informe de laboratorio n°3.docx

"acterial#

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1°- DETERMINACION DE LA CALIDAD DEL AGUA POR SU CONTENIDO

1°- DETERMINACION DE LA CALIDAD DEL AGUA POR SU CONTENIDO

BACTERIAL.

BACTERIAL.

OBJETIVO 

OBJETIVO 

Objetivo gee!"# 

Objetivo gee!"# 

• Evaluar la calidad sanitaria de 3 tipos Evaluar la calidad sanitaria de 3 tipos de muestras de agua.de muestras de agua.

Objetivo e$%e&i'i&o

Objetivo e$%e&i'i&o

•

•  Aprender la co Aprender la correcta manera de rrecta manera de obtener muestraobtener muestras de agua.s de agua.

MARCO TE(RICO

MARCO TE(RICO

La calidad del agua se define como: el conjunto de caracteres físicos químicos y La calidad del agua se define como: el conjunto de caracteres físicos químicos y biológicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea biológicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea segura para el fin destinado (!"#$% &')*.

segura para el fin destinado (!"#$% &')*.

+ara que el agua sea de calidad potable debe de reunir ciertos factores: +ara que el agua sea de calidad potable debe de reunir ciertos factores: a) Físicos

a) Físicos. "olor% olor% sabor% temperatura% conductividad específica% sólidos% p$.. "olor% olor% sabor% temperatura% conductividad específica% sólidos% p$. b) Químicos

b) Químicos. Alcalinida. Alcalinidad% metales% d% metales% nutrimentos% sulfatos% # nutrimentos% sulfatos% # (#,ígeno isuelto*% -#(#,ígeno isuelto*% -# (emanda -ioquímica de #,ígeno*.

(emanda -ioquímica de #,ígeno*. c

c) ) BBiioollóóggiiccooss.. El mEl mtotoddo o mimiccrorobbiiololóógigico co pparara a ddeetetecctatar r lla a ppreresesenncicia a dede micro

microorgaorganismnismos os colicoliformeformes s en en el el agua contemplagua contempla a tres tres fasesfases: : +rue+rueba ba +res+resuntiuntiva%va% +rueba "onfirmativa% +rueba "ompleta.

+rueba "onfirmativa% +rueba "ompleta. Los

Los parpar/me/metrotros s físfísicoico0qu0químiímicos cos dan dan ininforformacmacióión n e,e,tentensa sa de de la la nanaturturalale1a e1a de de laslas sustancias químicas del agua y sus propiedades físicas% sin aportar información de su sustancias químicas del agua y sus propiedades físicas% sin aportar información de su influencia en la vida acu/tica2 los

influencia en la vida acu/tica2 los mtodos biológicos aportan esta información pero nomtodos biológicos aportan esta información pero no sealan algo acerca del

sealan algo acerca del contaminante o contaminantes responsablescontaminante o contaminantes responsables.. E

ENNFFEERRMMEEDDAADD AAGGEENNTTEE   

ORIGEN BACATERIANO ORIGEN BACATERIANO F

Fiieebbrrees ts tiifofoiiddeeaas y s y ppaarraattiifofoiiddeeaass SSaallmmoonneelllla ta tyypphhii S Saallmmoonneelllla a !!aarraatytypphhi A i A y By B"" D

Diisseenntteerr##a a bbaa$$iillaarr SShhii%%eellllaa C

C&&lleerraa ''iibbrriio o $$hhoolleerraaee G

Gaassttrrooeenntteerriittiis as a%%((ddaas y ds y diiaarrrreeaass EEss$$hheerrii$$hhiia $a $oolliiCCaammppyylloobbaa$$tteer r 

)ersiniae ntero$oliti$a Salmonella spShi%ellas" )ersiniae ntero$oliti$a Salmonella spShi%ellas"

E# ite!)$ $e &et!" e #o$ *i&!oo!g"i$*o$ %"t+geo$, e $o #o$

E# ite!)$ $e &et!" e #o$ *i&!oo!g"i$*o$ %"t+geo$, e $o #o$

/i'e!ete$ ti%o$ /e b"&te!i"$, vi!$, %!oto0oo$  ot!o$ o!g"i$*o$, e

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t!"$*ite e'e!*e/"/e$.

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Ba$terias del %r(po $oliforme Ba$terias del %r(po $oliforme

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• Coliformes totales (bacterias del grupo coliforme* : -acilos gram0negativos% aerobios o anaerobios facultativos% no formadores de esporos% o,idase0negativos% capaces de desarrollarse en presencia de sales biliares o agentes pensativos que fermentan la lactosa con producción de /cido% gas y alde4ído a 35%6 7 6%58 " en )909 4oras% e que pueden presentar actividad de la en1ima  ; galactosa. La mayoría de las bacterias del grupo coliforme pertenece a los gneros Esc4eric4ia% "itrobacter% <lebsiella y Enterobacter.

