526731 N 526734 N 526821 N 560120 N 560121 N 560123 N 560125 N 560126 N 560129 N 560132 N 560134 N 560136 N 560137 N 560139 N 560140 N 560141 N 560141 N 560142 N 560143 N 560146 N 560147 N 560147 N 560150 N 560152 S 560153 N 560155 N 560156 N 560157 N 560158 N 560160 N 563764 S 563766 N 563767 N 563771 N
3.2.2_CONCLUSIONES_M8
5detección de esperma i sangre, con lo que obtuvimos un resultado positivo para semen. El resto del lavado se utilizó 26731 Para el análisis de la muestra M8, se realizó un primer lavado de la superficie del pelo. Con este lavado, se realizó la
para identificar al contaminante, mediante el análisis de STR’s autosómicos, STR’s X y STR’s Y. Los resultados obtenidos, han sido incorporados en las tablas como M8, ya que para el pelo no podíamos realizar estos análisis.Como se puede ver en los resultados, el contaminante de la muestra M8, no puede ser ninguno de los individuos de referencia, ya que no coinciden ninguno de los conjuntos de STR’s analizados. Por lo que se considera no identificado el contaminante. Lo que sí que pudimos observar, es que el perfil de STR’s Y del contaminante de M8, coincidía con el del contribuyente minoritario de M7, y además se observan algunos de los alelos identificados como del contribuyente minoritario en M7, como alelos del individuo contaminante de M8.Para el análisis del pelo, al no tener raíz, se hizo un estudio de ADN mitocondrial, del que sólo pudimos obtener uno de los fragmentos. El fragmento fue el forward de la región HVII, y se observa que hay una contaminación (probablemente debida a un mal lavado de los pelos), y que existe una heteroplasmia. Viendo este último hecho, se descarta que el pelo pertenezca a M5, ya que éste no presenta ninguna heteroplasmia de longitud.
5
ha detectado la presencia de antígeno prostático (PSA) en la muestra.2. De la "contaminación" se ha obtenido un 26734 1. La muestra de pelo se encontraba contaminada con material biológico humano compatible con semen, ya que se
genotipo parcial mediante el análisis de STRs autosómicos, que no coincide con ninguno de los genotipos de las muestras M1 a M7. Lo mismo ocurre con el haplotipo obtenido del análisis de STRs del cromosoma Y, el cual no coincide ni con M2, M4, M6 ni M7.3. El haplotipo obtenido del análisis del ADN mitocondrial de la "contaminación" es idéntico al obtenido de la muestra M8 propiamente dicha (cabello). Este resultado sería compatible con que el donante del material contaminante (semen) fuera la misma persona que la donante del pelo, o bien, personas emparentadas por vía materna. 4. El análsis (negativo) de STRs autosómicos del pelo propiamente dicho (M8) descarta la posibilidad de que no se haya limpiado correctamente la superficie del pelo y que el haplotipo detectado del pelo se corresponda en realidad con el haplotipo del material contaminante.526734
Observaciones
tests pertinentes para determinar la naturaleza de dicho fluido, resultando ser semen.De la muestra se ha obtenido un único perfil genético masculino utilizando los kits AmpFLSTR Identifiler PCR (para marcadores autosómicos) y AmpFLSTR Yfiler PCR Amplification (para el cromosoma Y). Como los pelos no tenían raíz se supone que el perfil obtenido procede de los restos de semen.Como hemos visto en el apartado anterior la muestra M8 contribuye a la mezcla de la muestra M7.
5
perfil genético, el cual podría corresponder a un único individuo de sexo masculino. el perfil obtenido presentó 60117 Se detectó la presencia de un fluido contaminante que resultó ser compatible con semen. Del mismo se obtuvo un
concordancia con el perfil masculino minoritario detectado como componente de la muestra M7.560117 5
ADNmt, STRs autosómicos y STRs de Cromosoma Y al pellet obtenido a partir de la solución de lavado de dichos 60120 La naturaleza de la contaminación de la muestra de cabello M8 no pudo ser establecida, sin embargo, el análisis de
cabellos (denominado “M8 resuspendido”) mostró la posible contaminación de M8 con algunos de los contribuyentes de la mezcla M7 (STRs autosómicos y Crom Y) y a su vez de material biológico del propio individuo al cual pertenece M8, dado el patrón de mutaciones de ADNmt obtenido para ambas muestras. Si bien los ensayos realizados nos permitieron determinar la contribución de los donantes de las muestras M4 y M5 a la mezcla M7, no puede afirmarse la contribución de estas muestras al contaminante de M8 dado que los resultados obtenidos muestran exclusiones de algunos alelos de M4 y M5 en el perfil STR autosómico de la contaminación.
