Observaciones y respuestas varias

Observaciones

Observaciones y respuestas varias

Punto

Observaciones

1.3.3

Aspectos de la metodología de ADN mitocondrial diferentes a los especificados en las tablas 3 y 4:

5

editadas con el software DNA for Windows y analizadas con el software DNAMAN Versión 5.2.2 (Lynnon Biosoft). El 60120 Se utilizó el kit CONCERT (GIBCO BRL) para la purificación de los productos de PCR. Las secuencias fueron

proceso de secuenciación del total de muestras fué llevado a cabo tanto en el secuenciador automático modelo 3130xl de la casa comercial Applied Biosystem como en el modelo 310 de la misma casa comercial.

5

utilizado para análise das regiões HVI das amostras M1 a M7 e da região HVII da amostra M8.A edição da região HVII 60126 A purificação da reação de extensão foi realizada com a resina Sephadex-100.O software de edição SeqScape foi

das amostras de M1 a M7 foi realizada por dois analistas, através da leitura das sequências e comparação com a sequência de Anderson.

560129 PE: PRECIPITACIÓN ISOPROPANOL / ETANOL 70% 5

15998-16391 M4 : 49-407 15998-16391 M5 : 49-407 15998-16391

60131 Posiciones editadas por Muestras de sangre :M1 : 49-407 15998-16391M2 : 92-335 15998-16391M3 : 122-407 560132 Tabla 4 - Columna SE: O ( lectura directa del electroferograma).

560136 La purificación de PCR se llevó a cabo con Exo SapIT 5

Illustra Microspin S-300 HR Columns (GE) para HVI y HVII EXOSAP-IT para RCTotalQS - 1b con sustitución del 60140 AMPLIFICACIÓN - Nº CICLOS-TOTALES:Para RCTotal: 35 ciclos (M1 a M4).SECUENCIACIÓN Y EDICIÓN PU -

tampón del kit utilizado por BetterBuffer (Microzone Limited) para HVI y HVII1c para RCTotal PE - BigDye X-Terminator Purification Kit (Applied Biosystems) para HVI, HVII y RCTotal LIMPIEZA DE M8 Utilizada la misma 5

(Isopropanol 75%; Etanol 70%)

60142 Purificación: se realizó utilizando EXOSap IT Purificación de reacciones de extensión: por precipitación alcohólica 5

de amplificação, sequenciação e análise igual a M1-M7.L15996/H16401, L29/H408, 35 ciclos;PU:O:ExoSAP-IT (USB 60143 Contaminante de M8 - Efectuamos zaragatoa de limpeza do pêlo M8 e procedemos à sua análise usando parâmetros

Corporation)PE:O:BigDye X Terminator (Applied Biosystems). 5

H00599- H00639 Nota: alguns dos primers descritos só foram utilizados em caso de necessidade de confirmação 60145 As reacções de sequenciação foram realizadas com os seguintes primers:- L15900- L15997- H00016- L16555-

das sequências.Na Tabela 4:PU - Digestão com ExoSAP-ITPE - Colunas Sephadex 5

tabla 3, primers internos con el fin de mejorar la resolución de la lectura de fragmentos complicados. Estos primers 60146 Algunas muestras se secuenciaron utilizando, además de los primers de amplificación externos que figuran en la

internos son H00281, L16212 Y H16154.

560149 Purificación de productos de PCR: MicrocónPCR (Millipore)

560150 Tabla 1.3.2 Purificación de productos PCR -> O: Montage PCR Millipore 5

Agilent).No se realiza análisis de ADN mitocondrial en las muestras M6 y M7 por tratarse de mezclas.

60151 Cuantificación de productos de PCR HV1 y HV2 mediante electroforesis capilar en microchip (Bioanalyzer 2100, 560155 Se han empleado los primers descritos por Gabrieli et al. (2003) y modificados por Chong at al. (2005).

5

casos el primer reverso H16406. En el caso concreto de la muestra M7, con heteroplasmia de longitud en el 60157 Muestras M1 a M7: además de los primers referidos en la tabla 1.3.2, para la secuenciación se utilizó en todos los

segmento HVS-II y en el tracto poliCA del segmento HVS-III, se usaron además los primers L394 y H456.Muestra M8:- Para la secuenciación del fluido contaminante de la muestra M8 se utilizaron los primers L15988, H16406, L12, H616. Las posiciones editadas fueron 16024 a 16406 y 34 a 576.- Para la secuenciación de la muestra de cabello M8 se utilizaron los primers L15988, L16159, H16406, H16236, L172, L394, H408, H616. Las posiciones editadas fueron 16024 a 16406 y 173 a 576.

560158 Para la muestra M8 se utilizaron más primers: L00172/H00408 y L00332/H00611 5

ADN mitocondrial, por tanto no se han analizado los pelos, sólo la muestra contaminante del pelo.En este laboratorio 63761 Los datos de la metodología de la M8, se refieren a la muestra contaminante del pelo.En este Laboratorio no se hace de forma rutinaria no se hacen muestras procedentes de agresiones sexuales ni violaciones, por tanto no se realiza lisis difrencial, ni de rutina se hacen pruebas preliminares de esperma.

5

completa de la HVI, la HVII no fue posible obtener una secuencia clara, primers utilizados en HVII: L16555/H00285, 63764 Purificación de los productos amplificados mediante EXOSAP IT En la muestra M8 solo se obtuvo secuencia

L00172/H00408 y L00172/H00599. 5

síntese do sequenciamento foi feita através de precipitação com etanol, utilizando EDTA.

63766 A purificação dos produtos de PCR foi realizada através de tratamento com Exo/SAP e a purificação dos produtos de 5

np 56-360.

63767 HVI range, considered for the sequences edit, is np 16024-16400. HVII range, considered for the sequences edit, is 563771 PE: BigDye Xterminator Kit, Applied Biosystem-.

2.3

 Observaciones y conclusiones a los resultados de ADN mitocondrial

que presentan el mismo haplotipo para el ADN mitocondrial. Además, en las mismas muestras (M2-M3), podemos 26731 Por lo que respecta a las muestras M1-M4, podemos observar que M2 y M3 estan emparentadas por vía materna, ya

observar una heteroplasmia de longitud en el fragmento HVII, que hace que a partir de la posición 309.1 sea complicada la lectura en la secuencia forward y prácticamente imposible en la secuencia reverse.Haciendo referencia a las muestras forenses, hemos tenido problemas con los primers para la secuenciación de los fragmentos HVI, por lo que no hemos podido informar del haplotipo. Aun así, si que lo hemos podido hacer para HVII. Tal como podemos ver, en la muestra 6 se puede ver el mismo haplotipo que para las muestras M2-M3, lo que confirma la mezcla entre dichas muestras en éste análisis. En la M7, podemos comprobar la mezcla entre las muestras M4 y M5, ya que

Observaciones

observamos en dos posiciones, dos nucleotidos diferentes, los cuales en una muestra se observan mutados, y en la otra no .Finalmente, en M8 además del haplotipo indicado, también podemos observar una heteroplasmia de longitud, 5

G, 146 Y, 152 C, 263 G. 279 Y, 309.1 C, 315.1 C, 16126 Y, 16256 Y, 16270 Y, 16292 Y, 16294 Y, 16311 Y, 16399 26734 1. La Tabla 8 no permite poner completo el haplotipo de la muestra M7. El haplotipo completo es el siguiente: M7: 73

R 2. El haplotipo de la muestra M8 que se ha puesto en la Tabla 8 se corresponde con el pelo propiamente dicho. El haplotipo obtenido de la contaminación externa es el siguiente: M8-EXTERIOR 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A Ambos haplotipos son iguales, lo que indica que el semen que estaba depositado en el exterior

el pelo podría pertenecer al mismo individuo donante del pelo, o a personas emparentadas por vía materna. Este d

haplotipo no se corresponde con ninguno de los obtenidos de las muestras M1-M7. 3. Los donantes de las muestras M2 y M3 comparten el mismo haplotipo (también M6, que es una mezcla de M2 y M3), lo cual es compatible con que ambos individuos estén emparentados por vía materna (ver conclusiones del estudio de STRs)

4. El haplotipo de la muestra M7 refleja la mezcla de material genético procedente de las muestras M4 y M5. 5

inserción de una C en posición 309.2 C. El resultado obtenido es compatible con la existencia de dos poblaciones de 60119 En las muestras M2, M3 y M6 se observa una zona heteroplásmica a partir de la posición 309.1 C debido a la

ADNmt en dichas muestras, una con dicha inserción (309.2 C) y otra sin ella.El resultado obtenido es compatible con que las muestras M2 y M3 pudieran estar emparentadas por línea materna. Aunque la muestra M6 procede de una posible mezcla de M2 y M3 (como se observa en el estudio de ADN nuclear), mediante el estudio de ADNmt realizado no es posible discernir dicha mezcla ya que las secuencias de ADNmt de M2 y M3 son idénticas con lo que se obtiene un único haplotipo de ADNmt idéntico al de M2 y M3, incluyendo la zona heteroplásmica.

5

fragmentos hipervariables se emplearon los dos modelos de secuenciadores automáticos – ABI 3130xl y ABI 310- de 60120 Las muestras M1 a M7 fueron procesadas todas de igual manera. En el proceso de lectura de la secuencia de los

los que disponemos en el laboratorio de manera de optimizar el proceso de análisis de los datos. No se presentó mayor inconveniente al momento de editar y analizar los electroferogramas obtenidos para las muestras M1 a M4. De esta parte del análisis resaltó la coincidencia de los haplotipos obtenidos para las muestras M2 y M3. Para el caso de las muestras correspondientes al ejercicio forense –M5 a M8-, el análisis de la data debió ser exhaustivo dada la condición de mezcla de las muestras M6 y M7 determinado previamente mediante el análisis de STRs de estas muestras. El haplotipo obtenido para la muestra M6 coincide con el haplotipo encontrado para las muestras M2 y M3 en concordancia con los resultados obtenidos para STRs autosómicos de ambas muestras y STRs de Cromosoma Y para el caso particular de M2. En el caso de M7, el haplotipo obtenido coincide con el patrón de mutaciones encontradas en el análisis de las muestras M4 y M5, hecho que también se validó de acuerdo a los resultados de STRs obtenidos.Por su parte, los cabellos correspondientes a la muestra M8 fueron procesados y analizados individualmente, arrojando haplotipos idénticos.

