Estudio de la estructura genética de poblaciones de "Vibrio cholerae"

ESTUDIO DE LA ESTRUCTURA GENÉTICA

DE POBLACIONES DE

Vibrio cholerae

Maribel Farfán Sellarés

2002

Divisió de Ciències de la Salut

!

" # $% &''&

() ) *

! $! + , - ! . % %

Divisió de Ciències de la Salut

Divisió de Ciències de la Salut

Departament de Microbiologia i Parasitologia Sanitàries

Laboratori de Microbiologia Facultat de Farmàcia Av. Joan XXIII, s/n 08028 BARCELONA Tel. 34.93 402 44 97 Fax 34.93 402 44 98

! $/ 0 + 1 ,/102 -+- " .

3 4 5 . %

6 4 " 3 ! . 1 - 6 *0 7 6220" * %

3

4 5 . % 6 4 "

.-1*7 7. 28

9% : ; < % 5 < =%

4 % 8 >- % % % ?!

. =% : < @ =% % 5

" 3 %

< !

" # $% &''&

7 : 4

!

!

" #

$

$

7

! " # " $% " &

& '( ) " ! % ! " # " B

!&! -4 % 5 %

!&!& , &'

!&!C , 5 &

!&!B 4 &#

* + ! $!# &

!C! , &

!C!& , C#

!C!C , 5 CD

& , - B&

* ' . / / 0/ 1 BB

* / # !+) " B#

C! ! . % ; B#

C! !& % 3 #'

C! !&! 1 EB #'

C! !&!& * 5 *- 2 #'

C! !&!C % 5 E C'F #

C! !&!B * * EA. #

C! !&!# % 5 ;% #&

C! !&! * E '" #C

C! !&!D * 5 A D"' #C

C! !&! % 5 #B

C! !C % 4 #B

C! !C! 5 #B

C! !C! ! *. #B

C! !C! !& * ##

C! !C! !C %G A #

C! !C!& =% #

C! !C!&! % #

C! !C!&!& . * #D

8

C! !B . 4 5 #

C! !B! . 4 5 % #

C! !B!& . 4 5 5 #

C! !# 1 % 5 #

C! ! 5 % / #

C! ! ! A 5 : '

C! ! !& ( H % '

C! ! !C I

C! !D 5 % &

C! ! 5 5 B

C! ! 5 B

C! ! '

C! ! - ; %

C! ! & * 5 D

C! ! &! : J AK D&

C! ! &!& - ; J -K D&

C! ! &!C 7 : J7 AK DC

C! ! &!B % : J +K DC

C! ! &!# + % : J+ K DC

C! ! &! + : C : J+ K DB

C! ! &!D L : JL AK DB

C! ! &! : J , K DB

C! ! &! : J K DB

C! ! &! ' . &"C I J.&C/K D#

C! ! &! 2% 5 J2 K D#

C! ! &! & - J- *K D

C! ! &! C , % J, K D

C! ! &! B % J 6 K D

C! ! &! # % J +7K DD

C! ! C , % DD

C! ! B . 4 5 4 DD

C! ! # * D

C! ! D

C! ! ! % % D

C! ! !& 4 % D

C! ! !C 4 D

C! ! !B 4 '

9

C! ! ! . % 5

C! ! !D . % 5 &

* & "(! " C

C!&! % / C

C!&!& . 5 I % B

C!&!C * 5-*

C!&!B ( %

C!&!# 4 B

C!&! 1 5 %

,--C!&!D =% '&

C!&! 1 5 / % ! 3/ C

C!&! %

'B

'#

* * " ("$ 'D

2 3 / 0/ 1 #

2 / # !+) "

B! ! . % ;

B! !& % 3 D

B! !&! * 5 * - * D

B! !&!& * 5 %

B! !C + %

B! !B -I 5 2 5 &

B! !# N &

B! ! 1 5 J .1K &#

B! !D - 2 &

B! ! % 5 2 % &

B! ! .% 5 2 &

B! ! ' % 5 &

B! ! % C&

B! ! & * C&

B! ! &! 4 % C&

B! ! &!& 4 C&

B! ! &!C M 5 CC

B! ! &!B M 5 ; CC

10

B! ! &! 1 5 &' CB

B! ! &!D * O3 CB

B! ! C 1 5 C#

B! ! C! C#

B! ! C!& P C#

B! ! C!C 5 C#

2 & "(! " CD

B!&! / 5 % CD

B!&!& % C

B!&!C % * 5 * BC

B!&!B ( B

B!&!# =% BD

B!&! * O3 BD

B!&!D / B

B!&!D! P B

B!&!D!& 5 #'

B!&! . 5 % , * 3 ,-- #&

2 * " ("$ #D

4 / 5 B

6

7 ' D

8 9 C

! 4 % 3 B

!& M

12

1.1 Genética de poblaciones bacterianas patógenas

, % :

@ 4 " " ! - @ N

: 4 % % 5 % 4 3

=% 3 J % " K! ,

% 5 % % =% % : % 4 5 %

4 ! 7 % " 3 %

% =% % " 5 " % " "

% % 5 % " 3 %

% 4 % "

! - % : "

4 % % % " 5

% @ % ; !

Q.% 4 I 5 R

% ; % %

I % % " "

% % ! 4 =% % 4 % 5

=% % % 5 8 Q%

=% % % 4 5 R" Q%

5 R" Q =% 5

4 % R!

, % % % "

5 % % 3 % ; 4 5

=% I % ! , 4 5 %

5 % % " =% 4 % 4

! , 5 3 3

N % " : =% 4 % 4 %3 ! ,

5 3 5 % 4 % 5 3

5 "

13

% "

3 5 % " %

! % % : " 5 3 =% : %

: 4

4 % 4 3 % ! "

; % %

5 % "

5 3 % " 5

4 % " 3 ; 4 % 5

4 !

, % @ ;

5 "

! - I

5 " % " 3 5 " =% %

" % ! , 5

% 3% I 5

!

- % : 4 =% " " I

% 5 % " =% %

=% N 5 " 3 ! . % "

=% I 4 5 =% 4 !

-4 : % =% 3 % % %

" % =% ! - % @

% " % 5 % " : =%

5 % " 3 =% % %

% % 5 !

, : ; % 4

5 ! % =% 5

: % : " 4 I % ; %

% ! : 4 %

5 5 3 5 " ; =% I =%

@ ! , =% 5 I 5

% 4 % 5 " ; " % 5

14

4 % 5 =% % % %

=% : 5 !

" 4 5 5

% 8

% 4 5 " 5

5 % 5 4 %

4 " 5 %3 % %

4 % 4 =%

! 2 " N " =%

%3 % 3

% ! % =% %

" % ; " 5

" =% % !

1.2 Fundamentos de la genética de poblaciones bacterianas

, % 4

% ! 5 %

4 % 4 ! - < " % 4

% 4 " 4 5 5 % ! "

% I % % 4 % %

" 3 % : %

3 % !

% I % % : "

=% % %

! 4 % 4

% 5 % !

- 5

=% % 5 ! ,

% 5 " 5 " 5 " 4 3 5 % %3

15

, # % =% % 4 % 4 ! 2

" =% % 5 %3 < " 5 % 5

% % %3 !

, # ;

% 5 =% N 5 4 %

S % " % %3

!

, # %< % 5 %

5 % 5 " =%

% !

, ; =% % % 5

% ; % ! =%

" % % 5

% ! .% =% N 5 " 3 4

; % !

, # =% 4

5 " =% % 3 5 ! ,

5 % 4 5 % %

% 3 4 % 4 !

, 4 % 5 " 5 "

5 3 4 % % % %

4 @ % ! - "

5 % @ 4 % 4 =%

5 ! , % ; 4 " %

" 5 % !

, % ; < 3 %

3 % ! 4

% % ; " %

I % % 3 4 % 5

16

&

-, 4 % 5 5 % =% 4 % 5

% 5 4 5 3 5 ! @ *

% 5 2 % : J : " C'K" 4 % 5

4 I 5 !

-I " 3 J #K % =% I % 5

4 3 4 % 5 8 % 3 4 =%

I 5 3 % 4 % 5 ! " ; 5

4 J % " % 5 " 4 % 4 K

% < 4 !

: I %

4 5 % ! - % "

4 45" " % 5

J4 " N " !K 3 5 J 4 "

" !K! , I I

< 5 % " =% 4 5

! " I %

% 4 I ! 4

% % %

! / 5 %

4 4 " 3 =% @

5 " =% 4 5 ! 5

5 5 % % 5

4 !

< ; I "

5 ;

! " I 5 5 < % !

5 < % " % I

!

- % % % %

8

17

: ; " %3

% : ; S =% % "

" 5

4 ! - " 5 %

5 ! 6 % : 5 =%

I 4 " 3 4 5

% !

, # " % *: % ;: H3"

=% 4 % : ; 3=%

5 4 ! . % "

4 5 %3 !

- : 5 4 =% I

% % ! " % < %

% J) * % " 3 &D

5=% ; % " 3

5 % 4 5 %

% ! - " ;: H3 % %

) : 4 % 4 5 " %

% % >+ 3 ?J CDK!