560121 A amostra M8 apresenta contaminação. 5
marcadores analizados se excluye a M1, M2, M3, M4 y M5 como contaminante de la muestra de pelo M8.3) El 60123 1) Se detecta contaminación con semen en la muestra de pelo M8.2) De acuerdo a los resultados obtenidos para los
haplotipo de ADN mitocondrial hallado en el pelo M8 no es coincidente con el haplotipo de M5, indicando que el pelo M8 no puede pertenecer al donante de la muestra M5.4) El haplotipo de ADN mitocondrial hallado en el pelo M8 es coincidente con el haplotipo hallado en el contaminante de M8.
5
fosfatase ácida.Com base nas tipagens obtidas em loci autossômicos, cromossomos sexuais Y e X e no haplótipo 60126 A amostra M8 não apresenta contaminação por sangue ou semen com base em ensaio de microscopia, peroxidase e
do DNA mitocondrial, M8 corresponde a amostra de um único indivíduo. 5
y ADN mitoconcrial, y de la muestra M8 (pelo) para ADN mitocondrial. 2) Las secuencias de ADN mitocondrial 60129 1) Se obtuvieron resultados del análisis del lavado de la muestra M8 para marcadores autosómicos, de cromosoma Y
obtenidas del lavado de M8 y de M8 (PELO) son idénticas, por lo que no puede excluirse al individuo donante de M8 o un familiar del mismo por línea materna como donante del material obtenido del lavado. 3) Se excluye a los
individuos M1 a M5 como posibles donantes de M8 y del material biológico obtenido del lavado del mismo.NOTA: los resultados de marcadores autosómicos y cromosoma Y informados para M8 corresponden a los obtenidos a partir del 5
el líquido de lavado de la muestra M8 se detectó el siguiente haplotipo: 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 60136 La muestra M8 no comparte el haplotipo mitocondrial con ninguna de las otras muestras del ejercicio (M1-M7). pero en
16311 C, 16319 A que correponde a un contaminante de la muestra, haplotipo que no se comparte con ninguna de las otras muestras del ejercicio. Este perfil contaminante es el mismo perfil que aparece en la fase espermática de la extracción diferencial de la M7.
5
M5. Se encontraron más de dos diferencias entre la secuencia de la muestra M8 y la secuencias de las muestras 60139 Los pelos rotulados como M8 se excluyen como pertenecientes a los individuos de las muestras M1, M2, M3, M4 y
M1, M2, M3, M4 y M5. 5
mtDNA).M8 no pertenece a cualquier de los donantes M1 a M5 (mtDNA).560140
60140 El pelo M8 estaba contaminado con material biológico no perteneciente a cualquier de los donantes M1 a M5 (STRs y 5
resultados para STRs autosómicos, STRs de cromosoma Y , y secuenciación del D-Loop mitocondrial. Los
60142 Contaminante de la muestra M8A partir de la extracción de ADN de la muestra contaminante de M8, se han obtenido resultados en conjunto permiten concluir que el contaminate es un fluido biológico (semen) de un individuo de sexo masculino, que no se corresponde con ninguna de las muestras de referencia analizadas (M1 a M5). Los resultados correspondientes a esta muestra se adjuntan en la Tabla anexa .El haplotipo correspondiente al contaminante de la muestra M8 se adjunta e n "Tabla anexa" y fue editado entre las posiciones 16081-16462 y 53-514. Muestra 8-pelo: a partir de esta muestra sólo se obtuvieron resultados de secuenciación del ADN mitocondrial. La secuencia fue editada entre las posiciones 16024-16542 y 63-439.El haplotipo obtenido a partir de esta muestra presenta identidad con el haplotipo obtenido a partir del contaminante de la misma. Este hecho implica que no podemos descartar la posibilidad de que en la fracción de extracción de la muestra M8-pelo hubiera quedado parte del contaminante o bien que el donante de ambas muestras (pelo y contaminante) fuera una misma persona. Bajo el primer supuesto no resultaría posible establecer la identidad del pelo. Este haplotipo no presenta identidad con ninguno de los haplotipos obtenidos a partir de las muestras M1 a M5.
