Tipos de medios de cultivo MRD

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FÓRMULA (en gramos por litro)

• _{Peptona ...10.0.}

Lactosa...5.0. Sacarosa... ....5.0.

• _{Fosfato dipotásico ...2.0.}

Eosina...0.4.

• _{Azul de}

metileno...0.065.

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Instrucciones:

• _{Suspender 36 g del polvo en 1 litro de agua purificada.}

• _{Reposar 5 minutos.}

• _{Calentar con agitación frecuente y llevar a ebullición hasta su}

disolución total.

• _{Esterilizar en autoclave 121°C durante 15 minutos.}

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uso

• _{Este medio (también denominado E.A.M.) es utilizado para el}

aislamiento selectivo de bacilos Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.

• _{Permite el desarrollo de todas las especies de la familia}

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Fundamento

• _{Es nutritivo por la presencia de peptona que favorece el desarrollo}

microbiano.

• _{La diferenciación entre organismos capaces de utilizar la lactosa y/o sacarosa,}

y aquellos que son incapaces de hacerlo, está dada por los indicadores eosina y azul de metileno; éstos ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia

variedad de bacterias Gram positivas.

• _{El agar es el agente solidifícate.}

• _{Muchas cepas de Escherichia coli y Citrobacter spp. presentan un}

característico brillo metálico.

• _{Las cepas que utilizan la lactosa poseen centro oscuro con periferia azulada o}

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• _{Digerido pancreático de caseína 5,0 g} • Digerido péptico de tejido animal 5,0

• Lactosa 10,0

• Desoxicolato de sodio 1,0

• Cloruro sódico 5,0

• Fosfato dipotásico 2,0

• Citrato férrico 1,0

• Citrato sódico 1,0

• Agar 16,0

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• _{Disolver 69,5 gramos en 1 litro de agua bidestilada.} • _{Agitar calentando hasta ebullición.}

• _{No Autoclavar! No sobrecalentar!}

• _{El color final del medio es rosa pálido, traslúcido, con un fino}

precipitado de desoxicolato.

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uso

• _{Desoxycholate Agar es un medio de diferenciación débilmente selectivo para}

el aislamiento de bacilos entéricos gram negativos (principalmente Enterobacteriaceae) a partir de muestras clínicas

• _{para una mayor obtención de patógenos intestinales en las muestras que}

contienen flora entérica.

• _{Es principalmente inhibidor sólo para las bacterias gram-positivas,}

• _{originalmente se ha utilizado para la detección de Salmonella y Shigella en las}

muestras fecales humanas.

• _{En la actualidad este medio se utiliza como alternativa al agar MacConkey}

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Fundamento

• Las dos peptonas proporcionan nitrógeno y carbono para las necesidades generales del crecimiento.

• La lactosa es el carbohidrato fermentable.

• El cloruro de sodio y el fosfato dipotásico conservan el equilibrio osmótico del medio.

• El desoxicolato y los citratos de sodio inhiben las bacterias gram-positivas.

• El rojo neutro es un indicador del pH.

• La diferenciación se basa en la fermentación de la lactosa.

• Las bacterias que fermentan la lactosa producen ácido y, en presencia de rojo neutro, forman colonias rojas.

• Las bacterias que no fermentan la lactosa forman colonias incoloras.

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Formula

• Extracto de carne bovina 5,0 g

• _{Digerido pancreático de caseína 2,5} • _{Digerido péptico de tejido animal 2,5} • _{Lactosa 10,0}

• Sales biliares 8,5 • _{Citrato sódico 8,5} • _{Tiosulfato sódico 8,5} • _{Citrato férrico 1,0} • _{Rojo neutro 0,025} • Agar 13,5

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Preparación

• _{Suspender 60 g del polvo en 1 litro de agua purificada. Reposar 5}

minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar con agitación

frecuente y llevar a ebullición durante 1 minuto para disolución total.

• _{No esterilizar en autoclave.}

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uso

• _{Este medio se utiliza para el aislamiento primario de Salmonella a}

partir de muestras fecales humanas .

• _{Dado que existen medios más eficaces para el aislamiento de Shigella,}

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• _{Se trata de un medio selectivo de diferenciación para el aislamiento}

de Salmonella a partir de muestras fecales o torundas rectales de pacientes en los que hay sospecha de una infección entérica

bacteriana.

• _{Se le considera un medio moderadamente selectivo según el nivel de}

inhibición de los microorganismos gram positivos y

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fundamento

• la diferenciación de los organismos entéricos se logra mediante la incorporación de lactosa en el medio.

• _{Los organismos que fermentan lactosa producen ácido que, en presencia}

del indicador rojo neutro, propicia la formación de colonias de color rojo.

• _{Los organismos no fermentadores de lactosa forman colonias incoloras.}

Este último grupo incluye la mayoría de los patógenos intestinales, incluidas Salmonella y Shigella.

• El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la detección de

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Formula

• Peptona bacteriológica 10.00

• _{Fosfato Disodico 4.00}

• _{Indicador bismuto sulfito 8.00} • _{Sulfato Ferroso 0.30}

• Extracto de Carne 5.00

• Verde Brillante 0.025

• _{Dextrosa 5.00}

• _{Agar Bacteriológico 20.00}

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Preparación

• Suspender 52,3 gramos del medio en un litro de agua destilada.

