaza a la salud pública‖ [2,3,5].. IC. A. Para el año 2005 se estimó que 1,5 millones de personas murieron a causa de. ÁT. enfermedades diarreicas a nivel mundial y el 70% de ellas son atribuidas a las ETA [6]. Es. RM. bien conocida la transmisión al hombre de bacterias patógenas a través del consumo de. IN. FO. alimentos con bacterias como Escherichia coli, Salmonella spp., S. aureus, Pseudomonas. DE. aeruginosa y B. cereus, siendo por esto, reconocidos como microorganismos de vital. EM AS. importancia para la salud pública. Este grupo de bacterias, debido a su ubicuidad e incidencia, se ha constituido en blanco de acción de muchos de los sistemas de. SI. ST. aseguramiento de la calidad en industrias alimentarias [8].. DE. A pesar que existen muchos antimicrobianos para su control o tratamiento, su uso. N. irracional genera resistencia microbiana y otras secuelas. La biodiversidad vegetal ofrece. CC. IO. alternativas antimicrobianas; algunas especies con excelentes resultados, debido a sus. DI. RE. componentes químicos [9]. El uso de antimicrobianos como conservadores es una práctica común en la industria. de los alimentos; por muchos años se han utilizado antimicrobianos sintetizados. - 2Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. químicamente que en algunos casos han causado daño en la salud de los consumidores, si. N. se utilizan a grandes dosis o como en el caso de los sulfitos, redundando en un rechazo por. AC I. Ó. parte de los consumidores de productos procesados, por lo cual ha surgido la necesidad de. IC. buscar otras opciones. En esta búsqueda se han encontrado nuevos agentes antimicrobianos. M UN. de origen natural, como sustitutos de los tradicionalmente utilizados. Actualmente está. CO. aumentando el interés por los antimicrobianos de origen natural que puedan extraerse para ser utilizados con el fin de prolongar la vida útil del alimento y la seguridad para el. IC. A. Y. consumidor [10].. ÁT. De acuerdo con esto es importante resaltar que el estudio de sustancias de origen. RM. natural tales como extractos y aceites vegetales se han llevado a cabo para evaluar su efecto. EM AS. DE. IN. FO. antimicrobiano, fungicida, insecticida y plaguicida [11].. Se ha convertido en la razón de ser de muchas investigaciones recientes, la búsqueda. ST. del potencial antimicrobiano y antioxidante de aceites esenciales de plantas aromáticas y. SI. medicinales, que permitan sintetizar a partir de ellos agentes farmacéuticos para el control. DE. de patógenos causantes de enfermedades en humanos, animales y vegetales, que pueden ser. IO. N. utilizados como conservantes de alimentos y cosméticos con ventajas sobre los aditivos. CC. sintéticos referente a efectos tóxicos y genotóxicos colaterales, favorables económica y. DI. RE. medioambientalmente [,12,13,14]. El término aceite esencial probablemente se origina del hecho que, el aroma de una. planta existe en forma líquida inmiscible en agua, en glándulas o entre células. Los aceites. - 3Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. esenciales son en su mayoría sustancias terpénicas y fenilpropánicas, que se almacenan en. N. tejidos secretores de los órganos vegetales aromáticos. Así mismo son una compleja mezcla. AC I. Ó. natural de metabolitos secundarios volátiles, aislados de plantas mediante métodos de. IC. destilación, extracción con solventes, etc. Los principales constituyentes de los aceites. M UN. esenciales son mono y sesquiterpenos, incluyendo carbohidratos, éteres, aldehídos y. CO. cetonas, los que son responsables de la fragancia y propiedades biológicas de las plantas medicinales. Los aceites esenciales cubren un amplio espectro de actividades propiedades. antiinflamatorias,. Y. demostrando. antioxidantes. y. IC. A. farmacológicas,. ÁT. anticancerígenas. Otras cumplen actividad biocida contra una variedad de organismos como. RM. bacterias, hongos, virus, protozoos, insectos y plantas. Durante mucho tiempo han sido. IN. DE. alimentos y aromaterapia [15, 16, 17, 18,19].. FO. utilizados en el campo de la cosmética, en la elaboración de perfumes, la conservación de. EM AS. En recientes estudios se ha demostrado la actividad antibacteriana de diversos componentes de aceites esenciales de tomillo, ajedrea, orégano, comino, clavo de olor,. ST. corteza de canela, hoja de canelero, romero. Una especie aromática puede contener más de. DE. SI. 150 componentes químicos en su aceite esencial [20].. N. Pese a las diferencias de composición entre los distintos aceites esenciales se puede. CC. IO. afirmar que presentan una serie de propiedades físicas comunes: son liquidas a temperatura. RE. ambiente, volátiles y arrastables en corriente de vapor de agua y prácticamente inmiscibles. DI. con la misma. Son solubles en alcohol, éter, así como en la mayor parte de disolventes orgánicos. Presentan índices de refracción elevados y muchos de ellos son ópticamente activos. La densidad de los aceites esenciales suele ser inferior a la del agua, constituyendo - 4-. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. una excepción los obtenidos a partir de la canela, el clavo y el sasafrás, cuya densidad es. N. superior a la unidad. Todos ellos poseen olor característico, raramente son coloreados, salvo. AC I. Ó. excepciones, como el aceite esencial de manzanilla de intenso color azul, debido a su. IC. contenido de camazuleno. [21, 22].. M UN. El Perú es conocido como el tercer país megabiodiverso del mundo; algunos. CO. científicos lo catalogan como uno de los primeros, porque posee una extraordinaria riqueza. Y. biológica como fuente natural de moléculas bioactivas. La diversidad vegetal llega. IC. A. aproximadamente a unas cincuenta mil especies detectadas, mientras que todo el continente. ÁT. europeo posee doce mil especies. Por ello, el aprovechamiento sostenible de nuestros. FO. RM. recursos naturales debe ser validado científica y tecnológicamente [23].. IN. El género Tagetes comprende cerca de 56 especies de las cuales 27 son anuales y 29. DE. son perennes. Las especies comunes de esta familia son: Tagetes erecta, Tagetes minuta,. EM AS. Tagetes pusilla, Tagetes lucida, Tagetes patula, y Tagetes terniflora, entre las más destacables debido a sus usos como alimento, condimento, en la extracción de pigmentos,. SI. ST. en la medicina tradicional y antagonista de nemátodos fitoparásitos [24, 25].. DE. T. minuta, conocida como ―Huacatay‖ o ―Chinchu‖ es utilizado como alimento y. IO. N. condimento en ajíes, guisos, asados y pachamancas; y en la medicina tradicional, sus hojas. CC. son utilizadas en infusiones, para la dismenorrea, laxante, diurético. El uso de T. minuta se. RE. debe a su agradable aroma en potajes locales como pachamancas, algunos aderezos, y como. DI. paliativo en el síndrome menstrual. Gran parte de su utilización proviene de su contenido de aceites esenciales, los cuales le brindan el aroma característico [26].. - 5Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En el año 2004 Felice Senatore y colaboradores mostraron la existencia de actividad antimicrobiana del aceite esencial de Tagetes minuta (huacatay) contra las bacterias. AC I. Ó. N. evaluadas, con valores de Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) de 6.25 – 25μg/mL para. IC. bacterias Gram positivas y de 25- 50 μg/mL para bacterias Gram negativas. Así mismo, se. M UN. reportó que los niveles de dihidrotagetonas, tagetonas, y ocimenonas encontrados en dicha. CO. planta podrían tener relación en la actividad antimicrobiana observada .Otros reportes muestran que el extracto de hojas de Tagetes lucida presenta actividad contra bacterias. IC. A. Y. Gram positivas [25].. ÁT. S. aureus es anaerobio facultativo y habitualmente catalasa y coagulasa positivos; no. RM. esporulado, resistente a muchas condiciones ambientales adversas; es productor de gran. 28, 29]. . Se incluyen dentro de estas enzimas y toxinas,. DE. para la desoxirribonucleasa [27,. IN. FO. variedad de enzimas y toxinas, así como la fermentación del manitol y la prueba positiva. EM AS. diversas enterotoxinas termoestables, destacándose la enterotoxina A, la cual es extremadamente potente, una cantidad tan pequeña como 100 ng es suficiente para causar. ST. síntomas de intoxicación [30,31]. La producción de estas toxinas depende principalmente de. SI. la naturaleza del alimento, de los procesos a los cuales fue sometido (crudo, cocido,. N. DE. fermentado, etc.) y de su potencial exposición a temperaturas de abuso [32].. CC. IO. Los alimentos perecederos tales como carnes crudas y procesadas, ensaladas,. RE. productos de pastelería y productos de leche, son los más comúnmente asociados con. DI. contaminación estafilocócica. Entre 1993 y el año 2000, la OMS reportó que en América ocurrieron 191 brotes por intoxicación estafilocócica con 6 433 afectados y 2 muertes. De. - 6Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. estos brotes, 48 correspondieron a Venezuela, de los cuales, en 40 el queso fue el alimento. Ó. N. involucrado, afectando a un gran número de personas [6].. AC I. Salmonella es un género que pertenece a la familia Enterobacteriaceae, formado por. IC. bacilos gramnegativos, anaerobios facultativos, con flagelos perítricos y que no desarrollan. M UN. cápsula (excepto la especie S. typhi) ni esporas. Son bacterias móviles que producen sulfuro. CO. de hidrógeno, fermentan glucosa, pero no lactosa y no producen ureasa, su temperatura. Y. optima de crecimiento es de 35 - 37 ºC pero el crecimiento se enlentece por debajo de 10 ºC. IC. A. o en 45-47°C. En cuanto al pH muestra un crecimiento óptimo entre 6,5 - 7,5, viéndose éste. ÁT. detenido cuando el pH se sitúa por debajo de 4,5 o supera el valor de 9,0; ello explica que. RM. Salmonella se multiplique fácilmente en los alimentos de origen animal como carne de res,. IN. FO. carne de ave, huevo y la leche siendo las principales fuentes para la transmisión [33, 34, 35, 36].. DE. El género Salmonella es la bacteria más común, presente en la leche sin pasteurizar,. EM AS. los huevos y productos con huevos crudos, la carne cruda y las aves. Siendo así uno de los problemas más comunes de ETA en todo el mundo, teniendo una tasa de mortalidad. SI. ST. aproximadamente un 33% [5, 33,37]. Especies de Salmonella como S. typhi y S. enterica y,. DE. distintas subespecies se han considerado como uno de los patógenos de alimentos más. IO. N. importantes de transmisión [41].. CC. En el Perú, el numero de aislamientos de Salmonella enteritidis, referidas a fuentes. RE. humanas representa un 54% y Salmonella typhi representa un 36%, siendo ambas las. DI. especies de mayor prevalencia en nuestro país. La mayor parte de estos aislamientos provienen de pacientes con ETA [42, 43]. En 1998, se reportaron brotes de ETAs en. - 7Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. diferentes zonas de Lima, presentando el distrito de Comas el mayor número de casos de. N. aislamientos de Salmonella en puestos de venta ambulatoria de alimentos, asociado al. AC I. Ó. consumo de mayonesa y salsa de rocoto [44]. En el año 2010, a través de la vigilancia. IC. bacteriológica con la Red Nacional de Laboratorios en el Perú, se detectó un aumento de. M UN. casos de Salmonella en aislamientos de origen humano, en su mayoría pediátricos de. CO. diversos hospitales de Lima y aislamientos de alimentos [45].. Y. B. cereus es un microorganismo esporulado, aerobio facultativo, gram positivo, móvil. IC. A. que se puede aislar de una variedad de sitios diferentes [33]. Debido a la capacidad de B.. ÁT. cereus para producir esporas que sobreviven a altas temperaturas y crecen a bajas. RM. temperaturas, este microorganismo representa un riesgo asociado a enfermedades. IN. FO. transmitidas por alimentos [34]. Este microorganismo produce dos síntomas que pueden ser. DE. distinguidos, un síndrome emético y un síndrome diarreico. El síndrome emético es. EM AS. causado por la toxina cereulida, un péptido estable al calor y al pH. El síndrome diarreico es causada por enterotoxinas durante el crecimiento de B. cereus en el intestino delgado, así. ST. mismo se presentan tres enterotoxinas capaces de causar el síndrome diarreico y pueden ser. SI. descritas como: hemolisina (HBL), enterotoxina no hemolítica (NHE) y citotoxina K. El. DE. mecanismo del síndrome se cree que es el consumo de comida contaminado con las esporas. IO. N. y/o las células vegetativas de B. cereus. Las esporas pasan a través del estomago y alcanzan. CC. el intestino delgado, germinan, crecen y de este modo se producen enterotoxinas. Las. DI. RE. células vegetativas se cree que son muy susceptibles a las condiciones del estómago por lo tanto es difícil el alcance al intestino delgado [35].. - 8Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El papel de B. cereus como causante de gastroenteritis fue demostrado por Hauge en. N. Noruega en la década del ´50 del siglo XX. Goeppert et al. demostraron que B. cereus. AC I. Ó. produce y segrega por lo menos una enterotoxina durante su desarrollo exponencial en los. IC. alimento. Este microorganismo se ha aislado a partir de productos lácteos, incluyendo. M UN. leches deshidratadas especies comidas deshidratadas, arroz hervido, arroz frito, pastas,. CO. carne, pollo, postres, sopas, ensaladas y vegetales [34, 35].. Y. El uso de aceites esenciales de especias en los alimentos puede ser utilizado para. IC. A. inhibir crecimiento microbiano al mismo tiempo que adereza el sabor del mismo. Los. ÁT. alimentos pueden ser un vehículo de transmisión de microorganismos patógenos y por lo. RM. tanto tienen gran transcendencia en la salud de los consumidores. La adquisición de. IN. FO. enfermedades por el consumo de alimentos contaminados con bacterias como S. aureus, B.. DE. cereus y Salmonella typhi ha hecho que cada vez más países reconozcan la necesidad de. EM AS. someter estos productos a ciertas pruebas o estudios enfocados a evaluar su inocuidad y su calidad. Actualmente se conocen muchas técnicas para el control e inhibición de. ST. microorganismos con el fin de preservar los alimentos, una de estas es la adición de. SI. sustancias de origen natural que le provean al alimento calidad microbiológica y al mismo. DE. tiempo permitan sustituir los aditivos químicos. Por lo expuesto, el presente estudio tuvo. IO. N. por finalidad evaluar la actividad antibacteriana del aceite esencial de Tagetes minuta sobre. DI. RE. CC. el crecimiento de Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Bacillus cereus.. - 9Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. OBJETIVOS. N. 1. General el efecto antibacteriano del aceite esencial de Tagetes minuta. AC I. Ó. - Determinar. IC. ―Huacatay‖ o “Chinchu” sobre los microorganismos Staphylococcus aureus,. CO. M UN. Bacillus cereus y Salmonella typhi.. IC. A. Y. 2. Específico. ÁT. - Determinar los halos de inhibición del aceite esencial de Tagetes minuta sobre el. IN. FO. RM. crecimiento de Staphylococcus aureus, Bacillus cereus y Salmonella typhi.. la Concentración Mínima Inhibitoria CMI. DE. - Determinar. del. aceite. EM AS. esencial de Tagetes minuta sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus,. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Bacillus cereus y Salmonella typhi.. - 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL YMÉTODOS. N. III.. AC I. Hojas de Tagetes minuta ―Huacatay‖ o ―Chinchu‖ provenientes del Caserío la Merced–. IC. . Ó. MATERIAL BIOLÓGICO. Cultivos de Staphylococcus aureus, Bacillus cereus y Salmonella typhi procedente del. CO. . M UN. Yungay, Departamento Ancash.. Y. laboratorio de Microbiología y Tecnología de Alimentos de la Universidad Nacional de. RM. ÁT. IC. A. Trujillo en 2012.. FO. MÉTODOS. IN. 1. Recolección y transporte de Tagetes minuta.. DE. Las plantas de T. minuta ―Huacatay‖ fueron recolectadas en el caserío de la Merced, en. EM AS. la provincia de Yungay región Ancash (a 2532 m.s.n.m.). Las plantas se envolvieron con papel de molde y fueron transportadas al Laboratorio de Investigación Nº 4 de la. ST. Facultad de Ingeniería Química de la Universidad Nacional de Trujillo para la. DE. SI. extracción del aceite esencial.. N. 2. Identificación taxonómica de Tagetes minuta.. IO. Asimismo una muestra de la planta fue llevada al Herbario de la Facultad de Ciencias. DI. RE. CC. Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación taxonómica.. - 11Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 3. Extracción del aceite esencial de Tagetes minuta [21, 22]. N. Las hojas de T. minuta ―Huacatay‖, fueron separadas de los tallos e inflorescencias,. AC I. Ó. luego fueron pesadas en una balanza mecánica de tres brazos para realizar la extracción. IC. del aceite esencial.. M UN. Se empleo el método de Destilación por arrastre de vapor, para lo cual se utilizo 3.5 kg. CO. de hojas de T. minuta colocándose 500g de hojas de T. minuta en un matraz esférico de tres bocas.. IC. A. Y. Se procedió a llenar con agua el balón destilador, previa instalación del conducto. ÁT. refrigerante, y se hizo circular el agua a través del mismo.. RM. Luego se llevó a calentamiento hasta desprendimiento de un líquido inmiscible. FO. conteniendo vapor de agua condensada y el aceite esencial, que fueron recolectados en. IN. un embudo de decantación.. DE. Se eliminó el agua y recogió el aceite esencial en un frasco de vidrio color ámbar.. EM AS. El aceite esencial fue almacenado a temperatura de refrigeración.. ST. Se realizo siete veces la extracción del aceite y se colectó 21 ml.. SI. 4. Reactivación y purificación de las bacterias. DE. Se tomó una azada del cultivo conservado de S. aureus, B. cereus y S. typhi y se. IO. N. sembraron en 4ml de caldo Infusión cerebro corazón (BHI) respectivamente, se llevó a. CC. incubar a 37 ºC durante 24 horas.. RE. Luego se sembró la suspensión de S. aureus en agar Baird Parker, B. cereus en Agar. DI. selectivo para cereus y S. typhi en Agar Salmonella Shigella. Los cultivos se llevaron a incubar a 37 ºC durante 24 horas. Se seleccionaron colonias que presentaron características culturales propias. - 12 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. De las colonias se tomó una azada y se realizo la coloración Gram y se observo a 100x.. N. Una vez comprobada la pureza, de la parte restante de la colonia se sembró en agar. AC I. Ó. nutritivo semisólido inclinado.. IC. 5. Preparación del inóculo[45, 46]. M UN. Se realizo a partir del cultivo puro de cada bacteria sembrado en Plate count agar (PCA). CO. con 18 horas de incubación.. Y. Se hizo una suspensión en 5 ml de solución Salina Fisiológica Estéril (SSFE) a una. IC. A. turbidez equivalente al tubo Nº 0.5 del nefelómetro de Mac Farland (1.5 x 108 UFC/mL).. ÁT. 6. Preparación de las muestras. RM. Se prepararon las muestras a concentraciones de 5% y 10% de aceite esencial de T.. IN. FO. minuta, más el etanol como solvente, tal como muestra la Tabla Nº 1. (Ver anexo Nº 1).. DE. 7. Medición de la actividad antibacteriana. EM AS. Método de Difusión en Agar [47]..  En tres placas con 20 ml de Agar Müeller Hinton, se vertió sobre la superficie 100 μL. ST. del inóculo de S. aureus.. DE. SI.  Las placas se llevaron a secar en la estufa por 10 minutos.. N.  En condiciones de esterilidad se hizo con un sacabocado un pozo con un diámetro de. IO. 5 mm en cada placa.. RE. CC.  Se inoculó 100µl de muestra a concentraciones de 5% y 10% de aceite esencial en. DI. cada uno de los pozos de las placas, en la otra placa se colocó 100µL de etanol como control negativo; y Oxacilina (1 μg/disco), Cloranfenicol (30 μg/disco) siendo el control positivo. - 13 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo.  Se siguió el mismo procedimiento para los cultivos de B. cereus y S. typhi.. N.  Luego se dejó en reposo durante una hora, esto con la intención de permitir una mejor. AC I. Ó. difusión de la muestra en el agar.. IC.  