UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
ESCUELA DE POSTGRADO
PROGRAMA DOCTORAL EN CIENCIAS BIOMÉDICAS
EFECTO GASTROPROTECTOR DEL EXTRACTO TOTAL DE Solanum tuberosum L. var. “papa blanca”
y
Croton lechleri L. “sangre de grado” EN RATTUS RATTUS VAR. ALBINUS CON DAÑO GÁSTRICO POR ACCIÓN DEL ETANOLAUTOR : MSc. LUIS FELIPE GONZALES LLONTOP ASESOR : Dr. JOSE LLANOS QUEVEDO
TRUJILLO – PERÚ 2013
No de Registro: _________
TESIS PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:
DOCTOR EN CIENCIAS
BIOMÉDICAS
DEDICATORIA
A mis queridos padres:
León Luis e Isolina Marcela porque a través de su ejemplo inculcaron en mí el deseo de superación.
A mis amados hermanos:
Delia Ángela y Jorge Guillermo por su comprensión, inspiración y estímulo para superarme cada día y alcanzar mis metas.
A mí amado hijo:
Luis Gabriel por ser el motivo de mi constante superación y desarrollo profesional.
AGRADECIMIENTO
Al gran JEHOVÁ Dios de los Hebreos en cuyas manos está mi vida, por concederme su amor, protección y dirección.
Al Dr. JOSÉ LLANOS QUEVEDO
verdadero MAESTRO Y AMIGO, mi reconocimiento y gratitud, por su invalorable apoyo y orientación
en la realización del presente trabajo de tesis.
A la Dra. MARGARITA ROMAN DE LLANOS
reconocida MAESTRA cuya invalorable contribución y participación fue muy importante para la realización del presente trabajo.
PRESENTACIÓN
Señores miembros del Jurado Dictaminador:
Dando cumplimiento a las disposiciones emanadas del reglamento para la obtención de grados de la Escuela de Postgrado de la Universidad Nacional de Trujillo, me es honroso presentar y someter a vuestra consideración y elevado criterio, el presente trabajo de tesis titulado:
Efecto gastroprotector del extracto total de Solanum tuberosum L. var. “papa blanca” y Croton lechleri L. “sangre de grado” en Rattus rattus var. albinus con daño gástrico por acción del etanol
Con el que pretendo optar el grado de Doctor en Ciencias Biomédicas. Esperando que el presente trabajo sea de vuestra aprobación.
Trujillo, 30 de enero 2013
MSc. Luis Felipe Gonzales LLontop Autor
JURADO DICTAMINADOR
………. Dra. Elena Alvarado León
Presidente
……… Dra. María Reyes Beltrán
Secretaria
……….. Dr. José Llanos Quevedo
INDICE
Pag.
RESUMEN………i
ABSTRACT………..ii
I. INTRODUCCIÓN………..01
II. MATERIAL Y MÉTODOS………09
III. RESULTADOS………13
IV. DISCUSIÓN………28
V. CONCLUSIONES………...37
VI. PROPUESTA………38
VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………..39 ANEXOS
RESUMEN
Autor: MSc. Luis Felipe Gonzales LLontop
Título: Efecto gastroprotector del extracto total de Solanum tuberosum L. var. “papa blanca” y Croton lechleri L. “sangre de grado” en Rattus rattus var. albinus con daño gástrico por acción del etanol
Asesor: Dr. José Llanos Quevedo
Páginas Totales: 50
Año: 2013
Institución: Universidad Nacional de Trujillo
El estudio fue orientado a evaluar el efecto gastroprotector del extracto total de Solanum tuberosum L. var. “papa blanca” y Croton lechleri L. “sangre de grado” en Rattus rattus var. albinus con daño gástrico inducido por etanol en un modelo experimental usado en ratas para producir injuria gástrica. Se evaluó a 35 animales divididos en 07 grupos de tratamiento: control (solo con etanol), problema (extractos aplicados) y patrón (ranitidina). Cada grupo estuvo conformado por 05 especímenes a cada uno se les aplicó en ayunas y por 3 días las dosis de: 200 mg/Kg (Problema I), 400 mg/Kg (Problema II), 200 mg/Kg y 400 mg/Kg (Problema III), 400 mg/Kg y 800 mg/Kg (Problema IV) y 100 mg/Kg (Patrón) de ranitidina que fue el grupo de referencia para evaluar y comprobar el efecto de nuestro tratamiento. Después de una hora se administró por vía orogástrica 1 mL de etanol para inducir la úlcera. 7 horas después de aplicado el etanol, las ratas fueron sacrificadas para realizarse la evaluación macroscópica y microscópica y observar el grado de lesiones ulcerosas en los diferentes grupos en el estómago de los animales. El pretratamiento con Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. administrados independientemente redujo parcialmente (p<0,05) las lesiones ulcerosas con necrosis hemorrágica inducidas por etanol, presentando un 20,21 % y 31,26% cada uno; mientras que a una doble dosis del extracto presentó 93,69 % mostrando un alta reducción ulcerosa. La ranitidina presentó un efecto gastroprotector (p<0,05) en un 61,17% de reducción de la lesión. En las condiciones experimentales de nuestro laboratorio a 400 mg/Kg y 800 mg/Kg (doble dosis) del extracto utilizado se observó el mejor efecto antiulceroso.
Palabras clave: Solanum tuberosum L., Croton lechleri L., lesión gástrica, agente antiulceroso, modelo animal, etanol.
ABSTRACT
Autor: MSc. Luis Felipe Gonzales LLontop
Título: Gastroprotective effect of total extract of Solanum tuberosum L. var. “white potato” and Croton lechleri L. “sangre de grado” in of Rattus rattus var. albinus with gastric damage by the action of ethanol
Asesor: Dr. José Llanos Quevedo
Páginas Totales: 50
Año: 2013
Institución: Universidad Nacional de Trujillo
He study was designed to evaluate the gastroprotective effect of total extract of Solanum tuberosum L.var. "White potato" and lechleri Croton L. "sangre de grado" in Rattus rattus var. albinus with ethanol-induced gastric damage in an experimental model used in ratas for produce gastric injury. We evaluated 35 animals divided into 07 treatment groups: control (ethanol only), problem (extracts applied) and pattern (ranitidine). Each group consisted of 05 specimens each were applied in three days fasting and doses: 200 mg / kg (Issue I), 400 mg / kg (Issue II), 200 mg / kg and 400 mg / kg (Problem III), 400 mg / kg and 800 mg / kg (Issue IV) and 100 mg / kg (Pattern) of ranitidine was the reference group to evaluate and test the effect of our treatment. After an orogastric horase administered 1 mL of ethanol to induce ulcer. 7 hours after application of the ethanol, the rats were sacrificed to perform macroscopic and microscopic evaluation and observe the degree of injury ulcerosas in different groups in the stomach of animals. Pretreatment with Solanum tuberosum L. and Croton lechleri L.administrados independently partially reduced (p <0.05) with ulcerative lesions ethanol-induced hemorrhagic necrosis, having a 20.21% and 31.26% each, while a double dose of the extract present 93, 69% show a high reduction colitis. Ranitidine showed a gastroprotective effect (p <0.05) in a 61.17% reduction of the lesion. Under the experimental conditions of our laboratory to 400 mg / Kg and 800 mg / Kg (double dose) extract used was observed better antiulcer effect.
Keywords: Solanum tuberosum L., Croton lechleri L., injury gastric, ulcer agent, animal model, ethanol.
I. INTRODUCCIÓN
Actualmente se está empleando las plantas medicinales para el tratamiento de una serie de enfermedades como: diabetes mellitus, cirrosis, VIH-sida, gastritis, ulceras gastrointestinales, síndrome de intestino irritable, hipertensión, asma, artritis reumatoide, migraña, epigastralgia, colitis ulcerosa, cólicos abdominales, estreñimiento, gastropatía, anemia aplásica, trombocitopenia, cáncer de mama, cáncer de pulmón y otros (1,2).