5
mais forte do pêlo Contaminante de M8 é diferente de M1, M2, M3, M4 e M5 Tendo em consideração o primeiro 60143 1º resultado: M8=contaminante de M8, após lavagem suave do pêlo2º resultado: M8: sem resultados, após lavagem
resultado, e partindo do princípio de que a lavagem do pêlo foi suficiente para remover o contaminante, o haplótipo do pêlo é idêntico ao do contaminante (sémen). Ou seja, pêlo e contaminante serem provenientes do mesmo indivíduo ou da mesma linhagem materna.
5
correspondiente al lavado del pelo (fracción seminal). Este ADN se ha cuantificado mediante el uso del kit 60146 Se ha identificado la presencia de semen como contaminante del pelo M8. Se ha extraido ADN de la fracción
Quantifiler. Esta fracción seminal ha sido analizada obteniéndose un perfil completo para los marcadores incluidos en el kit Identifiler y NGM. Sin embargo, sólo ha sido posible obtener un perfil para 11 marcadores del cromosoma Y de los 16 estudiados. Estos perfiles son los que aparecen en las tablas 7.A y 7.B. El perfil de la muestra M8 (fracción
seminal) no se corresponde con ninguno de los perfiles de las muestras de referencia. El ADN obtenido de la muestra M8 (pelo lavado) se ha cuantificado mediante especrometría (Nanodrop). Solo ha sido posible la obtención de secuencia de la
muestra M8 (pelo) para los primers forward de las regiones HVSI, HVSII y HVSIII. Este hecho ha dificultado la lectura completa de la secuencia y la correcta interpretación de la misma. En la tabla 8 se han reportado los cambios respecto a la CRS que podían leerse con claridad, no descartandose que pudieran existir otros cambios. El haplotipo obtenido para la muestra M8 (pelo) no es coincidente con ninguno de los de las muestras de referencia, lo que excluye la posibilidad de que el pelo pertenezca a uno de los donantes de las muestras de referencia.
5
contaminante M8:El ADN obtenido del contaminante del pelo fue escaso. Nos permitió realizar la amplificación de los 60147 Conclusión contaminante del pelo: Se detecta la presencia de esperma en el contaminante. Observaciones
Observaciones
mezcla compleja. No nos permite descartar con certeza a ninguno de las muestras de referencia, incluso hay otro donante distinto a las muestras de referencia.
donante distinto a las muestras de referencia. 5
Otros tests (Adler, fosfatasa ácida, PSA) han resultado negativos en M8.- El pelo M8 no pudo ser amplificado con los 60149 - El fluido contaminante del pelo M8 da una reacción a la alfa-amilasa demasiado débil: no se considera positivo.
primers para ADN mitocondrial humano (descritos por Wilson IJLM, 108:68, 1995) 5
espermatozoides.El ADNmt del pelo no coincide con ninguina de las muestras de referencia.El contaminante no 60150 Se trata de pelo con contaminación posiblemente por semen según las pruebas orientativas. No se observan
coincide con las muestras de referencia ni con el pelo. Su haplotipo es: 73 G, 152 C, 263 G, 315.1, C, 16224 C, 5
RESPONDERSE SÍ O NO, YA QUE EN EL ANÁLISIS DE ADN NUCLEAR NO SE ESPERA OBTENER 60151 A LA PREGUNTA "¿Puede el pelo M 8 pertenecer al donante de la muestra de referencia M 5?" NO PUEDE
RESULTADOS DEL PELO AL TRATARSE DE PELOS SIN RAÍZ Y DEL ANÁLISIS DE ADN MITOCONDRIAL NO SE PUEDE CONCLUIR SI EL PELO M8 PUEDE PERTENECER AL DONANTE DE M5 PUESTO QUE NO HAY SEGURIDAD DE QUE EL HAPLOTIPO DETECTADO SEA EL CORRESPONDIENTE AL PELO (VER OBSERVACIONES DE ADN MITOCONDRIAL).EN LA MUESTRA M8, EL PERFIL DE STRS AUTOSÓMICOS OBTENIDO ES COINCIDENTE EN AMBAS FRACCIONES OBTENIDAS TRAS LA LISIS DIFERENCIAL.EN LA MUESTRA M8 SE INVESTIGÓ TAMBIÉN LA PRESENCIA DE SALIVA (CÓDIGO MÉTODO: SV1, RESULTADO: NEGATIVO). NO SE REFLEJA EN LA TABLA 5 POR FALTA DE CAMPOS PARA ELLO.
