Efecto Inhibitorio In Vitro De Myrciaria Dubia “Camu Camu” Sobre Staphylococcus Aureus Y Candida Albicans

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(1)Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE MEDICINA. FO R. MA TI. CA. ESCUELA DE MEDICINA. MA S. E. IN. “Efecto inhibitorio in vitro de Myrciaria dubia “camu-camu” sobre Staphylococcus aureus y Candida albicans”. TESIS:. TE. PARA OPTAR EL GRADO DE:. SI S. BACHILLER EN MEDICINA. IN. A. DE. AUTOR: CASTILLO CARRANZA CLAUDIA NELLY ASESOR:. OF. IC. DRA. MEJÍA DELGADO ELVA MANUELA. TRUJILLO- PERÚ 2013. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IN. FO R. MA TI. CA. DEDICATORIA. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. A la memoria de mi ángel, Srta. Martha.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. MA TI. CA. AGRADECIMIENTOS. MA S. E. IN. FO R. A DIOS por permitirme cumplir mis sueños y por guiar mis pasos.. IC. IN. A. DE. SI S. TE. A MIS PADRES, por darme la vida y por su apoyo incondicional.. OF. A mi ASESORA por su gran apoyo y tiempo en la realización de este trabajo.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. ÍNDICE. MA TI. RESUMEN................................................................................................................Pág. 01 ABSTRACT..............................................................................................................Pág. 02 INTRODUCCIÓN..............................................................................................Pág. 03. FO R. I.. II. MATERIALES Y MÉTODOS...........................................................................Pág. 10. IN. III. RESULTADOS…..…........................................................................................Pág. 23. E. IV. DISCUSIÓN………..….....................................................................................Pág. 39. MA S. V. CONCLUSIONES…..........................................................................................Pág. 45 VI. RECOMENDACIONES....................................................................................Pág. 46 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS.........................................................Pág. 47. VIII.. ANEXOS......................................................................................................Pág. 53. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. VII.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. “Efecto inhibitorio in vitro de Myrciaria dubia “camu-camu” sobre Staphylococcus aureus y Candida albicans” RESUMEN. CA. Objetivo. Conocer si tiene efecto inhibitorio in vitro Myrciaria dubia “camu-camu” contra. MA TI. Staphylococcus aureus y Candida albicans.. Métodos. Se preparó el extracto etanólico de la cáscara de Myrciaria dubia en cuatro. FO R. concentraciones: 25%(250 mg/ml), 50%(500 mg/ml), 75%(750mg/ml) y 100%(1000mg/ml). Se utilizó el método de Kirby Bauer (difusión en disco) y la determinación de la concentración. IN. mínima inhibitoria (CMI) para evaluar la actividad antimicrobiana de M. dubia. Se expusieron. E. a S.aureus y a C.albicans a las cuatro concentraciones del extracto etanólico de M. dubia, así. MA S. mismo hubieron dos grupos control, uno con vancomicina o fluconazol para S.aureus o C.albicans respectivamente y, otro con el inóculo microbiano sin ningún tratamiento; se. TE. realizaron 10 repeticiones en cada caso.. SI S. Resultados. Se determinó que existe diferencia estadísticamente significativa entre el efecto antimicrobiano de las diferentes concentraciones de extracto etanólico de M.dubia tanto sobre. DE. el crecimiento de S. aureus como en el de C. albicans (P<0.05). Tanto S. aureus como C. albicans fueron sensibles a las cuatro concentraciones del extracto etanólico, al comparar los. A. halos de inhibición según la escala de Duraffourd. La CMI para S.aureus fue del 75%. IN. (750mg/ml) y para C. albicans la concentración que tuvo. efecto inhibitorio fue la del. OF. IC. 100%(1000 mg/ml). Conclusión. Myrciaria dubia “camu-camu” sí tiene efecto inhibitorio in vitro contra Staphylococcus aureus y Candida albicans. Palabras clave: Myrciaria dubia, Staphylococcus aureus, Candida albicans.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. In vitro inhibitory effect of Myrciaria dubia “camu -camu “on Staphylococcus aureus and Candida albicans. CA. ABSTRACT. against Staphylococcus aureus and Candida albicans.. MA TI. Target. To determine whether Myrciaria dubia "camu-camu" has in vitro inhibitory effect. FO R. Methods. Ethanolic extract of Myrciaria dubia peel was prepared at four concentrations: 25% (250 mg / ml), 50% (500 mg / ml), 75% (750mg/ml) and 100 (1000mg/ml). To evaluate the. IN. antimicrobial activity, the method of Kirby Bauer (disk diffusion) and the determination of. E. minimum inhibitory concentration (MIC) were used. S. aureus and C. albicans were exposed. MA S. to four concentrations of ethanol extract of M. dubia, also were two control groups, one with vancomycin or fluconazole for S.aureus or C.albicans respectively, and another with no. TE. treatment microbial inoculum, 10 repetitions were performed in each case.. SI S. Results. It was determined that there is statistically significant difference between the antimicrobial effect of different concentrations of ethanol extract of M. dubia on the growth of. DE. S. aureus and C. albicans (P <0.05). Both S. aureus and C. albicans were sensitive to 4 concentrations of the ethanol extract, comparing the inhibition halos as Duraffourd scale. The. IN. A. MIC for S. aureus was 75% (750mg/ml) and for C. albicans the concentration which had the. IC. strongest inhibitory effect was 100% (1000 mg / ml).. OF. Conclusion. Myrciaria dubia "camu-camu" has in vitro inhibitory effect against Staphylococcus aureus and Candida albicans.. Keywords: Myrciaria dubia, Staphylococcus aureus, Candida albicans.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. I.. INTRODUCCIÓN. Staphylococcus aureus (S.aureus) tiene una gran capacidad para adaptarse a. CA. entornos diferentes y representa una causa primaria de infección en seres humanos,. MA TI. siendo el mayor patógeno humano causante de infecciones a la piel y tejidos blandos, neumonía, septicemia e infecciones por dispositivos asociados. S. aureus tiene gran. FO R. variedad de factores de virulencia; el conjunto de estos factores, el sitio de la infección y la variabilidad de la respuesta inmune del huésped explica la amplia gama de. IN. manifestaciones clínicas relacionadas con estas infecciones. En efecto, estas bacterias. E. pueden tener un impacto insignificante sobre la salud, actuando como comensales (en. MA S. la piel o mucosa nasal anterior), pueden causar infecciones moderadas locales, o infecciones graves e invasivas. La mayoría de las infecciones son leves, como la. TE. forunculosis, el impétigo y la foliculitis; pero se pueden producir cuadros graves que ponen en riesgo la vida de los pacientes, como la neumonía, la osteomielitis, la artritis,. SI S. las bacteriemias y la endocarditis.1,2,3. DE. En las últimas décadas S. aureus ha adquirido una elevada relevancia en la. A. medicina humana por diversas razones, una de ellas es la prevalencia creciente de. IN. cepas resistentes a antibióticos, sobre todo por la aparición de los Staphylococcus. IC. aureus meticilino resistente (SAMR). Quedando el tratamiento de las infecciones por. OF. Staphylococcus aureus meticilina sensible (SAMS) en manos de una penicilina isoxazólica como oxacilina y dejando a la vancomicina para el tratamiento de las infecciones por SAMR, pero aun así el uso indiscrimado de antibióticos hace que. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. aparezcan microorganismos resistentes a múltiples antibióticos e incluso a la vancomicina, por lo que se buscan constantemente nuevas alternativas terapéuticas. 4,5. CA. Por otro lado, la importancia clínica de las enfermedades fúngicas ha sido. MA TI. reconocida sobre todo por el aumento del número de pacientes inmunodeprimidos y el incremento de la agresividad de las técnicas diagnósticas y terapéuticas que han hecho. FO R. crecer la población susceptible de sufrir alguna infección fúngica oportunista, siendo el agente más común Candida albicans, que puede causar dos tipos principales de. IN. infecciones en los seres humanos: las infecciones superficiales, como la candidiasis. E. oral o vaginal, y las potencialmente mortales infecciones sistémicas. 6,7,8,9. MA S. El tratamiento de candidiasis en mucosas es sencillo en inmunocompetentes en quienes los antifúngicos tópicos resultan eficaces; sin embargo, en inmunodepresión. TE. existen altas tasas de recurrencias o recidivas, requiriendo terapia intensiva, tanto. SI S. sistémica como local; y a pesar de los excelentes resultados con antifúngicos azólicos orales, existen formas clínicas de candidiasis resistentes al tratamiento con. DE. ketoconazol, fluconazol e incluso anfotericina B. 10,11,12,13. A. La creciente aparición de resistencia, toxicidad e interacciones farmacológicas. IN. de los antimicrobianos tradicionales actualmente está fomentando la búsqueda de. IC. nuevas alternativas terapéuticas entre los productos naturales; las más estudiadas son. OF. las plantas con sus respectivos frutos, cortezas, raíces y semillas. La Amazonía es el ecosistema más importante del mundo. Ésta región es una fuente muy rica de especies para la agricultura, la domesticación de plantas y las. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. aplicaciones medicinales. Se calcula la existencia de unos 30 millones de especies de plantas, sin embargo, solo unas pocas han sido estudiadas e identificadas hasta ahora; y. CA. solo el potencial farmacológico de alrededor de 1% de todas las especies de plantas tropicales ha sido evaluado, lo que la hace un gran reservorio para el descubrimiento 14,15. MA TI. de nuevas moléculas bioactivas y agentes fitoterapéuticos.. FO R. Entre las especies de la Amazonía destaca Myrciaria dubia, o mejor como conocida en nuestro país como “camu-camu”. Camu-camu es de la familia Myrtaceae. IN. y crece en las orillas de lagos y ríos en la selva amazónica. El interés en esta fruta se ha. E. incrementado recientemente debido a la impresionante cantidad de vitamina C que. MA S. contiene, que puede alcanzar hasta los 6g/100g de pulpa fresca, lo que hace que sea una de las fuentes más ricas de vitamina C en el mundo. Adicionalmente, el camu-. TE. camu posee pequeñas cantidades de calcio, hierro, niacina, tiamina, riboflavina, carotenoides y antocianinas. Éstas y otras propiedades convierten al Camu-Camu en. SI S. un importante antioxidante y antiinflamatorio, utilizándose en el alivio del stress,. DE. infecciones virales y enfermedades autoinmunes. 16,17. A. Nascimento y col (2013) investigaron la acción antiobesidad de la ingestión de. IN. la pulpa de camu-camu en un modelo de ratas obesas inducido por dieta, luego de 12. IC. semanas los animales fueron sacrificados y los animales que recibieron camu-camu. OF. redujeron los pesos de la grasa de sus tejidos adiposos blancos; además sus niveles de glucosa, colesterol total, triglicéridos, colesterol LDL e insulina en la sangre. Asimismo Cássia y col (2012) estudiaron el potencial hipolipidémico del jugo de camu-camu a diferentes dosis en ratones dislipidémicos, y encontraron que las. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. diferentes dosis de jugo de camu-camu presentaban efectos moduladores en el perfil lipídico, con los mejores resultados en la concentración de 10 ml/Kg. 16,18. CA. Inoue y col (2008) estudiaron las propiedades antiinflamatorias y antioxidativas. MA TI. del jugo de camu-camu en pacientes fumadores que tomaron 70 ml diarios de jugo equivalente a 1050 mg de vitamina C comparado con un grupo que tomó 1050 mg de. FO R. vitamina C en tabletas; luego de 7 días los marcadores de estrés oxidativo y los marcadores de inflamación disminuyeron significativamente en el grupo con camu-. IN. camu mientras que no hubo cambio en el grupo con vitamina C. También Yasawa y. E. col (2011) investigaron los efectos antiinflamatorios de las semillas de camu-camu,. MA S. extrajeron el extracto metanólico de las semillas de camu-camu y lo administraron por vía oral a ratas con edema inducido en las patas, además identificaron ácido betulínico. TE. en el preparado, conocido como un tripernoide antiinflamatario, el cual sería el. SI S. responsable de la desaparición del edema en las ratas. 19, 20 Pacci y col (2009) investigaron el papel del camu-camu en el control de. DE. quemaduras comparándolo con la sulfadiazina argéntica. Utilizaron el extracto. A. etanólico al 5% de la cáscara de la fruta para preparar una mezcla untuosa que se. IN. aplicó a quemaduras de segundo grado en las patas de ratas durante 5 días;. IC. encontrándose una mayor reducción de la cicatriz en el grupo camu-camu y una mayor. OF. cantidad de fibroblastos, esto se explicó por la mayor activación de las células basales y la detención de los procesos oxidativos, debido a propiedades antioxidantes del camu-camu, aunque la diferencia no fue estadísticamente significativa .17. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Como. vemos,. las. propiedades. hipolipemiantes,. antiinflamatorias. y. antioxidantes del camu-camu son bien conocidas, pero pocos son los trabajos. CA. realizados para investigar su actividad antimicrobiana. Mori y col (2010) evaluaron el efecto antimicrobiano de Myrcyaria dubia “camu camu” y Cyperus luzulae “piripiri”. MA TI. sobre microorganismos patógenos. Se trabajó con las hojas y corteza de Myrciaria dubia, de donde se obtuvieron los extractos hidroalcohólicos a las siguientes. FO R. concentraciones: 500 mg/ml, 600 mg/ml, 700mg/ml y 800mg/ml, para probar su efecto sobre cepas de Staphylococcus aureus, Pseudomona aeruginosa y Escherichia coli,. IN. encontrándose actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus en las. E. concentraciones de 800 mg/ml, 700 mg/ml y 600 mg/ml del extracto de Myrciaria. MA S. dubia. También Myoda y col (2010) investigaron la actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Saccharomyces cerevisiae; utilizando los. TE. extractos metanólicos de la semilla y cáscara de camu-camu, mostrando ambos. SI S. extractos actividad antimicrobiana contra S.aureus en las concentraciones de 75% para. DE. el extracto de semilla y de 100% para la cáscara. 