Inmunohistoquimica aplicada en musculo.ppt

(1)

Jorge Car

Jorge Carrasco Sanhuezarasco Sanhueza T

Tecnólogo Médicoecnólogo Médico

Morfosiopatología y Citodiagnóstico Morfosiopatología y Citodiagnóstico

Hospital Dr. uis Cal!o Mac"enna Hospital Dr. uis Cal!o Mac"enna

Inmunohistoquímica

aplicada en musculo

(2)

Sumario

••

_{#eneralidades del te$ido %uscular}

••

_{&plicaciones Diagnosticas de la}

_&plicacione

_{s Diagnosticas de la 'H(}

_'H(

••

₎

_{)or%as de}

_{or%as de procesa%iento}

_{procesa%iento}

••

_{*rocedi%iento de técnica}

••

_{&nticuerpos utilizados}

(3)

Sumario

••

_{#eneralidades del te$ido %uscular}

••

_{&plicaciones Diagnosticas de la}

_&plicacione

_{s Diagnosticas de la 'H(}

_'H(

••

₎

_{)or%as de}

_{or%as de procesa%iento}

_{procesa%iento}

••

_{*rocedi%iento de técnica}

••

_{&nticuerpos utilizados}

(4)

Generalidades del tejido

muscular

•• _T_Te$ido_e$ido _alta%ente_alta%ente _especializa_{especializado+}_do+ _deri!a_deri!a _del_del

%esoder%o %esoder%o

•• _{,esponsa-le de las fuerzas de contracción del}_{,esponsa-le de las fuerzas de contracción del}

organis%o organis%o

•• _{o%enclatura especíca/}_{o%enclatura especíca/}

•• _{Célula %uscular}_{Célula %uscular} ___{-ra %uscular}_{-ra %uscular} •• _{Me%-rana plas%0tica}_{Me%-rana plas%0tica} ___Sarcole%a_Sarcole%a •• _Citoplas%a_Citoplas%a ___sarcoplas%a_sarcoplas%a

•• _,etículo_,etículo _{endoplas%atico}_{endoplas%atico} _liso_liso __ _retículo_retículo

sarcoplas%ico sarcoplas%ico

(5)

(6)

Generalidades del tejido

muscular

• _Se

_encuentran

_coordinadas

_en

con$unto con te$ido conecti!o/

• _{)i-ras col0genas}

• _,eticulares

• _1l0sticas

• _*resentan

_una

_alta

_irrigación

sanguínea

(7)

Fibras reticulares del

sarcolema e irrigación del

musculo

(8)

Tejido muscular: tipos

• Musculo esquelético • _1striado

• 2oluntario

• *er%ite %o!i%iento del aparato loco%otor

• Musculo liso • o posee estrías

• )or%a parte de las !ísceras

• 3a$o control autóno%o y hor%onal

• Musculo cardiaco

• Caract. De %usculo

es4uelético y estriado

(9)

(10)

Tejido muscular:

organización

•• 1l TM 1s4uelético se organiza %ediante1l TM 1s4uelético se organiza %ediante agrupaciones de -rillas %usculares 5células agrupaciones de -rillas %usculares 5células %usculares6

%usculares6

••

sta agrupación es mediada por:

••

Tejido conecti!o

__ e%pa4uetan las -ras e%pa4uetan las -ras for%and

for%ando pa4uetes o pa4uetes %ioconecti!os%ioconecti!os

••

Sistema de proteínas de unión

___{per%iten la}_{per%iten la}

unión %olecular del sarcole%a al te$ido

unión %olecular del sarcole%a al te$ido conecti!oconecti!o

•• &%-as per%iten la tras%isión de las fuerzas de&%-as per%iten la tras%isión de las fuerzas de tención de los huesos 4ue unen

(11)

"aquetes mioconecti!os:

epimisio # perimisio $

endomisio

(12)

%plicaciones

&iagnosticas de la I'(

• _{“Tipifcación, diagnostico y tratamiento”}

• Tumores

– Des%oide – )i-ro%atosis – ,a-do%io%a – ,a-do%iosarco%a

• &istro)as

– Distroa %uscular de Duchenne

– Distroa %iotónica de Steiner

(13)

%plicaciones

&iagnosticas de la I'(:

tumores

• Fibromatosis

• _{#rupo de proliferaciones de -ro-lastos}

del

te$ido

conecti!o

4ue

tienen

creci%iento inltrati!o+ tendencia a la

recidi!a+ sin heterotipía ni %et0stasis.