5

predominante o mesmo perfil de M2 e M3. A amostra M7 revela ser uma mistura, apresentando os perfis de M4 e M5 60121 As amostras M2 e M3 partilham a mesma linhagem materna. A amostra M6 revela ser uma mistura, sendo

para a região HVSI. A amostra M8 apresenta contaminação.560121 5

comprobamos que solo dos de ellas (M2 y M3) presentan un haplotipo similar para las regiones HVI y HVII, de lo que 60122 EJERCICIO DE PATERNIDAD (Muestras M1-M4):Al realizar el análisis de ADNmt de las muestras M1, M2, M3 y M4

se infiere que estas dos muestras podrían proceder de una misma linea materna.EJERCICIO DE FORENSE (Muestras M5-M8):Al realizar el análisis de ADN mitocondrial de las muestras M5, M6, M7 y M8 comprobamos que ninguna de ellas presentan el mismo haplotipo para las regiones HVI y HVII.La muestra forense M7 CORRESPONDE A UNA MEZCLA, a la cual PODRÍAN HABER CONTRIBUIDO los donantes de las muestras de referencia M4 y M5.A la muestra forense M6 podrían haber contribuido los donantes de las muestras M2 y M3.La muestra forense de pelo M8, presenta un haplotipo diferente al resto de muestras por lo que no pertenece a ninguno de los donantes de las muestras de referencia.OBSERVACIONES: Al no poseer reactivos para establecer la composición de las mezclas este análisis está basado exclusivamente en los resultados de ADN mitocondrial obtenidos de las distintas muestras. 560123 Las muestras M2 y M3 tienen el mismo haplotipo de ADN mitocondrial.

560125 Existe mezcla en las muestras M6 y M7 5

M7.Confirmação do haplótipo M7 (TABLA 8): 73 G, 146 Y, 152 Y, 263 G, 279 Y, 309.1C, 315.1C, 16126 Y, 16256 Y, 60126 M2, M3 e M6 compartilham o mesmo haplótipo.Os haplótipos de M4 e M5 estão contidos na mistura de haplótipos de

16270 Y, 16292 Y, 16294 Y, 16311 Y A confirmação se deve ao fato de não conseguirmos visualizar a digitação do polimorfismo 16311 Y, após salvamento.

5

del pelo. 2) Se excluye a los individuos donantes de las muestras M1 a M5 como posibles donantes de la muestra M8 60129 1) La secuencia de ADN mitocondrial obtenida del lavado realizado sobre la muestra M8 es la misma que la obtenida

y del material biológico presente sobre la superficie de la muestra. 560131 M2, M3 et M6 appartiennent à la même lignée maternelle

5

16311 C/T, 16399 A/G. En la muestra M2 se observa heteroplasmia de longitud en el tracto homopolimerico 303-315. 60132 M 7: 73 G, 152 C, 263 G, 279 C/T, 309.1 C, 315.1 C, 16126 C/T, 16256 C/T, 16270 C/T, 16292 T/C, 16294 T/C, 5

polimorfismos digitados,Na amostra M2 há heteroplasmia de comprimento nas posições 309 e 315.

60134 O espaço para a amostra M7 não permite escrever o haplótipo inteiro sem eliminar alguns dos espaços entre os 5

muestrras M2, M3 y M6 comparten el mismo haplotipo mitocondrial y por tanto, podrían compartir la misma línea 60136 La muestra M1 no comparte el haplotipo mitocondrial con ninguna de las otras muestras del ejercicio (M2-M8).Las

materna. La muestra M7 es un perfil mixto que incluye los haplotipos de las muestras M4 y M5. La muestra M8 no comparte el haplotipo mitocondrial con ninguna de las otras muestras del ejercicio (M1-M7). pero en el líquido de lavado de la muestra M8 se detectó el siguiente haplotipo: 73 G, C, 263 G, 315.1 C, 16244 C, 16311 C, 16319 A que corresponde a un contaminante de la muestra que no se comparte con ninguna de las otras muestras del 560137 Muestras M2 y M3 tienen el mismo perfil de ADN mitocondrial

5

relacionado por línea materna con M3. Este hallazgo se complementa con los resultados de STRs nucleares que 60139 1. La muestra M2 y la muestra M3 presentan el mismo haplotipo por lo cual no se puede excluir a M2 como

muestran que M2 y M3 están relacionados genéticamente.560139 5

Y, 16292 Y, 16294 Y, 16311 Y Ha sido detectada heteroplasmia de longitud en M2, M3, M6 y M7 en la posición 60140 RESULTADO COMPLETO PARA M7: 73 G, 146 Y, 152 C, 263 G, 279 Y, 309.1 C, 315.1 C, 16126 Y, 16256 Y, 16270

309.1. M2 y M3: No se puede excluir que pertenezcan al mismo linaje femenino. M6: Resultados de mtDNA concordantes con los STRs autosómicos (mixtura de M2 y M3).M7: Resultados de mtDNA concordantes con los

Observaciones

STRs autosómicos (mixtura de M4 y M5).M8 y Limpieza de M8: No se puede excluir que pertenezcan al mismo linaje femenino.En las posiciones 16 y 16449 (RCTotal) fueran detectados artefactos provocados por la utilización de los 5

pertenecer a la misma linea materna.n la muestra M6 los contribuintes tienen lo mismo haplotipo de M2 y M3. M7 es 60141 Muestra8 - extracto saliva:73 G, 152 C, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A, 16463 G, 16519 C M2 y M3 pueden

una mescla de M4 y M5. 5

pertenecer a la misma linea materna. Un la muestra M6 los contribuintes tienen lo mismo haplotipo de M2 y M3. M7 60141 Muestra8 - extracto saliva:73 G, 152 C, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A, 16463 G, 16519 C M2 y M3 pueden

es una mescla de M4 y M5. 5

mismo haplotipo mitocondrial que M2 y M3La muestra M7 presenta numerosos sitios heteroplásmicos compatibles 60142 La muestra M2 y M3 comparten el mismo haplotipo mitocondrial. La muestra M6 (mezcla de M2 y M3 ) presenta el

con una mezcla. EL haplotipo completo fue cargado en la "Tabla Anexa" ya que el espacio correspondinete en la Tabla 8 resulta insuficiente. Muestra 8 La muestra M8-pelo fue editada entre las posiciones 16024-16542 y 63-439. El haplotipo correspondiente al contaminante de la muestra M8 se adjunta en "Tabla anexa" y fue editado entre las posiciones 16081-16462 y 53-514.

5

M8)As amostras M2, M3, M4 e M6 apresentam um pico secundário C na posição 368 mas apenas na cadeia forward. 60143 Haplótipo do Contaminante de M8 - 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A (Zg de limpeza do pêlo

Para confirmar esta situação, procedemos à sequênciação do segmento HVII destas amostras com o primer

L318.Perfil de M7-73 G, 146 Y, 152 C, 263 G, 279 Y, 309.1 C, 315.1 C, 16126 Y, 16256 Y, 16270 Y, 16292 Y, 16294Y, 16311 Y 5

Mulero et al., J. Forensic Sci., 2006, 51: 694). Utilizando o ladder do kit Y Filer, corresponde a menos 9 repetições.** 60145 * nomenclatura dos alelos para o locus GATA H4.1 efectuada de acordo com as recomendações da ISFG (J.J.

este marcador STR do cromossoma X não cabe na tabela correspondente pelo que foi colocado nas tabelas relativas a Y-STRs.*** Resultado mtDNA para a amostra M7 (não cabe no espaço correspondente):73 G, 146 Y, 152 C, 263 G, 279 Y, 309.1 C, 315.1 C, 16126 Y, 16256 Y, 16270 Y, 16292 Y, 16294 Y, 16311 Y, 16399 R, 16519 Y

5

ambas presentan una heteroplasmia de longitud en el tracto poli-C de HVSII. La coincidencia de haplotipos no permite 60146 Las muestras M2 y M3 comparten el mismo haplotipo mitocondrial. Además de los cambios reportados en la tabla,

descartar una relación de parentesco vía materna entre los donante de ambas muestras. M1, M4 y M5 presentan haplotipos diferentes entre sí y diferentes al de M2 y M3. La muestra forense M6 podría corresponderse con una mezcla de M2 y M3 ya que comparte con ellas el mismo haplotipo, incluida la heteroplasmia de longitud en HVSII. Estos resultados concuerdan con los obtenidos para STRs autosómicos y STRs de cromosoma Y.La muestra forense M7 podría corresponderse con una mezcla de las muestras M4 y M5. En la secuencia de M7 se detectan en homplasmia los cambios comunes a M4 y M5 y en heteroplasmia los cambios no coincidentes. Estos resultados también son concordantes con los obtenidos en el análisis de STRs autosómicos y STRs de cromosoma Y.Solo ha sido posible la obtención de secuencia de la muestra M8 (pelo) para los primers forward de las regiones HVSI, HVSII y HVSIII. Este hecho ha dificultado la lectura completa de la secuencia y la correcta interpretación de la misma. En la tabla 8 se han reportado los cambios respecto a la CRS que podían leerse con claridad, no descartandose que pudieran existir otros cambios. El haplotipo obtenido para la muestra M8 (pelo) no es coincidente con ninguno de los de las muestras de referencia

5

C+T, 16270 C+T, 16292 C+T, 16294 C+T, 16311 C+T. Al intentar introducir los datos y después grabar, no aparece 60147 Observaciones: La M7 su haplotipo es 73 G, 146 C+T, 152 C, 263 G, 279 C+T, 309.1 C, 315.1 C, 16126 C+T, 16256

todos los valores que habia introducido. 5

de M8 corresponde al contaminante superficial del pelo. - El pelo M8 no pudo ser amplificado con los primers de ADN 60149 - Las muestras M6 y M7 son mezclas de ADN, por lo que no se aplica el análisis de ADN mitocondrial.- La secuencia

mitocondrial humano (descritos por Wilson, IJLM, 108:68, 1995)- Los resultados de STRs autosómicos y de cromosoma-Y para la muestra M8 corresponden al contaminante superficial del pelo.