• _{Mezclar bien y calentar agitando continuamente.}

• _{Hervir durante un minuto o hasta que el medio se disuelva por completo.} • _{EVITAR EL SOBRECALENTAMIENTO.}

• NO AUTOCLAVAR

• Dejar que el medio se enfríe a 45ºC (muy importante) y sin dejar de agitar verter en placas de Petri.

• El color del medio preparado es blanco opaco con tinte verde.

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uso

• _{utilizado para la detección de Salmonella, en particular Salmonella}

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Fundamento

• La Peptona y el Extracto de carne aportan nitrógeno, vitaminas, minerales y amino ácidos esenciales para el crecimiento.

• _{La Dextrosa es el carbohidrato fermentable y provee de carbono y}

energía.

• _{El indicador de Bismuto sulfito y el verde Brillante son inhibidores de}

bacterias Gram positivas y de algunas bacterias del grupo coliformes.

• _{El Agar bacteriológico es el agente solidificante.}

• _{El sulfato ferroso se incluye para la producción de H2S.}

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Formula

Tripteína

Extracto de levadura 10.02.5

Gelatina 30.0

Lactosa 2.0

D-Manitol 10.0

Cloruro de sodio 75.0

Fosfato dipotásico 5.0

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Preparación.

• _{Suspender 149 g del medio en un litro de agua destilada.}

• _{Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2}

minutos.

• _{Esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 121°C.}

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uso

• _{Es un medio selectivo para el aislamiento y diferenciación presuntiva}

de estafilococos, en base a la producción de pigmentos, la

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• En el medio de cultivo, el extracto de levadura y la tripteína aportan los nutrientes para el desarrollo de microorganismos.

• La gelatina es el sustrato de la enzima gelatinasa.

• La lactosa y el manitol son los hidratos de carbono fermentables.

• El cloruro de sodio, se encuentra en alta concentración, para inhibir el

desarrollo de la flora acompañante excepto Staphylococcus spp., lográndose así un medio selectivo para el desarrollo de estos microorganismos.

• Las ventajas de este medio por sobre los otros mencionados anteriormente, es que permite, en la misma placa,

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FÓRMULA

• _{Pluripeptona...5.0 g}

Extracto de carne...3.0 g Cloruro de sodio...8.0 g Agar...15.0 g Agua

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Preparación

• _{Colocar los frascos cerrados en baño maría y llevar a ebullición para}

fundir el medio de cultivo sólido contenido en los mismos.

• _{Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar}

cuidadosamente los frascos del baño maría y dejar enfriar.

• _{Cuando alcanzan temperatura 45-50 ºC, abrirlos y distribuir}

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uso

• _{Medio de cultivo nutritivo no selectivo}

• _{Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el}

aislamiento y recuento de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.

• _{Su uso está descripto en procedimientos para el análisis de alimentos,}

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Fundamento

• _{La pluripeptona y el extracto de carne constituyen la fuente de}

carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano.

• _{El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico}

• _{y el agar es el agente solidificante.}

• _{Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril para}

favorecer el crecimiento de microorganismos exigentes en sus

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Formula

Gtioglicolato de sodio

Glicerofosfato de sodio

0.09

10.0

Cloruro de calcio 0.1

Azul de metileno 0.002

Agar

pH final: 7.4 ± 0.2

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Preparación

• _{Suspender 14,1 g del polvo por litro de agua destilada.}

• _{Reposar 5 minutos.}

• _{Calentar a ebullición hasta disolución total.}

• _{Distribuir en tubos con cierre a rosca (para evitar oxidación)}

llenándolos hasta 2/3 del tubo.

• _{Esterilizar 15 minutos a 121ºC.}

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uso

• _{Es un medio de mantenimiento que sirve para transportar muestras}

clinicas.

• _{Medio destinado a la recolección, transporte y preservación de}

muestras clínicas aptas para exámenes bacteriológicos.

• _{Es útil para mantener la viabilidad de gonococos y de otros}

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uso

• _{Medio semisólido, no nutritivo.}

Contiene tioglicolato de sodio, el cual provee un ambiente reducido y es útil para suprimir cambios oxidativos en el medio de transporte, y azul de metileno, que es el indicador de oxido reducción. De esta

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Formula

• _{Glucosa...1.0.}

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Preparación

• _{Suspender 31 g del polvo en 1 litro de agua purificada.}

• _{Calentar, agitando frecuentemente y llevar a ebullición hasta}

completa disolución.

• _{Distribuir en tubos y esterilizar en autoclave a 121 ºC durante 15}

minutos.

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Uso

• _{Medio utilizado en la identificación de miembros de la familia}

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Fundamento

• Medio de cultivo altamente nutritivo por la presencia de extracto de levadura, peptona y tripteína.

• La tripteína aporta gran cantidad de triptofano, sustrato de la enzima triptofanasa a partir del cual se forma indol que puede ser revelado con el reactivo de Ehrlich o de Kovac´s por la formación de un compuesto de color rojo.

