Influencia del tiempo de fermentación en la producción de dextranos por leuconostoc mesenteroides en biorreactores tanque aireado y agitado”
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(2) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. UI M. IC. A. A DIOS. Q. Por ser tú quien me diste el don de la. BI O. vida y ser la luz que guía mi camino.. Y. Por ser amigo sincero y constante. AC I. A. dándome amor, sabiduría y paciencia. FA R. M. cada día.. DE. Por fortalecer en mí la vocación de. TE CA. servir al prójimo y sentir el dolor ajeno como propio, gracias porque. BL. IO. escuchaste mis oraciones y respondiste,. BI. haciendo realidad mi más grande anhelo:. SER BACHILLER EN FARMACIA. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Graciela. Montoya. mi. A José Montoya, mi abuelo,. madre, de quien aprendí que siempre. quien me apoyó siempre sin dudar. De. hay que luchar por lo que se quiere. quien aprendí que la vida es dura, pero. lograr, y quien me enseñó que todo. se debe continuar.... hay que hacerlo con amor.. A TI ABUELITO JOSE. A. A. UI M. IC. A TI MADRE. BI O. Q. A mis hijos Santiago, Joaquín, y mi hija Astrid que con sus sonrisas y energía me. A. Y. dan las fuerzas para seguir adelante y poder. AC I. formarlos en el bienestar, en la bondad y la. FA R. M. felicidad, y a mi esposo Mario por su amor y apoyo incondicional.. BI. BL. IO. TE CA. DE. A USTEDES MI FAMILIA. A mis hermanos Fernando y Frank, mi Tía Consuelo por apoyarme en todo momento, para que continúen en el mismo camino en el que nos iniciaron. CONTINUEN ASI.... Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. ii Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Al Grupo de Investigación del Laboratorio de Biominería de la Universidad de Antofagasta-Chile; por proporcionar a la presente investigación, financiamiento en. IC. A. reactivos, muestras, equipamiento, la bibliografía y su valiosa ayuda en la consultoría. UI M. técnica con lo que respecta al protocolo de producción, extracción y evaluación del. BI. BL. IO. TE CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Q. biopolímero dextranos.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. iii Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEL ASESOR. El que suscribe, Dr. José Gilberto Gavidia Valencia, profesor asesor, certifica que el presente trabajo de investigación se ha ejecutado en conveniencia con su. IC. A. respectivo proyecto y siguiendo las orientaciones brindadas a la tesista. Sobre el informe,. UI M. éste ha sido redactado, revisado y acoge a las observaciones y respectivas orientaciones. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Q. brindadas.. _____________________________. Dr. José Gilberto Gavidia Valencia. DE. Dpto. de Bioquímica. Facultad de Farmacia y Bioquímica. BI. BL. IO. TE CA. Universidad Nacional de Trujillo. iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEL COASESOR. El que suscribe, Dr. Mario Esparza, profesor coasesor, certifica que el presente trabajo de investigación se ha ejecutado en conveniencia con su respectivo. AC I. A. Y. BI O. Q. UI M. revisado y acoge a las observaciones y s5ugerencias alcanzadas.. IC. A. proyecto y con las orientaciones brindadas a la tesista. Sobre el informe, éste ha sido. FA R. M. _____________________________. Dr. Mario Rodrigo Esparza Mantilla Dpto. de Biotecnología. Facultad de Ciencias del Mar y Recursos Biológicos. BI. BL. IO. TE CA. DE. Universidad de Antofagasta. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACION. Señores miembros del jurado:. A. En cumplimiento con las disposiciones vigentes del reglamento interno referentes a. IC. grados y títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de. UI M. Trujillo, dispongo a vuestra consideración y criterio el presente informe de tesis I titulado:. BI O. Q. “INFLUENCIA DEL TIEMPO DE FERMENTACIÓN EN LA PRODUCCIÓN DE DEXTRANOS POR LEUCONOSTOC MESENTEROIDES EN BIORREACTORES DE. A. Y. TANQUE AIREADO Y AGITADO”, con la finalidad de obtener el grado de Bachiller en. M. AC I. Farmacia y Bioquímica.. FA R. Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por algunos errores u omisiones. Trujillo, Febrero del 2017.. BL. IO. TE CA. DE. incurridos en su elaboración, me someto a vuestro dictamen.. BI. Milagros Elizabeth Pinchi Montoya.