R E V I S I Ó N
Recibido: 07-04-2014 Aceptado: 23-04-2014
Correspondencia: Leonardo A. Salvarredi - División Bioquímica Nuclear - Departamento de Radiobiologia - Lab B221-2ºPiso-Edificio Tandar Centro Atómico Constituyentes - Comisión Nacional de Energía Atómica - Av. Gral. Paz 1499 (B1650KNA) - San Martín-Buenos Aires +54-011-67727186
microARNs: Nuevos actores en el metabolismo
de los lípidos
microRNAs: New Factors in Lipid Metabolism
Leonardo Salvarredi. División Bioquímica Nuclear. Comisión Nacional de Energía Atómica
RESUMEN
Es reconocido el papel que cumplen los microARNs (miRs) en procesos celulares como la diferenciación, la apoptosis, la proliferación y su alteración en enfermedades como el cáncer. Sin embargo el conocimiento acerca de su función en el metabolismo de los lípidos y desórdenes asociados es escaso. Recientemente se ha visto que estas moléculas desempeñan un papel importante en la homeostasis lipídica, regulando a nivel postranscripcional la expresión de genes involucrados en este metabolismo. También se ha observado que las lipoproteínas, fundamentalmente las lipoproteínas de alta densidad (HDL) son capaces de transportarlos, permitiendo la comunicación celular entre tejidos distantes, estableciéndose así una regulación recíproca. La comprensión de los mecanismos regulatorios involucrados en estos procesos abre nuevas posibilidades al desarrollo de estrategias terapéuticas para el abordaje de desórdenes metabólicos y cardiovasculares. Rev Argent Endocrinol Metab 52:75-84, 2014
Los autores declaran no poseer conflictos de interés.
Palabras clave: microARNs, lípidos, lipoproteínas, epigenética
ABSTRACT
The role of microRNAs (miRs) in cellular processes such as differentiation, apoptosis, and proliferation as well as their alteration in diseases such as cancer are well known. However, there is little knowledge about the role of miRs in lipid metabolism and associated disorders. Recently, it has been shown that these mol-ecules play an important role in lipid homeostasis by regulating post-transcriptional level expression of genes involved in this metabolism. It has also been observed that lipoproteins, mainly high-density lipoproteins (HDL), are capable of transporting miRs, enabling cellular communication between distant tissues, establish-ing a mutual regulation. Understandestablish-ing the regulatory mechanisms involved in these processes opens up new possibilities for the development of therapeutic approaches for metabolic and cardiovascular disorders. Rev Argent Endocrinol Metab 51:75-84, 2014
No financial conflicts of interest exist.
Key words: microRNAs, lipids, lipoproteins, epigenetic
INTRODUCCIÓN
Durante la última década una clase de RNA no codificantes, llamados microARNs (miRs), comen-zaron a ocupar un lugar crítico en la regulación de la expresión génica. De modo complementario a los
traducida del extremo 3`de los RNA mensajeros (mRNAs 3`UTR, untranslated region) inducen su degradación o bloquean su traducción (Fig. 1). Se encuentran ampliamente conservados y ejercen efectos regulatorios en animales, plantas y pro-tozoos(1,2). Descubiertos en C. elegans a la fecha
se han identificados cientos de miRs en animales, plantas y virus(3).
Un miR es capaz de regular simultáneamente distintos mRNAs, del orden de cientos(4) y se
cree que todos los miRs identificados hasta el momento podrían modular la expresión de más de un tercio de los mRNAs codificados en el ge-noma(5-7). Asimismo cada gen puede ser regulado
por más de un miR. De esta forma el potencial regulatorio de los miRs es enorme. Abarcan un amplio rango de procesos fisiológicos(8-13),
y consecuentemente su desregulación está estrechamente ligada a distintos desórdenes y enfermedades humanas.
En las últimas décadas se ha ampliado la com-prensión de los mecanismos involucrados en el metabolismo del colesterol y su participación en la progresión de enfermedades cardiovasculares. Los
miRs se ubican actualmente como actores claves de la regulación de procesos homeostáticos.
Comprender cómo estas pequeñas moléculas contribuyen a los mecanismos involucrados en la homeostasis lipídica y su desregulación abre la posibilidad al desarrollo de nuevos blancos y estra-tegias terapéuticas para el abordaje de desórdenes metabólicos y enfermedades cardiovasculares.