• _{*ueden ser/}

– superfciales de creci%iento lento y ta%a7o pe4ue7o

– _Proundas_{asociadas a te$ido %uscular de} _ -rosarco%as 8 tu%or des%oide

(14)

(15)

%plicaciones

&iagnosticas de la I'(:

tumores

• Tumor desmoide

• _{neoplasia -rosa -enigna originada de}

las estructuras %9sculo:aponeuróticas

del cuerpo.

• _{Se caracteriza por creci%iento de}

te$ido -rosos+ duro+ general%ente

-ien diferenciado e inltrati!o.

• _{1stos tu%ores est0n constituidos por}

la

lenta

proliferación

de

(16)

(17)

%plicaciones

&iagnosticas de la I'(:

tumores

•

rabdomioma

• tu%or -enigno %uy infrecuente+ considerado a !eces una %alfor%ación

•

rabdomiosarcoma

• tu%or %aligno u-icado preferente%ente en en!olturas testiculares+ retroperitoneo+ e;tre%idades.

• _{Formado por células musculares estriadas,}

en general inmaduras y polimoras.

• _{Requiere diagnostico dierencial con Tumor}

(18)

*abdomioma +

(19)

%plicaciones

&iagnosticas de la I'(:

&istro)as musculares

• 1nfer%edades degenerati!as pri%arias del %9sculo es4uelético+ 4ue tienen una -ase genética.

• _{#rupo heterogéneo de trastornos hereditarios} 4ue cursan con de-ilidad y atroa %usculares

• _{as %as co%unes son ligadas al cro%oso%a <+} en %enor grado las hay autonó%icas recesi!as • _{Requieren un diagnostico dierencial con}

miopatías mitocondriales y miopatías metablicas

(20)

%plicaciones

&iagnosticas de la I'(:

&istro)as musculares

• &istro)a muscular de &uchenne

• _trastorno

_hereditario

_ligado

_al

cro%oso%a <.

• _{1s la %as frecuente en ni7os}

• _{Causa destrucción progresi!a del}

%9sculo+ y se asocia con la ausencia

de

una

proteína

%uscular+

la

(21)

&istro)a muscular de

&uchenne

'

G,M,*I

(22)

%plicaciones

&iagnosticas de la I'(:

&istro)as musculares

• &istro)a miotónica de Steinert

• _trastorno

_hereditario

_ligado

_al

cro%oso%a <.

• Se presenta %ayoritaria%ente en adultos

• _{*resenta un rela$a%iento anor%al%ente}

lento de los %9sculos tras la contracción+

y la dis%inución irregular del ta%a7o de

las -ras de ciertos %9sculos.

(23)

&istro)a miotónica de

Steinert

(24)

%plicaciones

&iagnosticas de la I'(:

&istro)as musculares

• &istro)a muscular de -ec.er

• _trastorno

_hereditario

_ligado

_al

cro%oso%a <.

• _{De aparición %as tardía 4ue la de}

Duchenne

• _{Caracterizado}

_por

_de-ilidad

_en

%9sculos pro;i%ales de los %ie%-ros

inferiores.

• /a dis0ro)na

_{es anó%ala estando}

(25)

(26)

Formas de

procesamiento

• Toma de muestra

• _{Seg9n clínica/ 5tipo de patología6 se}

proceder0

a

-iopsiar

para

un

procesa%iento

di0erido

o %ediante

congelación

• Tumores

)jación en Formalina

tamponada

• &istro)as

$

Miopatias

congelación

(27)

Formas de

procesamiento

• Toma de muestra: Tumores

• _{Biopsias excisionales}

• _Fi!acin"

• _{ormaldehido 10%}

tamponada

(28)

Formas de

procesamiento

• Toma de muestra: Miopatias$

distro)as

(29)

Formas de

procesamiento

• Toma de muestra: Miopatias$

distro)as

• Fijación:

• _{Congelación en alcohol isopentano}

(30)

(31)

(32)

Formas de

procesamiento

• Toma de muestra: Miopatias$distro)as

• ,e4uieren aparte de la 'H(+ técnicas histo4uí%icas enzi%0ticas necesarias para poder e%itir un diagnostico nal • _&T*asa • C"# • $& • _'(& • )osorilasa • )osatasa (cida • )osatasa alcalina

• _{#stas enzimas son $idrosolubles y sensibles en}

(33)

*rocedi%iento de técnica

•

Fijación en

0ormalina

=.3lo4ueo de pero;idasa

>.,ecuperación

antigénica

?.3lo4ueo de proteínas

@.'ncu-ación &c. =A

B.Siste%a de detección:

re!elado

.Contraste con H.