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI O. Q. UI M. IC. Dra. GONZALES POSITO, GLADYS SILVIA (PRESIDENTE). A. MIEMBROS DEL JURADO. FA R. M. AC I. A. Y. Dr. GAVIDIA VALENCIA, JOSE GILBERTO (MIEMBRO). BI. BL. IO. TE CA. DE. Mg. ARO DIAZ, RUBEN JESUS (MIEMBRO). vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. Se investigó la influencia del tiempo de fermentación en la producción de dextranos por Leuconostoc mesenteroides en biorreactores de tanque aireado y agitado, para lo cual se reactivó la cepa de L. mesenteroides en medio ETS-01, e incubó a 28 °C, pH: 7,0 por 24. IC. A. horas. Luego se adicionó 65 mL de este inoculó (109cel/mL), en 585 mL de medio de. UI M. producción para dextranos en cada uno de siete biorreactores tipo tanque aireado y agitado. Q. (1,0 L) con 0,65 L de volumen de trabajo y se inició el bioproceso a 22 + 1 °C; 100 g/L de. BI O. sacarosa; pH: 7,0; 0,5 vvm y 600 RPM. Luego se detuvo el bioproceso en cada uno de los. Y. biorreactores a las 5, 10, 15, 20, 30, 40 y 50 horas de fermentación respectivamente y de. AC I. A. cada biorreactor se colectó 100 mL de caldo de fermentación y precipitó con 2,5 mL de. M. KCl 2% y aforo a 200 mL con etanol (96°), después de 30 minutos, cada muestra fue. FA R. centrifugada a 16 800 g por 15 minutos luego concentró y secó el dextrano a 40 °C por 4 horas y se determinó la producción para cada tiempo de fermentación encontrándose 3,86. DE. g/L de dextranos en 5 h; 8,43 g/L en 10 h; 13,94 g/L en 15 h; 18,18 g/L en 20 h; 22,05 g/L. TE CA. en 30 h; 23,18 g/L en 40 h y 24,63 g/L a las 50 h respectivamente; demostrándose que a medida que avanza el tiempo de fermentación, se incrementa la producción de dextranos. BI. BL. IO. por L. mesenteroides a partir sacarosa en biorreactores tipo tanque aireado y agitado.. Palabras Claves: biopolímero, dextranos, bacterias, biotecnología, sacarosa.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT. The influence of fermentation time in the production of dextrans by Leuconostoc mesenteroides in bioreactors aerated and agitated tank was investigated, to which L. mesenteroides strain was reactivated in ETS-01 medium, and incubated at 28 °C, pH 7,0 for. IC. A. 24 hours. Then added 65 mL of this inoculum (109cel/mL), 585 mL in production medium. UI M. for dextrans in each of seven tank bioreactors aerated and agitated (1,0 L) with 0,65 L. Q. workload and began the bioprocess at 22 + 1 °C; 100 g/L sucrose; pH: 7,0; 0.5 vvm and. BI O. 600 RPM. The bioprocess in each of the bioreactors at 5, 10, 15, 20, 30, 40 and 50 hours of. Y. fermentation respectively was then stopped, and each bioreactor 100 mL of fermentation. AC I. A. broth was collected and precipitated with 2,5 mL of KCl 2 % and to carry to 200 mL whit. M. ethanol (96°), after 30 minutes, each sample was centrifuged at 16 800 g for 15 minutes. FA R. then concentrated and dried dextran at 40 °C for 4 hours and the production was determined for each time finding fermentation 3,86 g/L in 5 h dextrans; 8,43 g/L in 10 h; 13,94 g/L in. DE. 15 h; 18,18 g/L in 20 h; 22,05 g/L in 30 h; 23,18 g/L at 40 h and 24,63 g/L at 50 h. TE CA. respectively; demonstrating that as fermentation time progresses, the production of dextrans. BL. IO. by L. mesenteroides increases from sucrose in bioreactors aerated and agitated tank.. BI. Keys words: biopolimer, dextrans, bacteria, biotechnology, sucrose.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. INDICE. DEDICATORIA. i iii. DEL ASESOR. iv. DEL COASESOR. v. IC. A. AGRADECIMIENTO. UI M. PRESENTACION. Q. MIEMBROS DEL JURADO. BI O. RESUMEN. Y. ABSTRACT. AC I. A. INDICE INTRODUCCION. II.. MATERIAL Y METODOS. III.. RESULTADOS. IV.. DISCUSION. V.. CONCLUSIONES.. VI.. REFERENCIAS BILIOGRAFICAS. FA R. vii viii ix x 1 6 12. DE. 17. TE CA. 21 22. IO. 26. BI. BL. ANEXOS. M. I.. vi. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN. Los polisacáridos se derivan de una amplia variedad de fuentes: plantas (por ejemplo: goma de guar, pectina, celulosa, almidón), algas (por ejemplo: carragenina,. IC. A. alginato, agar), bacterias (por ejemplo: xantano, gelano) y hongos 1.. UI M. El dextrano es un biopolímero con varias aplicaciones conocidas y es producido. BI O. Q. por una gran variedad de bacterias a partir del ácido láctico. Estos exopolisacáridos (EPS) bacterianos tienen diversas ventajas sobre otros polisacáridos producidos por las. A. Y. plantas, algas marinas y los animales debido a sus propiedades de biodegradabilidad y. AC I. biocompatibilidad 2. El dextrano producido por diferentes cepas también varía en sus. FA R. 2, 3. DE. características físicas y químicas. M. enlaces glicosídicos, el grado y/o el tipo de ramificación, masa molecular,. TE CA. A pesar de la dominación mundial de polisacáridos en el mercado de plantas y algas, los expopolisacáridos (EPS) producidos por microorganismos han atraído un. IO. interés creciente en las industrias de alimentos y productos no alimentarios desde que. BI. BL. fue aislada la cepa de L. mesenteroides a partir del vino 4.. El dextrano de L. mesenteroides es uno de los primeros biopolímeros producidos a una escala industrial, y es aplicado ampliamente en los alimentos, así como en las industrias no alimentarias, por ejemplo, como un modificador de la textura en los alimentos, como un agente de bioseparación (geles Sephadex®), o como un sustituto de plasma, transportador de hierro o anticoagulante en farmacia, etc 5.