HOMEOSTASIS DEL COLESTEROL
Mediante un proceso conocido como transporte reverso del colesterol (RCT, reverse colesterol transport) las lipoproteínas de alta densidad (HDL, high density lipoproteins) remueven el colesterol contenido en los macrófagos localizados en las pa-redes de los vasos y lo transportan hasta el hígado para su excreción. Este proceso comienza con la hidrólisis de ésteres de colesterol citoplasmático mediante la acción de hidrolasas y a través de lipasas lisosomales(14). El colesterol libre luego
efluye desde la célula por difusión pasiva y, por transporte activo, a través de los transportadores
Figura 1. Biogénesis y función de los miRs. lnicialmente los miRs son transcriptos en transcriptos primarios de gran longitud. La secuencia del miR está contenida dentro de una estructura tipo hairpin de 60 a 80 nucleótidos que es clivada por acción de Ia m7G endonucleasa Drosha dando Iugar a un producto intermedio conocido como pre-miR. Este es transportado al cito-plasma por medio de Ia exportina 5 donde es procesada por acción de Ia endonucleasa Dicer. Como resultado del clivaje se produce una estructura de doble cadena. Una de las cadenas es cargada selectivamente en el complejo de silenciamiento (RNA-induced silencing complex, RISC) y sirve de guía al complejo hacia el mRNA target induciendo su clivaje y degrada-ción si la complementariedad miR:mRNA es perfecta o la represión de la traducdegrada-ción si la complementariedad es imperfecta
ABC A1 (ABCA1) y G1 (ABCG1) es transferido a las lipoproteínas apoA1 y HDL respectivamente. Estos mismos transportadores intervienen en la biogénesis del HDL en el hígado y su maduración en el plasma(15).
Mientras adquieren colesterol y fosfolípidos las HDL atraviesan distintos eventos de remodelación bajo la acción de colesterol transferasas (LCAT, lecithin-cholesterol acyltransferase) o lipasas hepá-ticas y/o endoteliales que en su curso van alterando la composición y el tamaño de las lipoproteínas(16).
Las HDLs pueden intercambiar el colesterol por triglicéridos procedente de lipoproteínas que con-tienen la proteína apoB por medio de la acción de la proteína transferidora de ésteres de colesterol (CETP,cholesteryl ester transfer protein). De esta forma el colesterol puede ser tomado por el hígado a través del receptor de lipoproteínas de baja den-sidad (LDLR, low density lipoprotein receptor)(16).
En el último paso de la vía canónica del trans-porte reverso las HDLs trasladan su contenido lipídico al hígado donde puede ingresar a través del receptor SR-BI (scavenger receptor class B,
type I)(17). Una vez en el hígado el colesterol que ha
ingresado tanto a través de los receptores de LDL o los SR-BI puede ser oxigenado y convertido en sales biliares que luego serán secretadas al intestino a través de transportadores canaliculares(18).
Tanto el proceso de eflujo y remoción en condi-ciones de exceso de colesterol como la biosíntesis y la internalización de colesterol exógeno están regulados por la expresión de distintos genes. Una familia importante de proteínas son las proteínas de unión a elementos regulados por esterol (SRE-BPs, ER-bound sterol regulatory element-binding
proteins)(19). Esta familia de proteínas consiste
en 3 proteínas codificadas por los genes Srebp-1 y Srebp-2. El gen Srebp-1 genera por remoción de intrones (splicing) 2 transcriptos alternativos, Srebp-1a y Srebp-1c. Las proteínas SREBPs di-fieren en su expresión tejido específico, la selec-tividad de los genes blanco y la potencia relativa de sus dominios de transactivación. SREBP1c regula la transcripción de genes involucrados en el metabolismo de los ácidos grasos, como la sin-tasa de ácidos grasos (FASN, fatty acid sinthase). SREBP2 y SREBP1a regulan la transcripción de genes asociados al colesterol, como la reductasa HMGCR (3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase), la cual cataliza un paso limitante en la biosíntesis del colesterol, y el receptor de LDL, el cual importa colesterol desde la sangre(19).
Otro paso importante en la transcripción para el mantenimiento de la homeostasis del colesterol lo constituyen los receptores X del hígado (LXR, liver X receptors), que regulan la respuesta al ex-ceso de colesterol(20) LXRα y LXRβ son factores de
transcripción activados por ligando pertenecientes a la familia de receptores nucleares de hormonas y son activados por metabolitos endógenos oxidados que derivan del colesterol, llamados oxisteroles. Estos factores de transcripción son activados en respuesta a niveles elevados de colesterol e indu-cen la expresión de proteínas involucradas en la absorción de colesterol, transporte, excreción y eflujo, incluyendo a los transportadores ABCA1 y ABCG1(20).
