CROMATOGRAFIA

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INFORME DE LABORATORIO 3 INFORME DE LABORATORIO 3

CROMATOGRAFIA

PRESENTADO POR:

JOSE DA

JOSE DAVID SERNA MO

VID SERNA MORALES

RALES

JESUS ALEJANDRO GAMBOA MESA

PROFESORA:

LUZ AMPARO

LUZ AMPARO VÉLEZ

VÉLEZ

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

ESCUELA DE MICROBIOLOGIA

ASIGNATURA:

QUIMICA Y LABORATORIO

MEDELLIN

2016

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Objetivo general:

- Separar una mezcla de compuestos orgánicos en solución, mediante cromatografía de capa fina.

-Objetivos espec!icos:

- Identificar cada uno de los compuestos separados comparándolos con muestras patrones

- Calcular el factor de retardo para cada una de las especies separadas incluyendo la muestra desconocida.

- Identificar el compuesto en la muestra problema.

- Separar acetaminofén y cafeína de un fármaco por cromatografía de columna.

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La cromatografía en capa fina es una técnica usada para separar moléculas relativamente peue!as, al igual ue otras cromatografías utiliza una fase móvil y una fase estacionaria y su principio es el mismo" la sustancia de interés se ad#iere a la fase estacionaria o se mueve con la fase móvil, la fase estacionaria puede ser variada" puede ser de papel, celulosa o de un gel de silicato unido a una superficie sólida, una placa de aluminio, vidrio, plástico o papel, el tipo de fase estacionaria depende del tipo de moléculas ue se uiere separar. La fase estacionaria consiste en agua un solvente orgánico o una mezcla de ambos. La cromatografía en capa fina permite, determinar el grado de pureza de unas sustancias, comparar muestras y realizar el seguimiento de una reacción.

Cromatografía de columna, $n este tipo de cromatografía, la fase estacionaria utilizada, es decir, el absorbente, se coloca en el interior de una columna de vidrio, la cual finaliza con una llave para controlar el paso de sustancias al e%terior de la columna. La fase estacionaria se impregna con el eluyente o fase móvil. Seguidamente la mezcla orgánica ue nos interesa separar la depositamos por la parte superior de la fase estacionaria, y así la fase móvil podrá ir atravesando el sistema. DATO$ g F a s e 8 . 2 F a s e 6 . 4

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& ' & '

RE$%LTADOO$

Luego de realizar la prueba se puede observar ue la elución situó a los

compuestos de la siguiente manera, ()naftol, *esorcinol y ácido gálico, ordenadas por su polaridad, en ambas placas se puede observar ue aparentemente la

muestra carece de resorcinol, teniendo porciones de ácido gálico y ()naftol . + partir de la placa .- por su mayor resolución realizaremos los cálculos del factor de retardo.

La distancia recorrida por el solvente fue de ,/ cm a partir de este dato se calculara el factor de retardo para los compuestos. A c i d o G á l i c o A c i d o G á l i c o R e s o r c i n o l R e s o r c i n o l B - n a f t o l B - n a f t o l 5,52 cm 4,67 cm 2,28 cm 0.03 cm

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En &'estra (esconoci(a )*+: en la muestra aparentemente no se encuentra el resorcinol. B-na!tol: R!, 0.01 cm 2 0 ,/ ci(o g.lico: R!, -,3 cm 2 0,4-,/ cm En &'estra patr/n: B-na!tol: R!, 0.01 cm 2 0 ,/ cm Resorcinol: R!, /,/4 cm 2 0,-5 ,/ cm ci(o g.lico: R!, -,3cm 2 0,4-,/ cm "ROMATO0RAFIA DE "OL%MNA

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"ro&atogra!a en capa !ina:

$l acetato de etilo es un compuesto ue polariza muy fácil, al encontrarse con el ()naftol, un compuesto no polar, #ace ue este se uede en la fase estacionaria, aunue por la presencia de #e%ano este se mueve un poco. $ntre más polar sea el compuesto su *f es mayor. &or lo cual se sit6a el ácido gálico como el

compuesto con mayor *f.

La muestra 7-4 contiene ()naftol y ácido gálico. "ro&atogra!a (e col'&na8

Luego de realizar la observación de este tipo de cromatografía podemos decir ue la velocidad de arrastre de cada componente 9azul de metileno y naran:a de

metilo;, depende de su grado de absorción en la fase estacionaria y de su afinidad por la fase móvil.

&ara la fase móvil se utilizó silica gel, para llevar acabo la separación de etanol. +l realizar el e%perimento el compuesto ue salió primero de la columna fue el naran:a de metileno por ser la sustancia menos polar, el azul de metileno por ser más polar se liga con la fase móvil, por esta razón sale de ultimo.

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"ON"L%$IONE$

- Se determinó ue la muestra desconocida 7-4 contiene ()naftol y ácido gálico.

- La cromatografía de columna y la de capa fina son técnicas de separación de método fácil de aplicación.

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1RE0%NTA$

2 <=ué tipos de cromatografía se utilizan seg6n la fase estacionaria>

Cromatografía de reparto8 la fase estacionaria suele mantenerse fi:a mediante un soporte poroso, papel o celulosa, esta suele ser una mezcla de disolventes medianamente miscibles en el agua, cuanto más soluble en agua sea la sustancia a cromatografíar mas retenida y retrasada uedara en el desarrollo cromatografico.