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Las bacterias del ácido láctico (BAL) producen EPS y suelen ser aplicadas directamente a los productos fermentados para modificar sus propiedades en los aspectos de la textura, sensación en la boca, percepción del gusto, reología y estabilidad Los efectos beneficiosos de BAL para la salud humana se han atribuido en parte a las. EPS,. por. ejemplo,. antitumoral,. antiulceroso,. antiviral,. homopolisacáridos,. compuestos. pueden. por. solo. un. UI M. BAL se. clasificar. Q. producidos por. BI O. EPS. IC. inmunomodulador y antioxidante 6.. Los. antimutagenico,. A. 4.. tipo. de. en dos. grupos:. monosacárido,. y. A. Y. heteropolisacáridos, compuestas de unidades que consisten en dos o más monosacáridos. AC I. repetidos. Sobre la base de las unidades monoméricas, los homopolisacáridos pueden. M. ser agrupados en cuatro grupos: alfa-D-glucanos, beta-D-glucanos, fructanos (por. FA R. ejemplo: levanos, inulina) y otros, como poligalactano. 6, 7.. Dependiendo de los. DE. principales enlaces glicosídicos, los alfa-d-glucanos se pueden clasificar como: (i). TE CA. dextrano con alfa-(1→6), (ii) mutano con alfa-(1→3), (iii) alternano con alfa-(1→6) y. IO. alfa-(1→3), y (iv) reuterano con alfa-(1→6) y alfa-(1→4) 8, 9.. BL. Los dextranos, que se producen principalmente a partir de Leuconostoc,. BI. Lactobacillus, Streptococcus, y especies Weissella, difieren en el tipo de enlace glucosídico, el grado y tipo de ramificación, longitud de la cadena, distribución del peso molecular y conformación de la cadena polimérica. 10, 11 .. Estas variaciones están. influidas por cepas productoras, condiciones de cultivo y composición de los medios. Especies de Leuconostoc son los productores primarios de los dextranos que tienen una gran variedad de estructuras y propiedades fisicoquímicas. Por ejemplo, el dextrano 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. producido a partir de L. mesenteroides NRRL B-640 contiene residuos de D-glucosa en una cadena lineal con enlaces consecutivo alfa-(1→6) y exhibe un comportamiento típico pseudoplástico no newtoniano. 12 .. Un nuevo dextrano soluble en agua sintetizado. por L. citreum SK24.002 se compone principalmente de alfa-1,3 y alfa-1,6 unidades de 13 .. IC. A. D-glucopiranosa unidas con una relación de 4:5. UI M. Leuconostoc mesenteroides NRRL B-512F se utiliza para la producción comercial. BI O. Q. de dextrano soluble en agua que contiene predominantemente 95 % de enlaces lineales alfa-(1→6) y 5 % de enlaces ramificados alfa-(1→3). 14 .. Debido al bajo grado de. A. Y. antigenecidad y alto porcentaje de enlaces glicosídicos alfa (1→6), este dextrano se. AC I. utiliza para fines clínicos. La estructura del dextrano puede ser lineal o ramificada en. M. función de las cepas productoras. Se ha reportado que varias cepas pueden producir un. DE. FA R. número de tipos de dextrano con diferentes grados y tipos de ramificación 3.. TE CA. Entre diferentes dextranos, los producidos por L. mesenteroides NRRL B-512F y L. mesenteroides NRRL B-1299 han sido bien caracterizados y clasificados. El dextrano. IO. producido por L. mesenteroides B-512F es ampliamente utilizado como sustituto de. BL. plasma y sangre debido a la baja antigenicidad, alta solubilidad en agua y alta. BI. estabilidad biológica en la sangre humana. 15 .. Dextranos producidos por Leuconostoc. también se han aplicado en la industria de alimentos (por ejemplo, emulsionantes y espesantes) y en la industria química (tamiz molecular). 4, 16, 17.. La aplicación de los. dextranos se expande a los productos para los ojos y el cuidado de la piel por su excelente biocompatibilidad, propiedades hidratantes y la estabilidad, y para productos de panadería para mejorar la suavidad, textura de la miga y el volumen del pan. 18 .. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Según lo descrito anteriormente, los dextranos son polisacáridos comercialmente importantes, por lo que hay un volumen considerable de literatura orientada a estudios microbiológicos de las bacterias productoras de dextranos, el uso de medios óptimos de cultivo. 19 ,. a la estructura molecular del dextrano. 20 ,. así como a sus aplicaciones en. 21. obtuvieron goma xantana. IC. prima para la producción de gomas ya que Esparza y cols.,. A. distintas industrias, también se conoce que la sacarosa ha sido usada como materia. UI M. a partir de sacarosa comercial, pero no se han reportado en la literatura local. BI O. Q. investigaciones relacionadas con la producción de dextranos a partir de sacarosa comercial en biorreactores tanque aireado y agitado, más aún; no se han diseñado. A. Y. experiencias para evaluar la potencial producción de goma dextrana a diferentes. M. AC I. tiempos de fermentación.. FA R. Para producir el dextrano a nivel de laboratorio e industrial debe considerarse el. DE. uso de sustratos de menor costo y de mayor disponibilidad en el medio, como es el caso. TE CA. de la sacarosa comercial ampliamente disponible, por tanto, con lo antes sustentado; en. IO. el presente trabajo se investigó:. BL. ¿Cómo influye el tiempo de fermentación en la producción de dextranos por L.. BI. mesenteroides a partir de sacarosa en biorreactores tipo tanque aireado y agitado?. Para lo cual, se postuló que: La producción dextranos por L. mesenteroides a partir de sacarosa en biorreactores tipo tanque aireado y agitado es mayor a las 50 horas de fermentación.