NORMA TÉCNICA
NTC
COLOMBIANA
6134
2015-09-23
CALIDAD DEL AGUA.
GUÍA GENERAL SOBRE LA ENUMERACIÓN DE
MICROORGANISMOS POR CULTIVO
E: WATER QUALITY. GENERAL GUIDANCE ON THE
ENUMERATION OF MICROORGANISMS BY CULTURE
CORRESPONDENCIA: esta norma es una adopción idéntica (IDT) respecto a su documento de referencia la norma ISO 8199: 2005 DESCRIPTORES: calidad de agua; microbiología; cultivo
microbiológico.
I.C.S.: 07.100.20
Editada por el Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación (ICONTEC) Apartado 14237 Bogotá, D.C. - Tel. (571) 6078888 - Fax (571) 2221435
PRÓLOGO
El Instituto Colombiano de Normas Técnicas y Certificación, ICONTEC, es el organismo nacional de normalización, según el Decreto 2269 de 1993.
ICONTEC es una entidad de carácter privado, sin ánimo de lucro, cuya Misión es fundamental
para brindar soporte y desarrollo al productor y protección al consumidor. Colabora con el sector gubernamental y apoya al sector privado del país, para lograr ventajas competitivas en los mercados interno y externo.
La representación de todos los sectores involucrados en el proceso de Normalización Técnica está garantizada por los Comités Técnicos y el período de Consulta Pública, este último caracterizado por la participación del público en general.
La NTC 6134 fue ratificada por el Consejo Directivo de 2015-09-23.
Esta norma está sujeta a ser actualizada permanentemente con el objeto de que responda en todo momento a las necesidades y exigencias actuales.
A continuación se relacionan las empresas que colaboraron en el estudio de esta norma a través de su participación en el Comité Técnico 25 Microbiología.
ALIMENTOS CÁRNICOS S.A.S. ALPINA S.A.
ALQUERÍA S.A. ASINAL LTDA.
BECTON DICKINSON DE COLOMBIA S.A. BOLSA MERCANTIL DE COLOMBIA COOPERATIVA COLANTA
GRUPO ÉXITO LTDA.
INDUSTRIAS ALIMENTICIAS ZENU S.A. IVONNE BERNIER LABORATORIO LTDA. LABORATORIOS SFC LTDA.
NULAB LTDA.
PAF LABORATORIOS LTDA.
Además de las anteriores, en Consulta Pública el Proyecto se puso a consideración de las siguientes empresas:
ALGARRA S.A.
BARRANQUILLA LTDA. BAVARIA S.A.
BIOCONTROL LTDA.
COMPAÑÍA NACIONAL DE CHOCOLATES
EMPRESA DE ACUEDUCTO Y
ALCANTARILLADO DE BOGOTÁ S.A. E.S.P. FRIGORÍFICOS COLOMBIANOS S.A. FRUGAL S.A.
FUNDACIÓN LABORATORIO DE
FARMACOLOGÍA VEGETAL S.A. GASEOSAS POSADA TOBON S.A. INGENIO PROVIDENCIA S.A.
KOYOMAD S.A. LA CAMPIÑA S.A.S.
LABORATORIO MICROBIOLÓGICO LABORATORIOS CALIFORNIA S.A. LARKIN LTDA.
MEALS DE COLOMBIA S.A.S.
MINISTERIO DE LA PROTECCIÓN SOCIAL PONTIFICIA UNIVERSIDAD JAVERIANA PRODUCTORA DE JUGOS S.A.S.
PRODUCTOS LÁCTEOS EL RECREO S.A. SERVICIO NACIONAL DE APRENDIZAJE SENA
VILASECA S.A.S.
ICONTEC cuenta con un Centro de Información que pone a disposición de los interesados
normas internacionales, regionales y nacionales y otros documentos relacionados.
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CONTENIDO
Página
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN ... 1
2. REFERENCIAS NORMATIVAS ... 1
3. PRINCIPIO ... 1
4. GENERALIDADES ... 2
5. DILUYENTES Y MEDIO DE CULTIVO ... 2
5.1 GENERALIDADES ... 2
5.2 DILUYENTES ... 3
5.3 MEDIOS DE CULTIVO ... 5
6. ESTERILIZACIÓN DE EQUIPOS Y MATERIAL DEL LABORATORIO ... 5
7. MUESTRAS ... 5
7.1 MUESTREO ... 5
7.2 PREPARACIÓN DE LA MUESTRA DE ENSAYO ... 5
8. MUESTRAS ... 6
8.1 PRINCIPIO ... 6
8.2 PROCEDIMIENTOS ... 6
8.3 ENUMERACIÓN ... 10
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Página
9. ENUMERACIÓN POR INOCULACIÓN EN MEDIO LÍQUIDO ... 17
9.1 PRINCIPIO ... 17
9.2 APLICACIONES ... 17
9.3 PROCEDIMIENTO ... 17
9.4 INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS ... 19
9.5 DETERMINACIÓN DE VALORES DE NMP... 20 9.6 ESTIMADOS DE PRECISIÓN ... 22 BIBLIOGRAFÍA ... 37 DOCUMENTO DE REFERENCIA ... 39 ANEXOS ANEXO A (Guíativo) CRITERIOS PARA LA SELECCIÓN DE LA TÉCNICA DE ENUMERACIÓN ... 24
ANEXO B (Informativo) TABLAS DE NMP ... 30
Tabla 1. Ejemplos de obtención del NMP de los números de resultados positivos en grupos de cinco tubos, usando la Tabla B.6 ... 22
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CALIDAD DEL AGUA.