21, 22. A. JUSTIFICACIÓN. IN. La actividad antimicrobiana de Myrciaria dubia todavía no ha sido muy. IC. estudiada, sin embargo, en la cáscara del camu-camu podemos encontrar antocianinas,. OF. flavonoides y compuestos fenólicos totales; los cuales poseen acción antimicrobiana 23;. éstos convierten al camu-camu en una potencial fuente de antibióticos. Por otro lado, la aparición de especies patógenas con resistencia antibiótica, las interacciones farmacológicas significativas, la biodisponibilidad insuficiente y la toxicidad de los. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. fármacos tradicionales, han fomentado la búsqueda de nuevas alternativas entre productos naturales contra los patógenos más frecuentes como, S.aureus y C.albicans.. CA. Si bien se conoce la actividad antimicrobiana contra S. aureus, faltan estudios adicionales que la comprueben, mientras que todavía no existen trabajos publicados. MA TI. acerca de la actividad antifúngica de M.dubia contra C. albicans; y siendo nuestro país uno de los más ricos en biodiversidad, y además el país del cual el camu-camu es. FO R. nativo, se consideró pertinente y factible la realización de este proyecto para evaluar la actividad antimicrobiana contra S.aureus y C.albicans, para lo cual se utilizó el. IN. extracto alcohólico de la cáscara del camu-camu y así aprovechar los recursos. E. biológicos de nuestro país con un respaldo científico en beneficio de la salud de la. MA S. población.. TE. 1.1.Problema:. SI S. ¿Tiene efecto inhibitorio in vitro Myrciaria dubia “camu-camu” sobre. 1.2.Hipótesis:. DE. Staphylococcus aureus y Candida albicans?. IN. A. Sí tiene efecto inhibitorio in vitro Myrciaria dubia “camu-camu” sobre. OF. IC. Staphylococcus aureus y Candida albicans.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 1.3.Objetivos: 1.3.1. General: Conocer si tiene efecto inhibitorio in vitro Myrciaria dubia “camu-camu”. MA TI. contra Staphylococcus aureus y Candida albicans.. FO R. 1.3.2. Específicos: . CA. . Determinar el efecto inhibitorio del extracto etanólico de la cáscara de. IN. Myrciaria dubia “camu-camu” utilizando el método de Kirby y Bauer. Determinar el efecto inhibitorio del extracto etanólico de la cáscara de. MA S. . E. (difusión en disco) sobre una cepa de Staphylococcus aureus.. Myrciaria dubia “camu-camu” utilizando el método de Kirby y Bauer. Determinar la concentración inhibitoria mínima del extracto etanólico de la. SI S. . TE. (difusión en disco) sobre una cepa de Candida albicans.. DE. cáscara de Myrciaria dubia “camu-camu” utilizando concentraciones al. Determinar la concentración inhibitoria mínima del extracto etanólico de la. IN. . A. 25%, 50%, 75% y 100% sobre una cepa de Staphylococcus aureus.. IC. cáscara de Myrciaria dubia “camu-camu” utilizando concentraciones al. OF. 25%, 50%, 75% y 100% sobre una cepa de Candida albicans.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. II.. MATERIALES Y MÉTODOS. 1. MATERIAL DE ESTUDIO. MA TI. CA. 1.1. Material biológico. La cepas de Candida albicans ATCC 10231 y Staphylococcus aureus ATC 25923 fueron obtenidas del cepario del laboratorio de Microbiología de la Facultad de. FO R. Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. IN. 1.2. Material botánico. E. Se utilizaron frutos frescos de Myrciaria dubia adquiridos de un conocido. MA S. mercado de la localidad que comercializa productos de la Amazonía peruana, se seleccionaron los mejores frutos quedando aptos para su procesamiento.. SI S. TE. 2. MÉTODOS Y TÉCNICAS 2.1. Tipo de investigación. DE. El presente trabajo tiene un diseño experimental en bloques completamente al. IN. A. azar, con una observación por bloque en cada tratamiento.. IC. 2.2. Diseño estadístico de muestreo. OF. 2.2.1. Unidad de análisis: La unidad de análisis la constituyó cada uno de los discos de difusión y placas petri observadas.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.2.2. Tamaño de muestra: Por tratarse de un trabajo experimental, se empleó la siguiente formula. CA. estadística para el cálculo del número de repeticiones necesarias que validen el. =. (Z α/2 + Z β)2 2 S2 (X1 – X2)2. FO R. n. MA TI. diseño experimental:. IN. Siendo n= el número de repeticiones a efectuar en cada investigación. E. Z α/2 = 1.96 para α = 0.05. MA S. Z β = 0.84 para β = 0.20. TE. S = 0.8 (X1 – X2) valor asumido por no haber estudios previos. SI S. n=10. DE. Con estos datos se determinó una muestra de 10 observaciones para cada concentración de extracto etanólico de cáscara de Myrciaria Dubia, tanto para. IN. A. Staphylococcus aureus, como para Candida albicans:. IC. 10 repeticiones colocándose a una concentración de 25%. OF. 10 repeticiones colocándose a una concentración de 50% 10 repeticiones colocándose a una concentración de 75% 10 repeticiones colocándose a una concentración de 100%. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.3. Procedimiento y captación de la información La obtención del extracto etanólico de la cáscara de Myrciaria dubia se realizó. CA. en el laboratorio de la facultad de Farmacia de la Universidad Nacional de Trujillo por. 2.3.1. Tratamiento del material vegetal:. MA TI. un especialista en farmacognosia.. FO R. Lavado de muestra: Los frutos seleccionados de Myrciaria Dubia se lavaron con agua destilada, seguido de una desinfección utilizando hipoclorito de sodio. IN. a una concentración de 200 ppm, durante 5 minutos. Posteriormente se realizó. E. el enjuague de la planta con abundante agua destilada estéril, esto es para. TE. para obtener la cáscara.. MA S. retirar los residuos de hipoclorito. Una vez lavados los frutos, éstos se pelaron. SI S. Secado: Las cáscaras del fruto de Myrciaria dubia fueron colocadas sobre papel Kraft y sometidas a secado, primero a temperatura de ambiente por 24 y luego en la estufa a una temperatura de 40°C.. Se realizó la. DE. horas,. A. determinación de peso cada 24 horas hasta lograrse valores constantes.. IN. Pulverización: Una vez secadas las cáscaras del fruto Myrciaria dubia (camu -. OF. IC. camu) se pulverizaron con ayuda de un mortero. Tamizaje: El material obtenido de la pulverización se pasó a través de los tamices Nº 2, 1.2, 0.7. La muestra de trabajo correspondió al tamiz Nº 0.7.