En cuanto a las enfermedades gástricas constituyen hoy día un dilema clínico-social de repercusión económica a nivel mundial y es una de las enfermedades más graves del aparato digestivo, debido a su alta incidencia, amplia distribución geográfica, morbilidad y consumo de medicamentos farmacológicos (3).
Las patologías del aparato digestivo representan un problema de salud a nivel global en todo el mundo entre ellas se encuentran: gastritis, úlceras pépticas y duodenales y en general los diversos trastornos del tubo digestivo alto (estómago) teniendo una alta incidencia y elevada morbilidad (3,4).
La úlcera gástrica es el deterioro de las capas de la pared gástrica debido al rompimiento del epitelio entre los procesos defensivos de la mucosa y el ataque del jugo gástrico, que en condiciones normales no ocurre; y es asociado a múltiples factores. Entre ellos tenemos: una elevada secreción de ácido, anomalía pilórica, incremento en la secreción de gastrina, disturbio de la motilidad del píloro, reducción del moco protector de la mucosa gástrica, el uso incorrecto de antiinflamatorios no esteroideos (AINES), presencia de Helicobacter pylori, estrés y estilo de vida inadecuado (5,6,7,8,9).
El epitelio de la mucosa gástrica y de las células mucosas del cuello secretan moco gástrico. El moco secretado forma una capa sobre la superficie mucosa que le permite resistir las agresiones producidas por el ácido clorhídrico, la pepsina y los agentes nocivos que ingresan con la ingesta. Este mecanismo, denominado “citoprotección”, está integrado por un conjunto de factores que actúan formando la barrera mucosa gástrica. El moco forma una capa inmóvil adyacente a la superficie que retiene al bicarbonato liberado. A medida que el bicarbonato progresa hacia la luz del órgano, neutraliza el ión H+ que está difundiendo en sentido contrario, produciendo un
gradiente de pH que va de 1,5 a 7,0. Si esta barrera se debilita por la acción de agentes nocivos o se rompe por un aumento de la motilidad gástrica, cantidades importantes de iones H+ difunden nuevamente hacia el tejido provocando que las células cebadas o mastocitos liberen histamina e incrementen la permeabilidad capilar, siendo el resultado, la formación de úlceras gástricas(10).
Etanol ejerce un efecto bifásico dosis dependiente sobre la secreción ácida gástrica en humanos y en diferentes modelos animales. Así, en seres humanos bajas concentraciones de etanol (1.4% – 4% vol/vol) han demostrado estimular moderadamente la producción de ácido, mientras que concentraciones de 5 – 40% no han ejercido ningún efecto o, más bien, un efecto inhibidor. Del mismo modo, investigaciones llevadas a cabo en mucosa gástrica de sapos, bajas concentraciones de etanol (2% – 10% vol/vol) estimulan la secreción de ácido clorhídrico (HCl) a nivel de la submucosa, mientras que concentraciones altas (>20%) tienen un efecto inhibitorio
(11,12)
.
En Sudamérica, las afecciones gástricas producidas por diversos factores son muy conocidos, ante ello, gran parte de la población recurre a tratamientos alternativos como la fitoterapia, por constituir un tratamiento de fácil obtención y bajo costo. Sin embargo, existen pocos trabajos experimentales con modelos en animales que confirmen la efectividad que pueden tener estos tratamientos sobre las lesiones gástricas y si sus efectos son comparables o no con los tratamientos convencionales(13).
La papa cuyo nombre científico es Solanum tuberosum L. es una planta que pertenece a la familia de las solanáceas, y es muy cultivada en toda sudamérica especialmente en los países de Perú y Chile. Este tubérculo es muy solicitado en el campo culinario por su riqueza en nutrientes, tales como: proteínas, vitaminas, minerales, carbohidratos, y otros compuestos. Su jugo viene siendo utilizado por empíricos en el tratamiento de diversas enfermedades, tales como las gastrointestinales, renales y otras(1,34).
La papa es una planta suculenta, herbácea, que presenta tubérculos (tallos subterráneos), los cuales se desarrollan al final de los estolones que nacen del tallo principal. Los tallos aéreos son de sección angular, y entre las axilas de las hojas y los
tallos se forman ramificaciones secundarias. El tallo es el órgano generalmente subterráneo, más o menos largo y cilíndrico; sus hojas son alternas, simples enteras o pinnatificas, frecuentemente con pelos estrellados y pelos glandulares, igual que los estolones. Las primeras hojas tienen aspecto de simples, luego vienen las hojas compuestas, imparipinada con 3-4 pares de hojuelas laterales y una hojuela Terminal. Entre las hojuelas laterales hay hojuelas pequeñas de segundo orden. La inflorescencia es cimosa; hermafroditas, regulares, tetracíclicas, pentámeras; son bisexuales
Dentro de los componentes nutritivos de la papa se encuentra en mayoría el agua que constituye el 80% del total. Luego siguen los carbohidratos que constituyen el 16-20% entre los que hay que destacar el grupo de los almidones que son polisacáridos complejos que se absorben como glucosa previa hidrólisis enzimática. La fibra alimentaria representa 1-2% del total de la papa y se encuentra preferentemente en la piel. La concentración de azucares sencillos es baja (entre 5% a 8%) siendo los más importantes la glucosa, fructosa y sacarosa.
Las proteínas son el nutriente más abundante después de los carbohidratos constituyendo el 2% del total asentándose mayoritariamente en el cortex (zona inmediatamente debajo de la piel) y la médula (zona central). Destacan las albúminas (49%) y globulinas (26%) como las fracciones proteicas más abundantes seguidas de prolaminas (4,3%) y glutelinas (8,3%). Asimismo destaca la presencia de gran cantidad de enzimas y aminoácidos libres cuyas concentraciones dependen de la forma de cultivo y almacenamiento. Los lípidos no tienen importancia desde un punto de vista cuantitativo (0,1%) y se encuentran mayoritariamente en la piel. Existe gran cantidad de vitaminas hidrosolubles tales como las vitaminas A y C y a1gunas del complejo B. También la papa es rica en minerales, los cuales constituyen el 1% del total de la papa, destacando el potasio como elemento mayoritario. En lo que se refiere a los componentes no nutritivos resaltan los pigmentos que son carotenoides responsables del color de la papa de color y las clorofílas que se pueden hacer patentes en el caso de papas expuestas al sol. Además existen ácidos orgánicos tales como cítrico, oxálico, fumdrico y málico que, además de regular la acidez de la savia de la papa, contribuyen al aroma y sabor.
Crotón lechleri L. (46)conocido como “sangre de grado” es una planta peruana y árbol de gran tamaño (crece de 10 a 20metros) que crece en ambientes tropicales y a lo largo de los trópicos y las regiones del Amazonas de América del Sur, de su corteza y de las hojas de donde se extrae una resina roja o “sangre” (latex), teniendo una larga historia de uso indígena en América del Sur. La usan las tribus indígenas en nuestro país internamente y externamente como cicatrizante de heridas, leucorrea, fracturas
(40,51)
y también en la medicina folklórica brasileña, para tratar enfermedades intestinales y úlceras gástricas. De la resina se obtienen sus principales componentes activos tales como: la taspina, la 3-4-O-Dimetilcedrusina, los polifenoles (catequinas y proantocianidinas) y su látex (savia pura) que es el más activo de todos sus componentes. Puesto que mucha de la investigación en sangre de grado se ha realizado en países en vías de desarrollo, gran parte de esta no ha sido publicada. Además de ello, la mayoría de los estudios han estado orientados a la determinación de sus componentes y no tanto en relación a sus propiedades, menos aún sobre sus propiedades curativas gastrointestinales (14,15,16).
El extracto total de Croton lechleri L. “sangre de grado” se utiliza como cicatrizante para el tratamiento de heridas con hemorragias y úlceras gástricas, gracias a la acción de los polifenoles que contiene su resina. La sangre de grado también tiene una acción antidiarreica, anti cancerígena y en afecciones de la piel. También la sangre de grado es conocida por sus propiedades curativas en su acción antiviral, antibacteriana, inmunomoduladora, astringente intestinal y antinflamatoria por la presencia de su resina como principio activo (17,18).