GUÍA GENERAL SOBRE LA ENUMERACIÓN DE MICROORGANISMOS POR CULTIVO
ADVERTENCIA Las personas que usan la presente norma deben estar familiarizadas con las prácticas normales del laboratorio. Esta norma no pretende abordar todos los aspectos de seguridad, si los hay, asociados con su uso. Es responsabilidad del usuario establecer las prácticas apropiadas de salud y seguridad y determinar la aplicabilidad de las limitaciones reglamentarias antes de su uso.
IMPORTANTE Es absolutamente esencial que los ensayos realizados de acuerdo con esta norma los ejecute personal con entrenamiento adecuado.
1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN
Esta norma presenta una guía para llevar a cabo manipulaciones que son comunes a cada técnica para el ensayo microbiológico del agua, particularmente la preparación de muestras, medios de cultivo y equipos. También describe las diferentes técnicas de recuento disponibles y los criterios para la selección de una técnica particular. Esta norma está prevista principalmente para bacterias, mohos y levaduras. Algunos aspectos también son aplicables a virus y parásitos.
2. REFERENCIAS NORMATIVAS
Los siguientes documentos normativos referenciados son indispensables para la aplicación de este documento normativo. Para referencias fechadas, se aplica únicamente la edición citada. Para referencias no fechadas, se aplica la última edición del documento normativo referenciado (incluida cualquier corrección).
ISO 3696:1987, Water for Analytical Laboratory Use. Specification and Test Methods. ISO 19458, Water Quality. Sampling for Microbiological Analysis.
3. PRINCIPIO
El principio general de estas técnicas consiste en inocular un volumen conocido de muestra de agua sobre un medio de cultivo (sólido o líquido). Se asume que después de la incubación cada microorganismo presente se multiplica, lo que da una colonia visible directamente en el medio sólido, o cambios en las propiedades visibles del medio líquido. La selección del método particular depende no solamente de la naturaleza de los microorganismos buscados, sino también de la naturaleza del agua y las razones del análisis.
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BIBLIOGRAFÍA
[1] COCHRAN W.G. 1950. Estimation of Bacterial Densities by Means of the "Most
Probable Number". Biometrics, 6, pp. 105-116.
[2] HURLEY MA and ROSCOE M.E. 1983. Automated Statistical Analysis of Microbial
Enumeration by Dilution Series. J. Appl. Bacterial., 55, pp. 159-64.
[3] LIGHTFOOT N.F. and MAIER EA 1998. Microbiological Analysis of Food and Water:
Guidelines for Quality Assurance. Elsevier, Amsterdam, etc.
[4] NIEMELÁ S. 1983. Statistical Evaluation of Results from Quantitative Microbiological Examinations. Nordic Committee on Food Analysis. NMKL, Report No. 1, 2nd Edition. [5] NIEMELÁ S. 2003. Uncertainty of Quantitative Determinations Derived by Cultivation of
Microorganisms. Centre for Metrology and Accreditation. Publication J4/2003, 82 pp.
Helsinki, Finland (www.mikes.fi)
[6] TAYLOR J. 1962. The Estimation of Numbers of Bacteria by Tenfold Dilution Series. J. Appl. Bacterial., 25, pp. 54-61.
[7] THOMAS HA, Jr. 1942. Bacterial Densities From Fermentation Tube Tests. J. Am. Wat. Wks Ass., 34, pp. 572-76.
[8] ISO 3534-1:1993, Statistics. Vocabulary and Symbols. Part 1: Probability and General
Statistical Terms.
[9] ISO 5667-2:1991, Water Quality. Sampling. Part 2: Guidance on Sampling Techniques. [10] NTC - ISO 5667-3:2003, Calidad del agua. Muestreo. Parte 3: Guía para la preservación
y manejo de muestras de agua.
[11] ISO 5725-1:1994, Accuracy (Trueness and Precision) of Measurement Methods and
results. Part 1: General Principles and Definitions.
[12] ISO 6107-8:1993, Water Quality. Vocabulary. Part 8.
[13] ISO 6887-1:1999, Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. Preparation of Test
Samples, Initial Suspension and Decimal Dilutions for Microbiological Examination. Part 1: General Rules for the Preparation of the Initial Suspension and Decimal Dilutions.
[14] ISO 7218:1996, Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. General Rules for
Microbiological Examination; Including Amendment 1:2001 to ISO 7218:1996.
[15] ISO 7704:1985, Water Quality. Evaluation of Membrane Filters Used for Microbiological Analyses.
[16] ISO 7899-1:1998, Water Quality. Detection and Enumeration of intestinal Enterococci.
Part 1: Miniaturized Method (Mast Probable Number) far Surface and Waste Water; Including Technical Corrigendum 1:2000 ta ISO 7899-1:1998.
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[17] ISO 9308-3:1998, Water Quality. Detection and Enumeration of Escherichia Coli and
Coliform Bacteria. Part 3: Miniaturized Method (Mast Probable Number) for the Detection and Enumeration of E. Coli in Surface and Waste Water; Including Technical Corrigendum 1:2000 to ISO 9308-3:1998.
[18] ISO/TS 11133-1:2000, Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. Guidelines an
Preparation and Production of Culture Media. Part 1: General Guidelines on Quality Assurance for the Preparation of Culture Media in the Laboratory.
[19] ISO/TS 11133-2:2003, Microbiology of food and Animal Feeding Stuffs. Guidelines on
Preparation and Production of Culture Media. Part 2: Practical Guidelines on Performance Testing of Culture Media.
[20] ISO/TR 13843:2000, Water Quality. Guidance on Validation of Microbiological Methods. [21] ISO 16140:2003, Microbiology of Food and Animal Feeding Stuffs. Protocol for the
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