.Deshidratar+ aclarar y

%ontar en %edio

anhidro

•

Fijación por

congelación

=.*ost$ación en %etanol: acetona =/= >.3lo4ueo de proteínas ?.'ncu-ación &c. =A @.Siste%a de detección: re!elado B.Contraste con He%ato;ilina a elección .Deshidratar+ aclarar y

(34)

*rocedi%iento de técnica

•

Fijación en 0ormalina

=.3lo4ueo de pero;idasa

– _{*ara e!itar tinción de} fondo por eritrocitos y *M.

>.,ecuperación antigénica

– _{*ara re!ertir el}

en%ascara%iento

antigénico causado por la for%alina

•

Fijación por

congelación

=.*ost$ación en

%etanol:acetona =/=

–

"ermite una )jación

ideal para proteínas

de

– Citoes4ueleto

– Sarcole%a

– E 1;tracelulares asociadas

(35)

*rocedi%iento de técnica/

pasos críticos

•

Fijación en 0ormalina

1*T+ de fación apropiada -*Temperat!ras de procesamiento .*/ec!peración antignica apropiada */espetar la2ados 3*il!ción de (c 4 T+ inc!bación 5*$istema de detección6 re2elado •

Fijación por

congelación

12/a!ados con e3tremo

cuidado4

• _{pese a la adherencia de} portaobetos, presentan !n % de desprendimiento m!cho mayor a cortes en parafna •

&ilución de %c # T5

incubación

•

Sistema de detección$

re!elado

(36)

Sistema de proteínas de

unión del musculo

(37)

Sistema de proteínas de

unión del musculo

(38)

(39)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

• _{&ctina %usculo especica}

• _{&ctina %usculo liso}

• _Des%ina

• _Disferlina

• Distrona =+ > y ?

• _1%erina

• _Merosina

• _Miogenina

• _Mioglo-ina

• _MyoD=

• _Sarcoglicano

(40)

&nticuerpos Ftilizados

•

%c usados en

)jación con

0ormalina

• _{&ctina %usculo} especica

• _{&ctina %usculo liso}

especica • _Des%ina • _Merosina • _Miogenina • _Mioglo-ina • _MyoD=

• %c usados en

)jación por

congelación

• _Disferlina

• _{Distrona =+ > y ?}

• 1%erina

• _Sarcoglicano

(41)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

•

%7TI8% M6S76/, S"7IFI7% 9''F;<

• _{a &ctina+ una proteína citoes4uelética u-icua}

alta%ente conser!ada de las células %usculares y no %usculares

•

speci)cidad

• _{no reacciona con la a:actina de origen no}

%uscular 5células endoteliales6.

• _{,eacciona con isotipos de a:actina y g:actina de}

%9sculo liso+ es4uelético y cardíaco.

•

"atrón de marcación

_{Citoplas%0tico}

(42)

%ctina musculo

(43)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

• %7TI8% M6S76/, /IS, S"7IFI7% 91

% =<

• _{*roteína del Citoes4ueleto de todo te$ido}

%uscular liso

• speci)cidad

• _{'sofor%as de la alfa:actina %usculo liso}

• _{,eacciona con células %usculares lisas de}

!asos y diferentes parén4ui%as

• "atrón de marcación

Citoplas%0tico

(44)

%ctina musculo liso

especi)ca

(45)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

•

&esmina

• _{proteína de tipo ''' de los la%entos inter%edios}

del citoes4ueleto intracelular en particular de células %usculares+ tanto estriadas co%o lisas

•

speci)cidad

• _{Marca las células del %9sculo liso y estriado+ así}

co%o las células %esoteliales+ y constituye una herra%ienta 9til para la identicación de ra-do%iosarco%as+ leio%io%as y %esotelio%as.