- % 4 %

% 5 JA% 3 3 , O " S , O 3 A% 3"

SA " K! , % " 3 "

=% % 3 4

I ! , 5 45

; % % J ,--K" =%

% ;5 ; % !

. ,-- % % " "

4 4 ! - 4 %

=% 4 ; 5

J>: % H ?K! "

% ; " I % 4 % % " 3

18

, % 5 %

" 3 " %

% % ! , 4 % ;

; " " % %

% % =% ; !

, ; =% % % 5 ; =%

=% N % % " " 4 %

! - % ; % 4 % "

" % 4 % % 5

% " " %

% 4 ; ; ; !

% % % < " 3

=% % =% 5 %3 <" 3 "

=% % % 5 % ! :

=% ; % % 'F

% % J1 : O 3 !" D S , " BK! "

% =% 3 ; % % " 3=% 4

4 % < 4 !

- % " ,-- ;

5 " =% =% ; % %

5 ; 3" % " 4 5 4

% ! - " % %

5 4 " =% 4 " 3

% 5 " 5 " < 4

!

, ; % : %3 @ %

4 3 % % % ! ;5 % ;

'" % " % 5

: '! - N '"

% 4 I % " 3 4 5

3 4 % " % % 5

: 5 4 % 4 ! 4 % % 5

4 J,% " #S1 " ST 3 O " K! .

19

% " " % : " ) !

4 % 4 !

- " 5 5 ,-- "

% % " I

< J 3 % 4 "

; 5 " 5 " !K! - D" O 3

!" 4 % < % " 5

4 4 % 3

! " @ % 5 %

; " 3 =% : % : =%

% 5 ! "

< H J DCK" ; 4 5 # ; 5

% 5 '' % - < %

3 , 4 % % % 3' !" =%

4 J, 4 " ST: 3 !" CS/ : 3 !"

CK! : % % % 5

,-- % % !

A : 4 " ; % %

5 % " %

% " % %

% 5 " : =% %

4 4 !

3 " 3

,--3 " =% %

" 3 % 4 3 =% "

% % < 4 =%

% ! 4

" 3 ! J K % 3

,-- % % 4 =% % % %

J , *K! , , * % B#' #''

4 5 % % ! , %

2 =% % 5 2 %

% " 3 " % % 4 5

20

% <% 5 " 3

% " % =% % @ % 5 " % !

- 3 4 < ,--" 3 =% 3 4 5 "

=% % 3 5 ; 5 =%

% ,--" 3 % %

! " % =%

% % 4 7 " 5 4

% !

& &

, 5 % %

% 4 " N '! - %

% " H 3

" 4 ; 5

! - % 5 =% %

% % 4 5 "

4 % : " 3 =%

J % " K!

, % " =%

: 3 I 5 " 3 " % 5 !

- " % 5 3 ;

" " =% % % 5 I% ! - "

% % % 5 "

% % 5 I% ! " 3 =%

" " < =%

I% !

%

=%

% " 3=% " 4 " % 4 % 4 ! -I

8 5 " <% 5 3

% 5 ! , 4

21

% " 3 =% : 4 =%

5 3 % ! - N

=% N " % " 3 4

@ ! , 5 % %

% J K % "

J K!

-4 % 5 3 % " =% % : : =%

% "

! 6 =% 5 % %

4 % 4 ! - "

5 % % %3 =% 4

" =% < ! < " 5 %

% =% 4 < 5 4 % 5 "

4 % 3 5 " 5

5 =% 4 % " %3 4

5 ! " % =% % 5

% % 5 4 " !

-=% % ; 4 % ! ,

5 % % 5

=% % % ! - " :

; 5 5 "

% % ! " =%

=% % 5 5 "

" 3 4

5 !

& *

/

Q =% R

-5 " 3 =% : ;

% 4 5 ! %

BD" % * % 3, % 4 ; 5

% ; % U &! % =%

5 % I : #' N "

22

2% 5

% %3 ! - % " % 5

I J <% 5 " 5 3 % 5 K

45 % % =% 4

; 4 %3 4 ! " % I %

=% % % ; ! :

% " =% % : :

4 < %3 4 ! - "

% 4 % 4 "

% " =% I 4

% %3 <!

% =% 3

5 % 5

% 5 " % 5 4

5 ! < " % %

: " % =% % % %

4 5 ! " % 5 % %

5 3 5 =% %3 " =% % 4

% %

! % I J, 4 " S H 3 " 'K" :

=% % % % %3

<" % " 3 =% =%

% % 5 !

- % ; 3 % 5

% % ! I

5 5 " %

% % ! , 4 5 5 4 " % "

% 5 ! - =% % ;

4 % 4 ! . % "

% " ; =% %

! - %

% 5 5 %

! - % " : =% I % " :(! # !% ) !

23

5 " 3 =% : : 5

5 ! - % " : =% :

:(! # !% ) !

% =% " % %

% 3 ! @ 3

: J CK" 5 5 ; 4 %

% 5 " 5 4 I

! 5 4 % 5 4

4 =% %

" 5 "

4 % " < 5 5 " ! . % " =%

; % <% 4 =%

% 5 !

. 5 ,-- % " : 4

=% 3 " % =%

% % 3 =% ! - =%

5 " % =% 5 " %

" 3 =% ! - "

: 4 3 % % =%

% % % ! " % "

3+ " 5 : ;

" % =% !

; % " 3 : 3 !

J CK I 5 " @ % % %

" ! ; I "

" =% " 3 I "

=% " 3 % ! , % !

% % !

. : 4 " % % < 3

% 4 ! " ; % 3

5 ! , I 5 3

=% " %

24

% % % 5 ! :

4 =% 5 @ 5 4

J>: % H ?K % " 3=% 4 4 =%

% % 4 % % % 5 5

5 % 5 %

4 5 " 4 ; % < 5 !

' %(# % % !

/ /

25

& 2

3

-- " J " " "

" !K % : % ; % I 5 3

5 ! 5 4 " %

%3 4 " 3 %

5 % 3

5 ! " 4 % !

/ : 5 2 2 3 : 5 2 12

% 3 5 =% I 5I "

4 4 5 % " %% =%

5 5I !

" % %

4 =% I % 5

! - % : % ;

I 4 5 8

# ,8

- " ; 3 4 % =%

4 5 ! % ; "

5 J1 , K" %

J +-K 3 % .1 % ; 4

!

, 4 5 =% =% 4 % " 3

" % @

; " 4 4 !

% " +-" % @

% " 4 4 5 =% %

,--! < " 5 "

+- % 4 % % " =%

4 5 % %

! "

; " =%

26

6 ; % " =% 4 5

; > 4 =% % ?!

# ,8

- I 5 4 5 =% % % 5 "

=% 4 % ! - =%

: ; " "

; % % J ,K!

-; "-; 3 =% : % % < % %

3 % : % "

% 5 " 3 <

=% % 5 !

- ! % % =% : % ;

,-- % % % % !

. % " : % 4 "

% % % J , *K" =% ; 4

% 5 2 " 4 5 %

% ! - % %3 " 3 !& %

% 3 =% !

! &- ; , *!

" # ;# "

- . . 3 !" &'' S % % 3 !" &''

3 !" SA 3 !" S*; H H 3 !" &''

' - : 3 !" &'''8 33 !" &''

' - : 3 " S : 3 !" SV: %3 !" &'''S - : 3 !" &'''

' - : 3 !" &'' 3 !" &''&

" ## !!

/ 0

+ ,

'

27

! - ; ,--!

" # ;# "

/ 7 H3 !" &

/ +% H 3 !" &'''

/ ! % 3 !"

/ 3 !" &

/ ! + 3 !" &''

/ 0 T 3 !" #

- . . 2 : H 3 !" &''

- % 3 !"

% * 3H 3 !" #

% H 3 !" DCS. % 3 !" ST: 3 !" CS/ : 3 !" CS : 3 !" ST: 3 !" S % 3 !" DS %; 3 !"

+ , 3 !" S % 3 !" 'S % 3 !"

+ + 3 !"

1 3 !" #

1 3 !" '

2 ! T 3 !" S/: 3 !" #

2 ! /W 3 !"

/W1 %H 3 !" C

. % 3 !" S. 3 !" &S ;2 3 !" &S1 4 3 !" #S*; H H 3 !" &''

4 3 !" D ! U 3 !" &

3 !" S, : 3 !" &''

, H H 3 !" S1 % 3 !" &''

3 , ! - 33 !" 'S, % 3 !" B

' ! 3 !" '

' + 3 !" D

' ! / : 3 !" C

' % 3 !" '

' A :O33 !" &''

' % ;3 !" &S 3 !" &

' % 3 !"

: 3 !" S 3 " S T : %: 3 !" CS-4 3 !" #S 3 !"

S 3 !" &'''

28

1.3 Vibrio cholerae y el cólera

, % 4 % %

@ 4 % ! % % % =%

% % J ! !&K! , 3 % %

% " 3 I % 5 "

3 ; ! , % 5 " 3 4 % " 3

% % % %3 % 5 !