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se plantearon los siguientes sobjetivo: 1. Producir dextranos por Leuconostoc mesenteroides a partir de sacarosa, en biorreactores de tipo tanque aireado y agitado. 2. Controlar el pH, aireación (vvm), agitación y la espuma durante la producción de. A. dextranos.. IC. 3. Precipitar el medio de producción final con etanol comercial y KCl al 2% y extraer el. UI M. dextrano obtenido en esta operación.. BI O. Q. 4. Determinar la viscosidad, productividad y rendimiento final del medio de producción. BI. BL. IO. TE CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. de dextranos.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II. MATERIAL Y METODOS. 2.1 Material de estudio. 2.1.1 Material de Estudio. IC. A. 2.1.1.1 Muestra. UI M. Sacarosa comercial, azúcar blanca granulada Marca IANSA de. Q. distribución en Chile.. puro. correspondiente fue. a. la. y. Leuconostoc. la. purificada. en. investigaciones. previas realizadas en el Laboratorio de. M. AC I. aislada. cepa. mesenteroides;. A. cual. Y. Cultivo. BI O. 2.1.1.2 Material biológico. 2.1.2 Medios de Cultivo. FA R. Biominería en la Universidad de Antofagasta-Chile.. DE. Para el crecimiento y producción de inóculo: Medios ETS-0,5; ETS-1,0 y. TE CA. para la producción de dextranos: el MPD (Anexo).. BL. IO. 2.2 Métodos y técnicas. BI. 2.2.1. Reactivación de la cepa y preparación del inóculo Leuconostoc mesenteroides. Se extrajo una asada del cultivo puro e inoculó en caldo ETS-0,5; 30 ºC, pH 7,0 por 12 horas. Luego sembró por superficie en cuatro placas con agar ETS1,0 e incubó a 22 ºC, pH 7,0 por 12 horas. Después el inoculo celular bacteriano fue cosechado; agregando 3,0 ml de solución salina fisiológica estéril a cada placa.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Se homogeneizó la suspensión bacteriana con ayuda del asa bacteriológica y estandarizó la suspensión resultante obteniendo aproximadamente 109cel/ml por el método de recuento en cámara de Neubauer. 21 .. A. Para la preparación del inoculo, se sembró la suspensión de L. mesenteroides en. IC. medio ETS-1 e incubó a 28 ºC, pH 7,0 por 24 horas, luego se estandarizo hasta. BI O. Q. UI M. obtener aproximadamente 109cel/ml.. 2.2.2 Lavado, desinfección e irradiación ultravioleta de los biorreactores de. A. Y. tanque aireado y agitado.. AC I. Aproximadamente 12 horas antes del ensayo se procedió a lavar el. M. tanque, tapa y mangueras de cada uno de siete biorreactores, con detergente. FA R. comercial. Después dejó reposar por dos horas y luego enjuagó bien con agua. DE. potable a chorro hasta eliminar el detergente remanente, seguidamente se. TE CA. desinfectó cada parte del biorreactor sumergiéndolas en un depósito conteniendo lejía al 1,0% por dos horas. Luego eliminó la solución de lejía residual y colocó en. IO. el mismo depósito con agua potable a 80 ºC, tapó y dejó en reposo por 15 minutos.. BL. Luego se escurrió la solución acuosa de las diferentes partes de cada biorreactor y. BI. taponó con algodón los orificios de las mangueras del tanque y la tapa de jebe e inmediatamente se llevó cada parte a la cámara de irradiación UV con lámpara de 60 watts a una distancia de 10 cm, dejó irradiar por dos horas haciendo rotar las partes, cada media hora, para lograr una buena irradiación de las zonas que son menos accesibles a la irradiación como son turbina Rhuston y el eje 21.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.3 Ensamblaje y acondicionamiento de los biorreactores. Al finalizar la irradiación y en condiciones asépticas se procedió a ensamblar el sistema de agitación (turbina Rhuston, eje y motor) y el sistema de aireación (aireador circular, válvulas, trampa de aire y compresor de aire) y. A. aseguró de que todo el biorreactor esté listo parar iniciar el proceso. Luego. IC. distribuyó la ubicación de los biorreactores evitando hacer entrecruzamientos entre. UI M. las conexiones eléctricas y las mangueras de aireación, es decir cada biorreactor. BI O. Q. estuvo a una distancia mínima de 30 cm del otro contiguo, y logró un buen. A. Y. acondicionamiento del sistema 21.. AC I. 2.2.4 Producción de dextranos por Leuconostoc mesenteroides a partir de. M. sacarosa. FA R. Se agregó 585 ml del medio de producción para dextranos “MPD” a cada. DE. uno de siete biorreactores conteniendo igual concentración del azúcar (100 g/L);. TE CA. luego se agregó 65 ml de inóculo (10% del volumen total de producción), seguidamente se tapó herméticamente cada biorreactor y se inició el bioproceso a. IO. pH 7,0; temperatura ambiental, a 0,5 vvm de aireación estéril, con 600 RPM por 5,. BL. 10, 15, 20, 30, 40 y 50 horas. El diseño experimental fue realizado por duplicado,. BI. teniendo como variable independiente el tiempo (horas) y la variable dependiente la producción de dextranos (g/L)21 (Anexos).. 