5

Y, 309.1 C, 315.1 C, 16126 Y, 16256 Y, 16270 Y, 16292 Y, 16294 Y, 16311 C M8: 73 G, 152 C, 242 T, 263 G, 295 60150 M7 y M8 no entra el haplotipo en la casilla correspondiente (se trunca al grabar):M7: 73 G, 146 Y, 152 C, 263 G, 279

T, 315.1 C, 16069 T, 16075 G, 16093 C, 16126 C, 16145 A, 16172 C, 16222 T, 16261 T, 16316 G 5

contaminación con semen humano, se realizan tres extracciones independientes mediante distintos procedimientos de 60151 * En M2 se observa heteroplasmia de longitud acusada, podría incluirse 309.2 C.En M8, en la que se detecta

lisis diferencial (tendentes a eliminar la contaminación del pelo) obteniéndose en todos los casos y en ambas fracciones (1ª y 2ª lisis) el mismo haplotipo (mostrado en la tabla). Estos resultados (así como la valoración

cuantitativa de ADN total humano de ambas fracciones mediante Quantifiler DUO) sugieren que el haplotipo obtenido en las fracciones de las 2ª lisis puede provenir todavía del semen y estar enmascarando el haplotipo constitutivo del pelo. Otras posibles explicaciones serían que los donantes del semen y del pelo tengan el mismo haplotipo o que el donante del semen y del pelo sea el mismo individuo.Por las razones expuestas este laboratorio no puede emitir resultados fiables con respecto al ADN mitocondrial del pelo analizado, emitiendo solamente el haplotipo de ADN mitocondrial obtenido de la fracción de la 1ª lisis que proviene de la contaminación de semen detectada.

5

nuestra región de edición. M2 presenta heteroplasmia de longitud en HVII, que también se ha observado en M3 60152 En M1 se detecta además la 72C, si bien no la hemos reflejado en el formulario por quedar esta posición fuera de

aunque más levemente.En el pelo se ha detectado una contaminación con semen. La secuencia obtenida a partir del semen contaminante es 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A. A pesar de los diferentes intentos que se han realizado para soslayar la contaminación, intensificando los lavados previos, no ha sido posible obtener una secuencia única que defina el haplotipo del pelo. En todos los ensayos realizados se observa mezcla con la secuencia obtenida para el semen contaminante. Considerando la secuencia obtenida para el semen, no puede descartarse a M5 como donante del pelo, si bien en este último se detecta además una heteroplasmia de secuencia (16188 C/T) y una heteroplasmia de longitud en el tracto poliC.No se han analizado para ADN mitocondrial M6 y M7 5

(alrededor de la posición 310) en el fragmento correspondiente a HVRII. En cambio en la muestra M8 dicha 60155 Las muestras M1, M2, M3, M4, M5, M6 y M7 presentan claramente heteroplasmia de longitud en el tracto de poly-C

heteroplasmia es mucho menos evidente. En cuanto al número de inserciones de citosinas en la posición 309, el haplotipo descrito en la Tabla 8 hace referencia al haplotipo mayoritario. Destacamos que para la muestra M2, contribuyen de forma casi equivalente los dos tipos mitocodriales con una o dos inserciones (ver electroferogramas correspondientes-HVII forward y reverse). Sin embargo, el haplotipo que contiene 309.1C es ligeramente mayoritario y, por consecuencia, es el que se ha incluido en la Tabla 8.Todos los prefiles de mtDNA se han buscado en diferentes bases de datos (EMPOP, mtDNA Manager, MtDNA Population Database). Entre las muestras de referencia, el único haplotipo que no se ha encontrado en ninguna de ellas es el de M4. Se trata, por tanto, de un

Observaciones

haplotipo poco frecuente.*NOTA* Se adjunta en hoja a parte con los electroferogramas el haplotipo completo de la 5

procesado también la contaminación detectada en el pelo, que se determinó era de semen, obteniéndose el siguiente 60156 En la casilla correspondiente a la muestra M8 se ha cargado el haplotipo correspondiente al pelo. Además se ha

haplotipo: 263 G, 315 T, 16224 C, 16311 C, 16319 A.Se ha llegado a las siguientes conclusiones:- M2 y M3 están emparentados por vía materna. El cálculo del índice de maternidad da un valor de 0.999999934 y, por sus haplotipos de ADN mitocondrial, concluimos que M2 y M3 son madre e hijo.- M6 resulta de la mezcla de M2 y M3, confirmando los resultados obtenidos por STRs.- M7 resulta de la mezcla de M4 y M5, confirmando los resultados obtenidos por STRs 5

309.3 C Muestra M3: Heteroplasmia de longitud en el segmento HVS-II, 309.1 C >309.2 CLos haplotipos de ADNmt 60157 EJERCICIO DE PARENTESCOMuestra M2: Heteroplasmia de longitud en el segmento HVS-II, 309.1 C >309.2 C >

correspondientes a las muestras M2 y M3 son coincidentes entre sí. El valor LR, basado en el cálculo de frecuencias de Balding y Nichols (Tully et al., Forensic Sci. Int. 124(2001):83-91), indica que la probabilidad de coincidencia entre las secuencias de M2 y M3 debida a la pertenencia de ambas a un mismo linaje matrilineal es 2.213 veces mayor que la probabilidad de coincidencia debida al azar en la población de referencia utilizada (6.415 haplotipos de región de control recogidos en EMPOP 2). El valor de LR es de 1.169 al considerar los 2.336 individuos caucasoides incluidos en la base de datos EMPOP 2.Los individuos donantes de las muestras M1 y M4 no

pertenecen al mismo linaje materno, de forma que estos individuos no están emparentados por vía materna. De igual forma, tampoco tienen relación por vía materna con M2 y M3.EJERCICIO FORENSE Muestra M6: Heteroplasmia de longitud en el segmento HVS-II, 309.1 C >309.2 C >> 309.3 CMuestra M7: Heteroplasmia de longitud en el segmento HVS-II, 309 C < 309.1 C Haplotipo completo de la muestra M7: 73 G, 146 Y, 152 C, 263 G, 279 Y, 309.1 C, 315.1 C, 523.1 T, 523.2 A, 16126 Y, 16224 Y, 16256 Y, 16270 Y, 16292 Y, 16294 Y, 16311 Y, 16319 R, 16399 R, 16463 R, 16519 YHaplotipo del fluido contaminante de la muestra M8: 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 523.1 T, 523.2 A, 16224 C, 16311 C, 16319 A

5

M4 tienen diferente perfil entre ellas y con las muestras M2 y M3. M6 tiene el mismo perfil mitocondrial que el de las 60158 Los donantes de las muestras M2 y M3 comparten el mismo perfil mitocondrial. Los donantes de las muestras M1 y

muestras M2 y M3. M7 es compatible con una mezcla de los perfiles mitocondriales observados en M4 y M5. Para la muestra M8 (cabellos) se ha procesado de forma independiente el pelo y el lavado del pelo: Pelo M8: los

electroferogramas no cumplen unos criterios de calidad mínimos utilizados en este laboratorio como para reportar oficialmente el perfil obtenido; Lavado pelo M8: 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 523.1 T, 523.2 A, 16224 C, 16311 C, 16319 A, 16463 G, 16519 C El lavado de pelo tiene un perfil mitocondrial que es diferente a cualquier otro observado en las muestras M1 a M7.

5

entre dichas muestras, no obstante, si observamos los resultados en su conjunto, estos datos son compatibles con 60159 Las muestras M2, M3 y M6, poseen el mismo haplotipo. No se puede descartar por tanto la relación por vía materna

las conclusiones obtenidas en el análisis de STRs autosómicos. La muestra M7 corresponde a un haplotipo mezcla, compatible con los haplotipos M4 y M5. Estos datos son compatibles con las conclusiones obtenidas en el análisis de STRs autosómicos. Los fragmentos de pelo que contenía el sobre de la muestra M8, se sometieron a una extracción individualizada. Tras el proceso de lavado se observo el perfil expuesto anteriormente para uno de los pelos, en otro de ellos aparecía idéntico perfil (a excepción del polimorfismo 152) aunque con muy baja intensidad de señal. En el resto de pelos los resultados no fueron concluyentes. Hay que hacer mención de que se llevó a cabo la

secuenciación del extracto obtenido a partir del lavado en el cual se obtuvo igualmente el resultado expuesto en M8. 5

la presencia de semen como contaminante. Hemos recogido el semen de la superficie mediante torunda y procedido 60160 1.- En casos de heteroplasmias de longitud se informa del haplotipo mayoritario. 2.- MUESTRA M8: se ha detectado

a su extraccion. El pelo se ha lavado sucesivas veces y posteriormente se ha extraido su ADN. Los resultados que obtenemos son (16024-576): Torunda recogida semen en superficie: 73G 152C 263G 315.1C 524T 524.1A 524.2C 16224C 16311C 16319A 16463G 16519C Pelo lavado: 73G 152C 263G 315.1C 524T 524.1A 524.2C 16224C 16311C 16319A 16463G 16519C Este resultado puede deberse a: a) que ambas muestas (semen y pelo) procedan el mismo individuo, a individuos emparentados matrilinealmente, o a dos individuos no emparentados que presenten el mismo haplotipo (si bien el haplotipo presenta algunos polimorfismos no frecuentes); b) que la separación física de muestras no haya sido efectiva para mt y que por tanto estemos detectando sólo el haplotipo de uno de los tejidos biológicos en ambas muestras 3.- MUESTRA M7: se detecta una mezcla de al menos tres personas en autosómicos (compatible con M4 + M5+ torunda M8) y sólo dos haplotipos mitocondriales (M4 + M5) en ambas lisis. No hay muestra

indubitada del donante del semen M8 pero si el haplotipo de este donante es el detectado en la torunda M8, este haplotipo no aparece en M7. Esto puede deberse al escaso número de mt en semen (ver Montesino et al., 2007) 5

correspondientes donantes. La muestra M6 tiene el mismo haplotipo que M2 y M3 porque es mezcla de ambas 60161 Las muestras M2 y M3 tienen el mismo haplotipo, por lo que no se descarta un origen materno común de los

(deducido del estudio de STR´s). Dicho haplotipo no coincide con el de ninguna otra muestra.El haplotipo de la muestra M7 es mezcla de los haplotipos de M4 y M5 (también se deduce dicha mezcla del estudio de STR´s). NOTA: LA POSICIÓN "16311 Y" DEL HAPLOTIPO DE M7 (LA ÚLTIMA, QUE APARECE EN LA TABLA ÚNICAMENTE COMO "163") NO SE GRABA CORRECTAMENTE.