' %(# & % % 4 % !

2 8 , % 3 4 % " 3 4

% " 3 % 4 < %

% !

% 8 / " !

, % 5 % 4 % "

=% % 5 " 3 5

:% ! - "

" ; 5 3 5

=% 4 3 5 % !

;#) " ; " "

&4<

- 4 %

C F

-3 4

F

/ F

. CF * %

F #F

29

% % 5 " =%

% 3 % "

=% !

*

- 5 : % !

- B 1 U : 5 % 5 %

< - ! , %

%4 " =% 5 ! - % U : %

% ; 5 % 3 % 4 : !

, U : %4 % " % %

I 4 H " =% : ; : % =%

5 % I : : ! - #" :

1 U : 3 % % 3 % "

H % 5% % 4 %

=% % 5 ! 5 % % 5

% ; A " 3 =% %3

: " 3 % " 5 % 4 ! <

=% : : ! 5 =%

% :% =% %< " =%

:% !

- % " % =% ;

=% " 3 % % 5 5 /

J, K J % 3 !" BK! &'' %

: " " / 3/ C "

@ 5 ! %4 ;" % %

/ 8 ( 3% ! " 3 % %

8 7 " / O A H < ! - %

@ / E / C " % % 3 %

% 3 I ! % =% "

" % / E / C =% %; I

% 4 % " % @ JU 3 !"

30

% 4 "

% " % % " =% %

% 4 % ! : =%

% : =% ; % % 3 % ;

% " " 3 % J. O 3A%="

BS %=% 3 !" K! - : 3 %

/ E / C ! " =% 5 4 % %

; % :% "

" % 3 % I % 5 JU 3 !"

#K!

' %(# * 4 !

J 5 3 5 < 2 3

! J D K" 8 3% " 3:

% S 3.8 4 : % % K!

, % 44 3 % 5 :

% 8 " =% 4

% S3 " =% : % ! "

31

" 34 , =% @ 4 % J % "

% 3 K" 3% ; 5 !

, % % I J.*K 3 % 5

J ! !BK! - I % % % % "

3 &" 3 # % % ! * % %

5 4 /! , % % %

5 + % " % %

5 % ! , 5 5I

" =% % 3 4 ; "

% 4 5 J * K

J K! - % 4 % 3 % %;

!

' %(# 2- % % 3 5 I J.*K!

! " #

" # $

%

$ & '(

&

$

32

- : @ :% " % =% %

I 4 " @ " 4

J44 % 4 K! * : % =%

" 5 2 N " % 5 % 4

5 ! - % 4 "

% % " 5 % 3

5 " =% : % @ 5

J. O " K!

. 3% % " <% % 5

% =% JA 3 !" &'''K" :

=% % <! - %

: 4 =% 5 " =% .*"

=% % ; 5 *. J I

% % K 3 % % * I1" % % I 5

.* 3 *. JA 3 !" K! - :

3 " 7 J 3 K " =% =%

: ; 5 5 !

- 5 4 /5=% I " %

5 .*LX" " H " =% % ;

JT 3 !" K! - %

% " 5 5> ?3 5 1 &! - 5

% " " I J 4 /K"

5 J " " 63 K" 3 % =% %

< 4 5 J, K! " %

=% I

5 " < , J; % % I K %

% 3 J 3 : I K ;

% % % 5 =% ! , 5 1 & %3

5 J K" 5 J /K 3 % 5 J 3K .*LX! " : 4 =%

I % 4 % 5 4 /!

- 5 *. " @ 5 .*LX" 3 % 4

; 5 ! , =%

33

=% 5 ( 7X JU 3

!" K!

, : 5 % =% % I % 4

% % %

% 3 :% " =% 5 .*LX 3( 7X"

% 5 ; 44 %

:% J ! !#K! : =% I %

/ 3/ C " % % % 4 % 5 .*LX!

-% % % " % =%

% : ! * % % 5

5 ( 7X ( 7" =% %3 *.

5 5 .*LX! 5

5 5 5 % % % :% "

: ! " % @ 4 %

" 3 %: " " 5 .*LX =%

=% % " *. ! - =%

5 =% I " 3 5 "

; 5 " % 5 3 % 5 .*! - %

: 3 " % @ 4 I "

% % J %=% 3 !" K!

, % 5 : 4 I

" I 1*L" % %

% %3 % 5 .*LX! - I

" =% % 5 @ % J 1 "

&'''K! - % I " 3 @ =%

=% <% 5 !

* : % 5

5 < " %

5 I J.*K 3 < % I %

: % J A K! - : % %

4 % 5 " =% :

4 % " 3 =% % 44

34

' %(# 4 % % 4 5

/ 3

/ = /

#>(!"! # " !

#$;% 9?

! $ (# !

= " ;#) "

+ # # "

! @ $ ! " !% A

)(! ! $ + #:( )

" ! B #) " ! "

C% "

#$;% - ?

) # !

9?

D

CE

E D

- ?

D

35

"

: =% 5 " " 3

% 5 %3 I 5 3% 5 : %

:% ! < 5 % =%

J . " :3 : I K =% % % 4 %

% " ;@ 3 I ! , U & %

5 # . " 5 - . . ' . " 3

: BC . %

J 1 " &'''K! - @ 4 . %

% " 3 I % % % 5 "

=% % % 4 %

% =% !

, 5 ; " @ =% % :

5 4 % ! % =%

4 % "

3 5 :%

% 5 " 5 %

% " % % !

* &

'

/

- 5 % % =% : % :

! A 5 " %3 =% 5 % 2 "

: I % '!''' N " % % % 5

:% : " J 3% 3

!" K! -I =% : .: " 7 3 +

" < A 5 " + 3 J. O "

K! % % : 5 : % "

7 3 : J ! ! K" %

=% % !

- ; % %

% " : % 3 45 ! : %3 =%

% " =% % =%

36

' %(# 6 % 5 5 % !

- : =% %

! , 3 % % 4 " % =%

% : 5 % I 3 4 J % I

&' K" % % 5 : %

% !

, 5 % :

3E 45 ! , % 4 % :% :

@ < =%

! : =% 5 ' 4 %

" 4 ; % % 5 " % ; 5 A

5 " % 'B _{! - <}

A 5 % !

* % % 5 =% % : 3 "

; " ; % % " 3

I " =% =% ! , 4 % 5

% 3 " #F

5 4 " @ # 3 F % : 5 % " 3

=% " 3 % 'F" % 5 4 " % "

3 : H : 4 " %3 %

37

. 5 " % 5 =% 3 !

- 3 % % 5 : 5 "

% : 5 %3 % " 5 4 =%

3 % ! 5 4 % 5 "

5 ! %

" %3 % ; 5 I "

" 3 % ; !

% 4 " 5 % 5 % 4 !

* :

=% =% 4 % 5 !

- % 4 5 "

5 % " % 5 : "

< % 5 5 " 3 % 5 3 4 5

=% % % % !

- @ 4 % 5 4 5 "

4 % " 3 =% % 5 %3

J K! " DC % % 5

1 7 " =% I @ 4 <

4 % 5 5 ! - % " 4

4 % ! - " 3 %

% " % 4 3 "

% % I J T.KS3 % J.( 'C A 1K"

=% 3% % : =%

% % .*" % % % %

% ! " % 4 % : % 5

5 % J% N K 3

% E E ! " 4 % 5

@ % 4 5 !

* *

/

, ;5 < ; $: O" %

38

%< % 5 " %

% ; % ! . % <" O 5

5 5 3 5 % 4 5 3

!

-I % : % 5

5 % ! =% : L7L" 5

% % ! " D

5 % " 3 : % D

% J Y 8 D &CS&Y 8 & # SCY 8 #& # S

BY 8 C D S #Y 8 S Y 8 &CS DY

8 % K J H " BK! , =% 3 I % %

/ ( " % ; =% %<

B !

A " : !

" ;5 7 J7 . K "

5 " % D' 5 P " 3

, " I : - 6 ! - /

% ! " + : : 4 ,

% " % 5 % %

-J H " BK!

' %(# 7 -4 % 5 @ 5 3

/ N #' 3 J % 8 / "

&'' K!

3;#

) # "

) )

C )

F

)

#

"

"

(#B

# G

" ") # !"

#

G

;

!!

)

39

- % " % % % " 3 % % N

: % % !

5 @ 5 =% ! " %

3 4 " " %

! , 8 P "

3 % 3 . ! - "

" % =% I %

! % N &''' / % CD!'D

5 3B! ' % JT-1 &'' K J* !CK" P =% 5%

< 3 J DF K!

! * . 5 3 /

% N &''' J % 8 / " &'' K!