En la composición química de la sangre de grado se identificó esteroides, cumarinas, alcaloides (tipo isoquinoléico y fenantrénico), flavonoides, taninos (54%), saponinas (baja concentración), antocianinas, proantocianidina SP-303, antracenos; compuestos reductores (4%) como lactosa, galactosa y ramnosa, triterpenoides, compuestos fenólicos (ácido gálico); además contiene vitaminas A, E y C; también posee ácidos orgánicos débiles, almidón, celulosa, grasas, lignanos, mucilagos, proteínas, catequinas y otros (11,12,19,20).
Las cumarinas son fitoconstituyentes derivados de la α – benzopirona y muchas de ellas son fenólicas, por lo que se incluyen dentro de los derivados fenólicos. Se
clasifican, según la genina, en hidroxicumarinas, metoxicumarinas, furanocumarinas y piranocumarinas, pudiendo encontrarse en el vegetal en forma de heterósidos (6,39,48,58).
Las cumarinas tienen estructuras muy variadas, por lo que sus propiedades farmacodinámicas abarcan una amplia gama terapéutica. Entre todas ellas, podemos destacar la acción vitamínica P (disminuyen la permeabilidad capilar y refuerzan los capilares), antiinflamatoria, antiespasmódica, vasodilatadora coronaria, sedante e hipnótico suave, estrogénica, antihelmíntica, antibacteriana y antimicótica, analgésica e hipotérmica. A su vez se ha demostrado efecto citotóxico sobre células tumorales, actividad antiulcerosa en algunas cumarinas tanto a nivel de protección celular como antisecretora (6,21,22,23,24).
Los flavonoides son un tipo de pigmentos vegetales cuya estructura posee un esqueleto C6-C3-C6. Los principales grupos estructurales que entran a formar parte del
mencionado término genérico son: flavonas, flavonoles, isoflavonas, flavononas, catequinas, leucoantocianos, antocianos, chalconas y auronas (25,26).
Estos compuestos son sustancias fácilmente oxidables y, por lo tanto, antioxidantes naturales porque se oxidan con mayor rapidez que otro tipo de sustancia. Las aplicaciones terapéuticas más importantes son: antivirásica, antiinflamatoria, citotóxica (de forma indirecta por medio de inhibición enzimática). En investigaciones realizadas se ha comprobado la actividad inhibitoria frente a patógenos como Staphylococcus aureus, Escherichia coli y Candida albicans. Otras acciones consideradas muy significativas son sus efectos cardioprotectores, y existen indicios probados de su uso para el tratamiento del asma, por su actividad espasmolítica (27).
Los taninos están constituidos por un amplio grupo de compuestos de origen vegetal, sin nitrógeno, hidrosolubles, con estructura polifenólica, capaces de precipitar las macromoléculas (proteínas, celulosa, gelatina), alcaloides y metales pesados. Esta capacidad para precipitar las proteínas es la base de sus dos propiedades principales: capacidad de curtir la piel y poder astringente. Los taninos son capaces de precipitar las proteínas salivares y las glucoproteínas de la boca, por lo que la saliva pierde su poder lubricante y se obtiene un sabor astringente. (18,28,29).
Serkedjieva et al (1999), les confiere acción bactericida y bacteriostática, por lo que son considerados antisépticos; ejercen también efecto antifúngico y antiviral.Además, son capaces de captar radicales libres e inhibir la peroxidación lipídica. Inhiben la autooxidación del ácido ascórbico (vitamina C) y disminuyen los niveles de colesterol en sangre.
Las saponinas son un grupo de fitoconstituyentes que aparecen normalmente como heterósidos y son encontrados mayoritariamente, en el reino vegetal, cuyas estructuras están formadas por una parte glucosídica (azúcar o cadena azucarada) que puede ser neutra o ácida y otra no glucosídica (aglicón o genina) denominada sapogenina.
Las saponinas tienen efecto antiedematoso, antiinflamatorio, estimulante, tonificante, antioxidante, antimicrobiano, antivírico y antimicótico. Por otra parte, se ha demostrado que pueden producir un efecto citoprotector gástrico y antifúngico (28,29).
Los alcaloides son sustancias que suelen tener actividad farmacológica incluso a dosis muy bajas. En estudios recientes, se ha demostrado actividad antiinflamatoria, antipirética, antimalárica, hipoglucemiante, antipsoriática, antihelmíntica, antiagregante plaqueatario, antimicrobiano y citotóxica frente a carcinoma humano (30).
Los triterpenos son compuestos de treinta carbonos biosintetizados por condensación isoprénica. Estas sustancias poseen propiedades farmacodinámicas muy variadas, en relación con las diferentes funciones ligadas al esqueleto terpénico. Algunas de ellas son irritantes de la piel y mucosas por lo que son utilizadas como rubefacientes, antisépticos, vermífugos y abortivos (31).
Las plantas medicinales han revelado secretos a través de un largo proceso en el transcurso del cual, el ser humano, en su íntimo contacto con la naturaleza, ha mantenido una lucha incesante para sobrevivir, ejerciendo la necesidad de adquirir conocimientos de identificación sobre lo que se alimenta, cura y mata; lo importante es que la medicina moderna descubre remedios antiguos en las plantas y ciertos compuestos químicos que ejercen una cierta influencia sobre la fisiología humana (32).
El Perú presenta una gran riqueza de plantas medicinales nativas, que es uno de los pilares de la etnofarmacología y la medicina tradicional, desde la época del incanato hasta la actualidad. Siendo estas utilizadas en forma empírica por sus bondades terapéuticas en el cuidado y restauración de la salud (33).
Actualmente se está empleando las plantas medicinales para el tratamiento de una serie de enfermedades que afectan a diversas poblaciones; conocedores de la necesidad comercial y económica, de las diferentes especies vegetales, específicamente Solanum tuberosum L. “papa blanca” var. Yungay y Croton lechleri L. “sangre de grado” es menester conocer los efectos de su aplicación en el desarrollo de ulceras gástricas en modelos animales con la finalidad de desarrollar y divulgar el valioso patrimonio de conocimientos y tecnologías artesanales de manejo y uso de estos recursos naturales (34).
Ante este problema, mediante este estudio se pretende presentar y utilizar a Solanum tuberosum L. “papa blanca” var. yungay y la resina de Croton lechleri L . “sangre de grado” como un posible agente gastroprotector de lesiones ulcerosas en la pared digestiva de Rattus rattus var. albinus por los principios biológicos activos presentes y atribuidos científicamente a estas plantas.
En nuestro país, en un estudio realizado en el periodo 2000-2005, se comunicó, una prevalencia de ulcera péptica de 83,09% por 1000 pacientes sintomáticos, a los cuales se les realizo una endoscopia, siendo la ulcera duodenal la más común, Sin embargo, en los últimos años, la ulcera gástrica se ha ido incrementando, caracterizándose por presencia de hemorragia alta y dispepsia; además, la frecuencia de infección por Helicobacter pylori fue 65,3% en todas las ulceras pépticas, 74,3% en ulcera duodenal y 55,4% en ulcera gástrica. Cabe agregar que el descubrimiento de H. pylori ha esclarecido mucho sobre la epidemiologia clínica de la ulcera péptica (65).
La perforación de la mucosa como forma ulcerosa con frecuencia está rodeado por una porción de tejido inflamado pero integro, lo cual sugiere que la gastritis constituye una lesión predisponente para el desarrollo de la ulcera gástrica (9). La mayor parte de las ulceras gástricas se presenta en la curvatura menor del estómago. Se estima
que algunas ulceras gástricas están relacionadas con el deterioro de la defensa de la mucosa, ya que en algunos de los pacientes afectados la capacidad secretora de ácido y de pepsina resulta normal e incluso menor de lo normal (35).