5
sangre ni de saliva. La muestra se sometió a un primer proceso de lavado cuidando la recuperación del contaminante 60152 La muestra M8 se encuentra contaminada con restos de semen. No se han detectado sobre esta muestra restos de
para su análisis. Los restos de semen recuperados se sometieron a lisis diferencial. El análisis de la fracción epitelial y espermática obtenidas reveló un mismo perfil genético coincidente con el obtenido para la fracción espermática de la muestra M7, coincidencia que se da también para los haplotipos del cromosoma Y obtenidos en estas
muestras.En el pelo, tras una nueva fase de lavado, se realizó una lisis diferencial. El análisis de la 1ª fracción revela un haplotipo para ADN mitocondrial distinto a los observados en las muestras de referencia analizadas en el presente ejercicio. En la 2ª fracción, la presencia de varias posiciones ambiguas hace pensar en la presencia de un contaminante que no ha sido posible eliminar en las fases de lavado, pese a los reiterados intentos.Con el resultado obtenido, no cabría descartar a M5 como donante del pelo, si bien sería necesario admitir la presencia de una heteroplasmia de secuencia y una de longitud, además de mezcla con la secuencia del semen contaminante. En un caso real, se estimaría como resultado no concluyente.
560153 La muestra M8 corresponde a un varon diferente de las otras muestras. 5
autosómicos como para Cromosoma Y pertenecen al fluido contaminante del pelo M8.
60154 Los perfiles genéticos obtenidos y que hemos puestos en las tablas como correspondientes a M8, tanto para 5
resto de todas las muestras del ejercicio.Para el ADN mitocondrial, la muestra M8 presenta un perfil de mezcla, 60155 La fracción contaminante del pelo presenta un perfil distinto, para autosómicos y cromosoma Y, con respecto al debido a la incompleta descontamincación del pelo. La fracción contaminante ha podido ser separada del pelo y analizada. Por otro lado, no ha podido eliminarse del todo la fracción contaminante existente en M8. Esto puede deberse bien a un fallo técnico o bien a la absorción de la contaminación en el pelo. Se pueden detectar en M8 dobles picos que corresponden con las mutaciones detectadas en la contaminación del pelo, excepto en las que coinciden entre los dos perfiles. Perfil pelo M8: 73 R, 152 Y, 263 G, 315.1 C, 16224 Y, 16311 Y, 16319 R Perfil contaminación del pelo: 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A Con estos datos se puede deducir que el haplotipo más probable del donante del pelo M8 sería el siguiente: 263 G, 315.1 C NOTA: Toda la información del contaminante del pelo (autosómicos, mtDNA y cromosoma Y se muestra en una tabla complementaria. La muestra 5
contaminante que se determinó era semen; el pelo al no tener raíz no permite obtener elperfilde autosomas, 60156 El perfil que se ha volcado para los microsatélites de la muestra M8 corresponden al perfil obtenido de la muestra
únicamente su haplotipo mitocondrial.La muestra M8 y su contaminante no se corresponden con ninguna de las muestras de M1 a M5.
5
ser semen. Para el fluido contaminante de la muestra de cabello M8 se ha obtenido perfil de loci microsatélite 60157 La muestra de cabello M8 presenta contaminación por un fluido; los análisis preliminares indican que el fluido podría
autosómicos y de los cromosomas X e Y, así como haplotipo de ADN mitocondrial. En el caso de la muestra de cabello M8, se ha obtenido un haplotipo parcial de la región de control de ADN mitocondrial. Haplotipo del fluido contaminante de la muestra M8: 73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A Haplotipo de la muestra de cabello M8: 228 R, 263 G, 315.1 C, 16224 Y, 16298 Y, 16311 Y El haplotipo de la muestra de cabello M8 no coincide con el haplotipo de la muestra de referencia M5.
560158 En relación al apartado 3.2.2.3. la respuesta "NO" viene marcada en el formulario por defecto. 5
el proceso de lavado se utilizó este extracto para el análisis de STRs autosómicos y de Cromosoma Y,
60159 Los fragmentos de pelo que contenía el sobre de la muestra M8, se sometieron a una extracción individualizada. Tras observandose el perfil expuesto en la tabla de resultados. Habida cuenta de que se trata de pelos sin bulbo cabe pensar que dicho pelo estaba contaminado con algún fluido biológico y el perfil obtenido por tanto se debe a este y no al pelo. Como conclusión final en esta muestra cabe decir, que es posible que la concentración del fluido biológico que está contaminando la muestra de pelo sea tal que no ha sido posible su eliminación completa en la muestra y esté enmascarando la verdadera información genética. En la mayoría de los fragmentos de pelo de M8 no se obtuvo resultado concluyente para el ADN mitocondrial.