H >"IJ# " " /( # " H >"IJ# " " /( # "

3;# ) #

B D # D

%H D B . # J& K '

%% !'& - % &D

. @ &C & - 4 C J K &

. C!& D +% &

. & A % # C

1 ! . B! # B I # '

< % ! & C& 2 % &

+: C!CC DB @ CB

+% # D C - 6 B JB K '

U ! #D D ( ;% B B

, C # '

& !' C ! C ! * K 2K

O &!C #

3 ' "

; =% D! BD &#C B!CC'

2 & C .: ! CB

2 &!D BC A U &

1% !&C# 7 C! 'D

D!B # C 7 CB# C

% ! D 7 H #C& B

O ; B $ 5 CB JC& K '

* CC &C &B

6 !# # 'D / C '

1 @ 6 * ; B! CD # & C

V &!& C # % ' '

V O ! D# , H & '

! 8 L*& 2 6 K ! &26 &*&

> (#

% J K ' & J& K '

+% B J K ' 1 6 CC JCC K '

7 : C''

- C!B#& &' ! *4 K

! * 747 &6 !)( ! *7 K7 2 LK8

40

- - N " N D' ;5 5

5 " =% V ; " " ( 3 % J D KS+ J D#KS

3 J D K! - 5 =%

3 % &'' 3 C'' ! % " 5

!

, ' : % % 4 % : 5 "

% % 4 % I =% @ % %

4 ! &" 5 7 3

:" % % =% % % / 3 /

: ! - % 4 " =% 5 / C "

5 4 3 ;5 5

% / ! - % =% % % / !

% % " : =% / C

%3 / % ! " 4

=% % ! , / C % " =%

/ ! - J, K / C JC" I , K" ;@

=% , / " ,

! % / C 4 " =%

3 < /! * " : % =%

% % % =% % 4 % / C 5 % /

% ! =% =% 5 2 I 5 " % ;5 =%

/ J H3 !" #S 4 3 !" #K!

% 5 I 4 &" % 5 % :

=% B" % % 4 / % ! ;5 % / C

. % ! - 5 . % % % 4 / C "

% % D J %=% 3 !" &'''K!

: % " / C % " I

/ " 4 : !

* : % % % 3 ; 5

.*LX / C ! =% J & CK

.*LX % 1 " =% / C %

J DK .*LX % ! , 3

41

7 N ; 5

.*LX =% % " .*LX J %3 !" &'''K!

, 5 % / C &" % 5

% C" % % =% % N B 3

#" 3 % 3 5 % N 3 D"

43

- < 4 < % %

3 4 ! "

; % % J ,--K % <% :

" 3 " ; %

% % J , *K ; " " 5

% / C " 5 % 4

,-- % !

" < % % @

" 3 < 4 % 8

! ,-- I

% " % % 5

'D " 4 3 %

!

&! % % 5 3 %

4 5 =%

!

C! - % % 5 & % / C

% % : % " ; %

45

3.1 Material y métodos

*

.

- % ,-- : ; % 'D "

% '' 3D 5 !

-% % I 3 I % 3

" =% % 4 % " " 3

=% !

, % 1! J ! 3

" % " 6 4 K" +! ! 2 J2 7 %

.: Z - " . % " 7 K" ! ! 1! .: O :%3 J , 3"

3" 6 4 3 3 " 6 K 3 ! * J,

3 " % . 5 " 6 4

2 3 " , " @K!

- < %3 D 5 " % J.-.* # B" .-.*

# " .-.* #&" .-.* ##" .-.* # " .-.* # K % % >. 5

- N .% 4 * ?J: 8EEOOO!%4! E K 3 % J *.. B'C#K

> *3 .% % . ?J: 8EEOOO! ! K!

, % % 3 :

46 ! * % ; % ,--! M $ % # ;#

# %#( I

I # '(

#% % %#J; ' N "!) # " C

* C# &C DD 2 / E / C ! % DD 4

& * CB & DD 2 / E / C ! % DD 4

C * #&BD D 2 / E / C ! % D 4

B * '&B D 2 / E / C ! % D 4

# * &C&# D 2 / E / C ! % D 4

* &&# D 2 / E / C ! % D 4

D ++ ' 2 2. 2. 2.

* D' # & 2 / E / C ! % & 4

* B DCC & 2 / E / C ! % & 4

' * D C 2 / E / C ! % C 4

.* 'DC & 2 / E / C 1 & 4

& .* ' CB & 2 / E / C 1 & 4

C .* &'' & 2 / E / C ! % & 4

B ++ & 2 2. 2. 2.

# + C' ' 2 / E / C / ' 4

+ C ' 2 / E / C / ' 4

D + CC ' 2 / E / C < 5 ' 4

+ CB ' 2 / E / C < 5 ' 4

+ C# ' 2 / E / C < 5 ' 4

&' + C ' 2 / E / C < 5 ' 4

& + CD ' 2 / E / C < 5 ' 4

&& + C ' 2 / E / C < 5 ' 4

&C .*D ' C / % ! ! % C 4[

&B .* # C / % ! ! % C 4[

&# * 'D ' / % ! ! % ' 4

& ++ BB 2 2. 2. 2.

&D * &'D C& D / % ! ! % D 4

& .*&#' / % ! ! % 4

& .*D'& B / % ! 1 B 4[

C' * B#D D / ( ! % D 4

C .*D B B / % ! ! % B 4[

C& .* 1 7& & / % ! 1 & 4[

CC .* . 7 & / % ! ! % & 4[

CB I & 2 / E / C A I 2. 4[

C# I & 2 / E / C A I 2. 4

C I CB 2 / E / C A I 2. 4

CD I #D 2 / E / C A I 2. 4

C I # 2 / E / C A I 2. 4

47

M

$ % # ;#

# %#( I

I # '(

#% % %#J; ' N "!) # " C

B' *' /B . 7 C 4[

B ./C / C A 7 &E C 4[

B& ./B'D / C A 7 &E C 4[

BC ./B B /# 7 C 4

BB ./B D / % ! / O . 7 C 4[

B# ./ D' / % ! / O 7 C 4

B +&B / C . 7 &E C 4[

BD DEC / % ! --66 2. 2.

B CE / % ! --66 2. 2.

B 2*CC' / C . 7 &E C 4[

#' ./B'& / C A 7 &E C 4[

# ./B B / C A 7 &E C 4[

#& 2* B& / C . 7 &E C 4[

#C / / C A 7 &E C 4[

#B &'C' A 2 / E / C --66 2. 2.

## 2*C& / C . 7 &E C 4[

# &# D& 2 / E / C 2. 2. 2.

#D ,/ / % ! . : C 4[

# / ' / C . 7 &E C 4[

# /& / C . 7 &E C 4[

' ./B' / C A 7 &E C 4[

(/ / C . 7 &E C 4[

& /& / C A 7 &E C 4[

C ./B'B 2* # / C A 7 &E C 4[

B /C' / C . 7 &E C 4[

# ./B D / % ! A 7 C 2.

C E& 2 / E / C --66 2. 2.

D # ECD / ( * ; 2. 2.

ED / ( --66 2. 2.

./B'C / C A 7 &E C 4[

D' &'D E& 2 / E / C 2. 2. 2.

D C E / % ! --66 2. 2.

D& -LCC& / ( . I 2. 4[

DC 2 BC & / % ! . 2. 2. 4[

DB C& / C . 7 &E C 4[

D# CB 2 / E / C 2. 2. 2.

D DE / % ! EEUU 2. 2.

DD -LBB# / ( . I 2. 4[

D 2 & / % ! . 7 2. 4[

D #CEC / C . 7 &E C 4[

48

M

$ % # ;#

# %#( I

I # '(

#%

% %#J;

' N

"!)

# " C

./C 2* B / C . 7 &E C 4[

& C EC 2 / E / C --66 2. 2.

C CE& / % ! --66 2. 2.

B CE#' 2 / E / C --66 2. 2.

# 2 /C / C . 7 &E C 4[

./B / % ! A 7 C 2.

D 2* B / C . 7 &E C 4[

2 /C ' / C . 7 &E C 4[

/ / C . 7 &E C 4[

' ./B # / C A 7 &E C 4[

/ ' B / C . 7 &E C 4[

& 2* C / C . 7 &E C 4[

C 1074-78 / ( --66 2. 2.

B BO4 / C A 7 &E C 4[

# ./B / C A 7 &E C 4[

,(. ' 'C / % ! 7 . @ 4[

D ,(. ' / % ! / O . @ 4[

,(. & 'CBB / % ! 7 . @ & 4[

,(. & '#CB / % ! A H < . @ & 4[

'' ,(. C ''&B / % ! / O . @ C 4[

' .-.* # B / ( / O A 1 6 B 4[

'& .-.* # / ( 7 . 7 B 4[

'C .-.* #& / % ! . 2. 2. 4[

'B .-.* ## 2 / E / C % : 2.

'# .-.* # 2 / E / C % : 2.

' .-.* # 2 / E / C % : 2.

'D *.. B'C# / ( / O . 1 6 2. 4[

2 8 ! % % % " 32. !

- % % % % 5 % ;

% @ % 5 % 3 J ! C! K" %

49

' %(# * % 3 %

,--!

' %(# * & / % !

' %(# * * % % ; % !

% : % % " %3

=% =% % % " % % " 3 % !

7

--66 I

@ :

(

1 6

/ C

2 / E / C / % !

/ ( 2

/

50

*

&

5

/

, % % % 8

* & % #O

- % 5 5 : % ; ; 4 %

5 % ! % 5 4 % J/I

1#&K #'' % ! - A % 5 D"&! ; % 4

& ). % &' % !