PAPEL DE LOS MIRS
Muchos genes involucrados en la biogénesis de HDL, el eflujo celular del colesterol, el ingreso selectivo al hígado desde las lipoproteínas y el transporte biliar son potenciales blancos para los miRs. Algunos son capaces de regular múltiples genes de la vía e inversamente algunos genes claves pueden ser regulados por distintos miRs.
Hasta el momento los miRs 122 y 33 han sido identificados como reguladores claves del metabo-lismo de los lípidos (Fig.2 ). Recientemente se ha reportado que otro miR, el miR30c cumple también una función en la homeostasis lipídica(21).
miR 122
Es el miR más abundante en el hígado, comprende el 70 % de la totalidad de miRs expresados y está altamente conservado en distintas especies. Ini-cialmente fue estudiado en procesos de respuesta a estrés o depleción de aminoácidos. Sin embargo. se desconocía su papel en la fisiología normal del hígado. Posteriormente, en estudios in vivo en ratón se realizaron análisis funcionales(22,23).
observa-ciones resultaron coherentes con la represión por parte de este miR de la enzima FASN. Para hacer extensivos estos resultados a otros mo-delos, se practicaron estudios de silenciamiento en primates no humanos. Con oligonucleótidos antisentido se realizaron estudios in vivo inhi-biendo al miR122 en monos verdes Africanos(24)
y chimpancés(25). Se observó en forma similar a
lo sucedido en el modelo murino, una reducción en los niveles de colesterol totales en un rango de entre el 20 al 30 %.
La aplicación clínica de estos resultados hoy está allanada por estudios que involucran al miR122 como parte de una estrategia terapéutica en pacientes con hepatitis C. El miR122 contiene 2 sitios de unión a la región 5` no codificante del genoma del virus, que resultan esenciales para la acumulación y propagación del virus en hepa-tocitos(26,27). En estudios realizados en primates
no humanos donde se silenció al miR se observó una mejora en la patología y reducción en la vire-mia(25). Estos resultados han impulsado la primer
aplicación clínica basada en miRs sobre pacientes con hepatitis C que a la fecha se encuentra en fase II(28).
miR 33
Aunque la localización genómica del miR 33 había sido reportada en 2004(29) las consecuencias
funcio-nales de su papel en el metabolismo de los lípidos no se conocieron sino hasta 2010(30-32). Tres laboratorios
por distintas caminos determinaron que este miR constituía un regulador clave en el metabolismo del colesterol. Se observó por medio de un análisis de expresión por microarrays que la expresión del miR estaba regulada por el contenido de colesterol en macrófagos(32). En condiciones de depleción o
enriquecimiento de colesterol se determinó que el miR estaba positiva o negativamente regulado res-pectivamente, correlacionado a la expresión del gen Srebf2 (Sterol Regulatory Element-Binding Factor 2). También se observó en ratones que la dieta rica en colesterol alteraba los niveles de expresión del miR. Estos datos sugirieron una coregulación de ambos genes. En otro estudio por análisis in silico se observó que el miR estaba localizado en un intrón del gen Srebf2. Más interesante aún, este grupo mostró explicando la corregulación de ambos genes, que el miR33 se cotranscribe junto a Srebf2 tanto en macrófagos como hepatocitos(30,31).
Figura 2. Regulación de Ia homeostasis de lípidos por miRs. Las puntas de flecha rectangulares indican Ia represión postrans-cripcional de los genes regulados por el miR33. La represión de genes por parte de los miR22 y 30 c produce un incremento y una reducción de los niveles plasmáticos de LDL respectivamente.
Para explicar el efecto del silenciamiento del miR33 sobre los niveles de colesterol total se analizaron genes blanco del miR que pudieran estar asociados al metabolismo del colesterol. El principal candidato encontrado resultó ser el transportador ABCA1, responsable del mo-vimiento de colesterol al medio extracelular. La región 3`UTR del mRNA de ABCA1 contiene 3 sitios de unión al miR33 (en sus dos isoformas miR33a y miR33b). El análisis funcional mostró que la sobreexpresión del miR reprimió la expre-sión de ABCA1 e inversamente la inhibición del miR resultó en un incremento de la expresión del transportador(30-32). La mutación de los sitios
de unión del miR en la región 3`UTR de ABCA1 restauró los niveles de expresión(30-32). Producto
de la inhibición también se observó en macró-fagos y hepatocitos, conjuntamente al aumento de expresión del transportador, un aumento del eflujo de colesterol a apoA1. De modo inverso la sobreexpresión del miR produjo una disminución del eflujo de colesterol a apoA1(30-32).