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Almacenamiento: El polvo de las cáscaras del fruto Myrciaria dubia (Camu Camu) obtenidas se guardó en frascos de vidrio de color. ámbar de boca. CA. ancha.24. MA TI. 2.3.2. Preparación del extracto etanólico de Myrciaria dubia. Se pesó con exactitud 20g de cáscara previamente pulverizada y tamizada.. FO R. Luego se humectaron con 30 mL de etanol de 96º G.L, se colocaron en una cápsula de porcelana y se mezclaron con cantidad suficiente de arena lavada.. IN. Posteriormente se vertieron en un cartucho de papel filtro, se colocaron en el. E. extractor del equipo de Soxhlet y se extrajeron con 150 mL de etanol de 70°. MA S. G.L. a una temperatura de 60oC a 80oC durante 8 horas.. TE. El producto se filtró 3 veces, primero con papel filtro Whatman N° 41, un. SI S. segundo filtrado se realizó con papel filtro Whatman N°4 y por último, un tercer filtrado fue en papel Whatman N°2, obteniéndose un extracto purificado,. DE. libre de gérmenes.. A. La solución resultante fue llevada a secar en una cámara de secado al vació a. IN. una presión reducida y a una temperatura de 40 °C; luego se pesó el residuo. IC. seco y se guardó en refrigeración a 2 °C en un frasco de vidrio de color ámbar. OF. estéril. De este residuo seco se prepararon las concentraciones de 25%, 50%, 75% y 100% disueltas en etanol de 70ºG.L. respectivamente. 25, 26 Para la preparación de la concentración del 25% se añadió el residuo seco en una proporción de 25 g de residuo seco en 100 ml de etanol, determinando una 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. concentración de 250 mg/ml, para la concentración del 50 % se añadió 50 g de residuo seco en 100 ml de etanol determinando una concentración de 500. CA. mg/ml y así sucesivamente hasta la concentración del 100%.. MA TI. Luego se realizó la separación por concentraciones en frascos de color ámbar, debidamente rotulados y esterilizados en autoclave por 15 minutos a 121 ° C y. FO R. a 15 libras de presión. Dichas diluciones se conservaron a una temperatura de 4°C para su posterior utilización.. IN. 2.3.3. Preparación de la cepa. E. Una vez obtenida las cepas, éstas fueron cultivadas en tubos de ensayo con tapa. MA S. rosca a 25°C por 24 horas en medio Agar Sabouraud dextrosa 4%. para. Candida albicans y en agar soya tripticasa (TSA) para Staphylococcus aureus,. SI S. TE. con el fin de obtener colonias jóvenes. 2.3.4. Preparación del inóculo. DE. Ambas cepas se diluyeron con solución salina hasta obtener una suspensión. A. semejante a la turbidez del tubo Nº 0,5 del nefelómetro de MacFarland, que. IC. IN. corresponde a 1,5 x108 UFC/ml.. OF. 2.3.5. Sembrado Con un hisopo estéril, el cual fue embebido en el tubo del cultivo preparado y a una distancia de 10 cm de la llama de un mechero, se sembró en placas Petri conteniendo Agar Mueller Hinton para Staphylococcus aureus y en agar. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Sabouraud para Candida albicans, hisopando uniformemente sobre toda la superficie del agar y girando cada placa 30°C por 10 veces aproximadamente.. CA. 2.3.6. Determinar el efecto inhibitorio (prueba de susceptibilidad). MA TI. Luego de realizar el sembrado de la cepa de Staphylococcus aureus ATC 25923 y de Candida albicans ATCC 10231 en placas Petri, se realizó la prueba. FO R. de susceptibilidad utilizando el método de Difusión en Discos o método de Kirby-Bauer. Se prepararon discos de papel filtro estériles y se les sumergieron cada una de las concentraciones de extracto etanólico: 25%. IN. dentro de. E. (250mg/ml), 50%(500mg/ml), 75%(750 mg/ml) y 100%(1000mg/ml); y. MA S. después, con aguja estéril fueron colocados los discos sobre los cultivos de Staphylococcus aureus ATC 25923 y Candida albicans ATCC 10231 en las. TE. placas Petri preparadas previamente, se colocaron 4 discos por placa de agar.. SI S. Hubieron dos grupos controles para cada microorganismo: un grupo control con vancomicina y un grupo control con solución salina para Staphylococcus. DE. aureus, un grupo control con fluconazol y un grupo control con solución salina. A. para Candida albicans. Posteriormente las placas se incubaron a 37°C durante. IN. 24 horas.. IC. La siembra de los microorganismos fue para cada una de las concentraciones. OF. del extracto etanólico de la cáscara de Myrciaria dubia y sus respectivos grupos controles.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Finalmente la lectura de resultados se llevó a cabo a las 24 horas. Se midieron los halos de inhibición, incluyendo el área del disco de papel de filtro, con una. CA. regla milimetrada, procediéndose de igual manera con ambos controles. La lectura de los halos de inhibición producidos se midió en milímetros, teniendo. MA TI. en cuenta la escala de Duraffourd.27. FO R. 2.3.7. Determinación la concentración mínima inhibitoria (CMI) Para la determinación de la CMI se realizó el método de dilución en tubos. IN. abreviado. Se prepararon seis tubos de ensayo para cada microorganismo;. E. cuatro con las concentraciones de 25%(250mg/ml), 50%(500mg/ml), 75%(750. MA S. mg/ml) y 100%(1000mg/ml), se añadieron 0.8 mL de cada concentración, luego se realizó la inoculación de 0,2 mL de la bacteria y hongo (en. TE. concentraciones semejantes al tubo 0.5 de la escala de MacFarland) en cada. SI S. uno de los tubos correspondientes, conteniendo las concentraciones mencionadas; el quinto tubo correspondió al control con vancomicina y. DE. fluconazol para la bacteria y el hongo respectivamente, se añadió 0.8 ml de. A. vancomicina o fluconazol y 0.2 ml de la bacteria u hongo según corresponda;. IN. en el sexto tubo se realizó el control sin ningún tratamiento, en estos tubos se. IC. añadió 1ml de cultivo de Staphylococcus aureus y 1 ml de cultivo de Candida. OF. albicans respectivamente. Luego los tubos fueron incubados a 37 ºC por 24 horas. Posteriormente, se determinaron las cuentas viables sembrando 0.1ml de solución de cada uno de los tubos en 10 placas con agar Mueller Hinton por cada concentración y grupos controles, utilizando el asa de Driglasky para. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. dispersar la muestra; dichas placas se colocaron en la estufa por 24 horas a 37°C y luego se observó el crecimiento del microorganismo mediante el conteo. CA. de unidades formadoras de colonias, considerándose como CMI a la menor concentración en la cual no se observaron UFC. Todo el procedimiento se llevó. MA TI. a cabo dentro del diámetro de 10cm de la llama de un mechero. 28. FO R. Se realizó el conteo de UFC empleando la siguiente formula. 29 UFC= N/4 x A x D. E. IN. Donde. MA S. N= número de colonias A=área. SI S. TE. D= dilución. Los resultados obtenidos fueron registrados en las fichas de recolección de. OF. IC. IN. A. DE. datos (Anexo 1, 2, 3 y 4) para su análisis.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.4. Variables y escalas de medición. Ordinal. FO R. MA TI. Concentraciones al Cualitativa 25%, 50%, 75%, 100% del extracto acuoso.. CA. Escala. De razón. Unidades formadoras Cuantitativa de colonias (UFC). De razón. IN. Diámetro del halo de Cuantitativa inhibición. Diámetro del halo de Cuantitativa inhibición Unidades formadoras Cuantitativa de colonias (UFC). De razón De razón. SI S. TE. Efecto inhibitorio “in vitro” sobre una cepa de Candida albicans.. Tipo. E. Variable dependiente Efecto inhibitorio “in vitro” sobre una cepa de Staphylococcus aureus.. Indicador. MA S. Variable Variable independiente Extracto etanólico de cáscara de Myrciaria Dubia.. 