En los hospitales nacionales tal es el caso del Hospital Belén de Trujillo-La Libertad en más de 50 pacientes sobre la infección de Helicobacter pylori se demostró que esta bacteria era capaz de desarrollar (a través de sus productos de excreción activos como la ureasa, la catalasa y la fosfatasa alcalina) gastritis aguda y crónica, ulceras gastroduodenales, gastritis atrófica, cáncer gástrico y linfoma tipo MALT (36).
Ante la estrategia terapéutica utilizada por la ciencia médica de combatir las patologías con fármacos que contienen sustancias químicas sintéticas como los antibióticos y los antiinflamatorios no esteroideos (AINES), sin importar sus desastrosos efectos colaterales; el conocimiento y la aplicación de una terapia alternativa como es el consumo de extractos naturales de plantas a personas con dolencias gástricas, y su total curación a corto, mediano y/o a largo plazo, fue pues el propósito esencial de los autores de este trabajo.
Existen actualmente diversos modelos experimentales para abordar el estudio de productos vegetales con potencial eficacia antiulcerosa. El modelo de injuria gástrica aguda inducida por la administración de etanol absoluto ha sido utilizado ampliamente, para estudiar diversas plantas medicinales (37).
En este estudio nos propusimos aplicar un modelo experimental en ratas con daño gástrico inducida por etanol para evaluar el efecto antiulceroso de un extracto de Solanum tuberosum L. “papa blanca” var. yungay y Croton lechleri L. “sangre de grado” en Rattus rattus var. albinus individualmente y asociados.
MATERIAL Y MÉTODOS
2.1 Animales y manejo
Se utilizaron 35 ratas hembras de la especie Rattus rattus var. albinus, de 03 meses de edad y 250 g de peso promedio y en buen estado de salud; provenientes del Bioterio de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional de Trujillo. Los animales fueron acondicionados por 07 días como periodo de adaptación donde se mantuvieron en 07 grupos de 05 animales en jaulas metálicas incluyendo ciclos de luz-oscuridad; recibiendo agua a libertad y alimento concentrado con cambio diario de viruta y cama. En este periodo no se administró ninguna sustancia ni se realizó ningún tipo de procedimiento. El octavo día se tomó como día 01, las ratas estuvieron en ayuno por 24 horas antes del experimento.
Se pesó a todos las ratas albinas y fueron consignadas las observaciones necesarias en la ficha de recolección de datos de cada espécimen. El tiempo total del experimento duró tres días. Los animales fueron manipulados según las Normas de Ética de Experimentación Animal (38). Además, se cumplieron con los principios rectores básicos, aplicables a las investigaciones biomédicas con animales, elaborados por el Consejo de Organizaciones Internacionales de las Ciencias Médicas, OMS (Organización Mundial de la Salud), en 1985.
Material vegetal
La resina de Croton lechleri L. “sangre de grado”, familia de las Euphorbiaceae, se obtuvo cortando el tallo transversalmente varias veces (39), cuatro meses antes de ser sometida experimentalmente y provino del departamento de Iquitos (Perú) y se utilizó en su estado natural líquido, y fue conservada en frasco de vidrio estéril a 10ºC.
Se empleó el extracto de Solanum tuberosum L. var. “papa blanca” el cual se adquirió de la provincia de Chachapoyas y se empleó en su estado fresco durante el experimento. Se obtuvo a través de varias papas multifragmentadas y/o rayadas con el uso de un cuchillo y un rayador común de cocina. Luego se procedió a extraer el extracto de papa mediante el uso de una tela blanca, limpia y esterilizada, para luego presionar periódicamente la papa fragmentada hasta lograr un extracto puro que finalmente fue utilizado en el preciso momento del proceso experimental.
2.2 Material farmacológico
Se usó ranitidina en ampolla que contiene 2 ml/ 50 mg. Las ratas fueron anestesiadas con pentobarbital sódico (Halatal*, Sanivet), que contiene 6,5g en vehiculo y exipientes c. s. p. 100mL.
2.3 Cuantificación y dosificación del extracto de Solanum tuberosum L. y Croton
lechleri L.
En base a un trabajo piloto se determinó la dosis efectiva (DE)50 del extracto de
Solanum tuberosum L.y de Croton lechleri L. el que fue administrado a los animales de experimentación según grupo de tratamiento correspondiente en dosis diarias por tres días. El trabajo piloto fue realizado con el 20% del número total de los animales de experimentación (05 Rattus rattus var. albinus), a los cuáles (grupos problema I, II, III y IV) se les administró una dosis por separado de cada extracto así como una dosis y doble dosis del extracto combinado de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. hasta obtener el efecto antiulceroso deseado en la injuria de la mucosa digestiva inducida por etanol en el 50% de Rattus rattus var. albinus.
Métodos
Se aplicaron los tratamientos por tres días a través de una sonda orogástrica con una cánula metálica, consistentes en la administración de una dosis de cada extracto por separado así como una y doble dosis del extracto mixto de Solanum tuberosum L.y Croton lechleri L., y una dosis de ranitidina que fueron comparados con los grupos testigo y control, teniéndose en cuenta la definición de los siguientes grupos:
2.4 Inducción de úlceras gástricas por ingesta de etanol.
Grupo 1: Grupo Testigo que solo recibió solución salina fisiológica (SSF).
Grupo 2:(Grupo Control) recibieron una dosis de solución salina fisiológica (SSF) y una hora después fueron inducidos con etanol absoluto.
Grupo 3:(Grupo Problema I) Una dosis de Solanum tuberosum L. después de una hora se aplicó etanol absoluto.
Grupo 4:(Grupo Problema II) Una dosis de Croton lechleri L. después de una hora se aplicó etanol absoluto.
Grupo 5:(Grupo problema III) Una dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. después de una hora se aplicó etanol absoluto.
Grupo 6:(Grupo problema IV) Doble dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. después de una hora se aplicó etanol absoluto.
Grupo 7:(Grupo Patrón) Una dosis de ranitidina después de una hora se aplicó etanol absoluto.
2.5 Repeticiones: Se trabajaron con 7 grupos de 05 animales cada uno. 2.6 Extracción de la cavidad gástrica y estudio anatómo-histopatológico
Siete horas después de la lesión gástrica con etanol, las ratas fueron anestesiadas con pentobarbital sódico (50mg/kg, vía intraperitoneal) y se procedió a una laparotomía, seguida de gastrectomía. Se seccionó aproximadamente la curvatura mayor del estómago para la evaluación de las lesiones ulcerosas. El contenido gástrico se descartó y se lavó con solución salina fisiológica (SSF) y/o cloruro de sodio al 0,9%. Se mantuvo la pared gástrica en vasos Beaker con solución salina helada hasta su inspección ocular con el microscopio estereoscópico. Se extendió el estómago sobre una plancha de tecknopor, fijándose mediante el uso de alfileres y luego se colocó en el microscopio estereoscópico para la evaluación del número y tamaño de lesiones de la pared gástrica se contaron las lesiones ulcerosas, las que fueron valoradas de forma cuantitativa según una ficha de recolección de datos (Anexo 1) (40).
Las biopsias obtenidas fueron fijadas en formaldehido neutro al 10% durante 24 horas (41,42) y luego se enviaron en frascos rotulados con el código del animal correspondiente al Laboratorio Especializado de Anatomo histopatológía “Soldado Muro” de la ciudad de Trujillo. Las láminas se colorearon con hematoxilina/eosina. Luego se procedió al análisis histopatológico y al fotografiado correspondiente.
El índice o grado de ulceración (IU) se expresó como el total de milímetros (mm2) contados teniendo en cuenta el largo y el ancho de cada lesión. Los resultados se expresaron en porcentajes de inhibición respecto al índice de ulceración del grupo control, según: 100 x . . . . . . Inhibición % c U I p U I c U I Siendo: I.U.c: Índice de ulceración medio del grupo control.