5

el oligo H408 no se ha reportado.

60186 En la muestra 1 se ha detectado heteroplasmia en la posición 309 con el oligo L043 pero al no poder confirmarla con 5

propiamente dichos

63761 El perfil que se ha puesto en la tabla 7.A, para la muestra M8, corresponde a la contaminación del pelo, no a los pelos 5

ser idénticos, no se presenta ninguna posición heteroplásmica. La muestra M7 puede presentar, al menos, la mezcla 63764 El haplotipo de la muestra M2 es identico a la M3. La M6 puede ser una mezcla de ambos haplotipos por lo tanto, al

de los haplotipos M4 y M5. 5

L48, H408 e H285.-Foram realizadas 2 extrações de DNA a partir da amostra M8: extração orgânica do pêlo total 63766 Para o sequenciamento das amostras foram utilizados os iniciadores de cadeia L15996, H16391, L16209, H16164,

(M8.1), do pêlo após lavagem (M8.2) e do material que recobre o pêlo (M8.3). O perfil colocado acima refere-se a amostra M8.1.Haplótipos obtidos:M8.1 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A M8.2 (pêlo) 73G, 150 T, 195 C, 263 G, 309.1 C, 315.1 C, 16172 C, 16189 C, 16223 T, 16320 T M8.3 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A

5

haplotype that is the same of M2/M3.- MtDNA analysis of M7 show a mixed profile, and it could be the result of a 63767 - M2 and M3 share the same mtDNA type.- The mixed stain M6 (based on STR result) shows only one mtDNA

Observaciones

563771 M2 y M3 comparten el mismo haplotipo de ADN mitocondrial por lo cual pertenecen al mismo linaje materno.

3.1

 Comentarios y observaciones que desee hacer referente a las muestras analizadas, no es 

necesario considerarlas como relacionadas genéticamente

5

siguientes observaciones y conclusiones:Por lo que respecta a las muestras M2 y M3, podemos ver que no 26731 Los resultados obtenidos en el análisis de STR’s autosómicos, STR’s X, STR’s Y y ADN mitocondrial, muestran las

presentan ninguna exclusión por STR’s autosómicos, lo que nos lleva a pensar que pueden estar relacionados y ser Padre e Hija, o Madre e Hijo. La segunda hipótesis, queda respaldada por la detección del mismo haplotipo de ADN mitocondrial. Aún así, las dos hipótesis quedan descartadas por la presencia de 3 exclusiones al analizar los STR’s X. Estas observaciones, nos llevan a considerar la relación de hermandad entre las dos muestras. Esta relación queda apoyada por el hecho de presentar el mismo ADN mitocondrial (relación por vía materna), y la presencia de ninguna exclusión por STR’s autosómicos. Si observamos las muestras M1 y M2, podemos ver que no hay ninguna exclusión al analizar los STR’X, por lo que podemos pensar que existe un vínculo Madre e Hijo o Padre e Hija. Las dos opciones quedan descartadas, ya que se observan varias exclusiones por STR’s autosómicos, y además no comparten el mismo haplotipo de ADN mitocondrial, lo que descarta la relación Madre e Hijo. Para el resto de pares de muestras (M1-M3, M1-M4, M2-M4 y M3-M4), se observan exlusiones tanto en el análisis de STR’s autosómicos como de STR’s de X, y además, ninguna de las muestras comparte un haplotipo de ADN mitocondrial. En el caso de las muestras M2 y M4 (varones), tampoco pertenecen a la misma línea paterna, ya que los perfiles de Cromosoma Y són diferentes.

5

no nos permiten establecer de manera concluyente el grado de parentesco entre ambas:1. Por una parte, M2 y M3 26734 Los donantes de las muestras M2 y M3 tienen una relación de parentesco entre ellas, pero los resultados obtenidos

comparten el mismo haplotipo de ADN mitocondrial, lo que es compatible con que ambos individuos estén emparentados por vía materna, sinedo las opciones más probables (como ahora veremos) que sean madre (M3) e hijo(M2), o bien hermanos por parte de madre, y también de padre (por STRs). 2. El análisis de los 22 STRs analizados no permiten excluir a la donante de la muestra M3 como madre biológica del donante de la muestra M2, ya que en todos los sistemas comparten, al menos, 1 alelo. La aproximación probabilística (utilizando nuestra propia base de datos de frecuencias alélicas) da como resultado un LR de 1,4 x10^11, equivalente (a priori 0,5) a una probabilidad de maternidad del 99,999999999% (99 y 9 nueves). 3. El problema surge cuando nos hacemos la pregunta de si M2 y M3 podrían ser hermanos completos, en vez de madre e hijo, ya que se observa una coincidencia perfecta en los genotipos de 10 de los 22 STRs autosómicos analizados. Al realizar el cálculo probabilístico se obtiene un LR = p(E/H1) / p(E/H2) de 1,72 x 10^12 (H1: hermanos completos; H2: sin relación de parentesco), equivalente (a priori 0,5) a una probabilidad de hermandad del 99,9999999999% (99 y 10 nueves).4. Si calculamos el LR = p(E/H1) / p(E/H2), siendo H1 la probabilidad de coinciencia de genotipos si M2 y M3 son hermanos completos y H2 la probabilidad de coinciencia de genotipos si M2 y M3 son madre e hijo, respectivamente, se obtiene un LR = 12, es decir, es 12 veces más probable la coincidencia de genotipos si M2 y M3 son hermanos completos, con respecto a que sean madre e hijo. 5. Como el LR obtenido en el punto 4 es muy bajo, si en nuestro laboratorio hubiesen llegado los individuos M2 y M3 y nos preguntaran si son madre e hijo, o bien, hermanos completos, con estos datos obtenidos no podríamos ofrecer un resultado concluyente. Sería necesario ampliar el estudio genético mediante el análisis de más marcadores STRs, SNPs, o bien, incluir más miembros de la familia en la "ecuación"

5

donantes de M2 y M4 no están vinculados por línea paterna (patrilínea) dado que no comparten haplotipo en 26820 M1 y M3 corresponden a donantes de sexo femenino, mientras que M2 y M4 a donantes de sexo masculino.Los

cromosoma Y.Los donantes de M2 ( sexo masculino) y M3 (sexo femenino) comparten un haplotipo en marcadores autosómicos como correspondería a una relación de paternidad o maternidad:-donante de M2 podría ser el padre de M3.-donante de M3 podría ser madre de M2.Si existiera una hipótesis a priori para el caso, se podrían realizar los cáculos correspondientes.El índice de paternidad o maternidad y las probabilidades correspondientes calculadas sin madre o padre son: 7098774,25 y 99,999998 respectivamente. 526820

526821 los donantes de las muestras M1 y M3 son dos hembras los donantes de las muestras M2 y M4 son dos nachos 5

utilizada (AmpFLSTR Identifiler PCR Kit).Se ha procedido a calcular el valor del posible alelo microvariable respecto al 60116

tamaño de los alelos 18 y 19:&#948;1 = S18 – L18 = 136.15 – 136.19 = -0.04&#948;2 = SOL – L19 = 144.86 – 140.31 = 4.55&#9474;&#948;1 - &#948;2&#9474; =&#9474; -0.04 – 4.55&#9474; = 4.59Conclusión: el alelo detectado fuera de la escala alélica utilizada es el 20.El análisis de esta muestra también se ha realizado utilizando el AmpFLSTR NGM PCR Kit corroborando nuestro resultado, pues la escala alélica utilizada para este kit contiene el alelo 20 y se le ha asignado este valor.Se han estudiado posibles vínculos de paternidad entre las 4 muestras mediante la

comparación de los alelos para los distintos marcadores amplificados con los diferentes kits. Las 4 muestras analizadas presentan entre ellas 4 o más exclusiones; únicamente las M2 y M3 no presentan exclusiones por lo que se ha procedido a realizar los cálculos para establecer la probabilidad (LR) de paternidad o hermandad entre ambas muestra.Los análisis se realizan mediante el software FAMILIAS v 1.8.- Respecto al cálculo de la paternidad se establecen las siguientes hipótesis:Con los datos obtenidos no es posible establecer quien de los donantes de las M2 y M3 es el progenitor o el descendiente.Hipótesis 1: Los donantes de las M2 y M3 tienen una relación de

paternidad.Hipótesis 2: Los donantes de las M2 y M3 no tienen una relación de paternidad.Del análisis estadístico resulta un índice de paternidad de 15.064.731,5451108. Lo que significa que es más de 15 millones de veces más probable si los donantes de las muestras M2 y M3 tienen una relación de paternidad que si no la tienen.Si suponemos una probabilidad a priori de 0.5 i expresado en tanto por ciento el anterior índice de paternidad se convierte en una probabilidad de paternidad de 99.9999933619797%.- Respecto al cálculo de la hermandad se establecen las siguientes hipótesis:Hipótesis 1: Los donantes de las M2 y M3 tienen una relación de hermandad.Hipótesis 2: Los donantes de las M2 y M3 no tienen una relación de hermandad.Del análisis estadístico resulta un índice de hermandad de12.312.729,0683932.Lo que significa que es más de 12 millones de veces más probable si los donantes de las muestras M2 y M3 tienen una relación de hermandad que si no la tienen.Si suponemos una probabilidad a priori de 0.5 y expresado en tanto por ciento el anterior índice de hermandad se convierte en una probabilidad de hermandad de 99.9999918783244%.Como conclusión podemos decir que ambos donantes están relacionados genéticamente, pero no es posible determinar la relación de parentesco entre ambos utilizando únicamente este tipo de marcadores.Además el hecho de que compartan más alelos de los esperables en un caso de paternidad, podría indicar un posible caso de incesto.

Observaciones

5

vínculo paterno/materno- filial.En el caso de los perfiles masculinos obtenidos a partir de las muestras M2 y M4 se 60117 Los perfiles genéticos obtenidos a partir de las muestras M2 y M3 se comportarían según lo esperado para un

observaron diferentes haplotipos del cromosoma Y, por lo tanto estos dos individuos no podrian estar vinculados por via paterna. Planteando como hipótesis que M4-M5 o M1-M4 sean abuelos maternos de M2 o de M3, se observaron exclusiones para dichos vinculos.