Además de ABCA1, se observó en el modelo murino que el miR33 inhibe la expresión del transportador ABCG1, responsable del transporte de colesterol hacia HDL(30-32). Llamativamente,
la región 3`UTR del mRNA de ABCG1 en ratón contiene 2 sitios de unión al miR33, ausentes en humanos. Esto explica porqué la sobreexpresión del miR en células de origen humano no inhibe la expresión del transportador. De modo inverso, la proteína NPC1 (Neimann Pick C1) a cargo del transporte del colesterol desde compartimentos lisosomales a otros compartimentos, y que actúa coordinadamente con ABCG1 en el eflujo de coles-terol a HDL, es reprimida por el miR33 en células de origen humano pero no en murinas(32). Esto
podría deberse a que el mRNA humano contiene 2 sitios de unión al miR y el murino solo uno de ellos. De esta forma se demostró la versatilidad que poseen los miRs para producir un efecto similar en diversas especies regulando distintos genes blanco pertenecientes a la misma vía.
Como consecuencia de la regulación de los trans-portadores ABCA1 y ABCG1 se pensó que esto debería tener un efecto sobre los niveles de HDL circulantes. Mediante el silenciamiento in vivo del miR33 en ratones se observó un aumento del 25 % en los niveles plasmáticos de esta lipoproteína. De modo inverso al sobreexpresar el miR se determinó una disminución entre el 25-30 % en los niveles de HDL circulante(30-32).
Dando más sustento al papel regulatorio del miR33 sobre los niveles de HDL circulantes Horie y col. (2010) utilizaron ratones knock out para la expresión del miR33, manteniendo intacta la expresión de Srebf2. Observaron un aumento de la expresión de ABCA1 y un aumento de entre el 25-40 % en los niveles de HDL(33).
Además de promover el eflujo de colesterol y la biosíntesis de HDL, estudios en ratón demostraron que el miR33 es capaz de regular la secreción biliar en el hígado(34). El miR regula a través de la unión
a la región 3`UTR los transportadores ABCB1 y ATP8B1, ubicados en las membranas canaliculares y claves en la secreción biliar. En experimentos in vivo también se observó una alteración en la secreción biliar y el contenido de esteroles(34).
Por otra parte, se observó que genes involucra-dos en la β oxidación de ácidos grasos como CPT1a, CROT y HADHB(35) presentan sitios de unión
al-tamente conservados para el miR33. Se determinó la unión específica del miR33 a los sitios de unión de la región 3`UTR de estos genes y la represión de CPT1a y HADHB(32).
Todos estos resultados sustentan con mayor fuerza el papel clave del miR33 en la regulación del transporte reverso de colesterol y en conse-cuencia su potencial terapéutico en enfermedades cardiovasculares como la aterosclerosis. En ratones knock out para el receptor de LDL (Ldlr-/-) con placas ateroscleróticas establecidas, la inhibición del miR33 produjo una regresión de las lesiones ateroscleróticas, reduciendo el tamaño de las placas, el contenido lipídico y de macrófagos y la expresión de genes proinflamatorios(36). En otro
estudio en macrófagos peritoneales de ratones knock out para miR33 y apoE (mir33-/- ;apoE-/-) se observó un incremento en el eflujo de coleste-rol a apoA1 y HDL respecto a macrófagos con la expresión normal del miR(37). En el mismo estudio
los ratones fueron alimentados por 14 semanas con una dieta conteniendo un 0,15 % de colesterol y se observó en los ratones knock out para el miR33 una reducción del 20-25 % en el tamaño de las placas y el contenido lipídico respecto a los ratones con la expresión del miR intacta(37).
con el incremento de la expresión de ABCA1, re-sultó en un aumento de la remoción del colesterol de estas células y la restauración de los niveles normales de insulina(38).