I.U.p: Índice de ulceración medio del grupo problema o patrón. 2.7 Estudio experimental
El total de Rattus rattus var. albinus fueron ubicados en una habitación cerrada libre de estímulos para su ambientación, y recibieron dieta controlada y balanceada por espacio de 07 días antes del experimento.
Grupo Tratamientos Nº de animales Dosis Vía de administración
Testigo Solución salina fisiológica
(SSF)
5 6 ml/ 100 gr oral
Control Etanol 5 1 mL oral
Problema I Una dosis de Solanum
tuberosum L.
5 200 mg/kg oral
Problema II Una dosis de Croton
lechleri L.
5 400 mg/kg oral
Problema III Una dosis combinada de
Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.
5 200 mg/kg y
400 mg/kg
oral
Problema IV Doble dosis combinada de
Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.
5 400 mg/kg y
800 mg/kg
oral
Patrón Ranitidina 5 100mg/kg oral
2.8 Análisis Estadístico
En la valoración estadística se tomaron en cuenta los datos que fueron procesados mediante laprueba T-Student, utilizándose el programa estadístico SSPS versión 15,0. Los datos fueron expresados como los promedios aritméticos ± el error estándar del promedio aritmético, donde se aceptó un valor significativo de p< 0,05. La comparación de Grupos se realizó mediante la prueba no paramétrica de Kruskall Wallis.
II. RESULTADOS
En la evaluación macroscópica y microscópica del grupo testigo no se observó daño alguno (figura 4). La mucosa gástrica mostró características histológicas normales.
En la tabla 1 se observa que el área total de lesiones gástricas, a ) una hora después de aplicarse una dosis de etanol absoluto (96º) fue de 44,8 mm2 esto correspondió al grupo control. En las ratas albinas que fueron tratadas independientemente con el extracto de Solanum tuberosum L.(problema I) el área que corresponde al daño de la mucosa disminuyó parcial y significativamente (p<0.05) teniendo un índice de ulceración de 24,4 mm2 con una disminución de 20,21%; comparado con el grupo control. El porcentaje de reducción de la lesión gástrica inducida con sangre de grado (grupo IV) (índice de ulceración fue de 19,6 mm2 con una disminución de31,26% del área gástrica dañada) al ser comparados con el grupo patrón que recibió ranitidina (p<0,05) presentó estadísticamente una ligera diferencia.
En las ratas que fueron tratadas con el extracto combinado de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. (Problema III) el área dañada disminuyó significativamente en forma parcial (p<0.05) teniendo un valor de 14,8 mm2 comparado con el grupo control. En cuanto al porcentaje de reducción de la injuria gástrica inducida con etanol, se encontró un valor de 93,69% para el grupo problema IV que recibió doble dosis del extracto, observándose diferencias significativas al ser comparado con los grupos testigo y control así como el resto de los otros grupos(p<0,05). El grupo patrón donde se administró ranitidina mostró también diferencias significativas respecto al grupo control. Entre el grupo IV y patrón presentó parcialmente diferencias significativas (p<0,05).
Respecto a la tabla 2 y figura 1 (análisis microscópico) se observa que el 80% de las ratas tratadas del grupo control presentó lesiones ulcerosas caracterizadas por marcadas erosiones extensas y amplias con sangrado muy severo; y que fue comparado con el grupo patrón que solo recibió ranitidina exhibió lesiones leves (40%) y lesiones moderadas (60%) presentando estadísticamente diferencias. El grupo problema I que recibió únicamente el extracto de Solanum tuberosum L. mostró lesiones severas (20%) y muy severas (80%) que comparado con el grupo IV presentó diferencias
significativas (p<0,05). El grupo patrón también mostró una ligera diferencia significativa comparada con el grupo II que recibió separadamente sangre de grado y exhibió lesiones leves (20%), moderadas (20%), y severas (60%). Entre los grupos problema III y IV también hubo diferencias significativas (p< 0,05).El grupo problema III que recibió una dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. mostró lesiones severas (60%) y muy severas (40%). Mientras el grupo problema IV con doble dosis del extracto no presentó lesiones muy severas exhibiendo diferencias significativas respecto a los grupos: testigo, control, I, II, III, IV y Patrón (p<0,05).
Los resultados macroscópicos nos indican que las lesiones inflamatorias están presentes en la mayoría de los animales, visualizándose el engrosamiento anormal de la pared gástrica e hiperemia como las características más evidentes en los grupos control, I, II y III (Tabla 3). Es notorio resaltar la escasez de exudado mucoso (amarillento y rojizo) así como la alta incidencia de úlceras en los grupos control y problema I y escasamente en los grupos problema IV y patrón.
En la Tabla 4 y figura 2, lo hallado microscópicamente en la observación de la mucosa gástrica existen entre dos y cuatro animales de los grupos problema I y II que presentaron lesiones severas, lo cual representa el 50% del total de animales tratados con los extractos de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.; y por lo menos el grupo tratado con ranitidina y doble dosis del extracto casi no presentó algún tipo de lesión gástrica. En esta misma tabla se observa que en el grupo problema IV comparado con los grupos: control, problema I, II, III y patrón presentó diferencias significativas (p<0,05) referente al grado de lesión severo. También el mismo grupo fue estadísticamente significativo respecto al grupo control y problema I según lo referente al grado moderado.
En la tabla 5 y figura 3 se observa que en el análisis de comparación de lesiones ulcerosas (macroscópico y microscópico) de la pared gástrica, aquellos grupos tratados con ranitidina (2 ml/ 50 mg) y doble dosis del extracto de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.comparado con los grupos control y problema III, IV, V y VI presentaron diferencias significativas (p<0,05).
Análisis histológico
El efecto del etanol se observó en el grupo control (positivo). Aquí se observaron lesiones múltiples, de aspecto similar pero de mayor tamaño que las erosiones (figura 5). Se han extendido hasta la muscularis mucosae comprometiéndola. Lesiones de tipo redondeado u ovaladas de bordes finos con centro blanco y en algún lado con área eritematosa. En el fondo de la úlcera se observa algo de tejido de granulación con reacción fibroblástica. Dicho infiltrado se halla constituido principalmente por leucocitos polimorfonucleares, neutrófilos y eosinófilos, también destacan linfocitos (figura 5). La submucosa del órgano muestra edema, congestión y exudado fibrinoleucocitario, característica de la inflamación aguda. El diagnóstico histológico fue úlceras gástricas agudas del antro.
En la figura 6 se observa lesiones múltiples localizadas en el cardias y cuerpo. Hay zonas de mucosa gástrica hiperémica, edematosa, con petequias diversas, las lesiones más profundas afectan a todo el grosor de la mucosa y se han extendido hasta la submucosa (ulceración). Hay aéreas de necrosis que se han extendido hasta la muscularis mucosae (figura 6) comprometiendo ampliamente la superficie del cuerpo. Hay sufusión sanguínea entre la mucosa y submucosa con reacción inflamatoria (derrame sanguíneo con infiltración en los tejidos). Se encuentran zonas con marcada atipia celular de carácter regenerativo del epitelio gástrico en el borde de la lesión. La submucosa del órgano muestra edema, congestión y exudado fibrinoleucocitario, característica de la inflamación aguda. El diagnóstico histológico fue úlcera gástrica aguda del cardias y cuerpo. Se observa lesiones múltiples en la figura 6.
Se observa lesiones múltiples en la figura 7. Existen áreas de necrosis que se han extendido hasta la muscularis mucosae comprometiendo ampliamente la superficie del antro. Hay sufusión sanguínea entre la mucosa y submucosa con reacción inflamatoria (derrame sanguíneo con infiltración en los tejidos). Se encuentran zonas con marcada atipia celular de carácter regenerativo del epitelio gástrico en el borde de la lesión. La submucosa del órgano muestra edema, congestión y exudado fibrinoleucocitario, característica de la inflamación aguda. El diagnóstico histológico fue úlcera gástrica aguda del antropíloro.