5

en el estudio de las muestras M1, M2, M3, M4, M5 y M6 se ha observado un único haplotipo de ADNmt (con una zona 60119 NOTA: Conclusión adicional sobre el estudio de ADNmt no incluida por error en el apartado anterior (mis disculpas):

heteroplásmica en M2, M3 y M6). En la muestra M7 se ha detectado una mezcla de, al menos, dos haplotipos de ADNmt compatible con una mezcla de los haplotipos de las muestras M4 y M5, lo que concuerda con el resultado obtenido en el estudio de marcadores nucleares.EJERCICIO DE PARENTESCO:En el análisis genético tanto por marcadores nucleares como por ADNmt de las muestras M2 y M3 se ha observado un resultado compatible con dos posibles hipótesis:1. M3 es madre biológica de M2: tanto el resultado de marcadores nucleares (IP/IM:

1.065.826.174,572 y Probabilidad de Paternidad/Maternidad superior al 99,99999991%) como el de la coincidencia de haplotipos de ADNmt son compatibles con esta hipótesis.2. M2 es padre biológico de M3. Las muestras M2 y M3, en algún momento, han compartido línea materna: de igual modo, tanto el análisis de marcadores nucleares (IP: 1.065.826.174,572 y Probabilidad de Paternidad superior al 99,99999991%) como el de la coincidencia de haplotipos de ADNmt son compatibles con esta hipótesis. Esta situación es bastante habitual en poblaciones pequeñas o entornos confinados en los que existe un alto nivel de endogamia y poca dispersión genética (pueblos, islas, poblaciones aisladas, etc.).La hipótesis más sencilla es la 1 aunque no se puede descartar la hipótesis 2.En principio tanto el estudio de ADN nuclear como de ADNmt de las muestras M1 y M4 indica que no existe una relación de parentesco de primer grado entre ellas y las muestras M2 y M3.

5

menos um alelo autossómico para cada marcador analisado, mas não partilham alguns alelos do cromossoma X.As 60121 As amostras M2 e M3 estão relacionadas entre si, podendo ser irmãos. Partilham a mesma linhagem materna, e pelo

amostras M1 e M4 não estão relacionadas entre si nem com a amostras M3. 5

de dilucidar si podrían tener una relación paterno-filial (materno-filial). El resultado de esta comparación fué el 60122 Una vez analisados los STR autosómicos de las muestras M1, M2, M3 y M4 se han comparado entre ellas con el fin

siguiente:- M1 con respecto a M2: 6 EXCLUSIONES DE SEGUNDO ORDEN Y 1 DE PRIMER ORDEN.- M1 con respecto a M3: 4 EXCLUSIONES DE SEGUNDO ORDEN Y 1 DE PRIMER ORDEN.- M1 con respecto a M4: 5 EXCLUSIONES DE SEGUNDO ORDEN Y 3 DE PRIMER ORDEN.- M2 con respecto a M3: No presenta ninguna exclusión, POR LO QUE PODRÍA TRATARSE DE MADRE- HIJO (teniendo en cuenta los resultados de ADN mitocondrial de ambas muestras M3 podría ser la madre de M2).- M2 con respecto a M4: 4 EXCLUSIONES DE SEGUNDO ORDEN Y 4 DE PRIMER ORDEN.- M3 con respecto a M4: 4 EXCLUSIONES DE SEGUNDO ORDEN Y 3 DE PRIMER ORDEN.CONCLUSIÓN: Debido al número de exclusiones existentes entre todas las muestras salvo M2-M3, el resto de muestras quedan descartadas como posible relación paterno-filial (materno-filial).

5

entre estes; no xstr-Decaplex, é verificada compatibildade para a hipótese de serem Pai e Filha, a qual é negada pela 60126 1- M1 (mulher) e M2 (homem) têm distintos mtDNA, o que exclui a ocorrência de vínculo por ancestralidade materna

inexistência de alelos comuns em 7 loci autossômicos do Kit Identifiler.2- M1 e M3 (mulher) têm distintos mtDNA, o que exclui a ocorrência de vínculo por ancestralidade materna entre estas; no xstr-Decaplex, em 2 loci, são verificadas incompatibilidades para a hipótese de serem filhas de mesmo Pai.3- M1 e M4 (homem) têm distintos mtDNA, o que exclui a ocorrência de vínculo por ancestralidade materna entre estes; no xstr-Decaplex, em 3 loci, são verificadas incompatibilidades para a hipótese de serem Pai e Filha; em mais 8 loci autossômicos do Kit Identifiler é também negada tal hipótese.4- M2 e M3 têm idênticos mtDNA, fato que demonstra a ocorrência de ancestralidade materna comum; no xstr-Decaplex, em 3 loci, são verificadas incompatibildades para a hipótese de serem Mãe e Filho; em todos os loci autossômicos do Kit Identifiler apresentam alelos comuns. Portanto, as análises informam serem M2 e M3 vinculados por herança materna, não sendo Mãe e Filho. 5- M2 e M4 têm distintos mtDNA, o que exclui a ocorrência de vínculo por ancestralidade materna entre estes; apresentam distintos haplótipos ystr, não sendo também, portanto, vinculados por herança paterna.6- M3 e M4 têm distintos mtDNA, o que exclui a ocorrência de vínculo por ancestralidade materna entre estes; no xstr-Decaplex, em apenas 1 locus, é verificada incompatibildade para a hipótese de serem Pai e Filha; em mais 8 loci autossômicos do Kit Identifiler é também negada tal hipótese.

560127 M2 e M3 INCLUEM. 5

cenário de vínculo genético do tipo Pai (M2) e filha (M3) ou Mãe (M3) e filho (M3). Foram observados dois haplotipos 60128 M2 e M3 compartilham pelo menos um alelo em cada locos examinado. Essa observação é compatível com um

de Y para as amostras M2 e M4.

560131 M2 et M3 ont un lien de parenté (parent/enfant) 5

M3 y M4. Los resultados obtenidos en el sistema Amelogenina indican que M1 y M3 son individuos femeninos, y que 60133 Se determinaron los perfiles de ADN con STRs autosómicos, cromosma X y cromosoma Y de las muestras M1, M2,

M2 y M4 son individuos masculinos.El haplotipo de cromosoma Y de M2 es diferente al haplotipo de M4, lo que indica que M2 y M4 no pertenecen a la misma línea biológica paterna Del cotejo de perfiles de STRs autosómicos de las muestras M1, M2, M3 y M4 se observa que M2 y M3 comparten al menos un alelo en los 17 STRs analizados, por lo que se evaluó estadísticamente la posibilidad de que M2 sea padre de M3 o que M3 sea madre de M2, obteniéndose para ambas hipótesis un IP = 846.700.000 y una PP= 99,9999999 %.No obstante, en los STRs de cromosoma X se observa que M2 y M3 no comparten alelos en dos sistemas. Resultado a partir del cual es factible dos

interpretaciones: a) M2 y M3 tienen un vínculo filial y las inconsistencias observadas corresponden a mutaciones. b) M2 y M3 no tienen vínculo filial, pero podrían tener otro vínculo biológico: hermanos, o abuelo-nieto.Para intentar definir entre ambas opciones se deberían analizar más STRs autosómicos y de cromosoma X, y el ADN mitocondrial.. 5

locos do cromossomo X (exceto DXS9898 e DXS7423). Portanto deve existir vínculo genético de filiação entre esses 60134 Os doadores das amostras M2 e M3 compartilham no mínimo um alelo em cada loco autossômico, e também nos

doadores. Os doadores das amostras M2 e M3 possuem o mesmo haplótipo de mtDNA e, portanto, é provável que a doadora da amostra M3 seja a mãe biológica do doador da amostra M2. A probabilidade dessa maternidade não foi calculada.

5

M2 y M4 no comparten el mismo linaje paterno ya que presentan distintos haplotipos de cormosoma Y.M2 y M3 60135 Las muestras corresponden a dos personas de sexo femenino M1 y M3 y dos personas de sexo masculino M2 y M4.

Observaciones

presentar vínculo biológico de primer grado ( paterno filial ). 5

masculino. Las muestras M2 y M3 comparten un alelo en todos los marcadores analizados, lo que sugiere una 60136 Las muestras M1 y M3 corresponden a individuos de sexo femenino, mientras que la M2 y la M 4 son de sexo

relación filial. La misma se confirma con los haplotipos de ADN mitocondrial que sugieren una relación por línea 560137 Muestras M2 y M3 comparten la misma secuencia de ADN mitocondrial.

5

que estas personas tienen algún parentesco biológico.

60139 1. M2 y M3 comparten al menos un alelo en cada uno de los sistemas genéticos analizados, por lo que se concluye 5

femeninas de M2, M3 o M4.M4 no puede ser padre ni hijo de M1, M2 o M3 (STRs autosómicos y del M2 y M3: no se 60140 M1 no puede ser madre ni hija de M2, M3 o M4 (STRs autosómicos), y no pertenece a cualquier de las linajes

puede excluir que pertenezcan al mismo linaje femenino. Muy probablemente son hermanos dada la similitud de sus perfiles de STRs autosómicos y del cromosoma X.M2 y M4 no pertenecen al mismo linaje masculino.cromosoma X) y no pertenece a cualquier de los linajes femeninos de M1, M2 o M3.M2 y M3 no pueden ser padre/hija o hijo/madre (STRs del cromosoma X).

5

son muestras de varones de lineajes paternaa distintas.

60141 Los individuos M2 y M3 comparten por lo menos un alelo en todos los marcadores autossomicos estudiados.M2 y M4 5

son muestras de varones de lineajes paternaa distintas.