2 & & ) $ E

- % 5 J ' * \ - * \ '"# 2 " A " K % ;5

I % % !

. 5 8

% 5 8 * '"# &

% 5 &8 - * '"# '"&

% ! ''

- ; ; % 4 & ). % &' !

2 '"'C

4 " & % 8 % * '"# J '" * J: I K

% S %H CC#&K 3 - * '"# J "

% S - & K! , %

; % ; 5 " 3 5 : '' %

!

, % 5 % ;5 % 4 " 3 % N 5'"'C

2 J 5 β % 5 S 2 C K"

% '"# % 5 ! 5 A

% 5 " =% " 3" % " <% 5 % % 5 2 /A

51

* & * !( $ #!) I " #!) !*K<

- % 5 % ;5 5 !

. 5 8

+- & "&

2 2W '"

% ! ''

5 J +-" :

D C'& '&K 3 J2 2W " : D C'B ' K"

% ; % 3 5 % 5I ! ;

% % 4 ] I % =%

=% ! : ;5 ; 4

% =% % %3 %;!

, % 5 % 5 % ; =% % 4

% ! 6 4 ; " 5 % ; : 4 %

% ! , % 5 % 5 %;3 % % B ). :

%% !

* & 2 ) " #"I= !

: % ; * EA. 3 A

J C! ! K" % 5 ;% =% N

% 4 % J C! !&!#K" 3

; J C! ! &K!

* J*

J: I K S %H CC#&K 3 ; % 4 ]

I % ! 6 4 ; % 5 A

% 5 % " 3 <% 5 % % 5 A. '" 2 A =% ! @ "

5 % : 4 % ! * %

52

! * &6 3 5 * EA. 3 A!

) " ) " $

* EA. '" &# A " #" * %

* EA. '"B A " B "# * % 5

* EA. '" A " " * %

% 5 ;% _{* EA. '"& A " &B"& * %}

* EA. '"'& A D"' &"B * %

* EA. '"& A " &B"& * % *

* EA. '"# A D" '" * %

* & 4 !( $ @(! # ) ; !

- % 5 % ;5 % =% 4

! - " % 4 " 3%

=% % 4 =%

" 3 ;% % =% %

% % 3 %

!

. 5 8

+

* EA. '"& A " &

;% ! '"'#F I! #

5 ; 3 5 * EA. '"& A " J C! !&!BK

% % 3 " 3 N % ;%

53 * & 6 #"I%! KAL/

- % 5 % ;5 5 " %

! - % =%

"# 3& 5 % !

. 5 8

C C4

* J: I K C"' #"

+ B"B D&"'

% ! ''' ! '''

A "C \ "D

5 ; % 4 % J 3 K %

4 % % 3 % 4 ; % " %

: 4 % ! : A % 5 =% :

"C 3 "D! . 4 % =% 5 % 4

% 4 !

* & 7 ) $ ;"; = 7AK

- % 5 % ;5 ; % ;

J C! ! &K! " % 4 % 5

2 &A /B '"& J& "B 5 % S %H D B&K 3

% 5 & 2 A& /B '"& JC "& 5 % S

B DDK!

. 5 8

% 5 8 2 &A /B'"& C'"#

% 5 &8 2 A& /B'"& "#

% ! ''

A D"'

; % 4 C'"# % 5 2 &A /B'"& 3 "#

% 5 2 A& /B '"& " 3 % ; 5 : '' %

54

: =% A % 5 % D"'! @ "

5 ;5 % 4 & ). % &' % 3 45

B ). : %% !

* & 8 !( $ " % !"

- % 5 % ;5 4 %

J C! ! BK! % % % ' ''

% 5 " 5 " % # C' % % !

. 5 8

+ ' &'

: % #' '

% ! #''

*

* /

-, % 4 % ; ,-- % % 8

C! !C!

5

* * % # "(!; E # E !"+ # " 0 1

6 ; 4 3 5 3

5 % 4 % J 'K!

4

=% 4 3 " 3

: 5 !

% 5

4 5 " % % % : 5

N ! % % 5 % % 3

! , =% % : 4

55

. 5 8

#

#

-I 4 % #

. 5 '

* % 5 '

4 #

. 5 C

&'

. % 5 '

.

;% '"'B

;% '"'B

B

% '''

A " I!

- ; % 4 !

* * & % # # + G 0 1

- * J &''K : % ; % 4 4

3 5 5 % 5 I

% ; % ! ; % % 4

5 % 4 !

. 5 8

* #

< #

. % 5 #

#

% '''

A D"C

56 * * * % #/(P!!#E=

- % 4 J : % C K % ;5

5 I ! - 3 ;5

; % / J C! ! K!

-3

U 3 % J % 3 !" K!

. 5 8

D"#

5 % 5 B"'

5 "#

#"'

% '''

A D"B

- ; & ). % # % !

C! !C!&

=%

* * & %( ! !

- % J.% B CD BK % ;5

=% % 5 % % 4 !

-=% % ; =% %

% !

. 5 8

'

. % 5 #

% '''

A J <% % 5 2 /A 2K

57 * * & & ! # + G 0 1

- * J.% B C &'K % ;5 =% 4

% 4 ! ; % % 4 =% % %

! - : % ; 4 5

5 % J

C! !B! K!

. 5 8

D

< C

. % 5 #

+ % &"#

&"#

% '''

A D"C

- ; & ). % &' % !

* * & * ! # G ) ! E - % " # "Q ( #0/ E- 1

% 4 ; 5 % ( H % J.%

B CD K! - 3 % ;5 5 " ( % ! "

% / J C! ! K!

. 5 8

D

+ % #

#

% ! '''

A "

- ; & ). % &' % !

5 4 %

% ! 5 A % 5 % =% : " !

% %35 % ;5 # " 3 ;5 % 4 & ).

58

*

2

-, % 4 8

C! !B! .

4 5

%

4 5 : % ; * J C! !C! !&K

% ! % % 3 % 5 C' ).

% &B :" % 4 %4 % ! %

% 4 =% 4 5 % % I "

5 % C' !

C! !B!& .

4 5

5

% 4 5 ; %4

* J B! !C!&!&K % &' F " =% @ !

5 % % % 4

I ! 5% * J C! !C! !&K" % 5

C' ). % &B : 3 %4 % % ! . 3% U

% 5 5 % % % # !

% : ;5 ; 3 5 # % "

\ B' ).!

. 5 % ; '' 8

* '

+ &'

; % 4 & ). % &' % .

*

4

, % %4 \ B' ). 3 % % 5

;5 & =% 8 * J C! !C!&!&K 3 % J

59

% '' µ % ' " 3

% 5 C# )." 5 % 4 " % &B :! % "

;" 5 8 * J C! !C! !&K 3

*. J C! !C! ! K" 3 % % C# ). % &B :!

5=% 5 % % % 4 % " 4 % ; %

" 3 % *. 5

" =%

! 5 ; % 5 + 3 % I ! 6 4 ;

% 5 % " 5 %

* % < ! " 5

% % * % * " % 5

C# ). % &B :" 3 % %4 % "

C' !

*

6

'

: % / 8 ( J

K 3% ! ! , %

5 3 % % / " % %

% =% % !

! * * . ( 3% ! % /

!

" !" # %#( #(

A 5 J: K [

( H % [

A % 5 J: K [

I [

, 5 8

7( %H < J ( K ( % %H < J% ! K

[

[

60

2 % /

% ; % ! " 35 4 ;

" =% %3@ ,--!

; % % 8

* 6 = )$!"" N ) >" # #

% 4 * J C! !C! !&K % #F 4E4

J# '' * " %IK!

5 * " ; % 4 & ). % &' % !

; ; 5 " 5 % N % B# ).!

6 4 ; ; % * " N 5 4 %

< % %< "

" ; 3 5 !

- =% =% =% %

" 3 % % C# ). % &B : 5 % % ! ,

: =% : %

: 5 " 3 " % 4 ! % ;

; " =% : !

* 6 & - % "E # "Q ( #

;5 % ( H % % ; % 4 1 (+

J C! !C!&!CK! % # 1 ( % 4

% ; " 3 % && ). % B :! , 5

% 5 J " &"C % K 45 N

4 J % 5 K! . 5 % "

N 5: 5I B'F J % 5 K!

. 5 4 8

− % 5 8 α F % J α ''

% S %H D'BB&K!

− % 5 8 A 5I B'F JB' : 5I ''

61

; % N 5 % % C 4

% 5 3 % 5 ! - 4 " % % % "

4 <! ; 3 4

" % ;5' 4 3%

4 % !

* 6 * " ! ! !) C

, % I ;5 @

U 3 % J % 3 !" K! %

3 % 5 J C! !&! K! %< % 5

% 5 3 5 % %G A J

C! !C! !CK ; 5 % ! % # ' =%

5 % " 5 J I

C''6" %I #B#&&K % % ; !

% C# ). % &B :" 3 ;5 %

: : 5 =% %<

" I % !