En el grupo problema III que recibió una dosis del extracto de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. mas etanol, se observan lesiones múltiples, de aspecto similar pero de mayor tamaño que las erosiones (figura 8). Se han extendido hasta la muscularis mucosae comprometiéndola. Lesiones ulcerosas agudas del antro y de tipo redondeado u ovaladas de bordes finos con centro blanco y en algún lado con área eritematosa. El infiltrado se halla constituido principalmente por leucocitos polimorfonucleares, histiocitos, neutrófilos y eosinófilos, también destacan linfocitos. Necrosis con depósito de material fibrinoso. La submucosa del órgano muestra edema, congestión y exudado fibrinoleucocitario, característica de la inflamación aguda. El diagnóstico histológico fue úlceras gástricas agudas del cuerpo.
El grupo IV que recibió una doble dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. más etanol. Existió abundante infiltrado inflamatorio agudo y extrusión hacia la luz del exudado (figura 6). Aparecen áreas grandes de mucosa gástrica lesionada. Mucosa con hiperemia y erosiones. Necrosis de los componentes celulares y el tejido conectivo de la mucosa. Células en mitosis en la región del cuello de las glándulas gástricas. Submucosa inflamada observándose exudado inflamatorio con presencia de polimorfonucleares, macrófagos y linfocitos. El diagnóstico histológico gastritis aguda erosiva y hemorrágica (figura 9) del antro. Además existió regeneración y restitución de la mucosa gástrica.
El grupo patrón que recibió una dosis de ranitidina más etanol se observa la mucosa gástrica friable, congestión vascular, edematosa y con erosiones (figura 10). Zonas de necrosis, con un infiltrado inflamatorio polimorfonuclear y la existencia de focos hemorrágicos. La gastritis superficial ha penetrado hasta las áreas glandulares más profundas terminando por producir pérdida parcial y total de las mismas (atrofia gástrica). En el exudado, a mayor aumento se pueden observar espacios vacíos que corresponde a la presencia de líquido conteniendo: sales, proteínas, además fibrina. Es posible observar también histiocitos, linfocitos y polimorfonucleares. La submucosa del órgano muestra edema (figura 10), congestión y exudado fibrinoleucocitario, característica de la inflamación aguda. El diagnóstico histológico fue gastritis aguda erosiva y hemorrágica del antro con lesiones necróticas.
Tabla 1: Análisis macroscópico según el Índice de Ulceración tratados con Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. en Rattus rattus var. albinus con daño gástrico inducida por etanol.
Grupo Nº de ratas Índice de ulceración
I.U. (mm2) Disminución (%) Testigo 5 - - Control 5 44,8 ± 6,94 - Problema I Problema II Problema III Problema IV Patrón 5 5 5 5 24,4 ± 0,68 19,6 ± 0,44 14,8 ± 1,52* 1,85 ± 1,97* 20,21 31,26 41,78 93,69 5 9,7 ± 10,87** 61,17
* p< 0,05 (comparado con el grupo control) **p<0.01 (comparado con el grupo control)
Tabla 2: Grado de lesión microscópica del antro y cuerpo del estómago en Rattus rattus var. albinus con lesión gástrica inducida por etanol y tratados con Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L., según la escala de Marhuenda.
Grado de lesión
Testigo Control Problema I Problema II Problema III Problema IV Patrón
nº % nº % nº % nº % n % n % nº % Sin lesión Leve (+) 5 0 100 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 1 0 20 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 40 Moderado (++) 0 0 0 0 0 0 1 20 0 0 4 80* 3 60** Severo (+++) 0 0 1 20 1 20 3 60* 3 60* 1 20 0 0 Muy severo (++++) 0 0 4 80 4 80 0 0 2 40 0 0 0 0
*p<0,05 (comparado con el grupo control) **p<0.01 (comparado con el grupo control)
Grupo 1: Testigo; 2: Control; 3: Problema I (una dosis de Solanum tuberosum L.); 4: Problema II (una dosis de Croton lechleri L.); 5: Problema III (una dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.); 6: Problema IV (doble dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.); 7: Patrón (una dosis de ranitidina)
Grado Leve: Ligero edema y congestión
Grado Moderado: Regular edema, congestión y sangrado
Grado Severo: Puntos de erosión, con edema, congestión y sangrado.
Figura 1. Grado de lesión microscópica del antro y cuerpo del estómago en Rattus rattus var. albinus con lesión gástrica inducida por etanol y tratados con Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L., según la escala de Marhuenda
Fuente: Tabla 2 0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Testigo Control Problema I Problema II Problema III Problema IV Patrón
Sin lesión Leve Moderado Severo Muy severo
Tabla 3: Lesiones gástricas macroscópicas (cuerpo y antro) en 05 Rattus rattus var. albinus con daño gástrico por efecto del etanol y tratadas con Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. según la escala de Marhuenda
Observaciones Grupo de animales afectados Total de animales afectados
1 2 3 4 5 6 7
Espesor anormal de la pared gástrica 0 2 1 1 2 1 1 6 Dilatación de la pared digestiva 0 2 1 2 1 0 2 6
Mucosa erosionada 0 1 3 1 2 1 1 8 Hiperemia 0 3 2 1 2 1 1 7 Exudado mucoso: Amarillento Rojizo 0 0 2 3 2 0 1 0 2 0 1 0 1 0 7 0 Ulceras: Únicas y múltiples Ausencia 0 5 4 1 2 1 2 2 2 0 0 5 0 4 6 12 Sobre un total de 25 ratas (grupos 3,4, 5, 6 y 7)
Grupo 1: Testigo; 2: Control; 3: Problema I (una dosis de Solanum tuberosum L.); 4: Problema II (una dosis de Croton lechleri L.); 5: Problema III (una dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.); 6: Problema IV (doble dosis de Solanum tuberosum L. y Croton
Tabla 4:Grado de lesión microscópica del estómago (antro y cuerpo) afectado en 05 Rattus rattus var. albinus con daño gástrico por efecto del etanol y tratados con Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. según la escala de Marhuenda.
Grado Animales evaluados
(Grupos) Nº de afectados 1 2 3 4 5 6 7 Sin lesión 5 0 0 0 0 0 0 0 Leve 0 0 0 1 0 1 1 3 Moderado 0 0 1 2 3 4* 3 13 Severo 0 5 4 2 2 0 1 9
Sobre un total de 25 ratas (grupos 3,4, 5, 6 y 7)
* p < 0,05 (comparado con los grupos: control, I, II, III, IV y Patrón)
Grado Leve: Poca o escasa destrucción Grupo 1: Testigo; 2: Control; 3: Problema I (una dosis de Solanum tuberosum L.); 4: Problema II (una dosis de
Croton lechleri L.); 5: Problema III (una dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.); 6: Problema IV (doble dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.); 7: Patrón (una dosis de ranitidina)
Grado leve: Poca o escasa destrucción de tejido gástrico, ausencia y/o escaso daño vascular (hiperemia y edema) y poca exudación.
Grado Moderado: Tejido gástrico parcialmente dañado con inflamación en la lesión con intensa presencia leucocitaria y procesos vasculares alterados. Grado Severo: Extensa área de tejido dañado y bastante exudado.
Figura 2.Grado de lesión microscópica del estómago (antro y cuerpo) afectado en 05 Rattus rattus var. albinus con daño gástrico por efecto del etanol y tratados con Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. según la escala de Marhuenda.
Fuente: Tabla 4 0 2 4 6 8 10 12 14
Sin lesión Leve Moderado Severo
Tabla 5:Media de comparación de lesiones ulcerosas inducidas por etanol en Rattus rattus var. albinus por grupo experimental.