60141 Los individuos M2 y M3 comparten por lo menos un alelo en todos los marcadores autossomicos estudiados.M2 y M4 5

cromosoma X puede concluirse que las muestras M2 y M4 corresponderían a individuos de sexo masculino, mientras 60142 -A partir de los resultados obtenidos, mediante el análisis de Amelogenina, STRs de cromosoma Y y STRs de

que M1 y M3 a individuos de sexo femenino. -Mediante el estudio de marcadores autosómicos y de ADN mitocondrial puede concluirse que M2 y M3 estarían relacionados biológicamente.Los resultados de ADN mitocondrial indican que M2 y M3 pertenecen a la misma línea materna.De los resultados de los marcadores autosómicos pueden postularse las siguientes hipótesis de vínculo:1- M3 sería madre biológica de M2: Indice de Maternidad: 4,0E9 , con una P superior al 99.99%2- M2 y M3 serían hermanos biológicos por línea materna y paterna: IP 8,2E7 con una P superior al 99.99% 3- M2 y M3 serían medio hermanos biológicos por línea materna: IP 3,7E5 con una P superior al 99.99%Por los resultados obtenidos de cromosoma X se descartaría la hipótesis 1 ya que en tres marcadores habría exlcusión de vínculo materno de M3 respecto de M2. De las restantes hipótesis podría ser más probable, de acuerdo al Indice 5

autossómicos e relativamente ao mtDNA M2 possui um haplótipo igual a M3; Outra hipótese seria que M2 fosse 60143 O mais provável é que M3 seja "Madre" de M2, uma vez que partilham sempre pelo menos um dos alelos nos STRs

"Padre" de M3, neste caso os pais teriam de ser aparentados por via materna para partilharem o mesmo haplótipo do mtDNA (ex. tio/sobrinha ou primos). Esta segunda hipótese fica excluída porque M2 e M3 teriam também de partilhar um alelo do cromossoma X, o que não ocorre.Relativamente ao Cromossoma Y M2 e M4 não partilham a mesma linhagem.Em relação ao mtDNA podemos ainda dizer que:- M1 possui um haplótipo de mtDNA diferente de M2, M3 e M4.- M4 possui um haplótipo de mtDNA diferente de M1, M2 e M3.

5

supuesto padre (M2) y una hija (M3).- Existir una relación de una supuesta madre (M3) y un hijo (M3).En las dos 60144 En relación a los donantes de las muestras M2 y M3, se pude verificar dos situaciones:- Existir una relación de un

situaciones la probabilidade de paternidad/maternidad es P(W)=99,9999997% que se corresponde a la expresión verbal "paternidad/maternidad práticamente probada".El valor de IP és 302145835,21560.

5

coincidencia de sus haplotipos permite concluir que M2 y M3 podrían estar emparentados, pudiéndo ser M3 madre de 60146 M2 y M3 comparten al menos un alelo en todos los marcadores autosómicos analizados. Este hecho unido a la

M2. Para esta relación de maternidad se ha obtenido un IP de 15.055.691, incluyendo en los cálculos los 15 marcadores incluidos en el kit Identifiler, para los que se dispone de frecuencias alélicas en el anexo. En las muestras M4 y M7 se ha obtenido un perfil 18/20 y 15/16/18/20 respectivamente para el marcador D3S1358. El alelo 20 aparece sensiblemente desplazado respecto a la posición esperada en el electroforegrama correspondiente al análisis con Identifiler, lo que en un primer análisis condujo a asignarle el valor de 20.1. Este resultado no se reproduce analizando las muestras con el kit NGM. Con el fin de comprobar esta anomalía se procedió al análisis de una nueva extracción de la muestra M4, obteniéndose idénticos resultados que la primera vez para ambos kits. La diferencia entre la posición del alelo 20 de la muestra y el alelo 19 del ladder (alelo de mayor tamaño contenido en el ladder) en el análisis con Identifiler es de 4.55 pb (promedio de varias inyecciones de las diferentes

amplificaciones). Consultada la tabla de variantes alélicas alojada en http://www.cstl.nist.gov/div831/strbase/ para el marcador D3S1358, no se ha podido llegar a una conclusión clara sobre el tamaño esperado para el alelo 20.1 ya que se reportan microvariantes 20 y 20.1 del mismo tamaño. Se han encontrado resultados similares en la bibliografía consultada y cuya referencia aparece a continuación, por lo que se ha decidido finalmente reportar el perfil 18/20 para M4 en el marcador D3S1358."Further allelic variation at the STR-loci ACTBP2 (SE33), D3S1358, D8S1132, D18S51 and D21S11" E.M. Dauber *, E.M. Schwartz-Jungl, S. Wenda, G. Dorner, B. Glock, W.R. Mayr. Forensic Science International: Genetics Supplement Series 2 (2009) 41–42

5

muestras presentan idéntico haplotipo para el ADN mitocondrial. Estos resultados nos podría hacer pensar que se 60147 Las muestras M2 y M3 no presentan exclusiones para los marcadores STR autosómicos estudiados. Dichas

trata de una pareja hijo:madre. Sin embargo, el estudio de los STR del cromosoma X nos permite concluir que no se trata de una pareja hijo:madre, ya que no comparten haplotipo para el cromosoma X. La relación de parentesco de los donantes M2 y M3 podría tratarse de dos hermanos.

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muestras presentan idéntico haplotipo para el ADN mitocondrial. Estos resultados nos podría hacer pensar que se 60147 Las muestras M2 y M3 no presentan exclusiones para los marcadores STR autosómicos estudiados. Dichas

trata de una pareja hijo:madre. Sin embargo, el estudio de los STR del cromosoma X nos permite concluir que no se trata de una pareja hijo:madre, ya que no comparten haplotipo para el cromosoma X. La relación de parentesco de los donantes M2 y M3 podría tratarse de dos hermanos.

5

ADN en concentración de trabajo directamente).Se Indica GATA H4.1 en vez de GATA H4 siguiendo las últimas 60150 Tabla 1.1 Cuantificación de M1-M4 y M5 no se realiza por haberse realizado con un método normalizado (obteniendo el

recomendaciones de la ISFG. 5

HAPLOTIPO DE ADN MITOCONDRIAL. ESTOS RESULTADOS SON COMPATIBLES CON UNA RELACIÓN 60151 M2 Y M3 COMPARTEN AL MENOS 1 ALELO EN TODOS LOS STRS AUTOSÓMICOS ANALIZADOS Y COMPARTEN

MATERNO-FILIAL ENTRE LOS DONANTES DE M3 Y M2. 5

parentesco por vía materna entre ellos. Para STRs autosómicos comparten al menos un alelo en todos los 60152 M2 y M3 comparten el mismo haplotipo para ADN mitocondrial, por lo que no podría descartarse una relación de

Observaciones

marcadores analizados, lo cual sería compatible con una relación materno-filial entre M3 y M2. La obtención de estos resultados sería unos doscientos mil millones de veces más probable si M3 fuese la madre biológica de M2 que si fuese una persona al azar de la población no relacionada genéticamente con éste último (IM= 247194066,7, con base 5

x 10E+6 equivalente a una probabilidad de 99,99999% considerando una probabilidad a priori del 50%.No se puede 60153 A la vista del genotipado de las muestras de referencia M2 y M3 son hermanos (razón de verosimilitud aproximada 12

descartar que M1 y M3 sean primos (razón de verosimilitud de 1,9) 5

parentesco entre ambos individuos.

60154 De los perfiles genéticos obtenidos de las muestras M2 y M3 nos permitirían deducir una posible relación de 5

en todos los sistemas autosómicos tipados. Así mismo, para el ADN mitocondrial, las muestras M2 y M3 presentan 60155 De las muestras M1, M2, M3 y M4 puede decirse lo siguiente: - Las muestras M2 y M3 comparten al menos un alelo

el mismo haplotipo. Los resultados de X-STRs indican, sin embargo, que no comparten alelos en 3 de los 10 X-STRs. La explicación más plausible es que sean hermanos, al menos de madre.- Las muestras M1 y M2 comparten un alelo en todos los loci estudiados del cromosoma X pero no comparten su ADN mitocondrial ni marcadores autosómicos. La hipótesis más plausible es que M1 y M2 sean primos.- La muestra M4 es diferente para marcadores autosómicos, ADN mitocondrial e Y-STRs respecto de todas las otras muestras. Es de destacar que en X-STRs la muestra M4 comparte al menos un alelo en todos los X-STRs menos en GATA31E08 con M3. Así, resulta improbable algún parentesco de M4 con M1, M2 pero podría existir algún parentesco con M3 produciéndose aguna mutación improbable (2 steps) en GATA31E08. NOTA: En cromosoma Y, las muestras M2 y M4 se han tipado para el sistema GATA H4 siguiendo la nomenclatura del kit Y-Filer (Applied Biosystems).

5

15065832.1945 y una probabilidad (W) de 99.9999934%.

60156 Para las muestras M2 y M3 se ha realizado un cálculo estadístico de maternidad obteniéndose un IP total de 5

analizados. El análisis de ADN mitocondrial de estas muestras indica que comparten el mismo haplotipo, siendo 2.213 60157 Las muestras de referencia M2 y M3 comparten al menos 1 alelo en todos los loci microsatélite autosómicos

veces más probable que coincidan por pertenencia a un mismo linaje materno frente a una coincidencia por azar (Base de datos EMPOP 2). El análisis de los loci microsatélite del cromosoma X descarta la posibilidad de una relación de M2 frente a M3 paterno-filial, así como una relación de M3 frente a M2 materno-filial.La relación de hermandad entre M2 y M3 es posible con los resultados obtenidos. La probabilidad de que M2 y M3 sean hermanos calculada con el software Familias v1.6 es de 0,976383.Las muestras de referencia M1 y M2 comparten 1 alelo en cada uno de los loci microsatélite del cromosoma X analizados. Asi mismo, las muestras de referencia M1 y M3 comparten 1 alelo en cada uno de los loci microsatélite del cromosoma X analizados, excepto en los loci DXS9898 y DXS7423, donde presentan exclusiones de una repetición más, pudiendo tratarse de mutaciones de un paso de una generación a otra. La relación de parentesco más probable de M1 frente a M2 y M3 calculada con el programa Familias v1.6 (p:0,97744061), es la de medio hermanos de padre, siendo hermanos M2 y M3, y siendo también los padres de M2 y M3 hermanos entre sí.