2.2.5 Monitoreo y control del bioproceso Cada 5 a 10 horas se realizó un monitoreo al pH, la espumación, turbidez del medio, RPM, viscosidad y el flujo de aire (vvm). La viscosidad del medio se 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. determinó con el viscosímetro rotacional digital, con disco rotatorio “R2”, control de eje Nº 7 a 100 RPM y 20 ºC al final de cada bioproceso.. 2.2.6 Operaciones unitarias aplicadas para la extracción y concentración del. A. dextrano Extracción de dextranos por precipitación alcohólica. IC. 2.2.6.1. UI M. Se colocó 100 ml del medio final de producción, correspondiente a cada. BI O. Q. uno de los siete biorreactores, en recipientes debidamente rotulados, en una probeta graduada de 250 ml, adicionó 2,5 ml de KCl al 2% y mezcló por. A. Y. inversión. Luego agregó etanol comercial 96º y aforó hasta 200 ml, se dejó. AC I. en reposo por una hora y extrajo el sedimento formado decantando la. M. solución sobrenadante a un vaso de precipitación de 250 ml y colectó el. FA R. dextrano en papel aluminio 21. Centrifugación. DE. 2.2.6.2. TE CA. Esta operación fue realizada cuando se tuvo la presencia de grumos en interfase durante la precipitación en las diferentes muestras, luego centrifugó. Destilación. BL. 2.2.6.3. 21 .. IO. a 16 500 g por 15 minutos. BI. Con el fin de recuperar el alcohol remanente, se destiló el líquido. decantado en el paso anterior, a temperatura constante de 78 ºC y reutilizó el alcohol obtenido (96º) en próximas reprecipitaciones. 21.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.6.4. Concentración del dextrano por secado. Se colocó el dextrano en la estufa a temperatura constante de 40 ºC por cuatro horas hasta evaporar el alcohol remanente y anotó la consistencia de 21 .. A. la goma antes y después del secado. IC. 2.2.7 Determinación de la producción y rendimiento aparente del bioproceso. UI M. El dextrano seco fue pesado en balanza analítica y anotó el peso obtenido. BI O. Q. a partir de 100 ml de medio evaluado, se multiplicó el dato por 10 y reportó la producción en g/L en cada uno de los siete biorreactores con sus. A. Y. respectivos tiempos de producción de dextranos (5, 10, 15, 20, 30, 40 y 50. AC I. horas). Luego, el dato obtenido, representó la producción del dextrano en. M. g/L. Finalmente se calculó el rendimiento aparente, asumiendo que el azúcar. FA R. (sacarosa) inicialmente ha sido consumido en 100% durante la producción. DE. del dextrano 21.. IO. Análisis estadístico. BL. 2.2.8. TE CA. Gramos del dextrano / litro de medio R = ---------------------------------------------------Gramos de azúcar consumida / L. BI. Para el analizar la producción de dextranos se aplicó el test estadístico de. Análisis de Varianza, y determinar las diferencias significativas existentes entre el tiempo de fermentación (horas) versus la producción de dextranos (g/L) por L. mesenteroides a partir de sacarosa en biorreactores aireados y. agitados. 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III. RESULTADOS. Tabla 1. Producción de dextranos por L. mesenteroides en biorreactores tipo tanque. UI M. IC. A. aireado y agitado a diferentes tiempos de fermentación.. Tiempo. *Producción (g/L). BI O. Q. (horas). A. Y. 5. AC I. 10. DE. 30. FA R. 20. M. 15. TE CA. 40. 8,43 13,94 18,18 22,05 23,18 24,63. IO. 50. 3,86. BL. *Los datos representan el promedio de dos ensayos realizados con los siguientes. BI. parámetros de producción: sacarosa 100g/L, 22 + 1°C; 0,5 vvm y 600 RPM.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Rendimiento aparente de la producción de dextranos por L. mesenteroides a diferentes tiempos de fermentación usando biorreactores tipo tanque. *Rendimiento. (horas). IC. Tiempo. UI M. A. aireado y agitado.. BI O. Q. aparente. 5. A. Y. 10. AC I. 15. 0,08 0,14 0,18 0,22 0,23. DE. 40. FA R. 30. M. 20. 0,04. 0,24. TE CA. 50. IO. *Se asumió que la sacarosa fue consumida al 100%.. BL. - Condiciones iniciales del bioproceso: sacarosa 100 g/L, 22 + 1°C; 0,5 vvm y 600. BI. RPM.. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3. Viscosidad de los caldos de fermentación a diferentes tiempos durante la producción de dextranos por L. mesenteroides en biorreactores tipo tanque aireado y agitado.. *Viscosidad. (horas). (cp). UI M. IC. A. Tiempo. 0. 850. BI O. Q. 5 10. A. Y. 15. AC I. 20. 1300 1350 1450 1450 1500 1600. DE. 50. FA R. 40. M. 30. 1150. TE CA. *Los datos representan el promedio de dos ensayos evaluados con los siguientes. BI. BL. IO. parámetros de producción: sacarosa 100 g/L, 22 + 1°C; 0,5 vvm y 600 RPM.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 30. 1800 1600. 25. A. 1400. Q. 15. 1000 800 600. A. Y. 10. AC I. 400 200. FA R. M. 5. 0 10. 15. 0 20. 30. 40. 