• La glucosa es el hidrato de carbono fermentable,

• la ornitina es el sustrato para la detección de la enzima ornitina decarboxilasa,

• el púrpura de bromocresol es el indicador de pH, que en medio alcalino es de color púrpura y en medio ácido es amarillo.

• El agar es el agente solidificante y a esta concentración le otorga al medio la propiedad de ser semisólido, condición necesaria para detectar movilidad, que se evidencia por el enturbiamiento del medio o por crecimiento que difunde mas allá de la línea de inoculación del microorganismo en estudio.

• Los microorganismos fermentadores de glucosa acidifican el medio de cultivo y producen viraje del color púrpura al amarillo.

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Formula

• _{EXTRACTO DE}

CARNE...3.0. PLURIPEPTONA...20.0. CLORURO DE SODIO...5.0. LACTOSA...10.0. SACAROSA...10.0. GLUCOSA...1.0. SULFATO DE HIERRO Y AMONIO...0.2. TIOSULFATO DE SODIO...0.2.

• _{ROJO DE FENOL...0.025.}

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Preparación

• _{Suspender 62,5 g del polvo en 1 litro de agua purificada.}

• _{Dejar reposar 5 minutos. Mezclar bien, calentar con agitación}

frecuente y hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total.

• _{Distribuir en tubos, llenandolos con un volumen que ocupe hasta la}

tercera parte de los mismos.

• _{Esterilizar en autoclave a 121°C por 15 minutos. Enfriar y dejar}

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uso

• _{Medio universalmente empleado para la diferenciación de}

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• _{En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes}

adecuados para el desarrollo bacteriano.

• _{La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables.}

• _{El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el}

sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el ácido sulfhí- drico y producen sulfuro de hierro, de color negro.

• _{El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.} • _{El agar es el agente solidificante}

• _{Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del}

indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido.

• _{El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidró- geno que reacciona luego con una sal}

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CALDO MALONATO

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Formula

• Azul de bromotimol 0.025

• _{Fofato dipotásico 0.6} • _{Cloruro de sodio 2.0}

• _{Fosfato monopotásico 0.4} • Dextrosa 0.25

• Malonato de sodio 3.0

• _{Extracto de levadura 1.0} • _{Sulfato de amonio 2.0}

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Preparacón

• _{Rehidratar 9.3 g del medio en un litro de agua destilada.}

• _{Reposar 10 a 15 minutos.}

• _{Distribuir en tubos de ensayo en volumen de 3 ml.}

• _{Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 10}

minutos.

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Uso

• _{Para diferenciación de coliformes y otros microorganismos en especial}

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• _{El extracto de levadura proporciona vitaminas.} • _{La dextrosa es la fuente de energía.}

• _{El cloruro de sodio ayuda a mantener el equilibrio osmótico.}

• _{La degradación del malonato origina alcalinización del medio que se manifiesta}

por vire del indicador de pH azul de bromotimol de verde a azul (reacción positiva).

• _{Cuando no se utiliza el malonato no hay cambio de color y es una reacción}

negativa.

• _{Los tubos con el medio de cultivo se inoculan con la cepa del microorganismo a}

identificar.

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Formula

• _{Infusión Cerebro Corazón a partir de sólidos 6.0 gr}

• _{Tejido Animal digerido por Enzimas Pépticas 6.0 gr}

• _{Cloruro de Sodio 5.0 gr} • _{Dextrosa 3.0 gr}

• _{Gelatina digerida por enzimas pancreáticas 14.5 gr}

• _{Fosfato di-sódico 2.5 gr}

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• _{Suspender 37 g del medio en un litro de agua purificada.}

• _{Calentar con agitación suave hasta su entera disolución y hervir}

durante un minuto.

• _{Distribuir en tubos de ensayo en volumen de 3 ml.}

• _{Esterilizar en autoclave a 121ºC (15 lbs de presión) durante 10}

minutos.

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Uso

• _{El BHI es un medio líquido usado para cultivar microorganismos patógenos y}

no patógenos, incluyendo Bacterias aerobias y anaerobias, además también es usado en la preparación de inóculos en pruebas de susceptibilidad

microbiana.

• _{El caldo BHI es usado para cultivar una amplia variedad de microorganismos,}

incluyendo bacterias, levaduras y mohos y para preparar inóculos para

pruebas de concentración inhibitoria mínima. Cuando un número de células es inoculado en un pequeño volumen de caldo, esto proporciona una fase rápida de crecimiento. Este caldo es usado en tubos con 3 ml para preparar inóculos en pruebas de susceptibilidad microbiana. El caldo de BHI con

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fundamento

• _{Este caldo es un medio de cultivo nutritivo que contiene infusión de}

cerebro, tejido de corazón y peptonas que proporcional proteínas y otros nutrientes necesarios para permitir el crecimiento de

microorganismos patógenos y no patógenos.

• _{Cuando al medio se le adiciona 6.5% de cloruro de sodio, las sales}

activas actúan como agentes diferenciales y selectivos, los cuales