miR30c
Aunque los niveles de expresión de este miR en hígado son relativamente bajos respecto a otros tejidos Soh y col. (2013) plantearon una amplia evidencia respecto a su papel en la homeostasis lipí-dica. El hallazgo de este miR surgió en la búsqueda de inhibidores de la proteína transferidora de tri-glicéridos microsomales (MTP, microsomal trigly-ceride transfer protein). Esta proteína, involucrada en el ensamblaje de precursores de lipoproteínas de baja densidad, interactúa y lipidifica a la proteína apoB, haciendo de ella un blanco terapéutico para reducir los niveles plasmáticos de los lípidos. Sin embargo, la utilización de inhibidores ha dado lugar a efectos secundarios como la esteatosis y el incremento en los niveles plasmáticos de transa-minasas. Mediante el análisis in silico se encontró que los miembros de la familia del miR30 contenían sitios de unión a los transcriptos de MTP y además se encontraban conservados entre los vertebrados. Estudios funcionales in vitro demostraron que, de los 3 miembros de la familia, debido a la presencia de sitios de interacción suplementarios al sitio de interacción principal(39), solo el miR30c tenía un
efecto sobre la actividad y los niveles de expresión de la proteína blanco. Se observó in vitro que la sobreexpresión e inhibición del miR no solo redu-cía y aumentaba, respectivamente, los niveles de expresión y actividad de la proteína sino que, como producto de estos cambios, también variaban del mismo modo, los niveles de secreción de apoB en el medio. En estudios in vivo, en ratones en los que se sobreexpresaba o inhibía la expresión de los miRs en hígado, se observó también un incre-mento y reducción respectivamente en los niveles de expresión de la proteína blanco y en los niveles plasmáticos de colesterol y triglicéridos, como re-sultado de la reducción en los niveles de secreción de lipoproteínas no HDL. Se observó además que estos cambios se producían sin variar los niveles plasmáticos de transaminasas. Cuando en el mismo experimento se analizaron los niveles de colesterol y triglicéridos, pero esta vez en los homogenatos de hígado, contrariamente a lo esperado, no se obser-vó un incremento en la concentración hepática de los mismos. Se buscaron posibles genes blanco del
miR en vías de oxidación y síntesis de triglicéridos y fosfolípidos. In vitro, la sobreexpresión del miR redujo entre otros genes los niveles de expresión de la enzima lisofosfatidilglicerol aciltransferasa (LP-GAT1, lysophosphatidylglycerol acyltransferase 1), que por estudios de silenciamiento mostró tener un rol en la lipogénesis de novo sin afectar la actividad de MTP. Para estudiar el efecto in vivo, ratones knock out para MTP fueron transfectados con el miR30c y no se observaron cambios en los niveles plasmáticos del colesterol y los triglicéridos, ni en el colesterol hepático, pero sí en los niveles de los tri-glicéridos, ácidos grasos y fosfolípidos. Esto indicó entonces que el miR era capaz de reducir los nive-les de triglicéridos hepáticos independientemente de la actividad de MTP. Para resaltar el alcance terapéutico de este miR se estudio el efecto sobre la aterosclerosis. Ratones knock out para apoE se transfectaron con el miR, con el inhibidor o con un control scrambled. Se observó una reducción y un incremento en las concentraciones plasmáticas de los lípidos y de la proteína apoB, sin cambios en los niveles de las transaminasas, en los ratones en los que la expresión del miR estaba aumentada o disminuida respectivamente. Asimismo se observó una reducción y un incremento en el número y tamaño de placas ateroscleróticas y en la tinción de macrófagos en las uniones cardíacas de la aorta en los ratones en los que el miR estaba aumentado y disminuido respectivamente.
De esta manera los autores demostraron que el miR30c era capaz, al disminuir la expresión de MTP, de reducir los niveles plasmáticos de coleste-rol y triglicéridos sin producir efectos secundarios, reducir los niveles hepáticos de los triglicéridos, disminuyendo la lipogénesis de novo al reducir la expresión de algunos genes blancos como LPGAT1 y finalmente reducir también la formación de placas ateroscleróticas en ratones knock out para apoE.
miRs circulantes
cuerpos apoptóticos, proteínas libres y en lipopro-teínas HDLs(40) (Fig. 3). Hay una amplia variedad
de trabajos que establecen una relación estrecha entre estos miRs y distintas patologías(41-43). Esto
ha generado un interés particular en la utilización de estas pequeñas moléculas como biomarcadores de distintas patologías.