Grupos tratados Nº de animales Promedio de
ulceras Desviación Standard Parámetro estadístico (t) Nivel de significancia Testigo 5 0 0 0 0 Control 5 4,0 1,88 5,344 <0,001 Problema I Problema II Problema III Problema IV 5 5 5 5 1,7 1,8 2,1 0,3 0,8 0,9 1,3 0,1 2,346 2,613 4,728 1,625* <0,05 <0,05 <0,05 <0,05 Patrón 5 0,8 0,4 1,015* <0,05
Figura 3.Media de comparación de lesiones ulcerosas inducidas por etanol en Rattus rattus var. albinus por grupo experimental. Fuente: Tabla 5 0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5 4 4.5
Testigo Control Problema I Problema II Problema III Problema IV Patrón
Figura 4. Mucosa gástrica de Rattus rattus var. albinus del grupo I que recibió inyección de solución salina fisiológica. La mucosa muestra características histológicas normales (10x).
Figura 5. Mucosa gástrica (cuerpo) de Rattus rattus var. albinus del grupo II que recibió solo etanol. Se observan ulceraciones hemorrágicas múltiples distribuidas por la superficie gástrica con lesiones necróticasprofundas (100x).
Figura 6. Mucosa gástrica (cuerpo) de Rattus rattus var. albinus del grupo III que recibió una dosis de papa, y etanol (10x).
Figura 7.Mucosa gástrica (cuerpo) de Rattus rattus var. albinus del grupo IV que recibió una dosis de sangre de grado y etanol(10x).
Figura 8. Mucosa gástrica de Rattus rattus var. albinus del grupo III con una dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. Se observa la muscularis mucosae dañada (100x).
Figura 9. Mucosa gástrica de Rattus rattus var. albinus del grupo IV con doble dosis de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L.(100x).
Figura 10. Mucosa gástrica (antropíloro) de Rattus rattus var. albinus del grupo V que recibió una dosis de ranitidina. Se muestra edema moderado y una ligera congestión vascular (100x).
III. DISCUSIÓN
No cabe duda que las plantas medicinales peruanas constituyen un manantial inagotable de una sucesión de principios activos, muchos de ellos siguen siendo de mucha importancia en el tratamiento profiláctico y terapéutico de diferentes enfermedades, conocidas a través de la historia, muy relacionada con la medicina natural y/o alternativa (1). En este estudio se demostró una acción muy significativa gastroprotectora sobre la mucosa gástrica, así como una marcada reducción del índice de ulceración.
En la evaluación macroscópica cuantitativa las lesiones en la prevención con solución salina más etanol alcanzó un promedio 44,8 ± 6,94% (Tabla 1 y figura 5) del total de la superficie glandular del estómago, siendo esta cifra muy superior a lo encontrado por Ayala y colaboradores (1999) quienes realizando la misma evaluación inducida con etanol en la mucosa gástrica encontraron un promedio de 15,4% ± 9,50%; sin embargo respecto al porcentaje derivado del efecto de los extractos fue de 14,8% ± 1,52% y 1,85% ± 1,97%, de reducción de la lesión gástrica siendo esta cifra mayor a lo hallado por los investigadores mencionados y otros (9,11,37), posiblemente esto se debió a dos mecanismos distintos y eficientes tales como: a) La formación de una trinchera gastroprotectora realizada por la fuerte adherencia de la sangre de grado a las áreas necróticas y sangrantes formando una película de defensa contra el efecto del etanol y como complementación de este blindaje citoprotector se debe mencionar a los componentes biológicos de la papa como la solamina y otras sustancias amiláceas y mucoides quienes habrían repotenciado la resistencia de la mucosa a que fuera dañada totalmente(no hubo presencia ulcerosa en los grupos problema II y IV y patrón) por el etanol b) la actividad de otros componentes fitoquímicos y biológicos de la papa (aminoácidos) y de la sangre de grado habrían estimulado al tejido epitelial gástrico a iniciar procesos de reparación celular intensa en aquellas áreas que habían sido dañadas por efecto del etanol. Lo impresionante de este estudio es que se observó hemorragia en las áreas afectadas (cuerpo y antro) de los estómagos de la mayoría de los animales, supuestamente la acción del etanol se habría dirigido en aquellas regiones con abundante irrigación sanguínea (figuras 5 y 6) través del cual indujo una marcada dilatación arteriolar acompañado de una fuerte y severa constricción de vénulas ocasionando daño en la mucosa gástrica como resultado de una congestión vascular
generalizada, tal como se aprecia en la figura 6. Además podemos afirmar que el extracto ensayado posee probablemente propiedades vasodilatadoras que ofrecen un adecuado flujo sanguíneo evitando la formación de erosiones ulcerosas como fue hallado en el grupo problema IV y se visualiza en las figuras 9 y 10.
El efecto drástico del etanol absoluto sobre la mucosa gástrica se observó con alteraciones en la irrigación sanguínea mucosal contribuyendo a la estasis sanguínea, incremento de la permeabilidad vascular y tejido necrosado (43). Los productos de la vía 5-lipooxigenasa, principalmente leucotrienos, así como moduladores de la función vascular como el factor de activación plaquetaria (PAF), también podrían desempeñar una función importante en el desarrollo de estas lesiones.
El etanol (44) en el grupo control ocasionó erosiones hemorrágicas múltiples distribuidas por la superficie gástrica (figura 5), con necrosis en la capa superficial y profunda (epitelio y lámina propia) llegando a la muscularis mucosae. Mientras que el grupo que recibió Croton lecheri L. mas etanol no presentó estas características, pues la sangre de grado posee probablemente propiedades adherentes que se conectan firmemente a la mucosa gastrica evitando la formación de erosiones ulcerosas (35,47). El proceso degradativo inducido por etanol es generado por activación de fagocitos, producción de O2-, H2O2, NO- y HOCL (radicales libres); la liberación de ácido
araquidónico y formación enzimática de peróxidos (a partir de la producción de lipooxigenasas y ciclooxigenasas) los cuales dañarían muchos lípidos y proteínas presentes en las membranas celulares (42,45,46,48).
Los flavonoides y otros polifenoles que son fitoquímicos presentes en Croton lecheri L. son potencialmente positivos en la salud humana. El efecto antioxidante de los flavonoides consiste en atrapar los aniones superóxidos (O2.), hidroxilos (OH.),
peroxilos (ROO.) y radicales alcohoxilos (RO.) generados por el daño inducido por etanol en mucosa gástrica (35). Los taninos y leucoantocianidinas forman parte del amplio grupo de compuestos fenólicos hallados en sangre de grado y están químicamente relacionados con el esqueleto C6-C3-C6, capaces de captar radicales
libres, inhibir la peroxidación lipídica y la autooxidación del ácido ascórbico (vitamina C) (25,27).
Los compuestos fenólicos son sustancias antioxidantes que presentan un gran poder destructor de radicales libres, capaces de donar oxígeno a los mismos y de esta forma romper la cadena de la oxidación lipídica en el primer paso de iniciación, lo cual generaría pérdida de la fluidez de la membrana, transporte de iones y la integridad de la membrana de las células de la superficie epitelial y, ayuda a la generación de lesiones gástricas. Este elevado potencial de los compuestos fenólicos para la neutralización de radicales inducidos por etanol absoluto se puede deber a sus grupos hidroxilo fenólicos
(35,49)
.
El etanol (56) es una molécula con gran capacidad de generar e incrementar el ataque oxidativo a las membranas celulares provocando su muerte por apoptosis, además de inflamación y necrosis, especialmente gástrica y hepática. La lisis de las membranas celulares reduce la hidrofobicidad de la cubierta adherida a la superficie celular de la mucosa, tal perdida de la hidrofobicidad podría facilitar la entrada de agentes dañinos solubles en agua, tales como el ácido clorhídrico, la pepsina y las sales biliares; los cuales causarían peroxidación lipídica y alterarían la fluidez de la membrana. Quizá estos daños facilitarían la acción rápida de Helicobacter pylori, causante de la gastritis erosiva y posible agente causal del cáncer gástrico. Esta bacteria con sus distintos factores de virulencia tales como: movilidad, factor inhibidor de la secreción gástrica, microaerofília, capacidad de adherencia (6) y otros, le permitirían invadir y permanecer en la mucosa gástrica dañada hasta su posterior implantación, después podría manifestar sus efectos toxigénicos mediante la producción de citotóxinas vacuolizantes, incremento de la producción de gastrina, degradación de la mucina mediante enzimas hidrolíticas; lo cual incrementaría un mayor daño a la mucosa gástrica (debilitada por otros agentes químicos citotóxicos y el estrés psicológico) y estar a un paso del estallido del nacimiento de un tejido maligno(21). Es conocida la relación entre la infección de Helicobacter pylori y la consecuente formación de ulceras gastroduodenales; debido a cambios fisiopatológicos, tales como atrofia de las microvellosidades, reducción de la secreción mucosa y daño epitelial, conllevando incluso al desarrollo de adenocarcinoma (6,7).