Después se llevó a incubación por 24 horas a 37 ºC.. M UN.  Las pruebas se realizarán por duplicado.. CO.  La Lectura de los resultados se realizó en base a la presencia de halos de inhibición. Y. del crecimiento (en milímetros), formados alrededor de cada pocillo por efecto de la. IC. A. actividad antibacteriana del aceite esencial a concentraciones de 5% y 10%, luego se. ÁT. restó los 5 mm del pozo.. RM.  Las mediciones se realizaron en 4 direcciones y se sacó el promedio.. FO.  Las placas que presentaron actividad antibacteriana significativa (definida como una. DE. IN. zona clara perfecta con un diámetro ≥ 18 mm para el cloranfenicol, Intermedia si es. EM AS. 13-17 y Resistente ≤ 12 y Significativa para la oxacilina si el halo ≥ 13 mm, Intermedia si es 11-13 y Resistente ≤ 10) se sometieron a una nueva evaluación para. SI. ST. determinar su Concentración Mínima Inhibitoria [48,49].. N. en Agar. DE. 8. Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria(CMI): Método de Dilución. CC. IO. 8.1. Preparación del inóculo.. RE.  Se trabajó con las bacterias que dieron positivo a la prueba de actividad. DI. antibacteriana..  Se realizó a partir del cultivo puro de cada bacteria sembrado en PCA con 18 horas de incubación, se hizo una suspensión en 5 ml de solución Salina Fisiológica Estéril - 14 -. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. (SSFE) a una turbidez equivalente al tubo Nº 0.5 del nefelómetro de Mac Farland (1.5. N. x 108 UFC/mL) [45,46].. AC I. Ó. 8.2. Preparación de la dilución doble seriada de aceite esencial. IC.  Se prepararon diluciones dobles seriadas de 100 μL/mL a 6.25 μL/mL de aceite. M UN. esencial de T. minuta en cinco tubos tapa rosca tomando como solvente el etanol.. CO.  Primero se preparó 6 mL de dilución stock de 100 μL/mL de la cual se tomó las. Y. diluciones siguientes, y para la dilución final 1:20 se tomó como diluyente final el. A. Agar Müeller Hinton quedando una concentración final de aceite esencial de 5. ÁT. IC. μL/mL a 0.15625μL/mL en cada placa petri; tal como muestra el esquema de dilución. FO. 8.3. Incorporación de la muestra [47]. RM. de la Tabla Nº 2.(Ver anexo Nº2). DE. IN.  En tres tubos de ensayo con 19 mL de agar Müeller Hinton a 40 ºC se agregó 0.1 mL. EM AS. de Tween 80, se agitó suavemente evitando la formación de espuma, e inmediatamente se agregó 1mL de la primera dilución doble de aceite.. ST.  Se homogenizó suavemente hasta miscibilidad total, y se sirvió en la placa petri que. SI. fue previamente rotulada con la dilución y el microorganismo de ensayo.. DE.  De la misma manera se trabajó con las diluciones restantes.. IO. N.  Adicionalmente, se trabajó con 2 placas conteniendo la primera Agar Müeller Hinton. CC. más Tween 80, y la segunda Agar Müeller Hinton más Tween 80 y el cultivo. DI. RE. bacteriano, las cuales se tomó como control negativo y control positivo.. - 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 8.4. Incorporación del inóculo. N.  Del tubo que contenía la suspensión bacteriana (1.5 x 108 UFC/mL) se tomó 100 μL. AC I. Ó. con la micropipeta y se colocó en la superficie del agar.. IC.  Se llevó a incubación a 37 ºC por 24 horas.. CO. 8.5. Lectura de los resultados. M UN.  Las pruebas se hicieron por duplicado para cada bacteria.. Y. Para la determinación de la CMI, se tomó en cuenta la placa donde no se apreció. IC. A. crecimiento bacteriano ya que a una concentración determinada se inhibe el. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. crecimiento bacteriano.. - 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. N. IV.. AC I. Ó. La Tabla Nº 3 muestra el Promedio del diámetro del halo de inhibición del. IC. crecimiento de S. aureus, B. cereus y S. typhi producido por el efecto antibacteriano del. M UN. aceite esencial de Tagetes minuta al 5% y 10 % en el cual se observa que S. aureus a la. CO. concentración de aceite esencial de 5% forma un halo de inhibición de 17.72 mm y al 10% de 22.97 mm; y para B. cereus el promedio del diámetro del halo de inhibición del. IC. A. Y. crecimiento al 5% y 10% de aceite esencial de T. minuta son 28.55 mm y 39.62 mm. ÁT. respectivamente. Así mismo para S. typhi el halo de inhibición del crecimiento producido. RM. por el aceite esencial de T. minuta al 5% es de 17.78mm y 24.28 mm al 10%.. FO. Observándose que para los tres microorganismos ensayados a medida que se incrementa el. IN. porcentaje de aceite esencial aumentan los halos de inhibición.. DE. La Tabla Nº 4 muestra que la concentración mínima inhibitoria del aceite esencial de. EM AS. Tagetes minuta en μL/mL por el método de dilución en agar para S. aureus es de 1.25. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. μL/mL, mientras que para B. cereus y S. typhi es de 2.5 μL/mL.. - 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 3: Promedio del diámetro del halo neto de inhibición del crecimiento de. N. Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Bacillus cereus producido por el efecto. AC I. Ó. antibacteriano del aceite esencial de Tagetes minuta al 5% y 10% y del. Microorganismos. Antibióticos. CO. Aceite esencial de. M UN. Halos de inhibición en mm. IC. Cloranfenicol y Oxacilina.. 10 %. S. aureus. 17.72. 22.97. S. typhi. 17.78. B. cereus. 28.55. Clor. A. 5%. Y. Tagetes minuta. Oxa R*. 24.28. R. I*. 39.62. S. R*. IN. FO. RM. ÁT. IC. R. I = 13-17 mm. S ≥18 mm. R* ≤ 10 mm. I* = 11-13 mm. S ≥13mm. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Oxa = Oxacilina:. EM AS. DE. Clor = Cloranfenicol: R ≤ 12 mm. - 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla Nº 4: Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) del aceite esencial de. N. Tagetes minuta (μL/ ml) para Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y. CO. B. cereus. Y. 2.5. A. S. typhi. ÁT. Microorganismo. IC. S. aureus. CMI (μL/ ml) 1.25. RM. M UN. IC. AC I. Ó. Bacillus cereus en Müeller Hinton a pH (7.3). DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. 2.5. - 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. DISCUSIÓN. N. Hoy en día existe una demanda significativa de los consumidores por los alimentos. AC I. Ó. que son mínimamente procesados y libres de conservantes químicos de síntesis con la. IC. percepción de ser ―natural‖: como resultado, la industria alimentaria se enfrenta a grandes. M UN. desafíos para producir alimentos naturales, es por ello, que han surgido investigaciones que. CO. utilizan los aceites esenciales como conservantes naturales , debido a su disponibilidad, bajos efectos adversos o toxicidad así como una mejor biodegradabilidad en comparación. IC. A. Y. con la disponibilidad de antibióticos y preservantes [50].. ÁT. La extracción del aceite esencial de T. minuta, se realizó por el método de Destilación. RM. por arrastre de vapor con 0.67% de rendimiento. Se uso el método Destilación por arrastre. FO. de vapor, ya que es la técnica más empleada en la extracción de los aceites esenciales,. IN. además es sencilla y económica, esta técnica se fundamenta en el rompimiento del tejido. DE. vegetal por acción del vapor de agua, liberándose así el aceite esencial. En general los. EM AS. rendimientos de extracción varían desde 0.1 a 2%, existiendo algunas excepciones como. ST. por ejemplo el clavo de olor con más de 15 % de aceite esencial [51,52].. SI. El contenido y cantidad de los compuestos de aceites esenciales de Tagetes depende. DE. del lugar y sitio de crecimiento de la planta, de la etapa fenológica, de la parte de la cual se. IO. N. extrae el aceite, la composición del suelo y la fertilización mineral, entre otros por lo que es. CC. común encontrar diferencias en el contenido del aceite entre otros vegetales de la misma. DI. RE. especie [53]. El aceite esencial de hojas de T. minuta no florecidas contiene principalmente dehidrotagetona, mientras que el aceite de hojas de plantas florecidas al igual que el aceite de flores es rico en β-ocimeno y tagetenona[54,55, 56].. - 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los resultados mostraron que el aceite esencial de T. minuta, obtenido mediante el tiene efecto antibacteriano sobre el. N. método de destilación por arrastre de vapor,. AC I. Ó. crecimiento de S. aureus, B. cereus y S. typhi, además se determino la Concentración. IC. Mínima Inhibitoria (CMI) (Tabla. 3 y 4).. M UN. La Tabla Nº 3 muestra el Promedio del diámetro del halo de inhibición del. CO. crecimiento de S. aureus, B. cereus y S. typhi producido por el efecto antibacteriano del. Y. aceite esencial de T. minuta al 5% y 10 %. La actividad antibacteriana del aceite esencial. IC. A. de T. minuta sobre el crecimiento de Staphylococcus aureus es significativa con un halo de. ÁT. inhibición de 17.72 mm al 5% y 22.97 mm a 10% en comparación con los antibióticos. RM. cloranfenicol y oxacilina donde los halos de inhibición son de 9 mm y 8 mm. IN. FO. respectivamente. Siendo resistente para el cloranfenicol si el halo de inhibición es menor o. DE. igual 12 mm (R≤ 12) y para la oxacilina si el halo es menor o igual 10 mm (R≤10). Los. EM AS. resultados encontrados difieren con los de Tahir y Khan. (2012), donde la actividad mostrada por el extracto de hojas de T. minuta frente a S. aureus es de 16±1.5 mm y el. ST. extracto de tallos es de 16±1.4 mm, en otros estudios la actividad antibacteriana del aceite. SI. de Tagetes pusilla es 6.0 mm, Rosmarinus officinalis 12.5 + 1 mm, Ocimum sanctum 10.3 +. DE. 0.5mm. Para S. typhi, la actividad del aceite esencial de Tagetes minuta fue significativa,. IO. N. con un halo de inhibición de 17.78 y 24.28 al 5% y 10% respectivamente, en comparación. CC. con los antibióticos cloranfenicol y oxacilina donde los halos de inhibición son de 8 mm y. RE. 13mm respectivamente. Siendo resistente para el cloranfenicol si el halo de inhibición es. DI. menor o igual 12 mm (R≤ 12) y para la oxacilina