Las HDLs son capaces de transportar miRs endógenos hasta células receptoras por medio de un mecanismo que involucra a los receptores SR-BI(44). Se ha observado además que las HDL de
pacientes con hipercolesterolemia familiar (FHC) presentan mayor abundancia y riqueza de miRs que aquellos procedentes de pacientes normales(44)
El análisis de los miRs contenidos en las HDLs mostró que el miR223 se encuentra altamente enriquecido y llamativamente este miR se encuen-tra en forma abundante en células receptoras con la consiguiente reducción en los niveles de dos genes target: RhoB y EFNA1. Inclusive cuando se trataron hepatocitos con estas HDLs se obser-vó una regulación negativa de 91 genes, 79 de los cuales eran blancos tentativos de los 22 miRs más abundantes contendidos en las lipoproteínas(44). La
heterogeneidad de efectos vasculares de los HDLs
en la regulación del óxido nítrico y funciones an-tioxidantes, antiinflamatorias y antitrombóticas hace pensar que esto puede deberse al perfil de miRs contenidos en las lipoproteínas.
De esta manera, los miRs no solo regulan genes clave del metabolismo de los lípidos, particular-mente involucrados en la homeostasis del coles-terol y los niveles de HDL circulantes, sino que estas mismas lipoproteínas son responsables de su transporte y en última instancia de sus efectos regulatorios en tejidos distantes.
Inclusive se ha reportado que los miRs no solo ejercen efectos regulatorias a distancia entre te-jidos distantes de un organismo sino que pueden hacerlo entre distintos organismos, inclusive de distintos reinos. En un trabajo reciente(45) se
des-cribió que un miR de origen vegetal, abundante en arroz, el miR168a, aumentó su nivel en plasma tras la ingesta de arroz, y fue capaz de unirse al mRNA de la proteína adaptadora 1 del receptor de LDL, inhibir su expresión y como consecuencia de ello alterar los niveles de colesterol en suero. Este trabajo evidencia cómo un miR de origen vegetal en la dieta es capaz de regular la expresión de un gen target en mamíferos.
Figura 3. miRs circulantes. Los miRs pueden ser secretados a Ia circulación en distintas vesículas lipídicas como exosomas, microvesiculas y cuerpos apoptóticos o pueden encontrarse fuera de las vesículas pero unidas a lipoproteínas o a proteínas de unión a RNA
CONCLUSIONES
Los miRs regulan una amplia variedad de pro-cesos fisiológicos incluyendo al metabolismo de los lípidos. Consecuentemente su desregulación está también asociada a dislipidemias. Como se describe anteriormente, se han identificado tres miRs que regulan la homeostasis de los lípidos: los miRs122, 33 y 30c. Se ha demostrado que la expresión de estos miRs está determinada por cambios en el ambiente celular, incluyendo los niveles de colesterol, y estos procesos se corre-lacionan con la inducción de otros genes que regulan la homeostasis lipídica. Los estudios funcionales, en los cuales se silencia por distin-tas vías la expresión de los miRs tanto in vitro como in vivo, incluyendo a modelos primates no humanos muestran resultados muy promisorios. Además, teniendo en cuenta la diversidad de ge-nes involucrados en estos procesos y de acuerdo a las predicciones bioinformáticas, se espera que en los próximos años sea aún mayor la cantidad de miR asociados a estos procesos regulatorios.
Sin embargo, la aplicación clínica de este cono-cimiento tiene por delante importantes desafíos. Debe tenerse en cuenta, en primer lugar, que un miR es capaz de regular simultáneamente la expresión de una amplia variedad de genes. En términos fisiológicos, esto significa que cuando se silencia o sobreexpresa un miR se puede es-tar inhibiendo la expresión de un gen blanco de interés conocido y simultáneamente estar inhi-biendo (o activando como resultado indirecto de la inhibición de un represor) otros genes blancos desconocidos. En segundo lugar la expresión de los miRs es tejido específica e incluso en dis-tintos tejidos un miR puede cumplir distintas funciones de acuerdo a los genes expresados por cada tejido. Teniendo en cuenta todo esto el desarrollo terapéutico de los miRs debe invo-lucrar entonces la producción de conocimiento básico: comprender los mecanismos detrás de los efectos fisiológicos observados e identificar y validar funcionalmente los genes blanco de estos miRs. Asimismo este conocimiento básico debe contrastarse con estudios funcionales de silen-ciamiento o sobreexpresión en modelos murinos y en primates no humanos. La tolerancia a los efectos del tratamiento con antagonistas del miR122 observada en pacientes con hepatitis C es un paso importante en el desarrollo de estra-tegias farmacológicas a base de miRs.
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