, : : 5 4

; " =% % 5 3 3 %

5 " "

J K" 5 ; !

! * 27 5 : : 5 I !

: J K

5 . 5

"" #) " !

62

*

7

/

- ,--" I %

% 4 % % ! I "

% 4 3 % :

% % 5 I ' ! %4 %

5 % ; !

% 4 % % 4 5 3 =% "

; % % % 8 I

% % ; % ; '' * J

C! !C!&!&K" % C# ). 5 % &B :! % "

; % 5JD!#'' " # " ).K % %

! 6 4 ; % " 5 3 45

4 % 5 1 ^ J C! !&! K! % 5 "

3 % 5 5 *- 2

J C! !&!&K 3 5 % % \ &' ).!

% " % ;5 5 5 C

! \ &' ). % & &B : 3 % N %

C ). % # ' ! , 4 =% % 5 % 5=%

: % % ! % % JB'!''' "

&# " ).K % " =% " 3

I =% % % !

-5 % =% % % %

63

' %(# * 2 - =% =% % % 5 I

!

-/ 9

* C#). &B :

5 % 4

D!#'' ). &'

'

- % 5 1 ^

B!#'' #

% 5 *- 2 5 \&').

9

/3

* !"

% ! $ H " % ! $

E&KM *6M

64

*

8

/

4 5 I

% % ;5 , O 33 ! J # K

@ 4 5 !

-< " &' &'' µ E ! * % "

% %4 5 " ; % 4

5 !

*

L

, % ; % % 4

% ; " % % % 5 ;

! - N % I&' 3 "# "

% % # 5&' % @ % ; !

! * 4 . 5 % J =%

5 K!

(# @ K< (# @ 8<

"# "#

% 5 E

C'F % &' & "B & "&

* 5 * EA. '" A " C' B'"' C' B'"'

% ' C" B "

% 5 'F C''µ C''µ C''µ C''µ

*- - 'µ 'µ 'µ 'µ

- % " &

% N 8 J > 4 ?K =% " 3

% @ 5 % 5 % % " 3

J > H ?K" % ; I " =% 5 %

3 5 ! , 5

% I "

65

! * 6 . 5 % J =%

5 K!

(# @ K< I8<

(# @ 8< I4<

"# "#

% 5 E

C'F %

&' & &&"B

* 5 * EA. '"B A " C' B& C' B&"'

% ' B B "

% 5 'F C 'µ C 'µ C 'µ C 'µ

!

" # #

*- - 'µ 'µ 'µ 'µ

% 5 E

C'F % #"C D"# C"C B"D

* 5 * EA. '" &# A " '"' B"' '"' B"'

% B"D " "D "B

% 5 'F B'µ B'µ B'µ B'µ

! #

*- - &'µ &' µ &'µ &'µ

" ; % 4

% 5 E " 5 * EA. 3 % " 3 N 5

5 4 J & &C K % ' ; % 5 % " 3

=% % % ; 5 ! % " % 5

5 4 % # " % %< I

% 5 " =% I % : ; 5 !

6 4 ; ; " N 5 % 5

% 5 J K 'F J % 5 ' S : D C

' K =% 5 ; 5 " 3 *- - J2"2"2W"2W"

S : D C & ' K =% @ ;

5 ! 3 3% % " % 5 5 =%

4 =% @ ! % C' ' "

% ; " %< ; 5 "

66

, % ; 4 @ ; 3 ! - %

'F F" 3 %

5 % 'F 5 F 3 F 5#F !

! * 7* 3 % ; @ ; % !

(# @

!% ! @) "

'F

: J AK

- ; J -K

7 : J7 AK

+ % : J+ K

+ : C : J+ K

: J K

, % J, K

% J 6 K

! (

F _{: J , K}

'F E F _- %_{J- *K} : J +K

% J +7K

! " (

F E#F L_{. &"C}:_{I J.&C/K}JL AK

2% 5 J2 K

4 C! !

*

K

'

- 4 ;5 % =% 1/*- 2 77 I . J 7/

1 K 3 % % O % 3- '' J : : - : K! 45

% ; 5 * '" A

67

<5 =% # 5 &' %

% " 3 " 5 "# " =% %

4 % I % " ''µ 5 #'µ 4 !

; ;5 % I

" =% # µ 3 'µ! %

N % 'F % % 5 3 ;% J C! !&!#K!

* ;5 < 5 JD ).K 4

% ; 5 ; ! "

% % =% % 5 " %

% ; ; 5 " % 3 4

=% % % ; !

, ; % % 4 < "

5 E =% 4 3 ;

3 ! ; " =% %

% " =% ,-- ; % !

! * 8. ; 3 % 5 !

! # ; # "" # (# $ ! # ; # ""!#% (# $

7 C# C' ( < '' ( C'

7 &' C'

7 B'

( < B' ' (

% 5

B \ : B\ :

% % 5 % <

&' % C' % " 3 % % B' :

" =% % % B :!

-% 5 " % 4 < JB' ' (K % "

68

; % %

! * 4 %

4 ; !

*

. /

: ; # ; 4 5 4

5 !

! * L. 5 ; % ; % ,--!

!" @) M ) # ! @) # B (#

+ % /L7 /1- 6.*

! ! !CD

! ! !B'

! ! !B&

! ! !BB

! ! !B

! ! !&'B

!&! ! &

!B! ! !B!C! ! !&! : - ; 7 : % : + % : L :

+ : C

: 2

:

:

. &"C I

A -7 A + + L A + , .&C/ Grupo

TRANSFERASAS &!B!&! 2% 5 2

Grupo HIDROLASAS

C! ! !

C!B! ! -, % - * , Grupo

LIASAS B!&! !& % 6

Grupo

ISOMERASAS #!C! ! % +7

- . 6 5 7 =% 3 % J76 K

; ; 3 % @ -. J. 5 - ; K

69

, ; ) ! "N # % "" " # "N # % " 3;() # "

; I U !

, @) )J! I 5 I 5

%4 3% 2 !

, ; %!( " E6E; "; "N # % " 3 6E; "; %!(

"N # % " @ 4 I 4 !

, ; ; "; %!( " ) # " 3%! # ! N E*E; "; "N # % "

; 4 I 4 : I 5 !

; % 4 % 4 - 3 : !

+ % [ 2 % +2 A [ A[

+ : C [ 2 [ _{[ "C +2 A [ A}[

+ % [ 2 % −δ + 2 A [ A[

% [ 2 % # +2 A [ A[

, [ 2 [ _{/I [ 2 A [ A}[

7 [ 2 α % [ ./&[ 2 A [ A[

% [ A&/

70

, ; ! "N # % " 3 " # "N # % "

5 " % ; ; 2 !

, ; !E&A*E C% " %

J ! <! 5 " ; " " " " !K! , 4

I 5 %

! - ; ; I 5 :

& : I % 5 " % =% % % % !

, ; !( ) " % I =%

; 5 I !

% =% ; ! ; ! ; "

% % 5 " 3 ; ! *

: 5 % " % =% ; 4

% !

, ; " # " " ; : 5 % 4

% !

, ; C "N # % " 4 5

J K" 4 % : I I !

OH

COO

-C

O OH

OH

: & : I % 5

, [ 2 [_{[ A}

&/ %4 +2 A [ A[

, [ 2 [_{[ A}

&/ /I +2 A [ A[

71

, ; ( !$" ; "; #!" 4 5 % % 5

J @ % % ;@ K!

*

&

, 4 ; % 5

% ; ! , % N

3 ! J K" I

; &"C I " =% 5 5 1 % 3 ! J&'' K!

% " 5 5 !

-% % % 5 5 =% E % E 3 =% =%

; 4 3 % =% 4 % 5

; : % ! 5 % 4

; 4 ; !

* ; % % CD )." 5 % 4 3

% " I ; " &"C I

J.&C/K 3 % 5 J2 K" =% ; %

" 5 3 %;!

- " 5 4 %

% =% % 5 5 : ! %

% % : % 4 5 4

J C! ! BK!

- 3 " %3 5 "("#

; % % ) $ " @) J2 2 K" /

J % ; K 3 / J ; ; K! % 5 %

% 5 2 2 A 5 2 2 A" % 5 =%

=% @ ! - 5 % 5

** =% % % ;% % =%

% 4 ; !

72

, % 2 3 2 F J α

% 2 '' % " : : &D S β

% 2 '' % "

2 C K! , % 5 F J % ; ''

% S &#K 3 ** "&#F J "&# ; ;

'' % S & & K! * % B ). 3

%;!

% 5 5 ;

% ,-- 4 ; % ! ,

5 % !

* & / ! "N # % " 0/ =1

, J HC K &''

* EA. '"# A D" C'

% '

2 .2 '" '

**

'"#

2 &

, 5 5 * EA. C! !&!B!

, % 5 2 .2 '" 4 B" % 5 J B #&K

% !

* & & @) )J! 0/ 1

, J HC K #'

* EA. '"& A "' ''

2 .2 '" #

**

'"#

2

, 5 5 * EA. C! !&!B!