5

biológica del individuo donante de la muestra M2, habida cuenta de que entre ambos comparten información genética 60159 Del análisis de los STRs autosómicos no se puede descartar que M3 sea la muestra perteneciente a la madre

en todos los marcadores estudiados. Esta hipótesis se ve reforzada por el análisis del ADN mitocondrial el cual manifiesta la no exclusión de una relación por vía materna entre M2 y M3

5

evidenciados son los siguientes: Se observa una posible relación genética entre las muestras M2 y M3: Las dos 60160 Realizados los estudios de individualización del ADN extraído de las muestras M1, M2, M3 y M4, los resultados

muestras COINCIDEN en el haplotipo obtenido en el estudio de ADN mitocondrial, lo que indicaría que no se puede descartar una relación matrilineal entre ambas (hijo-madre, hermanos, u otras mas alejadas geneticamente), si bien el haplotipo es bastante frecuente en población europea. En ADN nuclear las dos muestras comparten un alelo en todos los marcadores analizados, lo que apoyaría la hipotesis de una relación hijo-madre, pero esto queda descartado a la vista de los resultados obtenidos en el análisis de CrX. Conclusión: entre ambas muestras podría existir una relación via materna de hermanos u otros familiares mas distanciados pero que pertenecerían a la misma linea materna, exceptuando una relacion hijo-madre.Se quiere hacer constar que en el marcador D3S1358 de la muestra M4, se observa un ligero desplazamiento del pico que se correspondería con el alelo 20. Esta ligera desviación impide su asignación por el software del genemapper en el caso del kit Identifiler, pero es asignado correctamente cuando se usa el kit Powerplex 16 (se adjuntan los electros ampliados de dicho marcador con los dos kits utilizados) 5

sus perfiles genéticos. Además tienen el mismo haplotipo de ADN mitocondrial, que podría indicar una relación vía 60161 Entre los donantes de M2 y M3 hay una posible relación materno-filial o paterno-filial, que se deduce del estudio de

materna. Por otro lado, del estudio de los perfiles genéticos de M1 y M4 se deduce que no tienen relación de parentesco directa, entre sí, ni respecto a M2 y M3. Además, los varones M2 y M4 tienen distinto perfil de cromosoma Y, y los haplotipos de ADN mitocondrial de M1 y M4 son distintos entre sí y con respecto al de M2 y M3, lo que confirma la falta de relación vía materna y vía paterna.

5

parentesco directo entre sí

60163 De las muestras analizadas, se observo parentesco directo entre M3 y M2 El resto de las muestras no tienen 5

autossómicos é possível concluir que os doadores das amostras M2 e M3 são pai e filha ou mãe e filho. A amostra 60166 A amostra M2 pertence um homem e a amostra M3 pertence a uma mulher. Com base na análise dos 15 marcadores

M1 pertence a uma mulher e a amostra M4 pertence a um homem. Os doadores das amostras M1 e M4 não se relacionam geneticamente entre si nem com os doadores das amostras M2 e M3.

5

ser um pai e uma filha ou uma mae e um filho.

60168 Dentre as amostras testadas M1, M2, M3 e M4; apenas as amostras M2 e M3 podem ter algum parentesco. Podendo 560169 Sem comentários a fazer.

5

kit utilizado). Referência consultada: STRbase (http://www.cstl.nist.gov/div831/strbase/var_D3S1358.htm e

60171 Na amostra M4, o alelo 20.1 do marcador D3S1358 corresponde a uma variante (alelo não incluído no allelic ladder do http://www.cstl.nist.gov/div831/strbase/str_D3S1358.htm).

5

COMPARTILHARAM 15 DOS 15 LOCAIS GENÉTICOS INVESTIGADOS(100% DOS LOCI), ONDE PODEMOS 60172 A ANALISE ENTRE AS AMOSTRAS M1, M2, M3, E M4 REVELOU O SEGUINTE:AS AMOSTRAS M2 E M3

SUGERIR QUE PODEM SER CONSIDERADOS PARENTES BIOLÓGICOS TAIS COMO: PAIS E FILHOS.AS

DEMAIS AMOSTRAS JUNTAMENTE COM M2 E M3 COMPARTILHARAM ENTRE SI ALELOS EM MAIS DE 40% DOS LOCI INVESTIGADOS, ONDE PODEMOS SUGERIR QUE PODEM SER CONSIDERADOS PARENTES

Observaciones

5

su longitud ha sido nombrado como D3S1358*20, el cual existe en una baja frecuencia en la población española de 60174 Observaciones: La muestra M4 para el marcador D3S1358 ha producido un alelo no existente en el ladder. En base a

referencia. 560178 Nada a comentar. 5

escalera alélica disponible comercialmente del kit Identifiler de Applied Biosystems utilizado tiene un rango que va 60179 Se reporta el alelo 20 del STR D3S1358 el cual se observa con un tamaño aproximado de 145 bp, aun cuando la

para ese marcador desde el alelo 12 hasta el 19, sin embargo; se confirma la presencia de éste. Este alélo fue incluido en la base de datos de nuestro laboratorio pues ya ha sido reportado en varios individuos genotipificados. 5

Muestras M2 y M3 presentan relación genética de primer orden: padre-hija o madre-hijo.

60180 Muestras M1 y M3 presenten perfil genético femenino. Muestras M2 y M4 presentan perfil genético masculino. 5

alelo 19 (confirmado con reextracción), donde la altura del alelo 19 corresponde aproximadamente al 50% de la altura 60181 1. Se observa en el sistema vWA31 de las muestras M2 y M3, amplificación preferencial del alelo 14 respecto al

del alelo 14. Según se reporta en la literatura, este evento puede presentarse como consecuencia de mutaciones en el sitio de annealing del primer, lo cual podría confirmarse amplificando este sistema con un kit que emplee primers diferentes (de promega por ejemplo), o como consecuencia de mosaicismo cromosómico, donde un porcentaje de las células portaría un cromosoma 12 con deleción total o parcial de la región donde mapea el marcador vWA31 con el alelo 19. 2. Se observa que M2 y M3 comparten alelos en todos los sistemas analizados, por lo cual se presume parentesco biológico que puede ser padre-hija o madre hijo, dado que un perfil genético es femenino y el otro masculino. No es posible calcular la probabilidad si no se conoce cual es el tipo de relación.

5

1) Las muestras M1 y M4, NO están relacionadas genéticamente con las demás ni entre ellas, al menos de manera 60183 Al observar las relaciones genéticas entre los perfiles de ADN de las muestras M1 a M4, pudimos inferir lo siguiente:

directa. 2) Las muestras M2 y M3 compartieron al menos un alelo para todos los STRs analizados, lo que sugiere una relación biológica de parentesco ya sea padre/madre - hij@. 3) Para confirmar este supuesto, procedimos a calcular el índice de maternidad/paternidad par las muestras M2 y M3 que resultó de 15,064,732; mientras la probabilidad de maternidad/paternidad fue de 99,9999934%. Para esto se empleó la base de datos inlcuida como referencia en este ejercicio de control de calidad.

5

com o sequenciador automático ABI377.

60189 Considerando a metodologia utilizada, todas as amostras foram bem amplificadas.As amostras foram detectadas 5

obteniendose picos limpios.Las muestras M1 y M3 resultaron ser mujeres (amelogenina X) y M2 y M4 resulto ser 60190 Las muestras M1-M4 fueram analisadas.El material genetico extraido de las muestras tuvo una buena amplificacion,

varones (amelogenina XY). Las duas muestras (M2 y M4) se le estudio el haplotipo Y, mostrandose los resultados en la tabla reportada.

5

RESULTARON SER DE ORIGEN FEMENINO Y DOS DE ORIGEN MASCULINO A ESTAS ULTIMAS SE LES 60195 SE ANALIZARON 15 MARCADORES DE ADN PARA LAS MUESTRAS M1, M2, M3, Y M4, DE LAS CUALES DOS

DETERMINO EL CROMOSOMA "Y" Y EL "X" SIN ARROJAR RELACION ALGUN PARA LA AMPLIFICACION Y CARACTERIZACION DE LOS ALELOS PERTENECIENTES AL CROMOSOMA "X" SE UTILIZO EL JUEGO DE PRIMERS Y LADDER DEL "X DECAPLEX" UTILIZADOS EN EL EJERCICIO DE COLABORACION DEL 2009 DEL GRUPO. ENTRE LAS MUESTRAS M2 Y M4 SE REFLEJA LA EXISTENCIA DE RELACION FILIAL QUE PUEDE SER MADRE-HIJO PADRE-HIJA YA QUE NO HAY EXCLUSION DE NINGUNO DE LOS MARCADORES ANALIZADOS. 560196 De las muestras analizados, sólo las muestras M2 y M3 pueden tener relación paterno-filial entre sí.

560197 -NINGUNO 5

TANTO M2 PODRÍA SER PADRE BIOLÓGICO DE M3 Ó M3 SER MADRE BIOLÓGICA DE M2.DE OTRA MANERA, 60198 LAS MUESTRAS IDENTIFICADAS COMO M2-M3 COMPARTEN AL MENOS 1 ALELO DEL PERFIL GENÉTICO POR

NO SE DESCARTA QUE LAS MUESTRAS ANALIZADAS M1-M4 TENGAN OTRO TIPO DE RELACIÓN BIOLÓGICA EN SEGUNDO GRADO COMO PRIMOS, HERMANOS ENTRE OTROS.SE OBTUVIERON DOS PERFILES DE MUJERES M1 Y M3 Y DOS PERFILES DE HOMBRES M2 Y M4.LAS MUESTRAS FUERON CONFIRMADAS POR EXTRACCIÓN CON CHELEX DADO QUE EN LA PRIMERA AMPLIFICACIÓN TRAS EL ANÁLISIS EN EL ABI PRISM 310 DIERON RFU PARA LOS ALELOS MUY BAJOS.