intermedio si el halo es igual 11-13 mm (I=11-13); mientras que en otros estudios la actividad del extracto de las hojas de T. minuta. - 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. frente a S. typhi fue 16±1.3mm, del extracto de flores es 13.5 ± 0.70 mm y del extracto de. N. tallo es de 13 ± 1.40 mm, Ocimum sanctum 10.5±0.5 mm, Bidens tripartita (11 mm).. AC I. Ó. Mientras que para Bacillus cereus, la actividad del aceite esencial de T. minuta fue. IC. significativa, con un halo de inhibición de 28.55 mm al 5 % y 39.62 al 10%, siendo también. M UN. sensible para el cloranfenicol con un halo de inhibición de 22 mm (S≥ 18) y resistente para. CO. la oxacilina co un halo de 9 mm (R≤10); mientras que en otros estudios la actividad antibacteriana del extracto de flores es de 16±1.4 mm y del extracto de tallos es de 11.5±0.7. A. Y. mm, mientras que la actividad antibacteriana del aceite de Rosmarinus officinalis es de 14.7. ÁT. IC. + 1 mm, Ocimum sanctum no presenta actividad, Bidens tripartita (11 mm) [25,48,57,58].(ver. RM. anexo 6, 7, 8). IN. FO. Así mismo este resultado se refuerza con la Tabla Nº 4 donde se observa también que. DE. a las 24 horas de incubación la CMI de aceite esencial de T. minuta para S. aureus es 1.25. EM AS. μL/mL, en otros estudios la CMI para S. aureus presentó una actividad antibacteriana inferior en comparación con el presente estudio; por ejemplo, en el caso de T. minuta de. ST. UK-field es 25μg/mL, T. minuta de UK-GH es 25 μg/mL, T. minuta de Egipto es 50 μg/mL,. SI. T. minuta del sur de Africa es 100 μg/mL, T. lucida 30 μg /μL, Lippia alba 50 μg /μL,. DE. Lippia origanoides 512 μg /mL, C. Scoparioides 6.4 μg/ml [5,25,62]. Para S. typhi y B. cereus. IO. N. la CMI es de 2.5 μL/mL; mientras que otros estudios presentan un CMI con una actividad. CC. inferior para B. cereus, por ejemplo; Tagetes minuta de UK-field es 25μg/mL, T. minuta de. RE. UK-GH es 50 μg/mL, T. minuta de Egipto es 25 μg/mL, T. minuta del sur de Africa es 100. DI. μg/mL, C. Scoparioides 3.2μg/ml Lippia origanoides 512 μg/mL; así mismo en otros estudios la CMI para S. typhi presenta una actividad inferior; por ejemplo; Tagetes minuta. - 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de UK-field es 50μg/mL, T. minuta de UK-GH es 25 μg/mL, T. minuta de Egipto es 50. [20,25,54,58, 62]. Ó. . Las CMI para el. AC I. Minthostachys mollis 4 μg/mL, C. Scoparioides 6.4 μg/ml [. N. μg/mL, T. minuta del sur de Africa es 50 μg/mL Lippia origanoides 512 μg/mL,. IC. aceite esencial T. minuta de UK cultivadas en invernadero eran 6.25-25 mg / ml para. M UN. bacterias Gram-positivas y 25-50 g / mL para bacterias Gram-negativas, con el más bajo. CO. CMI de 6,25 g / mL contra Streptococcus faecalis. Aceite de plantas de Sudáfrica tenía CMI de 50-100 g / ml frente a bacterias Gram-positivas y Gram-negativas. Así mismo, se. A. Y. reportó que los niveles de dihidrotagetonas, tagetonas, limoneno y ocimenonas encontrados. ÁT. IC. en dicha planta podrían tener relación en la actividad antimicrobiana observada [25]. (Ver. RM. anexo 9, 10).. IN. FO. Estos resultados muestran que el aceite esencial de T. minuta inhibe. DE. significativamente el crecimiento de estas tres bacterias en estudio; esto permite considerar. EM AS. la acción antibacteriana ante un espectro más grande de microorganismos, pese a que en varias investigaciones se afirma que las bacterias Gram negativas son menos sensibles. ST. debido a la estructura de la membrana externa y a la constitución de su pared; porque la. SI. membrana externa de las bacterias Gram-Negativas, contiene lipopolisacáridos y no. DE. fosfolípidos. [59]. Las resistencias bacterianas generalmente aparecen por mutaciones y. IO. N. posterior selección en presencia de antibiótico o mediante la adquisición de elementos. CC. móviles, tales como plásmidos, transposones, integrones, etc[60]. Tal vez sea una de estas la. DI. RE. razón por la cual S. aureus resultó ser menos sensible frente al aceite esencial T. minuta al igual que en los trabajos realizados por Tahir y Khan. (2012), donde la actividad antibacteriana mostrada por el extracto de hojas de T. minuta frente a S. aureus es de. - 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 16±1.5 mm y para el de del extracto de las hojas de T. minuta frente a S. typhi es. Ó. N. 16±1.3mm.. AC I. Los aceites esenciales son en general ligeramente más activos frente a bacterias. IC. Gram positivas que frente a las Gram negativas. Esto puede deberse a la estructura de la. M UN. pared celular y la composición de la membrana externa de las bacterias y su interacción con. CO. los aceites esenciales, de naturaleza lipofílica. En el caso de las bacterias Gram negativas. Y. sensibles, así como de las Gram positivas, los aceites esenciales se introducen a través de. IC. A. los lípidos de la membrana celular y mitocondrial, alterando su estructura y haciéndolas. ÁT. más permeables, y como consecuencia tiene lugar