, % 5 2 .2 '" 4 B" % 5 J B #&K

73 * & * " # "N # % " 0 =1

", 7 5 J 7 &#&K '

* EA. '"& A "' ''

.&'" &

**

'"#

2

, 5 5 * EA. C! !&!B!

, % 5 .& '" 4 &'"C % J %H

C' K % !

* & 2 6E;";%!( "N # % " 06 1

P % 5 " J D &DK B'

* EA. '"& A "' '

.&'" &'

**

'"#

2

, 5 5 * EA. C! !&!B!

, % 5 .& '" 4 &'"C % J %H

C' K % !

* & 4 !( " E6E;"; "N # % " 0 6 1

% : J + D&#'K ''

* EA. '"# A D" '

% '

**

'"#

2

74

* & 6 ! # ! N E*E;"; "N # % " E 0 1

% " J 'D#&K ''

J &#CK ' 6

2 &A /B! D A&/ #'

* EA. '"& A "' '

**

'"#

2 &

, 5 5 * EA. C! !&!B!

* & 7 9 "N # % " 09 =1

A I J A CDDK #'

* EA. '"& A "' ''

**

'"#

2 &

, 5 5 * EA. C! !&!B!

* & 8 ! "N # % " 0 1

, J H ''DK ''

* 5 A D"' ''

**

'"#

2 &

, 5 5 C! !&!D!

* & L " # "N # % " 0 1

, J B&'CBK ''

* 5 A D"' ''

**

'"#

2 &

75 * & K !E&A*E C% " 0 &* 1

J %H # 'K C''

* EA. '"'& A D"' ''

, 5 5 * EA. C! !&!B!

; 5 % 4 3 %

% 5 5 ! ; 5 %

% CD )." 5 % 4 3 % ! - 5 =% ; ;

% % " : & : I % 5 " =%

4 % ; % ! .% ; 4

" % " 3 % 5

5 =% ! % < % 3 I

=% 4 I 5 4 < ! - 5 %

1 % 3 ! J&'' K!

2 % 5 =% % J : &

: I % 5 K % % " 3 % : ; !

* & ( !$" ;";#!" 0 1

7 J 7 B &#K B'

L I J L B D#K C''µ

* 5 A D"' '

**

, 5 5 C! !&!D!

, 5 ;5 ; #'' 3&# 5 * EA. '"& A "' 3

45 % 5 ! .% ;5 % % 5 " N 5 ;

5 " : ;5 3 5 ! " 5 %

5 % 4 ; !

- 5 ; %;" 5 3 % ! 2

76 * & & " # " "0 1

α J F K J 2 #'#K "#

* 5 A D"' ''

% 11 J '#''K &#

, 5 5 C! !&!D!

* & * ( ) " 0 1

, % β : J , 'CD K C'

UA& /B'" A #"# ''

.&'"

HU J D&#CK C'

, % 5 UA& /B'" A #"# ; C" J %H

'&C'K % " 3 <% A #"# % % 5 2 /A

'" 2!

, % 5 .& '" 4 &'"C % J %H

C' K % !

: ; 5 % 4 3

% 5 % : 5 !

* & 2 '() # " 0' /1

P % J B CCK #'

: J D#' K &C"#µ

* EA. '"& A "' ''

**

'"#

2 &

77 * & 4 ' ";%!( " ) # " 0 1

% J C &DK &'

+ % : J + D K 6

2 J 2 C K &

* EA. '"& A "' ''

.&'" '"

**

'"#

, 5 5 * EA. C! !&!B!

, % 5 .& '" 4 &'"C % J %H

C' K % !

*

*

, % =% % " 3 =%

=% % 5 ; 4 %

!

, 4 % ;

; " 3 @

% 5 5 !

* : % 5 @ =%

" % % " %

" " ! - % 4 ;

'" % =% % 4

% % % ; 5 !

*

2

-

-, 4 4

" % < % 4 5 %

78

, % % % % % 5 5

% 4 % # C' ! % % 5 J C! !&! K % ; %

% 5 J+ 3 % " 7/ 1 'D#&K!

" :@ 3% %

: < % !

-% =-% % %< =% % =% =%

4 % % ! , % ;

4 % 3 % " % <%

@ @ ! - % " "

% : !

*

4

/

- % 4 ,-- =% " =%

4 % ; % =%

" % % ; %

=% % % % % ! "

% % !

. % 5

; 3 ! - % @ " =%

% 5 % ; " %3 %

)(! ! (" ! "

3 ; % % ! ,

5 % " ! # ; # "

J-* K! " =% =% 4 %

; ; " " =% % % "

% % -*!

- %

I =%

79

*

6

3

- ,-- 5

% % %

!

* 6 '# ( " !" !!" ( !"! 0 1

, % % ;

J-* K ! % =% ; !

, % % %

I ." " % % .! , %

% . % %

=% % 4 5 =% !

* 6 & B #" % #! ("0 1

, 4 % 3 % % %

2 J D K" % ; % 5 % =% N !

=% -* " ; 5 % "

J K % % .!

I

1

)

1

(

−

⋅

−

=

n

n

p

h

j

. % % ." @ -* " 3

1

−

n

n

5 =% % =% N !

* 6 * B #" % ) 0=1

, 4 . 3 " 3

80

m

h

H

₌

@ J 3 : 3 !" CK!

* 6 2 B #" % > 0 1

, 4 % %

−

=

j j

g

G

₁

j

g

!" CK!

* 6 4 " $ 0

I

. ,-- :

% 5 -*

I ! . 4 ." % I

" 4 4 ; % 5

J

V

−

⋅

=

j j j

E

h

h

V

(

1

)

% % =% I @ 5 J =%

K!

- 4 5 J

V

V

% 5 % =%

I 5 "

I

=% =% % % !

1

−

=

E O

A

_V

81

(

I

V

≠

V

=% % ; ! - " I %

5 % "

; =% % !

" 5 5 %

" =% 5 % % % !

- " % % % 4

I

4 "

V

=

V

! - " 5 ; % 4

5 =% % =% 5

; !

O

V

V

=% '!''' % ; % 5

I " % =% 5

! % 4 5 " F Jα_ '"'' K %4 % 4 =%

: ; : 5 % JA/K 5 ; ! ≤ '"''

: ; : 5 % JA/K 3 : 5 4 =%

! - " ` '"'' % : 5 % !

* 6 6 "#( $ # %# ) "

, -* : % 5

=% I ! . : % ;

% ; 6 + J6 O : + % :

: 4 K" 3 Aa,7 J " CK : %

4 % ; I % !

%5 5

82 * 6 7 "#( $ ! %# ) "

* %3 % %

5 % I

! " ;5 % 2

J D&K 3 Aa,7 % ;

2 : % $ !

, 5 % > ?!

, % % ; % ''

N =% % !

% 4 % 2 " 3 % 2 : %

$ %3 ! % 5

'' % . % =%

Aa,7 ! - %

83

3.2 Resultados

* &

; % J C! ! K % &

/ " % % J.-.* # B" .-.* # " DEC " DE K" =% :

; 4 " % ; !

, % C % " ;

% / % 5 " %

!

! * K 1 % % =% !

= )$!""

" %# # #

- % "E # "Q ( #

" ! !) C

.*D ' C [ [ % !

.* # C [ [ % !

* 'D ' [ [ % !

* &'D C& D [ [ % !

.*&#' [ [ % !

.*D'& B [ [ % !

* B#D D [ (

.*D B B [ [ % !

.* 1 7& & [ [ % !

.* . 7 & [ [ % !

./B D [ [ % !

ED [ (

,(. ' 'C [ [ % !

,(. & 'CBB [ [ % !

,(. ' [ [ % !

,(. & '#CB [ [ % !

,(. C ''&B [ [ % !

# !"

.-.* # B [ (

.-.* # [ (

DEC [ [ % !

84

* & &

9

%4 I % %

% C! !D! ;

% ; 5 % 5

I =% 5 4 ;

,--!

- % 5 %

% 5 *- 2 % % '' "

=% %4 % % ! - 4

4 '"C'' '" ''!

- % % 5 % 5

I % , O 3 J C! ! K! 5

5 ; @

4 " 5 5 E % % !

: ; I 4 C E ! , 4

# 3& E I " % % !

! * . 5 I " @ , O 3"

% !

M $ %

# ;#

)%I)! # >

! M

$ % # ;#

)%I)! # >

!