2.5. Definición de variables. DE. 2.5.1. Variable Independiente:. IN. A. Extracto etanólico de cáscara de Myrciaria dubia: Extracto con olor. IC. característico, obtenido a partir de la cáscara del fruto de M. dubia, por. OF. maceración en contacto con etanol, seguida de la eliminación de dicho solvente por un procedimiento físico, contiene los principios activos de la cáscara.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.5.2. Variable dependiente: Efecto inhibitorio in vitro: Capacidad para evitar la reproducción o producir la. CA. muerte del microorganismo en condiciones experimentales, determinado al medir. MA TI. el crecimiento del microorganismo mediante la longitud del diámetro del halo de inhibición (diámetro del papel filtro=6mm, por ello se considerará inhibición. FO R. valores mayores a 6mm) y el conteo de unidades formadoras de colonias. 2.5.3. Halo de Inhibición: Zona transparente alrededor del disco donde una. IN. sustancia antibacteriana es capaz de impedir el crecimiento de la bacteria. E. al cabo de 24 horas de incubación. Se utilizó como medida los diámetros. MA S. de estas zonas en mm según la escala de Duraffourd. 2.5.4. Concentración mínima inhibitoria (CMI): Concentración mínima del. TE. extracto etanólico que impide el crecimiento bacteriano o fúngico in vitro.. SI S. Se midió mediante el conteo de las UFC, considerándose como CMI a la. DE. menor concentración en la cual no se observaron UFC.. A. 2.5.5. Escala de Duraffourd:. IN. Escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro,. IC. según diámetro de inhibición. 27. OF.  Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm..  Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro comprendido entre 8 a 14 mm.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT.  Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20 mm.  Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm.. MA TI. CA. 2.6. Análisis estadístico e interpretación de datos. Con la información recolectada se construyó una base de datos que fue procesada de manera automatizada con el soporte del paquete estadístico SPSS 18.0.. FO R. Para analizar la información se construyeron tablas de frecuencias de una entrada con. IN. sus valores absolutos.. E. La comparación de los resultados obtenidos en la investigación de realizó mediante la. MA S. prueba de análisis de varianza de un diseño completamente aleatorizado (ANOVA) y la prueba de Duncan para comparaciones múltiples, ambos con un nivel de significancia. TE. del 5%.. SI S. 2.7. Ética. DE. Con respecto a la ética, por realizarse el trabajo de investigación in vitro, no hay incumplimiento de normas éticas. Sin embargo en el presente trabajo se respetó el. A. principio ético adoptado en el capítulo 6 del código de ética del Colegio Médico del. IN. Perú titulado: “Del trabajo de investigación”, específicamente el 6 Art. 48°, donde. OF. IC. habla de la veracidad en la publicación de los resultados obtenidos en el estudio. Así mismo, se tuvieron en cuenta los principios de bioseguridad correspondiente a trabajos in vitro. 30. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 2.8. Diseño experimental. MA TI. Solución salina. Colonias jóvenes de SA. 75%. 50%. SS. vancimicina. 100%. E. IN. 25%. 0,5 de McFarland. FO R. Cepa de SA. CA. S. aureus(SA). 50%. 100%. 75%. SI S. TE. MA S. 25%. Siembra Solución salina. A. DE. 0,5 de McFarland. 0,2 ml SA. 0,2 ml SA. 0,2 ml SA. 0,2 ml SA. 0,8 ml ext. 50%. 0,8 ml ext. 75%. 0,8 ml ext. 100%. 0,8 ml vancomicina. IN. 0,2 ml SA. 10 repeticiones. OF. Siembra. 10 repeticiones. Siembra. 10 repeticiones. Siembra. 10 repeticiones. Siembra. 10 repeticiones. Siembra. Siembra. IC. 0,8 ml ext. 25%. 1ml SA. 21. 10 repeticiones. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. C.albicans (CA). Colonias jóvenes de CA. MA TI. 0,5 de McFarland. CA. Solución salina Cepa de CA. Fluconazol. 50%. 75%. 25%. IN. FO R. 25%. Sol. salina. 100%. 75%. 100%. MA S. E. 50%. TE. Siembra. SI S. Solución salina. DE. 0,5 de McFarland. 0,2 ml CA. 0,8 ml ext. 25%. 0,8 ml ext. 50%. 0,2 ml CA. 0,2 ml CA. 0,8 ml ext. 75%. 0,8 ml ext. 100%. 0,8 ml fluconazol. 1ml CA. OF. Siembra. Siembra. Siembra. IC. 0,2 ml cA. Siembra. Siembra. Siembra. IN. A. 0,2 ml CA. 10 repeticiones. 10 repeticiones. 10 repeticiones. 10 repeticiones. 10 repeticiones. 10 repeticiones. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. III.. RESULTADOS. Luego de realizar los tratamientos in vitro de M.dubia sobre S.aureus y. CA. C.albicans se determinó lo siguiente:. MA TI. S.aureus es sensible a M.dubia debido a que los diámetros de los halos de inhibición son mayores a 8 mm, según la escala de Duraffourd, como se observa en la que muestran diámetros y promedios de los halos de. FO R. tabla Nº1 y gráfico Nº1,. inhibición en mm del extracto etanólico de M. dubia sobre S. aureus. Además existe. IN. diferencia estadística significativa entre los diámetros de los halos de inhibición. E. hallados de acuerdo a la concentración del extracto etanólico de M. dubia utilizada (P. MA S. < 0,05), es decir el efecto es dosis dependiente: conforme aumenta la concentración del extracto etanólico de Myrciaria dubia aumenta el diámetro de halo de inhibición, o sea. TE. aumenta el efecto inhibitorio sobre S.aureus, tal y como se observa en las tablas Nº 2. SI S. y Nº 3. Con respecto a la determinación de la CMI, se halló que sí hubo efecto inhibitorio por haberse formado un mínimo número de UFC en las diferentes. DE. concentraciones utilizadas, tal y como se muestra en la tabla Nº 4 y gráfico Nº 2; la. A. CMI del extracto etanólico de M.dubia sobre S. aureus fue del 75 % (750 mg/ml),. IN. porque es la de menor concentración a la que no se produce ninguna UFC (tabla Nº 5).. IC. C.albicans es sensible a M.dubia debido a que los diámetros de los halos de. OF. inhibición son mayores a 8 mm, según la escala de Duraffourd, tal como se observa en la tabla Nº6 y gráfico Nº3, que muestran diámetros y promedios de los halos de inhibición en mm del extracto etanólico de M. dubia sobre C.albicans. Además existe. diferencia estadística significativa entre los diámetros de los halos de inhibición 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. hallados de acuerdo a la concentración del extracto etanólico de M. dubia (P < 0,05), es decir el efecto es dosis dependiente: conforme aumenta la concentración del. CA. extracto etanólico de Myrciaria dubia aumenta el diámetro de halo de inhibición, o sea aumenta el efecto inhibitorio sobre C.albicans, tal y como se observa en las tablas Nº. MA TI. 7 y Nº 8. Con respecto a la determinación de la CMI, se halló que sí hubo efecto inhibitorio por haberse formado un mínimo número de UFC en las diferentes. FO R. concentraciones utilizadas, tal y como se muestra en la tabla Nº 9 y gráfico Nº 4; la concentración inhibitoria del extracto etanólico de M.dubia sobre C.albicans fue del. E. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. como se observa en la tabla Nº 10.. IN. 100% (1000 mg/ml), porque es la concentración a la que no se produce ninguna UFC,. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 1: Diámetros de halos de inhibición en mm en función de cuatro concentraciones del extracto etanólico de Myrciaria dubia sobre Staphylococcus. CA. aureus y control con vancomicina.. Número de. MA TI. MEDICIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN (mm) de Staphylococcus aureus Concentración del extracto etanólico( %) de Myrciaria dubia. repeticiones 50. 1. 14.17. 16.84. 2. 15.20. 16.80. 3. 14.93. 16.37. 4. 15.66. 16.52. 5. 15.13. 16.52. 6. 14.04. 7. 15.25. 8. 15.42. 9. 15.96. 10. Vancomicina. 100. 22.50. 15.10. 18.67. 23.09. 19.31. 18.76. 24.09. 14.97. 18.32. 23.53. 13.85. 19.62. 24.55. 15.70. 16.40. 17.63. 25.96. 14.44. 16.48. 18.61. 22.66. 13.89. 18.39. 17.81. 23.91. 13.57. 18.83. 17.46. 23.92. 14.42. 14.97. 16.96. 18.80. 22.65. 12.49. 15.07. 17.01. 18.42. 23.69. 14.77. SI S. TE. MA S. E. IN. 18.54. DE. Promedio. 75. FO R. 25. Control. OF. IC. IN. A. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. GRÁFICO Nº 1: Media del diámetro de los halos de inhibición en mm en función de cuatro concentraciones del extracto etanólico de Myrciaria dubia. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. sobre Staphylococcus aureus y control con vancomicina.. OF. IC. IN. A. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 2: Análisis de Varianza para evaluar los bloques (diámetros de halos inhibitorios) y los tratamientos (actividad inhibitoria del extracto etanólico de. ERROR. Promedio. cuadrados. de. de los. libertad. cuadrados. 522,47. 4. 130,62. 54,01. 45. 576,48. 49. F. P. 108,84. 0.00. 1.20. E. IN. Total. Grados. MA TI. TRATAMIENTOS. Suma de. FO R. FV. CA. Myrciaria dubia y control con Vancomicina). OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 3: Prueba de Duncan de acuerdo al diámetro del halo inhibitorio en función de cuatro concentraciones del extracto etanólico de Myrciaria. n. Grupos para alfa = 0.05. Vancomicina. 10. 1 14,7740. 25%. 10. 15,0730. 50%. 10. 75%. 10. 100%. 10. 2. 3. FO R. 17,0110. MA TI. Concentraciones. CA. dubia sobre Staphylococcus aureus y control con vancomicina.. 4. 18,4220. E. IN. 23,6860. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 4: Número de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de Staphylococcus aureus en función de cuatro concentraciones del extracto. MA TI. CA. etanólico de Myrciaria dubia y control con vancomicina.. UNIDADES FORMADORES DE COLONIAS Staphylococcus aureus. FO R. CONCENTRACIÓN DE EXTRACTO ETANÓLICO DE Myrciaria dubia. DE. 3. 4. 5. 6. 7. IN. 8. 9. 10. 25%. 4. 0. 6. 1. 7. 5. 1. 2. 1. 6. 50%. 2. 1. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0.40 UFC. 75%. 0. MA S. 1. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0.00 UFC. 100%. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0.00 UFC. Vancomicina. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0. 0.00 UFC. 0. PROMEDIO 3.10 UFC. DE. 0. 0. E. 2. TE. 1. SI S. NÚMERO DE REPETICIONES. OF. IC. IN. A. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. GRÁFICO Nº 2: Media de UFC de Staphylococcus aureus en función de las cuatro concentraciones del extracto etanólico de Myrciaria dubia y control. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. con vancomicina.. OF. IC. IN. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 5 Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI). Promedio de. etanólico. UFC. 25%. 3,10. 50%. 0,40. 75%. 0,00. MA TI. Concentración del extracto. CA. del extracto etanólico de Myrciaria dubia sobre S. aureus.. CMI. IN. FO R. Observaciones. 0,00. MA S. E. 100%. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 6: Diámetros de halos de inhibición en mm en función de cuatro concentraciones del extracto etanólico de Myrciaria dubia sobre C.albicans y. CA. control con Fluconazol.. 75. 7.09 8.85 8.70 9.69 8.86 8.40 7.84 7.54 9.21 8.21 8.44. 12.68 11.50 10.82 11.93 11.73 12.46 12.02 12.48 11.19 11.54 11.84. 13.60 13.80 13.34 14.13 13.96 13.21 13.49 14.21 13.92 13.02 13.67. IN E. MA S TE. 100. FO R. 50. 21.84 23.17 20.10 21.19 24.38 21.61 21.68 22.09 22.10 20.90 21.91. 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00 6.00. SI S. 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Promedio. 25. MA TI. MEDICIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN (mm) de Cándida albicans Número de Concentración del extracto etanólico( %) de Control repeticiones Myrciaria dubia Fluconazol. OF. IC. IN. A. DE. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. GRÁFICO Nº3: Media del halos de inhibición en mm en función de cuatro concentraciones del extracto etanólico de Myrciaria dubia sobre C.albicans y. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. control con Fluconazol.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 7: Análisis de Varianza para evaluar los bloques (diámetros de halos inhibitorios) y los tratamientos (actividad inhibitoria del extracto etanólico de. Suma de. Grados. Promedio. cuadrados. de. de los. F. MA TI. FV. CA. Myrciaria dubia y control con Fluconazol) P. libertad cuadrados 1489,36. 4. 23,00. 45. 1512,361. 49. ERROR. 728,46. 0.00. 0,51. E. IN. Total. 372,34. FO R. TRATAMIENTOS. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 8: Tabla Nº 3: Prueba de Duncan de acuerdo al diámetro del halo inhibitorio en función de cuatro concentraciones del extracto etanólico. 25%. 10. 50%. 10. 75%. 10. 100%. 10. 2 8,43. IN. 10. 1 6,00. 3. 4. 5. 11,84. 13,67 21,91. MA S. Fluconazol. Grupos para alfa = 0.05. FO R. n. E. Concentraciones. MA TI. CA. de Myrciaria dubia sobre C.albicans y control con fluconazol.. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº 9: Número de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) de Cándida albicans en función de cuatro concentraciones del extracto etanólico de Myrciaria. MA TI. CA. dubia y control con fluconazol.. 3. 4. 5. 25%. 1. 0. 1. 0. 0. 50%. 2. 1. 0. 0. 75%. 0. 1. 0. 0. 100%. 0. 0. 0. 6. 7. 8. 9. 10. PROMEDIO. 1. 1. 2. 4. 5. 1.50 UFC. 0. 2. 0. 0. 0. 0. 0.50 UFC. 0. 1. 0. 0. 0. 0. 0.20 UFC. 0. 0. 0. 0. 0. 0.00 UFC. MA S. 2. E. IN. NÚMERO DE REPETICIONES. 1. 0. SI S. 0. 4595 5564 4467 5978 5966 5565 6630 6090 5056 5215 |. 5512.60 UFC. DE. Fluconazol. DE Cándida albicans. TE. CONCENTRA CIÓN DE EXTRACTO ETANÓLICO DE Myrciaria dubia. FO R. UNIDADES FORMADORES DE COLONIAS. OF. IC. IN. A. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. GRÁFICO Nº 4: Media de UFC de Cándida albicans en función de las cuatro concentraciones del extracto etanólico de Myrciaria dubia y control con. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. MA TI. CA. Fluconazol. OF. IC. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. TABLA Nº10 Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI). Promedio de. etanólico. UFC. 25%. 