50. DE. 5. Viscosidad (cp). UI M. IC. 1200. BI O. Producción(g/L). 20. TE CA. Tiempo de fermentación(Horas). BI. BL. IO. Figura 1: Cinética de la producción de dextranos (■) y viscosidad de los caldos de fermentación (●) de L. mesenteroides en biorreactores tipo tanque aireado y agitado a diferentes tiempos de fermentación.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 4: Cuadro del análisis de la varianza (SC tipo III) para la producción de dextranos por L. mesenteroides en biorreactores tipo tanque aireado y agitado a diferentes tiempos de fermentación.. IC. A. CM F p-valor 125.19 94.68 <0.0001 125.19 94.68 <0.0001 1.32. UI M. F.V. SC gl Modelo 751.15 6 Tiempos 751.15 6 Error 9.26 7 Total 760.41 13. M. AC I. A. Y. BI O. Q. Existen diferencias significativas entre los tiempos en la producción de dextranos (p-value <0.05).. DMS=2.71910. DE. Test: LSD Fisher Alfa=0.05 Error: 1.3223 gl: 7. FA R. Tabla 5: Comparación de los tiempos de bioproceso usando el LSD de Fisher.. BI. BL. IO. TE CA. Tiempos Medidas E.E. 5.00 3.86 2 0.81 A 10.00 8.43 2 0.81 B 15.00 13.94 2 0.81 C 20.00 18.18 2 0.81 D 30.00 22.05 2 0.81 E 40.00 23.18 2 0.81 E 50.00 24.63 2 0.81 E Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05). 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(27) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. F p-valor 20.05 0.0002 20.05 0.0002. IC. gl CM 7 112767.86 7 112767.86 5625.00. UI M. F.V. SC Modelo. 789375.00 Tiempos 789375.00 Error 45000.00 8 Total 834375.00 15. A. Tabla 6: Cuadro del análisis de la varianza (SC tipo III) para la viscosidad de los caldos de fermentaciona diferentes tiempos durante la producción de dextranos por L. mesenteroides en biorreactores tipo tanque aireado y agitado.. Y. BI O. Q. Hay diferencias significativas entre los tiempos en la viscosidad (p-value<0.05).. AC I. A. Tabla 7: Comparación de los tiempos de bioproceso usando el LSD de Fisher.. FA R. M. Test: LSD Fisher Alfa=0.05 DMS=172.95027 Error: 5625.0000 gl: 8. BI. BL. IO. TE CA. DE. Ensayos Medias n E.E. 0.00 850.00 2 53.03 A 5.00 1150.00 2 53.03 B 10.00 1300.00 2 53.03 B C 15.00 1350.00 2 53.03 C D 20.00 1450.00 2 53.03 C D E 30.00 1450.00 2 53.03 C D E 40.00 1500.00 2 53.03 D E 50.00 1600.00 2 53.03 E Medias con una letra común no son significativamente diferentes (p > 0.05). 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV. DISCUSION. En esta investigación se demostró que el tiempo de fermentación influye positivamente en la producción de dextranos por L. mesenteroides a partir de sacarosa en biorreactores tipo tanque aireado y agitado. Esto fue posible, mediante el desarrollo de un. IC. A. proceso de fermentación aséptico y empleando una fuente de carbono y energía (sacarosa. UI M. comercial) de bajo costo para producir un dextrano.. Q. En relación al por qué se usó la sacarosa y no otras fuentes de carbono (glucosa e. BI O. hidrolizado de almidón), esto se debió a un análisis de costos del sustrato, pues, la sacarosa. Y. es de bajo costo y tiene una gran disponibilidad en el medio local, con una pureza cercana. AC I. A. al 98%; sin embargo, la glucosa tiene altos costos y es menos disponible en nuestro medio.. M. Por otro lado, el hidrolizado del almidón es otra alternativa, pero también implicaría usos. FA R. de métodos (físicos, químicos y enzimáticos) para lograr su hidrólisis, lo cual demandaría una mayor inversión en el proceso. Resumiendo, se tiene que la sacarosa tiene una buena. DE. disponibilidad, bajo costo y una alta pureza para la producción de dextranos.. TE CA. Con la misma concentración de sacarosa (100 g/L, Tabla 1) se muestra un aumento proporcional de la producción de dextrano conforme avanza el tiempo de fermentación,. BL. IO. hasta obtener 24,63 g/L en 50 horas de bioproceso. Además, se encontró que existe. BI. diferencia significativa entre la producción de dextranos y el tiempo de fermentación. Con lo antes mencionado, se sustenta que los diferentes tiempos de fermentación influyen en la producción de dextrano producida por L. mesenteroides en biorreactores aireados y agitados. La máxima producción según el análisis de varianza y el test de LSD Fisher (Tabla 4 y 5) se obtiene a las 30 horas, esta no difiere respecto a los dextranos producidos a. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. los 40 y 50 horas. Para obtener dextranos podría recomendarse 30 horas. La menor obtención de dextranos se obtuvo en los tiempos 5 y 10 horas respectivamente. Los resultados reportados (Tabla 1) tienen una determinada producción de dextrano a tiempo específico de fermentación, esto se explica, por la fisiología de L. mesenteroides,. A. pues el comportamiento de ésta bacteria es diferente conforme avanza el tiempo de. IC. crecimiento celular, ya que no es lo mismo para la bacteria consumir y crecer en 10 h que. UI M. 50 h , en esta investigación sólo se tuvo el parámetro de concentración de dextrano por L.. BI O. Q. mesenteroides, basado en el consumo al 100% de sacarosa, esto se asumió, ya que las técnicas para evaluar sustrato residual como la sacarosa, son costosas, aún más no. A. Y. cuantifican exactamente una precisa cantidad consumida. Sólo estiman un porcentaje. Por. AC I. tanto, se hace útil el empleo de una técnica de bajo costo y que cuantifiquen cantidades. M. exactas de sustrato residual, obtenidos para cada concentración de sacarosa trabajada.. FA R. El rendimiento del bioproceso (Tabla 2), aumenta proporcionalmente a mayor. DE. tiempo de fermentación hasta las 50 h. Posiblemente se debe a que L. mesenteroides, no. TE CA. consume totalmente la sacarosa y quedan restos de este sustrato para continuar polimerizándola en dextranos. En relación al mayor rendimiento obtenido a las 50 h, con. IO. 100 g/L de sacarosa, se puede afirmar que, esto se correlaciona con el aumento de la. BL. viscosidad (Tabla 3, Figura 1). Este rendimiento sólo es válido para las concentraciones. BI. trabajadas en la presente investigación, pues, si se desearía realizar un escalamiento (scale up o scale down), éste dato, tendría ciertas variaciones, pues aún se tendría que evaluar otros parámetros de bioingeniería para afinar un verdadero escalamiento con el fin de reproducir los resultados obtenidos. La viscosidad de los medios al final del bioproceso (Tabla 3) fue diferente para cada tiempo de fermentación evaluado; así pues, la viscosidad obtenida es proporcionada por la 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. cantidad de dextrano producido y el aumento de biomasa celular bacteriana. También se demuestra que la reología no Newtoniana del caldo es una evidencia de la producción de biopolímero21. Además, la capacidad viscosificante del biopolímero se debería a la estructura ramificada de su molécula y su alto peso molecular21. Esta propiedad y. A. resultados son descritos en la Tabla 3, los cuales van de 850 – 1600 cps.. IC. Si se evalúa la producción, rendimiento y viscosidad del bioproceso en el presente. UI M. trabajo; se observa una directa correlación, la más cercana en la correlación entre la. BI O. Q. producción y el rendimiento, así como la producción con la viscosidad. En el caso del rendimiento y la viscosidad no se observa variación, así pues, a un tiempo mayor de. A. Y. producción se obtienen rendimientos mayores con viscosidades altas.. AC I. La máxima viscosidad se obtiene a las 40 horas del bioproceso, esto no difiere. M. significativamente de 50 horas. Aunque la viscosidad a las 40 horas tampoco difiere de 30 y. FA R. 20 horas, podría recomendarse 40 horas por obtener una mayor media respecto a 30 y 20. DE. horas. La menor viscosidad se obtiene en los tiempos 0 y 5 horas.. TE CA. Finalmente sumando las evidencias obtenidas en los resultados se demuestra que los diferentes tiempos de fermentación influyen en la producción de dextranos por L.. IO. mesenteroides, en biorreactores aireados y agitados. Además, el rendimiento del bioproceso. BL. es proporcional a la producción de dextrano, siendo 50h de fermentación la máxima. BI. producción de dextranos; así mismo, el comportamiento pseudoplástico de la viscosidad final de los medios de producción se debería a la cantidad, calidad y característica del dextrano, obteniéndose la mayor viscosidad en donde hay mayor cantidad de biopolímero, es decir que la viscosidad es proporcional a la concentración de dextrano, la cual se correlacionaría con la cantidad de sacarosa y el mayor tiempo de fermentación. Sin embargo, queda aún por evaluar rangos mayores de tiempo (50-100 h), con el fin de 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(31) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. determinar el comportamiento de la producción, pues con los datos obtenidos hasta 50 h de bioproceso se observa un aumento proporcional significativo de la producción hasta las 30 h, luego una diferencia no significativa de la misma hasta las 50 h, es por ello que se. BI. BL. IO. TE CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Q. UI M. IC. A. requiere investigar con el fin de evaluar hasta que rango hay producción de dextrano.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(32) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V. CONCLUSIONES. 1. La producción de dextranos en tanques aireados y agitados por L. mesenteroides a partir de sacarosa es directamente proporcional al tiempo de fermentación, es decir, conforme. IC. A. se incrementa el tiempo aumenta dicha producción hasta las 50 horas de fermentación.. UI M. 2. El rendimiento de la producción de dextranos por L. mesenteroides usando. Q. biorreactores tipo tanque aireado agitado, tiene una producción exponencial hasta las 30. BI O. horas de fermentación, después de la cual llega a una fase casi estacionaria.. Y. 3. La viscosidad de los caldos de fermentación de L. mesenteroides aumenta ligeramente. AC I. A. conforme transcurre el tiempo de fermentación siendo la máxima viscosidad a 40 horas. BI. BL. IO. TE CA. DE. FA R. M. de producción de dextranos en biorreactores tipo tanque aireado y agitado.