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Antecedentes del Mandante
Razón Social ADVANCED INTEGRATED TECHNOLOGIES SPA
RUT 76.951.378-7
Dirección Exequiel Fernández 3397, Macul, Santiago.
Nombre contraparte técnica Ignacio Gajardo
Cargo contraparte técnica Ingeniero de Desarrollo
E-mail contraparte técnica [email protected]
Antecedentes del Cliente (si es distinto al Mandante)
Razón Social ADVANCED INTEGRATED TECHNOLOGIES SPA
RUT 76.951.378-7
Antecedentes del Servicio
Cuerpo del informe 11 hojas (incluye portada)
Fecha ensayo noviembre de 2019
Dirección ensayo Vicuña Mackenna Nº 4860, Macul – Santiago
Autores Dictuc S.A.
Información Contractual Contrato N°:
OC N°: 1909003
Cotización N°: SERPROES-037-19 Descripción de muestra Muestras líquidas para ensayo
Descripción de ensayo Determinación CMI-CMB
Sra. María Victoria Letelier Responsable Técnico
Dictuc S.A.
Sra. Victoria Leighton Gerente de Unidad
Dictuc S.A.
Sr. Felipe Bahamondes Gerente General
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1. Antecedentes
De acuerdo a lo solicitado por el señor Ignacio Gajardo, a nombre de Advanced Integrated Technologies SpA, en el mes de septiembre de 2019, El personal del área de alimentos y análisis químico de DICTUC S.A. procedió a realizar ensayos microbiológicos para la determinación de la concentración mínima inhibitoria y concentración mínima bactericida, CMI y CMB, respectivamente, para 3 muestras líquidas entregadas por el cliente.
El procedimiento se realizó de acuerdo a la metodología entregada por el cliente (mediciones d e absorbancia a 620 nm, leídos en equipo Elisa disponible).
2. Descripción de la muestra
El ensayo se realizó sobre tres soluciones identificadas como sobrenadante, desengrasante 1 y desengrasante 2 (Figura 1). Las muestras ingresaron con los números correlativos OT 2017, L-9727 a L-9729.
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3. Alcances y Metodología
Para el ensayo se utilizó Escherichia coli (ATCC 25922) y Staphylococcus aureus (ATCC 25923), además de caldo Luria-Bartani (LB) y agar Luria-Bertani (LB). Todos los trabajos de inoculación y exposición se realizaron en campana de flujo laminar cuyas superficies se esterilizaron con luz UV y etanol al 70%.
a. Obtención del cultivo de ensayo:
Una azada proveniente de un cultivo fresco en agar nutritivo se inoculó en 10ml de caldo LB e incubada a 37 C durante 24 horas para posteriormente realizar un segundo pasaje con 10uL de cultivo a otro tubo con caldo LB e incubado a 37 C por 20 horas.
b. Inmediatamente después de obtener el cultivo se procedió como sigue:
Después de obtener los cultivos previamente crecidos, éstos fueron medidos por espectrofotometría para determinar la densidad óptica a una longitud de onda de 620 nm.
Enseguida se realizan diluciones al cultivo puro, hasta obtener la absorbancia de trabajo (0,02 nm). c. Determinación de la concentración mínima inhibitoria (CMI):
Una vez obtenidos los cultivos diluidos de las dos cepas bacterianas, se procedió a realizar diluciones seriadas de las tres soluciones a prueba (sobrenadante, desengrasante 1 y desengrasante 2) con agua ultra pura utilizando factor de dilución de 1:2 hasta completar la dilución 1:4096.
Después de realizadas las diluciones, se añadieron 50 uL de cada dilución de las soluciones a testear, más 50 uL del cultivo con absorbancia 0,02 nm dentro de un pocillo de Elisa, en quintuplicado. Se incubó durante 24 horas a 37 C.
Paralelamente se realizaron controles para corroborar la validez del experimento: medio estéril, Escherichia coli (E. coli sin aditivos) y Staphylococcus aureus (S. aureus sin aditivos).
Transcurrido este tiempo se observó presencia de turbidez en los pocillos de las placas, que indicaran signos de crecimiento bacteriano y se midió la absorbancia a 620 nm con un lector de placas Elisa. d. Determinación de la concentración mínima bactericida (CMB):
Una vez determinado el CMI, se tomaron 50 uL del contenido de los pocillos de donde se observó crecimiento y se sembró en placas de agar LB, incubando por 24 horas a 37 C.
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4. RESULTADOS
a. Determinación CMI Escherichia coli. Sobrenadante
Figura 2: CMI de sobrenadante Desengrasante 1
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Figura 3: CMI de desengrasante 1 Desengrasante 2
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b. Determinación CMI Staphylococcus aureus. Sobrenadante
Figura 5: CMI de sobrenadante Desengrasante 1
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Figura 6: CMI de desengrasante 1 Desengrasante 2
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5. Conclusión
Según los resultados obtenidos de este estudio de CMI, y para las muestras analizadas, se indica lo siguiente; Se observa que la concentración mínima inhibitoria (CMI) obtenida con la cepa en estudio Escherichia
coli, para las muestras ensayadas es:
Sobrenadante 1:256
Desengrasante 1 1:64 Desengrasante 2 1:128
Se observa que la concentración mínima inhibitoria (CMI) obtenida con la cepa en estudio Staphylococcus aureus, para las muestras ensayadas es:
Sobrenadante 1:256
Desengrasante 1 1:64 Desengrasante 2 1:128
Según los resultados obtenidos de este estudio de CMB, y para las muestras analizadas, se indica lo siguiente; Se observa que la concentración mínima bactericida (CMB) obtenida con la cepa en estudio Escherichia
coli, para las muestras ensayadas es:
Identificación Porcentaje de efectividad (E%) Rango de concentración
Sobrenadante 99,9 1:2 a 1:256
Desengrasante 1 99,9 1:2 a 1:64
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Se observa que la concentración mínima bactericida (CMB) obtenida con la cepa en estudio Staphylococcus aureus, para las muestras ensayadas es:
Identificación Porcentaje de efectividad (E%) Rango de concentración
Sobrenadante 99,9 1:2 a 1:256
Desengrasante 1 99,9 1:2 a 1:64
Desengrasante 2 99,9 1:2 a 1:64
NOTAS:
1. Las muestras fueron proporcionadas por el cliente, quien se responsabiliza de la correcta identificación de éstas
2. La información contenida en el presente informe constituye el resultado de un ensayo, calibración o inspección técnica específica, acotada únicamente a las piezas, partes, instrumentos o patrones o procesos analizados, lo que en ningún caso permite al solicitante afirmar que sus productos han sido “certificados por Dictuc”, ni reproducir total o parcialmente el logo, nombre o marca registrada de Dictuc, salvo que exista una autorización previa y por escrito de Dictuc.
Normas Generales
La información contenida en el presente informe constituye el resultado de un ensayo, calibración o inspección técnica específica acotada únicamente a las piezas, partes, instrumentos, patrones o procesos analizados, lo que en ningún caso permite al Mandante afirmar que sus productos han sido certificados por Dictuc ni reproducir de ninguna forma el logo, nombre o marca registrada de Dictuc.
El Mandante declara conocer y aceptar los términos y condiciones generales para la prestación de servicios, disponibles para todo el público en su sitio web oficial www.dictuc.cl/tyc