1,50. MA TI. Concentración del extracto. CA. del extracto etanólico de Myrciaria dubia sobre C.albicans.. FO R. Observaciones. ,50. 50%. ,20. IN. 75%. 0,00. CMI. MA S. E. 100%. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. Fuente: Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2013.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IV.. DISCUSIÓN. El empleo de las plantas y sus frutos con fines terapéuticos es una práctica que. CA. se ha realizado desde el origen de la humanidad y actualmente es enorme la difusión y. MA TI. popularidad de las terapias vegetales en el mundo, y lo que se venía haciendo en forma empírica y basada en la tradición tiene hoy una base científica. En este contexto. FO R. podemos referirnos a numerosos estudios sobre los extractos etanólicos, en los cuales se destaca su gran utilidad en diversas actividades biológicas tales como antioxidantes, y antibacterianas. Esta última. IN. antiinflamatorias, analgésicas, antiespasmódicas. E. actividad es la que cobra gran importancia debido a la creciente resistencia a los. MA S. antibióticos tradicionales que se está observando en los tiempos actuales. El efecto antimicrobiano de estos extractos puede variar desde la inhibición completa o parcial. TE. del crecimiento microbiano hasta la acción bactericida o fungicida. 31,32,33,34. SI S. El Perú, un país que posee abundantes especies vegetales, algunas muy estudiadas mientras que otras aún permanecen desconocidas en el ámbito terapéutico.. DE. Entre estas últimas tenemos a Myrciaria dubia “camu-camu”, una especie vegetal muy. A. poco estudiada, sobre todo en su actividad antimicrobiana.. IN. La presente investigación demostró la actividad antimicrobiana del extracto. IC. etanólico de Myrciaria dubia frente a Staphylococcus aureus y Candida albicans. OF. utilizando el método de Kirby y Bauer (difusión en disco) y determinando la CMI. Se determinó que el extracto etanólico de M. dubia tuvo efecto inhibitorio in vitro frente a. S.aureus al comparar los halos de inhibición según la escala de Duraffourd, para las 4 concentraciones utilizadas, además se observó que hubo una diferencia dosis 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. dependiente debido que las comparaciones entre los grupos mostraron tener diferencia estadística significativa (p<0,05); todo esto concuerda con los resultados encontrados. CA. por Mori y col (2010) que hallaron actividad antimicrobiana frente a Staphylococcus aureus en las concentraciones de 800 mg/ml, 700 mg/ml y 600 mg/ml del extracto de. MA TI. Myrciaria dubia, en este trabajo el promedio de los halos de inhibición fue de 15 mm, sin embargo no se mencionan los promedios de los halos para las diferentes. FO R. concentraciones, sino que se compara de manera global el efecto inhibitorio frente a S. aureus con el producido frente a otras bacterias como E. coli y P. aeruginosa; nosotras. IN. encontramos que el promedio de 15 mm en los halos de inhibición se obtuvo con la. E. menor concentración, la del 25% (250 mg/ml) que es homogéneo con el grupo control. MA S. con vancomicina, es decir son estadísticamente semejantes (p>0,05). Por otro lado Myoda y col (2010) también demostraron la actividad antimicrobiana frente a S.aureus. TE. utilizando los extractos metanólicos de la cáscara de camu-camu, mostrando actividad. SI S. antimicrobiana contra S.aureus en las concentraciones de 5mg/ml. 21, 22. , lo que. contrasta con el presente estudio ya que aquí la actividad antimicrobiana se observó. DE. desde la concentración del 25 % (250 mg/ml), una concentración mucho mayor a la. A. encontrada por estos autores, sin embargo existen diferencias en el estudio que pueden. IN. explicar estas discrepancias, como que estos autores utilizan discos de papel filtro de. IC. 1,6 mm de diámetro mientras que nosotras utilizamos discos de 6 mm, los halos de. OF. inhibición promedio del trabajo mencionado son de 4 mm, por lo que no se podría establecer comparaciones entre las medidas de las concentraciones. Con respecto a la CMI, se determinó que fue al 75% (750 mg/ml), ya que a partir de esta concentración no se presentaron UFC, sin embargo todas las 40. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. concentraciones tuvieron un buen efecto inhibitorio comparado con el control con solución salina en donde se observó un crecimiento elevado de 10 9 UFC/ml. Sin. CA. embargo el valor encontrado es muy elevado si comparamos respecto al valor de 6,38 mg/dl que hallaron Mori y col (2010) con extracto de la hoja de M. dubia, esto puede. MA TI. deberse a que las hojas de la planta y las cáscara de los frutos tienen diferentes. FO R. concentraciones de compuestos fenólicos, además de ser estos distintos entre sí. Las discrepancias en los valores encontrados pueden deberse a otros factores. IN. como el agar utilizado, en el trabajo realizado por Myoda y col (2010), se menciona. E. que se utilizó agar nutritivo, el cual es un medio simple a diferencia del utilizado por. MA S. nosotras; el tipo de agar puede influir en la capacidad de difusión de las sustancias en el medio agar y además los componentes del medio pueden interaccionar con los. TE. principios activos del extracto o ser el pH de un medio distinto al del otro. Otro factor seria el uso de diferentes cepas en los trabajos de investigación, usándose cepas con. SI S. mayor o menor resistencia antibiótica. 15. DE. También se demostró la actividad antimicrobiana frente a C. albicans, sin. A. embargo estos mecanismos aún no están bien dilucidados, y además no se cuentan con. IN. estudios previos que investiguen la actividad antimicrobiana de M.dubia frente a. IC. C.albicans. También en este estudio se observa que, a pesar de ser la máxima. OF. concentración de fluconazol vía endovenosa usada en la actualidad, la de 2mg/ml, el fluconazol a esta concentración in vitro no logro inhibir el crecimiento de las levaduras, esto podría explicarse por la resistencia a fluconazol de cepas de C.albicans. en nuestra región, coincidiendo con otros estudios nacionales como internacionales. 35. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Existen otros estudios, para la determinación de la actividad antifúngica contra C. albicans, Huamaní y Ruiz (2005) investigaron la actividad antifúngica in vitro de. CA. doce extractos etanólicos correspondientes a diez plantas medicinales peruanas; Annona cherimolia Mill, Annona muricata L, Bidens pilosa, Hypericum laricifolium,. MA TI. Juglans neotropica Diels, Piper spp, Plantago major L, Psidium guajava L, Schinus molle L y Spartium junceum L. La actividad antifúngica contra Candida albicans. FO R. ATCC 10231 se evaluó mediante los métodos de difusión en agar y dilución en agar para la determinación de la CMI. De diez extractos investigados, seis presentaron. IN. actividad antifúngica consistente con un diámetro de halos de inhibición ≥18mm. E. (Prueba de difusión en agar) frente a C. albicans ATCC 10231. La CMI de los. MA S. extractos que presentaron actividad consistente frente a C. albicans ATCC 10231, fue de 250 µg/mL para Hypericum laricifolium L, Juglans neotropica Diels, Psidium. TE. guajava L y Schinus molle L y de 500 µg/mL para Piper spp. En este estudio se. SI S. presentan los promedios de manera global y no de acuerdo a las concentraciones utilizadas, en el presente estudio se hallaron recién promedios mayores a 18 mm en la. DE. concentración al 100% (1000 mg/ml), siendo también el efecto aquí dosis dependiente,. A. y en cuanto a la concentración que tuvo efecto inhibitorio fue la del 100% (1000. IN. mg/ml). De esto se puede deducir de lo anterior que tanto el promedio de los halos de. IC. inhibición como la CMI fueron mucho mayores a las halladas por nosotras. Esto. OF. podría deberse a que comparan especies vegetales diferentes y por lo tanto, tienen un perfil fitoquímico distinto, así como los otros factores ya mencionados.. 