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ANEXOS. Medio de cultivo para el crecimiento y producción de inoculo de L mesenteroides Extracto de levadura-Triptona-Sacarosa ETS cantidad g/L 0,50 0,25 0,50 0,01 0,005 1000 mL. BI O. Q. UI M. IC. A. Ingredientes Extracto de levadura Triptona K2HPO4 Tiamina Niacina Agua destilada. DE. FA R. M. AC I. A. Y. Para el: ETS-0,5: Agregar sacarosa comercial 0,5 g/L y Glucosa 10 g/L. ETS-1,0: Agregar sacarosa comercial 10 g/L y Glucosa 0,5 g/L. Para solidificar el medio agregar agar a razón de 16 g/L La sacarosa se esteriliza por separado y el pH inicial de medio se regula a 7,2 - 7,4. TE CA. MEDIO DE PRODUCCIÓN PARA DEXTRANOS para L. mesenteroides cantidad g/L 100 2,50 0,25 5,00 0,20 0,60 0,003 0,002 1,0 1000. BI. BL. IO. Ingredientes Sacarosa comercial Extracto de levadura Triptona K2HPO4 Sulfato de magnesio Sulfato de amonio Carbonato de calcio Óxido de Zinc Cloruro de sodio Agua destilada. La sacarosa se esteriliza por separado y el pH inicial de medio se regula a 7,2 - 7,3.. 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BL. IO. TE CA. DE. FA R. M. AC I. A. Y. BI O. Q. UI M. IC. A. Dimensiones y proporciones geométricas del biorreactor aireado y agitado para la producción de dextranos por L.mesenterodies usando sacarosa.. DT= (4 V/(3.1416 HD))1/3 J = DT/10 DA = DT/3 AP = DT/10 HB = 1.2XDA. BI. HT = DTxHD S = DT/50 DD = DAx2/3 HA = DT/12 HL = 4xVB/(3.1416xDT2). 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 4. Viscosidad de los caldos de fermentación a diferentes tiempos durante la producción de dextranos por L. mesenteroides en dos ensayos evaluados con los siguientes parámetros de producción: sacarosa 100g/L, 22+ 1°C 0,5 vvm y 600 RPM usando biorreactores tipo tanque aireado y agitado.. A. Viscosidad (cp) ensayo N° 2. 0. 900. 800. 5. 1200. 1100. 10. 1250. 1350. 1300. 15. 1400. 1300. 1350. 20. 1450. 30. 1500. A. Promedio. Q. UI M. IC. ensayo N° 1. Y. (horas). BI O. Tiempo. 850 1150. 1450. 1400. 1450. 1500. 1500. 1500. 1700. 1500. 1600. FA R. M. AC I. 1450. 40. BI. BL. IO. TE CA. DE. 50. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 8. Producción de dextranos por L. mesenteroides en dos ensayos realizados con sacarosa 100g/L, 22+ 1°C; 0,5 vvm y 600 RPM en biorreactores tipo tanque aireado y agitado a diferentes tiempos de fermentación.. Producción (g/L) ensayo N° 1. ensayo N° 2. Promedio. 5. 4,22. 3,50. 10. 9,47. 7,39. 15. 14,36. 13,52. 13,94. 20. 19,33. 17,03. 18,18. 30. 22,58. 40. 24,27. A. Y. Q. UI M. IC. A. (horas). BI O. Tiempo. 3,86 8,43. 22,05. 22,09. 23,18. 23,96. 24,63. FA R. M. AC I. 21,52. 25,30. BI. BL. IO. TE CA. DE. 50. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Versión Estudiantil. Figura 2: Homogeneidad de varianzas para la producción de dextranos por L. Versión Estudiantil Versión en Estudiantil Versión Estudiantil Versión Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil mesenteroides tanques aireados y Estudiantil agitados.. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. VersiónTítulo Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil n= 14 r=Estudiantil 0.965 (RED extranos) 1.77 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil 0.00 Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. 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Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión -0.89 Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. 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Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Y. Versión Estudiantil. BI O. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Q. Versión Estudiantil. M. AC I. A. Cumple con la homogeneidad de varianzas. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Cuantiles observados(REDextranos). Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. BI. 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Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil 0.89. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. TE CA. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil n= 14 r=Estudiantil 0.965 (RED extranos) 1.77 Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil. IO. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. DE. Versión Estudiantil. FA R. Figura 3: Distribución de los errores para la producción de dextranos por L. mesenteroides en tanques aireados y agitados.. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión -0.89 Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. 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Cuantiles de una Normal(1.586E-017,1.0769). Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Versión Estudiantil. Distribución normal de los errores.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.
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