•

"atrón de marcación

_{Citoplas%0tico} •

7ontroles

_&péndice

(46)

(47)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

•

&ISF*/I8%

• *roteína asociada a la reparación del %usculo es4uelético+ los defectos en el gen de la disferlina resultan en dos distroas %usculares.

•

speci)cidad

• ,eacciona con la %olécula Disferlina del %usculo es4uelético

•

"atrón de marcación

*rincipal%ente de %e%-rana+ en %enor grado Citoplas%0tico

•

7ontroles

%usculo procesado por congelación G en defecto control negati!o

(48)

(49)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

• &IST*,FI8%S 14 > ? 

• )a%ilia de proteínas de trans%e%-rana 9@4 A4 B4 C or D< en!ueltos en un co%ple$o de proteínas responsa-les de

conectar el citoesqueleto de las )bras musculares con la matriz e3tracelular4 pre!iniendo el da7o del sarcole%a de la -ra %uscular tras fuerza %ec0nica e$ercida durante las contracciones %usculares

• a %utación de los genes + I+  or K genes 5no L6 4ue codican estas proteínas est0n asociados con distroa %uscular

• "atrón de marcación Membrana

• 7ontroles %usculo procesado por congelación G en defecto control negati!o

(50)

(51)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

• M*I8%

• _{proteína de la %e%-rana nuclear en}

!erte-rados. 1ste %edia el ancla$e de la

%e%-rana nuclear al citoes4ueleto

• "atrón de marcación

_%e%-rana

nuclear

• 7ontroles

_{%usculo procesado por}

(52)

(53)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

•

M*,SI8%

• ,eacciona intensa%ente con la cadena alfa > 5%erosina6 de la la%inina en %9sculo es4uelético hu%ano

•

speci)cidad

• ,eacciona intensa%ente con la cadena alfa > 5%erosina6 de la la%inina en %9sculo es4uelético hu%ano

•

"atrón de marcación

%arcación de %atriz e;tracelular de %9sculos

•

7ontroles

(54)

(55)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

•

MI,G8I8%

• _{1l gen de la %iogenina integra una fa%ilia de}

genes reguladores %iogénicos+ incluidos MyoD+ %yfB y M,)@.

• _{Codican un con$unto de factores de transcripción}

esenciales para el desarrollo del %9sculo.

•

"atrón de marcación

_{nuclear y en %enor}

grado citoplas%atica

•

7ontroles

_{ra-do%iosarco%a+ tu%or de ill%s+}

(56)

(57)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

• MI,G/,-I8%

• _{He%oproteína %uscular+ estructural y}

funcional%ente

%uy

parecida

a

la

he%oglo-ina+ contiene un grupo he%o con

un 0to%o de hierro+ y cuya función es la

de al%acenar y transportar o;ígeno.

• "atrón de marcación

_citoplas%a

(58)

(59)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

•

MEo&1

• proteína hu%ana con un i%portante papel en la regulación de la diferenciación del te$ido %uscular.

•

speci)cidad

• _{egati!a para te$ido %uscular %aduro+ %uy}

intenso en celulas tu%orales de ra-do%iosarco%as

•

"atrón de marcación

_nuclear •

7ontroles

_{ra-do%iosarco%a}

(60)

M?,&1 en

(61)

%nticuerpos 6tilizados

en tejido muscular

•

Sarcoglicano

• )or%a parte del co%ple$o de proteínas responsa-les de conectar el citoes4ueleto de las -ras %usculares con la %atriz e;tracelular+

•

speci)cidad

• 1l clon &d=G>N& detecta la proteína alfa: sarcoglicano 5adhalina6 en el sarcole%a de las -ras %usculares es4ueléticas y cardíacas.

•

"atrón de marcación

%e%-rana

•

7ontroles

(62)

(63)

%"/I7%7I8:

%-&,MI,S%7,M%

• _{Tu%or %aligno indiferenciado de te$idos -landos}

4ue afecta general%ente a ni7os.

• _{*uede afectar estructuras de la ca-eza y cuello+}

aparato genitourinario+ y e;tre%idades.

• _{3a$o la H1 la %orfología indiferenciada de sus}

células hace i%posi-le deter%inar a 4ue tipo de patología corresponde.

• _{a ih4 per%ite por lo tanto+ deter%inar con}

(64)