36. La actividad antimicrobiana de Myrciaria dubia, se puede explicar por el gran contenido de compuestos fenólicos, sobre todo los flavonoides y dentro de estos 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. tenemos a las antocianinas y antocianidinas que posee la cáscara del fruto de esta especie.23,37,38.. CA. La actividad antibacteriana de los flavonoides se realiza gracias a la inhibición. MA TI. de la síntesis de ácidos nucleicos, para lo cual los autores sugieren que el anillo B de los flavonoides pueden jugar un papel en la intercalación o enlace de hidrógeno con el. FO R. apilamiento de las bases de los ácidos nucleicos, lo cual inhibiría la síntesis de ADN y ARN. Las catequinas, un tipo de flavonoides, actúan dañando la membrana celular. IN. bacteriana, esto se explica mediante dos teorías: perturbando la bicapa lipídica. E. mediante la penetración directa de estas y mediante la disrupción de la función de. MA S. barrera; con lo que se ocasiona la salida de los componentes celulares, lo cual se produce sobre todo en organismos Gram positivos como Staphylococcus aureus. Los. TE. licocalcones, otro tipo de flavonoides, inhiben el metabolismo energético, mediante la. SI S. fuerte inhibición de la NADH-citocromo reductasa. 39 Por otro lado está la actividad antifúngica de los flavonoides contra Candida. DE. albicans, reportada en algunos estudios, y aunque los mecanismos mediante los cuales. A. la producen no están bien esclarecidos, esta acción antifúngica se podría dar por la. IN. inhibición de la conversión dimórfica mediante dos mecanismos: el primero sería ya. IC. inhibiendo la generación de EROS durante la formación del tubo germinativo,. OF. que los EROs juegan un rol durante la invasión e infección de los tejidos, en la formación del tubo germinal y crecimiento de las hifas; se ha demostrado que existe una estrecha correlación entre la formación del tubo germinal y el incremento de la adherencia de C. albicans a las células epiteliales de la mucosa, por lo que se ha. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. sugerido desde entonces que este pudiera ser uno de los mecanismos relacionados con la virulencia por parte de las especies de Candida; el otro mecanismo seria inhibiendo. CA. la actividad de la γ - glutamil transpeptidasa; responsable de la degradación del glutatión, principal regulador no enzimático del equilibrio redox intracelular; durante. MA TI. la elongación de las hifas. 39, 40,41,42. FO R. Según los resultados obtenidos, M. dubia abre nuevas posibilidades en el campo de la investigación clínica y farmacológica, constituyendo así una alternativa. IN. natural, eficiente y de bajo costo, para el tratamiento de las múltiples infecciones que. E. se producen por S.aureus y C.albicans en la comunidad; y aprovechando los recursos. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. propios de nuestro territorio con un respaldo científico.. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. V. . CONCLUSIONES. Myrciaria dubia “camu-camu” sí tiene efecto inhibitorio in vitro contra. La concentración mínima inhibitoria del extracto etanólico de la cáscara de. MA TI. . CA. Staphylococcus aureus y Candida albicans.. Myrciaria Dubia “camu-camu” sobre una cepa de Staphylococcus aureus fue. . FO R. del 75%.. La concentración inhibitorio del extracto etanólico de la cáscara de Myrciaria. El extracto etanólico de la cáscara de Myrciaria Dubia “camu-camu” tiene. MA S. . E. IN. Dubia “camu-camu sobre una cepa de Candida albicans fue del 100%.. efecto inhibitorio in vitro sobre una cepa de Staphylococcus aureus en las cuatro. El extracto etanólico de la cáscara de Myrciaria Dubia “camu-camu” tiene. SI S. . TE. concentraciones utilizadas.. efecto inhibitorio in vitro sobre una cepa de Candida albicans en las cuatro. OF. IC. IN. A. DE. concentraciones utilizadas.. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VI. . RECOMENDACIONES. Se recomienda realizar otros estudios para ampliar el espectro de actividad. Se recomienda realizar otros tipos de extractos de M.dubia para comparar con. MA TI. . CA. antimicrobiana de M.dubia.. el extracto etanólico y determinar la efectividad de los diversos extractos, así. Se recomienda aislar los principios activos causantes de la actividad. Se recomienda realizar pruebas in vivo para valorar la efectividad y la. MA S. . E. antimicrobiana de M.dubia.. IN. . FO R. como la variedad de su actividad antimicrobiana.. toxicidad que pueden proporcionar los componentes activos de M. dubia, así. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. como la dosis terapéutica para la población humana.. 46 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(51) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. VII.. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 1. Zecconi A, Scali F. Staphylococcus aureus virulence factors in evasion from innate. CA. immune defenses in human and animal diseases. Immunol Lett. 2013; 13(2):65-78.. MA TI. 2. Carmona E, Sandoval Seyzo, García C. Frecuencia y susceptibilidad antibiótica del Staphyloccus aureus proveniente de Hisopados nasales en una población urbano. FO R. marginal de Lima-Perú. Rev Peru Med Exp Salud Pública. 2012; 29(2):206-11. 3. Mamani E, Lujan D, Pajuelo G. Perfil de sensibilidad y resistencia de. MA S. Fac Med Lima. 2006; 67(2): 120-24.. E. IN. Staphylococcus aureus. Experiencia en el Hospital Nacional Hipólito Unanue. An. 4. Mensa J, Barberán J, Llinares P. Picazo JJ, Bouza E, Alvarez F et al. Guía de. TE. tratamiento de la infección producida por Staphylococcus aureus resistente a. SI S. meticilina. Rev Esp Quimioter. 2008;21(4):234-258. 5. Bustos J, Hamdan A, Gutiérrez M. Staphylococcus aureus: la reemergencia de un. DE. patógeno en la comunidad. Rev Biomed. 2006; 17:287-305.. A. 6. Moyes DL, Naglik JR. Mucosal Immunity and Candida albicans Infection. Clin. IC. IN. Dev Immunol. 2011 9:1-9.. OF. 7. Ahmad S, Khan Z. Invasive candidiasis: A review of nonculture-based laboratory diagnostic methods. Indian J Med Microbiol. 2012; 30: 264-269.. 47 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

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