En el grupo problema I que recibió una dosis de Solanum tuberosum L. más etanol absoluto (96°) se observó lesiones múltiples localizadas en el antro y cuerpo. Con
zonas de mucosa gástrica hiperémica, edematosa y petequias diversas. Las lesiones más profundas afectaron a todo el grosor de la mucosa (figura 3) y se extendieron hasta la submucosa causando ulceración. El parcial efecto protector (20,21%) ofrecido por el extracto de papa podría deberse a la solamina y otras sustancias amiláceas y mucoides las cuales habrían proporcionado cierto blindaje a la mucosa gástrica para que no fuese dañada totalmente (el 20% de los animales de este grupo no presentó daño ulceroso).
Por efecto de la dosis única de Solanum tuberosum L. administrado a los animales, estos tejidos dañados lograron protegerse parcialmente tal como se aprecia en la figura 6 y 7; esto concuerda con Lezaeta y Piles, quienes afirman haber utilizado el extracto de papa en pacientes con ulceras gastrointestinales logrando su recuperación mediante estrategias terapéuticas largas.
El grupo problema II que fue tratado con Croton lecheri L.y etanol según las tablas 2 (figura 1) y 3 no presentó formaciones ulcerosas (figura 7) solamente se halló puntos de erosión, con edema, congestión y sangrado posiblemente por efecto de los radicales libres (35). En la actualidad se acepta que el efecto de los radicales libres podrían causar daño oxidativo a los lípidos, proteínas y ácidos nucleicos destruyendo las capas celulares de la mucosa, submucosa y otras capas histológicas de la pared gástrica. La capacidad antioxidante de los fenoles, flavonoides y taninos como componentes de Croton lecheri L. demostró una gastroprotección superior respecto a la acción independiente de Solanum tuberosum L. Se observó una fuerte adherencia de la sangre de grado a las áreas necróticas y hemorrágicas.
Los resultados de este trabajo demostraron que utilizando un extracto de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. administrados independientemente logró reducir parcialmente el daño gástrico en la mucosa digestiva de las ratas inducido con etanol (20,21% y 31,26%) en dosis de 200 mg/Kg y 400 mg/Kg, mientras que comparado con la ranitidina esta presentó un mejor efecto gastroprotector (61,17%). El descubrimiento de que la ranitidina administrada oralmente no protegió la mucosa gástrica contra el etanol fue informado por otros investigadores (46).
En el grupo experimental (problema III) que recibió una dosis de Solanum tuberosum L. más Croton lecheri L. se observó lesiones múltiples localizadas en el
cardias y cuerpo (figura 8), con zonas de mucosa gástrica hiperémica, edematosa y petequias diversas. Las lesiones más profundas afectaron a todo el grosor de la mucosa y se extendieron hasta la submucosa causando ulceración. La presencia de estas lesiones ulcerosas podría deberse a la acción del etanol el cual habría generado injuria, resultado de la congestión de la microcirculación de la mucosa gástrica; y de la acción leucocitaria causando citotoxicidad lo que habría provocado la destrucción de las membranas celulares de la mucosa, submucosa y otros estratos celulares que son componentes de la pared gástrica. Si la congestión del flujo sanguíneo de la mucosa persiste, induce a una intensa hipoxia y de esta manera destruye el epitelio de la mucosa gástrica (41,42); sin embargo a la luz de los resultados en las tablas 3 y 4 del grupo problema 2 que recibió doble dosis del extracto no se encontraron lesiones ulcerosas marcadas posiblemente se habría contrarrestado el efecto drástico del etanol debido a la presencia de las vitaminas A y C en la papa así como los fenoles, flavonoides y taninos de la sangre de grado que habrían demostrado poseer una gran capacidad antioxidante
(19,28,50)
.
La administración de una doble dosis del extracto de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. posee efecto antiulceroso al reducir significativamente el daño gástrico en la mucosa digestiva de las ratas tratadas (93,69%) en dosis de 400 mg/kg y 800 mg/kg del extracto, existiendo una alta gastroprotección del extracto total empleado, al ser comparado con el grupo control, grupo problema I y grupo patrón (p< 0,05). La administración de ranitidina (61,17%) a los animales no presentó una similitud significativa comparado con el grupo problema III respecto a que no se encontró daño ulceroso.
El grupo tratado con doble dosis del extracto (grupo problema IV) obtuvo una reducción de lesiones ulcerosas altamente significativa (p<0,01) respecto al grupo que recibió ranitidina (tabla 1), por lo que se puede suponer que los componentes de este extracto poseen los nutrientes necesarios (la papa posee aminoácidos libres) para estimular la maquinaria de reparación celular de la mucosa gástrica (16,48,49), lo que se puede constatar en los resultados histopatológicos donde se muestra lesiones gástricas leves (figura 9); además nos señala que los animales que fueron tratados con el extracto presentaron un alto grado de regeneración celular debido a procesos mitóticos (figura 10).
Ayala y colaboradores en el año 2001 han demostrado el efecto gastroprotector y antiulceroso de la sangre de grado atribuyéndole solo a uno de sus componentes (taspina) dicho efecto; discrepamos con tales investigadores ya que mediante este estudio utilizando el extracto total de la sangre de grado combinado con el jugo de la papa (tal como lo emplea la medicina tradicional y popular) se logró demostrar el efecto antiulceroso ensayado en animales de experimentación.
Respecto a la tabla 2 y figura 5 se observa que el 80% de las ratas tratadas del grupo control exhibió daño ulceroso con erosiones de mucosa extensas y con áreas sangrantes muy amplias llegando al extremo de ser consideradas como lesiones muy severas y que fueron comparadas con el grupo que se administró doble dosis del extracto este mostró lesiones leves (0%), moderadas (80%) y severas (20%) presentando diferencias significativas. Esto demuestra la acción eficaz de los componentes activos del extracto empleado en la reducción de daño gástrico encontrado.
Tanto la papa como la sangre de grado son altamente alcalinizantes por la presencia de sus minerales, vitaminas A y C, agentes antioxidantes (flavonoides, saponinas y triterpenos) y sustancias orgánicas (taspina) que contiene. Tales sustancias habrían contribuido ligeramente en el tratamiento de las úlceras gástricas inducidas con etanol, al crear un ambiente interno con pH alcalino, logrando “atrapar” a los radicales libres de su nefasta acción anticelular, inducir la formación de prostaglandinas (PGE2),
que son responsables de la inhibición de la secreción de ácido clorhídrico a través de la producción y la acción del moco protector; todo esto habría propiciado una protección gástrica alta (93,69%) de inhibición ulcerosa concordando con lo reportado por Lezaeta (2001) y otros autores (11,12,19) quienes afirman haber encontrado efecto curativo por parte de estos dos vegetales utilizados.
En la preparación del extracto de Solanum tuberosum L. y Croton lechleri L. se
utilizó la cascara y el jugo de papa, esta es rica en clorofila, carotenos y en minerales (calcio, fósforo, cobre, hierro, manganeso, magnesio, potasio y sodio). El jugo de papa y la resina de sangre de grado son altamente alcalinizantes por la presencia de sus minerales, agentes antioxidantes (flavonoides, saponinas y triterpenos) y ácidos orgánicos que contiene. Tales sustancias habrían contribuido en el tratamiento de las úlceras gástricas inducidas con etanol, al crear un ambiente interno con pH alcalino,