560200 M2 e M3 são relacionadas genéticamente 5

paternidad/maternidad en STR autosómicos

60202 Existe relación biológica entre M1 y M2 através de 10 marcadores del cromosoma X, con discordancia para 5

Este hallazgo es compatible con la existencia de vínculo biológico paterno o materno - filial entre ambos. El 60203 El análisis genético comparativo de M2 y M3 muestra coincidencias alélicas en 15 de los 15 marcadores analizados.

genotipado de M2 y M4 indica que ambos pertenecen a linajes masculinos diferentes 5

estudo. As amostras são M2 do sexo masculino e M3 do sexo feminino o que permite propor a hipótese de se 60206 As amostras M2 e M3 compartilham pelo menos um alelo em todos os 40 locos autossômicos analisados no nosso

tratarem de amostras de pai-filha ou de filho-mãe. A verossimilhança (LR) dos dados genéticos observados condicional a esta hipótese de relação de paternidade ou maternidade entre M2 e M3 , ou seja o IP ou IM tem valor elevadíssimo, da ordem de 1,0 E+12. Este resultado permite portanto afirmar com probabilidade de paternidade ou maternidade > 99,999999% que M2 e M3 são pai-filha ou filho-mãe assumindo uma probabilidade a priori de 0.5. 5

a una paternidad Duo Padre e Hija en la cual La muestra M2 NO SE EXCLUYE como Padre Biológico de la muestra 60207 1.- Del análisis de las Muestras M1 a M4 se observa una relación de parentesco entre M2 y M3 haciendo referencia

M3, con un Indice de paternidad (relación de paternidad contra cualquier Presunto Padre de la Población) de 15.064.732 y una Probabilidad de Paternidad de 99.999993361980.2.- Con base en lo anterior cabe la posibilidad de un estudio de Maternidad entre M3 y M2 donde se encontraría igualmente relación de parentesco.3. Del análisis entre las muestras en Duo M1-M2, M1-M3, M1-M4, M2-M4 y M3-M4 no se evidencia relación de parentesco. Del análisis de las mismas muestras para casos trío No se evidenció de igual forma relación de parentesco alguno. 5

PRIMERA CORRIDA, SALVO M3, QUE AMPLIFICÓ EN LA SEGUNDA CORRIDA.

60208 TODAS LAS MUESTRAS FUERON FÁCILES DE EXTRAER. CASI TODAS LAS MUESTRAS AMPLIFICARON EN LA 5

calculado de acordo com o descrito em: Butler, John M. (2001). Forensic DNA Typing - Biology and Technology 60210 Na amostra M4, foi detectado um alelo fora da ladder no marcador D3S1358 cujo tamanho em pares de base (pb) foi

Behind STR Markers. Academic Press.

Observaciones

11/12; M4: 11 DXS8377:M1: 51/55; M2: 52; M3: 52/55; M4: 46 5

un alelo en todos los sistemas genéticos, lo que sugiere que están relacionadas filialmente, mientras que las 60212 Con la información generada por los genotipos, se puede observar que las muestras M2 y M3, comparten al menos

muestras M1 y M4 se excluyen entre sí y tambien se excluyen de una relación filial con respecto a M2 y M3 . 5

porcentaje de paternidad/maternidad del 99,99999668 (I.P o I.M= 30119975,4374) considerando una probabilidad a 60214 Las muestras M2 y M3 están emparentadas genéticamente como padre e hija o bien como madre e hijo con un

priori de 0,5 y tomando como referencia la base de datos presentada en la tabla 10 anexa a este ejercicio. 5

METODOS UTILIZADOS. EL NUMERO DE MUESTRAS A TIPIFICAR ES SUFICIENTE PARA DETERMINAR LA 63758 EL ANALISIS DE LAS MUESTRAS M1 A M4 NO PRESENTO INCONVENIENTES CON LOS MULTIPLEXES Y LOS

CORRECTA ASIGNACION DE LOS ALELOS. 5

permite excluir una relación genética del tipo madre-hijo ó hija-padre. Tras el análisis estadístico, el índice de 63759 Se observa una compatibilidad entre los perfiles genéticos evidenciados en las muestras M 2 y M 3, y por tanto NO

paternidad (IP) resultó ser 15064731,545; lo que significa que es algo mas de quince millones de veces más probable que los perfiles genéticos evidenciados en ambas muestras se correspondan con una relación del tipo madre-hijo ó hija-padre entre ellas, que si suponemos que no están relacionadas familiarmente entre sí. Suponiendo una probabilidad "a priori" de 0,5 el anterior IP se convierte en un probabilidad de paternidad de 0,9999999336 5

7 EXCLUSIONES DE PATERNIDAD.M1-M4: 8 EXCLUSIONES DE PATERNIDAD.LACIÓN DE PARENTESCO 63763 SE HAN CONTRASTADO LAS MUESTRAS M1 A M4 POR PAREJAS PARA ESTABLECER UNA POSIBLE RE M1-M3:

BIOLÓGICO ENTRE ELLAS. ENCONTRANDOSE LO SIGUIENTE:M1-M2: 7 EXCLUSIONES DE PATERNIDAD. M2-M3: NO SE HA ENCONTRADO NINGUNA EXCLUSIÓN DE PATERNIDAD.M2-M4: 8 EXCLUSIONES DE

PATERNIDAD.M3-M4: 6 EXCLUSIONES DE PATERNIDAD PARA LAS MUESTRAS M2 Y M3:SE HA COMPARADO LA PROBABILIDAD DE QUE EL ALELO COMPATIBLE DE CADA MARCADOR HAYA PASADO DE M2 A M3 Ó VICEVERSA, FRENTE A LA PROBABILIDAD DE QUE ESE ALELO PROCEDA DE OTRA PERSONA ELEGIDA AL AZAR EN LA POBLACIÓN. OBTENIÉNDOSE UN INDICE DE PATERNIDAD Ó MATERNIDAD ACUMULADO DE: 15.064.713,5. CONSIDERANDO UNA PROBABILIDAD DE PATERNIDAD Ó MATERNIDAD “A PRIORI” DE 0,5, LA PROBABILIDAD DE PATERNIDAD Ó MATERNIDAD ES DE: 99,9999934%. EL GENOTIPO DE UNA DE LAS DOS MUESTRAS (M2, M3) ES 15.064.713,5 VECES MÁS PROBABLE SI LA OTRA MUESTRA ES EL PADRE Ó LA MADRE BIOLÓGICA, QUE SI LO FUERA OTRA PERSONA TOMADA AL AZAR DE LA POBLACIÓN.

5

que la muestra M3 sea la madre de M2 en comparación con la hipótesis alternativa de que no lo sea es de

63764 Las muestras M2 y M3 pueden estar relacionadas filialmente. El Indice de paternidad que establece la probabilidad de 208985606,82 en base a sus marcadores STRs autosómicos (tabla de frecuencias del ejercicio). En terminos porcentuales, el valor de la probabilidad de que M3 sea la madre de M2 es de 99,9999995214% (a priori 0,5).Dicha hipótesis se encuentra respaldada por presentar idéntico haplotipo mitocondrial, ambas muestras.

5

mesmo haplótipo. STRs Y: foram obtidos dois haplótipos diferentes de cromossomo Y para as amostras M2 e M4. 63766 mtDNA: foram obtidos três haplótipos diferentes para as amostras M1 a M4. As amostras M2 e M3 compartilham o STRs autossômicas: foram obtidos quatro perfis genéticos completos para os marcadores utilizados, diferentes entre si, sendo dois do sexo masculino (M2 e M4) e dois do sexo feminino (M1 e M3). Conclusões: -Os indivíduos M2 e M3 compartilham o mesmo haplótipo de mtDNA. Além disso, M3 não pode ser excluída como mãe ou irmã biológica de M2, através das análises de STRs autossômicos.-M4 pode ser excluído como pai ou como pertencente à mesma linhagem paterna de M2 através das análises do cromossomo Y.-A análise de STRs autossômicos também exclui a possibilidade de M4 ser pai biológico de M1 ou de M3. Além disso, M2 pode ser excluído como possível pai de M1. 5

to their autosomic STRs and mtDNA type, M2 and M3 could be a mother and his son.- According to the mtDNA 63767 - M2 and M3 share at least one allele for each autosomic locus.- M2 and M3 share the same mtDNA type.- According

types, M1, M2/M3 and M4 cannot belong to the same maternal lineage.- According to the Y chromosome haplotypes, M2 and M4 cannot belong to the same paternal lineage.

5

se encontró alelos fuera de la escala alélica, ni posibles alelos silentes. Tampoco se observó duplicaciones, ni 63768 1.- Las muestras fueron analizadas sin complicaciones y se obtuvo perfiles genéticos claros y reproducibles. 2.- No

deleciones en el cromosoma Y. 3.- El análisis genético de las muestras M1 a M4 indicó que las muestras M1 y M3 presentaron un perfil genético femenino , y las muestras M2 y M4 presentaron un perfil genético masculino.4.- Para todos los marcadores analizados, las muestras M2 y M3 comparten al menos 1 alelo en común, lo cual sugiere una posible relación de parentesco en primer grado tipo Padre-hija o madre -hijo.5.-Las muestras M1 y M4 no presentan una relación de parentesco en primer grado (línea directa) con las muestras M2 y M3.6.-Las muestras M1 y M3 no presentan una relación de primer grado entre ellas.7.- Con el análisis de los marcadores autosómicos y del cromosoma Y, las muestras M2 y M4 no presentan una relación de parentesco de primer grado.

5

consideraciones:En el kit IDENTIFILER no existe este alelo en el "ladder", sin embargo, el programa Genemapper lo 63769 En relación a la muestra M-4, en el marcador "D3S1358", se ha valorado un alelo 20 con las siguientes

marca en la lectura como "alelo 20". 5

una probabilidad de hermandad del 99,4229 %. 2- M2 y M3 comparten el mismo haplotipo de ADN mitocondrial lo que 63771 1- M2 y M3 no pueden excluirse del vínculo biológico de hermandad con un indice de verosimilitud (LR) de 17228 y

refuerza la conclusión anterior. 3- M1 y M2 comparten el haplotipo de un cromosoma X por lo que estarían geneticamente relacionados. Este vínculo no puede establecerse con certeza en base a la información genética que se dispone.4- El haplotipo del cromosoma X de M4 esta contenido en M3 en 9 de los 10 loci estudiados, detectandose una mutación de 2 pasos en el sistema GATA172D05. Teniendo en cuenta esta consideración, M3 y M4 estarían relacionados pero la escasa información genética no permite establecer un vínculo con certeza.

5

donador de La M 4 es un hombre La M2 y la M3 aparecen compatibles entre ellas.Los 2 perfiles comparten un allele 63772 EL donador de La M 1 es una mujer EL donador de La M 2 es un hombre EL donador de La M 3 es una mujer EL

por cada locus.

3.2.1.1_M6_CONTRIBUYENTES