una fuga de iones y de otros contenidos. FO. RM. celulares, de forma más o menos intensa, que puede llevar a la muerte celular [25, 53,55].. IN. Generalmente los aceites esenciales poseen evidentes propiedades antimicrobianas,. DE. sin embargo, su mecanismo de acción aún no está definido, esto debido a su complejidad,. EM AS. aunque se reconoce que la acción antimicrobiana de los aceites esenciales depende de su carácter hidrofílico o lipofílico. Los terpenoides sirven como un ejemplo de agentes. SI. ST. liposolubles que afectan la actividad de las enzimas catalizadoras de membrana, por. DE. ejemplo su acción en la respiración microbiana. Teniendo en cuenta la gran variedad de. N. compuestos químicos presentes en los aceites esenciales, es muy probable que su actividad. CC. IO. antimicrobiana no sea atribuible a un mecanismo específico, sino a la acción combinada de. DI. RE. varios de ellos en distintas zonas de la célula [53, 55,57].. - 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ciertos componentes de los aceites esenciales pueden actuar como ―desacopladores‖,. N. que interfieren con la translocación del protón sobre la membrana de una vesícula y. AC I. Ó. subsecuentemente interrumpen la fosforilación del ADP (metabolismo de energía primario).. IC. Terpenoides específicos con grupos funcionales, como alcoholes fenólicos o aldehídos,. M UN. también interfieren en las proteínas enzimáticas integradas a la membrana o asociadas,. CO. deteniendo su producción o actividad [20, ,25].. Y. Algunos aceites, como el aceite esencial de Melaleuca alternifolia usado contra E. coli,. IC. A. actúan como desinfectantes activos provocando la desnaturalización de las proteínas de la. ÁT. membrana bacteriana, produciendo una interrupción en la membrana externa, con. RM. consecuente pérdida de iones potasio (K+), inhibición de la respiración y lisis celular. El. IN. FO. efecto de la acción del aceite puede ser observado en el microscopio como una coagulación. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. en el citoplasma y ruptura de la pared celular [61].. - 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. N. VI.. AC I. Ó.  Se determinó el efecto antibacteriano del aceite esencial de Tagetes minuta, mediante la. M UN. IC. presencia de halos de inhibición.. CO.  Para los tres microorganismos ensayados a medida que se incrementa el porcentaje de aceite. IC. A. Y. esencial de Tagetes minuta, aumentan los halos de inhibición.. ÁT.  Se determinó la concentración mínima inhibitoria en μl/mL de aceite esencial para. RM. Staphylococcus aureus es de 1.25 μg/mL, para Bacillus cereus y Salmonella typhi es 2.5. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. μg/mL.. - 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII.. RECOMENDACIONES. IC. AC I. Ó. N.  Continuar con el estudio de las especies vegetales nativas de nuestra variada Flora.. M UN.  Investigar otras propiedades biológicas del aceite esencial de Tagetes minuta.. A. Y. CO.  Investigar el aceite esencial de Tagetes minuta con otras cepas bacterianas y fúngicas.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC.  Determinar la actividad Tóxica del aceite esencial de Tagetes minuta In Vivo.. - 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VIII.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. AC I. survive. International Journal of Food Microbiology. 2007; 113:1-15.. Ó. N. 1. Gandhi M and Chikindas M. Listeria: A foodborne pathogen that knows how to. IC. 2. Arias ML, Antillón F. Contaminación microbiológica de los alimentos en Costa rica.. M UN. Rev Biomed 2000; 11:113-122.. CO. 3. Gonzales T, Rojas R. Enfermedades transmitidas por alimentos y PCR: prevención y. Y. diagnostico. Salud pública de México 2005; 47(5): 388-390.. IC. A. 4. Beverly J, McCabe-Sellers, Samuel E and Beattie. Food Safety: Emerging Trends in. RM. Association. 2004; 104: 1708-1717.. ÁT. Foodborne ilness Surveillance and Prevention. Journal of the American Dietetic. IN. FO. 5. Almeida CR. Contaminación microbiana de los alimentos vendidos en la vía pública. DE. en ciudades de américa latina y características socio-económicas de sus vendedores y. EM AS. consumidores. Organización Panamericana de la Salud. Instituto Panamericano de Protección de Alimentos y Zoonosis 2000: 1-151.. ST. 6. Hernández PE. Bacterias patógenas emergentes transmisibles por los alimentos.. SI. Departamento de Nutrición, Bromatología y Tecnología de los Alimentos. Facultad de. DE. Veterinaria. Universidad Complutense de Madrid 2010; 6: 147-179.. IO. N. 7. Blackburn C, McClure P. Foodborne pathogens. Hazards, risk analysis and control.. CC. CRC Press LLC; 2002: 3-12.. DI. RE. 8. Herrera FC, Garcia RO. Evaluación in vitro del efecto bactericida de extractos acuosos de laurel, clavo, canela y tomillo sobre cinco cepas bacterianas patógenas de origen alimentario. Bistuta 2006; 4 (2):13-19.. - 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..