5
procedió a limpiar el pelo con una torunda para arrastrar el fluido contaminante y se procesó esta torunda como 60160 Los fragmentos de pelo estan contaminados con semen (fosfatasa acida y PSA resultaron ser positivos). Se
"torunda M8", extrayendose tanto ADN nuclear como ADN mitocondrial. A su vez se extrajo el ADN mitocondrial del fragmento de pelo limpio de contaminante. Con los resultados obtenidos en los marcadores de ADN nuclear autosómico y Cr Y no se puede descartar que el donante de la torunda M8 sea uno de los participantes de la mezcla M7 junto con las muestras M4 y M5.Respecto a los resultados de ADN mitocondrial ver el apartado 2.3
"Observaciones y conclusiones a los resultados de ADN mitocondrial". 5
suponemos que, a pesar del exhaustivo lavado al que los hemos sometido, no hemos logrado eliminar por completo 60161 Tras obtener la secuencia de ADN mitocondrial del tallo de pelo obtenemos una mezcla de haplotipos, por lo que
los restos orgánicos adheridos, que previamente habíamos visualizado al microscopio óptico. Por ello, no podemos determinar si el tallo de pelo pertenece al donante de la muestra M5. No obstante, la secuencia de ADN mitocondrial
Observaciones
(regiones HV1 y HV2; posiciones 73 a 340 y 16024 a 16365) de los restos adheridos al pelo es la siguiente:73 G, 152 C, 263 G, 315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A Del cotejo de los resultados obtenidos del análisis de ADN de dichos restos orgánicos adheridos al pelo (STR´s autosómicos y de cromosoma Y y el haplotipo de ADN mitocondrial), se deduce que éstos no pertenecen a ninguno de los donantes de las muestras M1 a M5. 5
ya que en este laboratorio no se dispone de medios para este tipo de análisis.
63759 Se ha detectado una contaminación con esperma, no habiendose podido obtener el haplotipo para ADN mitocondrial, 5
tanto a la PSA como a la exposición frente a la luz óptica (MINICRIMESCOPE MS400).* Este laboratorio no lleva a 63760 La muestra M8 es un fragmento de cabello sin bulbo contaminado por un fluido orgánico que reacciona positivamente
cabo estudios de ADN mitocondrial por lo que no es posible determinar el origen del donante. 5
completo, pero no obstante forma parte de la M7 (al menos los marcadores de los que hemos obtenido valor) 63761 En el Laboratorio no se hace Mitocondrial. Se ha analizado el contaminante del pelo pero el perfil obtenido no es 5
315.1 C, 16224 C, 16311 C, 16319 A
63764 El producto de lavado de la M8 presenta el siguiente haplotipo para las regiones HVI y HVII: 73 G, 152 C, 263 G, 5
lavagem (M8.2) e do material que recobria o pêlo (M8.3). STRs autossômicos: M8.1 e M8.3: Foi obtido um perfil 63766 -Foram realizadas 2 extrações de DNA a partir da amostra M8: extração orgânica do pêlo total (M8.1), do pêlo após
masculino idêntico para as duas amostras.-Y STRs: M8.1 e M8.3: Foi obtido um perfil idêntico para as duas amostras.Não foram obtidos perfis de STRs para a amostra M8.2 (pêlo)-mtDNAM8.1 e M8.3: haplótipos idênticos, diferentes de M1 a M5. M8.2 (pêlo): haplótipo sem indicativo de mistura, - diferente de M8.1 e M8.3.Conclusão: A amostra M8 consiste de pêlos contaminados com fluido biológico (provavelmente semen). O doador do semen não pode ser excluído como contribuinte da amostra M7. O haplótipo de mtDNA do doador do pêlo não foi observado em nenhuma das outras amostras.
5
profile. According to the STR typing, the semen washed away showed a single unique profile that could be one of the 63767 The hair consisting in M8 sample was washed to separate the semen on its surface.The hair showed only mtDNA
contributors of M7. 5
actividad enzimática de fosfatasa ácida NEGATIVO pero con detección de PSA-p30 POSITIVA). La visualización de 63769 En la muestra M-8 se trata de dos pelos sin raíz en los que se detecta contaminación por fluido seminal (test de
espermatozoides resultó negativa. Ante la pregunta de si el pelo puede pertenecer a la muestra de referencia, no hemos determinado tal evidencia por carecer ambos pelos de raíz. Sin realización de prueba de ADN mitocondrial, no se puede aproximar una respuesta. En relación al perfil obtenido de la contaminación (fluido seminal), se ha
evidenciado un perfil genético procedente de un varón, que resulta COINCIDENTE con la fracción haploide