* C# &C DD & "D + C ' &B"C

& * CB & DD & "B D + CC ' "

C * #&BD D & "# + CB ' & "

B * '&B D &&" + C# ' C"C

# * &C&# D &'"& &' + C ' "

* &&# D C" & + CD ' "

D ++ ' " && + C ' C"'

* D' # & #"C &C .*D ' C &"B

* B DCC & " &B .* # C "

' * D C & " &# * 'D ' C"

.* 'DC & & " & ++ BB "&

& .* ' CB & " &D * &'D C& D "

C .* &'' & #"C & .*&#' B"

B ++ & " & .*D'& B "&

85

M _{# ;#}$ % )%I)! #_! > M _{# ;#}$ % )%I)! #_! >

C .*D B B &&" D' &'D E& "D

C& .* 1 7& & B" D C E #"C

CC .* . 7 & " D& -LCC& "'

CB L & &&"& DC 2 BC & &"

C# L & " DB C& & "#

C L CB &C" D# CB &&"

CD L #D &B" D DE '"C

C L # &"D DD -LBB# "

C L # D" D 2 & "

B' *' #"# D #CEC &"B

B ./C & " ' &# DC &&"

B& ./B'D D"' ./C 2* B "D

BC ./B B " & C EC "

BB ./B D "& C CE& &"D

B# ./ D' "# B CE#' &"&

B +&B &C" # 2 /C "&

BD DEC &" ./B D"

B CE &" D 2* B #"

B 2*CC' " 2 /C ' "D

#' ./B'& D" / &"B

# ./B B "C ' ./B # C"

#& 2* B& B" / ' B #"

#C / "B & 2* C "&

#B &'C' A #"B C 'DB D "

## 2*C& &#" B /B &#"&

# &# D& " # ./B &"

#D ,/ &'"C ,(. ' 'C "#

# / ' &"D D ,(. ' "

# /& "B ,(. & 'CBB '"B

' ./B' &D" ,(. & '#CB B"

(/ '" '' ,(. C ''&B '"

& /& "B ' .-.* # B #"

C ./B'B 2* # B"# '& .-.* # "

B /C' D" 'C .-.* #& '"C

# ./B D B" 'B .-.* ## '"C

C E& #" '# .-.* # C"

D # ECD " ' .-.* # "D

ED B"C 'D *.. B'C# "&

86

* & *

'

$

"

- % ; % % ;5 % 'D

" ; 4 ; # ; 5 " =%

-* ! - % %

; " -* =% % !

* N @ =% -*!

! * & % ; !

!!" ! ("

" M

" ;#

" + 7 A , + A 6 , - - * .&C/ 2 L A +7 +

* C# &C DD B C C & D & C B & & * CB & DD B C & C & B & C B * '&B D B C & C & B & C B C * #&BD D B C & & # & & C B B * &C&# D C C & # & & C & # * &&# D C # B & # & & C B & C

++ ' C C & & # & & C # C # D * D'# & C C & # & # & & & C C

C * B DCC & B C C & C & D & C B * 'D ' B C C & C & D & C B ./B B B C C & C & D & C B * D C C C & B & # C & C B C ' .* 'DC & C C & & # C & C B C C

.* ' CB & C C & B ' # & & C B & # & .* &'' & C B & C B C & # & & C C C ++ & C C # & # C & C & B + C' ' C & & C C C C B & C C C C

# + C ' B C C & D C & C B

+ CC ' C C & # & & C & # D + CB ' C C & & # & & C &

+ C# ' B C & C & C & C B + C ' B & C & D C & C B B &' + CD ' C C & # & # C & C C & + C ' & C & B & C & C C B && .*D ' C C C & C & D C B B

87

!!" ! ("

" M

"

;#

" + 7 A , + A 6 , - - * .&C/ 2 L A +7 +

&B ++ BB B & C & D & C B &# & * &'D C& D B C & & C & B & C B ,(. & 'CBB B C & & C & B & C B & .*&#' C C & C & D C B B C &D .*D'& B C & & C & C & C B B

& * B#D D C C B # C & C C #

& .*D B B B C & & C & D & C B C' .* 1 7& & B C C & C & C B C C .* . 7 & C C & & B & C & C B C& L & C & B # & & C & # CC L & C C & # & & & C

CB L CB B C C & D & C & #

C# L #D B C & C & & & C B

C L # C C & # # C & C C

CD L # B C C & C & & & C C C *' B & & C & B & C B C ./C B C & # & # C & C & # B' ./B'D C C & B & # C & & C C B ./B D B & C & B C & C B B B& ./ D' C B & C & & C B C #

BC +&B C & C & & C B C

BB .-.*# B C & & D & & C C B &

B# .-.*# & & D & C B B

B .-.* #& C & & D & & C & C B BD .-.* ## B C & & D & & C & C # B B .-.* # C C & C & & & C B B B .-.* # C & C & C & & C B B #' DEC B C & & C & & & C B

# CE C C & C & & C B

#& 2*CC' B C & & C & & & C # # #C & ./B'& C C & C & & C B B /C' C C & C & & C B B #B ./B B C & C & C & & C B C ## 2* B& C C & B & & C & C B

# / C C & C & & C B

#D *.. B'C# C & & C & & & C ' B # &'C' A C & C & C C & C B # # 2*C& C C & C & & C B B

' & &# D& C & & C & & C # B ./B' C & & C & & C # B

88

!!" ! ("

" M

"

;#

" + 7 A , + A 6 , - - * .&C/ 2 L A +7 +

& / ' B C & C & C C B

C /& C B & C & & C B B

B (/ B C C & C & & C ' B

# /& B C & & C C B B

./B'B C & C & B ' # &

D ./B D C C & C & & C # B CE' E'& B & C & # C B # ECD B & & & C & C C B C D' ED C B & & & & # & D ./B'C B C & & C & C C B B D& &'D E& C & & & B & C & & C C DC C E B & & C & C & ' C # & DB -LCC& B C C & C C B & C B ' D# 2 BC & C C & # & B & & C C ' D C& B C & & C & C & C B DD CB B & & C C C B & C & B &

D DE C C & & C & C & B

D -LBB# C B & & & C B B

' 2 & # C C & B & B & & C ' # ' #CEC C B & B & & & C ' B ' & &# DC B C & C & C C B B B C ./C C & & C & & C B C B C EC C C & B & D & & C B # CE& C & & B & C & & C B CE#' C C & C C C B B & & C ' B D 2 /C C & & C C C C B & ' C ' '

./B C & & C C C B & & C & C 2* B C & & C & D ' & C # & ' & 2 /C ' C C & C & C C B

/B C C & C & C C B

/ C C & C & D & & C C & ./B # C & & C & & & C B C / ' B C & & C & C & C ' B B 2* C C C & C & & & C B

# 'DB D C B & C C & C B C

./B C & C & C C B

89

, J-* K &" " &#" #C" '" ' 3 D %

! * -* " I -*

=% % ! , & -* 5 %4 % @ !

- % % 4 =%

% % -*" % % 3E " % 3

!

! * * % =%

% % !

M " ;#

" # %#( I '(

#%

% %#J;

& & * CB & DD 2 / E / C * '&B D 2 / E / C

C * B DCC & 2 / E / C

* 'D ' / % !

./B B 2 / E / C 7

&# & * &'D C& D / % !

,(. & 'CBB / % ! . @

#C & ./B'& / C 7

/C' / C . 7

' & &# D& 2 / E / C

./B' / C 7

' & 2 /C ' / C . 7

/B / C 7

D & ,(. ' 'C / % ! . @

,(. ' / % ! . @

* & 2

-* % % 5 " 3 @ % 5

&" ; : 3 " 3 D" ;

% " % " I : 3 %

90

! * 2 ( ,-- <%

% !

! * 4 % 5 D& # % !

!!" ("

I 2) E %

+

7 A B B

, & &

+ # #

A C C

6 D D

' C B

, D D

- # #

- * & &

.&C/ ' C B

2 C C

L A ' D

+7 ' #

+ ' D

45% @ =% N % <% -*

J DK" % # # ; ; J " .&C/" L A" +7" +K!

2) _ 'D

2) _ #

2)-* _

2) _ D&

2) E % _ & J , " - *K

2) I E % _ D J 6 " , " L A" +K

91

- % % N

% ; % " 4 4

; 3 % % !

' %(# * 4 4 ; : J AK

' %(# * 6 4 ; J -K

' %(# * 7 4 ; : J7 AK

92

' %(# * L 4 ; % : J+ K

' %(# * K 4 ; : C : J+ K

' %(# * 4 ; I : JL AK

93

' %(# * * 4 ; : J K

' %(# * 2 4 ; &"C I J.&C/K

' %(# * 4 4 ; % 5 J2 K

% % =% 4 3 =% % %

N ; % 5 J C! ! &! K!

94

' %(# * 7 4 ; % J, K

' %(# * 8 4 ; % J 6 K

' %(# * L 4 ; % J +7K

* & 4

-- % % 4 4 % 3

4 " ; 5 5 -*

! , 4 %3 3 " : "

% % 5 -*

95

! * 6 4 % 3 4 %

% !

B #" % #! ("0N1 ("

-* J K . J 'DK

+ '" '"

7 A '"B ' '"C B

, '"'D '"'DC

+ '"# # '"#

A '"# '"##B

6 '" ' '"#

'"CBD '"C&#

, '" C& '" CC

- '"# B '"##

- * '"B '"B

.&C/ '"## '"##B

2 '"'D '"'DC

L A '"##& '"#BC

+7 '"#BC '"# B

+ '"# # '"##C

B #" % ) 0=1

-* J K . J 'DK

'"#'' '"B

* % % 5 -* " 4

% 5 '"'D 4 J , 32 K 3'" C&

% 4 J, K J* C! K! * %5 4 JAK"

; 4 4 % "

3 % '"#''!

- C! D 4 % 4