Cromatografía de adsorción8 la fase estacionaria retiene con más o menos poder a la sustancia a cromatografiar por un fenómeno de adsorción en superficie. &ara ello se utiliza al6mina, gel de sílice, la cromatografía de afinidad es un tipo de cromatografía de desorción, en la ue la fase estacionaria tiene afinidad biológica por la sustancia ue se uiere separar" se utilizan así, pare:as antígeno)anticuerpo, enzima)in#ibidor, en la cromatografía de intercambio iónico, la fase estacionaria retiene a la sustancia por su carga iónica, las sustancias ue tengan carga opuesta a la resina uedara en la fase estacionaria y las cargas iguales a la resina serán arrastradas por la fase móvil, las sustancias ue uedan unidas a la resina pueden eluir si se les cambian las condiciones, variación de p? fuerzas iónicas" este tipo de cromatografía se #ace en columna y los soportes utilizados son polímeros como la celulosa, poliestireno carbo%ilado o poliaminados.

@e acuerdo al soporte físico donde se #ará la separación, #abla de dos tipos de cromatografías.

Cromatografía en capa fina8 la fase estacionaria se e%tiende sobre una placa.

Cromatografía en columna8 la fase estacionaria se empaueta en una columna y se #ace pasar solventes a través de ella para separar o identificar sustancias.

4 <&ara ué se utiliza la cromatografía y en ué se diferencia de la electroforesis>

$s una técnica de separación de compuestos, se utiliza para la identificación y verificación de rendimiento de reacciones uímicas" y la diferencia entre cromatografía y electroforesis es ue la cromatografía separa sustancias sin ning6n uso de energía como lo #ace la electroforesis, ya ue esta separa moléculas seg6n la movilidad de estas en un campo eléctrico a través de una matriz porosa, la cual los separa por tama!o y por carga eléctrica.

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3 <$n ué campos es más utilizada la cromatografía sobre papel 5

La cromatografía sobre papel es muy parecida a la cromatografía en capa fina, e%cepto ue se usa papel de filtro de alta calidad como adsorbente o fase estacionaria, el fundamento de la cromatografía sobre papel no es e%actamente la adsorción, sino más bien una combinación de adsorción y reparto, el reparto ocurre entre el agua ue #idrata la celulosa y la fase móvil orgánica, el papel se emplea cuando se desea separar compuestos polifuncionales o muy polares, por e:emplo azucares, aminoácidos" estos compuestos no pueden ser cromatografiados en adsorbentes más activos" este método se realiza parecidamente a la ALC.

-. 'encione cinco solventes ue se utilicen en ALC

• ?e%ano 9no polar;

• @iclorometano 9bastante polar; • Bter di etílico 9medianamente polar; • 'etanol 9muy polar;

• Cloroformo 9polar;

. <Se podrá utilizar agua como solvente en ALC>

o se puede utilizar agua como solvente, ya ue esta no es muy volátil, también porue se tardaría muc#o en subir por la fase estacionaria de sílice, y lo más importante es ue al ser el agua tan polar no interact6a con las sustancias ue en su mayoría son compuestos orgánicos y por esto es una fase móvil de poca afinidad con la cromatografía en capa fina.

. Si se tiene como eluente #e%ano)éter 585 y se necesita aumentar la polaridad de este <Cuál de los dos componentes se necesita aumentar> Se debería aumentar el éter ue es medianamente polar, y el #e%ano por ser un #idrocarburo es un compuesto no polar, por consiguiente para aumentar la polaridad se debe aumentar de éter.

3. + un eluente benceno)cloroformo 585 se reuiere disminuir la polaridad <cuál de los dos componentes aumentaría>

&ara disminuir la polaridad se debería aumentar el componente benceno y disminuir el cloroformo, ya ue el benceno es un aromático no polar, entre más proporción #aya de este menos polar será la eluente.

4. <$n ué se diferencian los términos adsorción y absorción>

La adsorción es un proceso físico o uímico por el cual átomos, iones o moléculas son atrapados o retenidos en la superficie de unas materias y absorción es un fenómeno físico o uímico donde átomos, moléculas o iones pasan de una primera fase a otra incorporándose al volumen de la segunda fase

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BIBLIO0RAFIA$

Dilson Cardona Ealeano" *oberto amaris" 'anual de prácticas de fundamentos de uímica orgánica" universidad de +ntiouia.

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"IBER0RAFIA$ #ttp8FFGGG.uprm.eduFbiologyFprofsFvelezFfina.#tm #ttp8FFestudiarfarmacia.blogspot.com.coF/055F0-Ftipos)de)cromatografia.#tml #ttp8FFdepa.fuim.unam.m%FamydFarc#iveroF$%posicionHelectroforesisH043. pdf #ttps8FFboos.google.com.coFboos> id2u?d?S4JKICMpg2&+13Mlpg2&+13Md2cromatografiaNsobreNpapelN usosMsource2blMots2@1nOvbIPMsig2Qv(R0sKK%lC&%%KLaJPuHg4M#l 2esMsa2KMved20C==+$GC/oC#'Itcz%oaEy+I#*TeC#1KUgEC7v 2onepageM2cromatografiaV/0sobreV/0papelV/0usosMf2false #ttp8FFblog.mariogonzalez.esF/003F01Fdiferencia)entre)adsorcion)y) absorcion.#tml #ttp8FFuimica.laguia/000.comFgeneralFcromatografia)en)columna #ttp8FFGGG.ub.eduFoblFoblV/0castellanoFcromatografiaHtipus.#tml