• "oliformes termotolerantes : =ubgrupo de las bacterias del grupo coliforme que fermentan la lactosa a 99%5 7 6%)8 " en )9 4oras2 teniendo por principal representante la Esc4eric4ia coli% de origen e,clusivamente fecal.

• Esc4eric4ia coli ; bacteria del grupo coliforme que fermenta la lactosa y manitol% con producción de /cido y gas a 99%5 7 6%)8 " en )9 4oras% produce indo a partir  del triptófano%o,idase negativa% no 4idroli1a la urea y presenta actividad de las en1imas  galactosa y  glucuronidase% que es considerado el m/s específico indicador de contaminación fecal reciente y de eventual presencia de organismos patognicos.

CARACTERES DE *AS AG+AS !OTAB*ES &. #rganolpticos: sabor color% olor% turbide1 ). >ísico0químicos:

? p$ de @ a .

? #,ígeno disuelto 4asta5 mgl de agua.

? Besiduo seco a &&68" 4asta @56 mgl de agua.

? ure1a total mínima &56 mg carbonato c/lcico por litro de agua. ? "loruros 4asta )5 mgl de agua.

? "alcio 4asta &66 mgl de agua.

? Cagnesio 4asta 36 mgl de agua sulfatos 4asta )5 mgl de agua. ? Aluminio 4asta 56 microgramoslitro de agua.

? $asta &66 bacterias aerobiasml de agua a ))8". ? $asta &6 bacterias aerobiasml de agua 3@8". 3. Cicrobiológicos

? Ausencia total de bacterias coniformes% =treptococus faecalis% clostridios sulfito. ? Ausencia total de elementos formes.

? Dn m/,imo de )66 bacterias aerobiasml de agua a 3@8".

RECUENTO DE COLONIAS EN PLACA

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Es un mtodo muy utili1ado cuando se necesita determinar el tamao de la población bacteriana de una muestra.

El recuento de microorganismos% en este caso% se basa en que cada uno desarrollar/ una colonia visible. +ero debido a que una muestra no es totalmente 4omognea con respecto a su composición microbiológica% es posible que una colonia se origine de un microorganismo o de cientos de ellos% dando en este ltimo caso un recuento menor del real.

Fambin es posible que muc4as de las bacterias presentes en la muestra no puedan crecer en las condiciones elegidas (p$% temperatura% medio de cultivo% tiempo% etc.*. En este caso el recuento tambin ser/ inferior al real. Lo que sí se sabe es que cada colonia observada se formó a partir de por lo menos un microorganismo.

Esta es una condición necesaria y suficiente. Entonces la colonia es considera una unidad formadora de colonia (D.>.".* a los efectos de los c/lculos. =e admite% por lo tanto% que en los mtodos de recuento de microorganismos vivos% son inevitables los errores. Especialmente cuando se e,aminan muestras pequeas% es posible cometer  grandes errores.

 -A"FEBGA= "#LG>#BCE=

0 Ctodo de los tubos mltiples (HC+ nmero m/s probable*.

Este mtodo podr/ utili1arse para cualquier tipo de agua y ser/ el procedimiento oficial obligatorio en casos de litigio.

eterminación del nmero de coliformes mediante siembra de distintos volmenes del agua a anali1ar en series de tubos conteniendo medio de cultivo liquido lactosado y resiembra en medios de cultivo selectivos con incubación a temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva% de confirmación de coliformes totales y de confirmación de coliformes fecales. 0 Ctodo del filtro de membrana (mtodo alternativa*.

eterminación del nmero de coliformes mediante filtración de volmenes determinados del agua a anali1ar por filtros de membrana e incubación sobre medios de cultivo a temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las determinaciones de coliformes totales y de coliformes fecales.

E=FBE+F#"#"#= >E"ALE=

0 Ctodo de las tubos mltiples (HC+ nmero m/s probable*.

Este mtodo podr/ utili1arse para cualquier tipo de agua y ser/ el procedimiento oficial obligatorio en casos de litigio. >undamento. eterminación del nmero de estreptococos mediante siembra de distintos volmenes del agua a anali1ar en series de tubos conteniendo medio de cultivo liquido glucosado con agentes in4ibidores selectivos e incubación a temperatura adecuada. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva y de confirmación de estreptococos fecales.

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eterminación del nmero de estreptococos fecales mediante filtración de volmenes determinados del agua a anali1ar por filtros de membrana e incubación sobre medio de cultivo selectivo a temperatura adecuada.

To*" /e *e$t!"$ %"!" "2#i$i$ *i&!obio#+gi&o

Las muestras que se tomar/n para el an/lisis deben ser representativas para poder  determinar así su calidad microbiológica. $ay normas para la toma de muestras de aguas segn sus distintas procedencias (grifos% po1os% depósitos% lagos% ríos% manantiales% etc.*. +ara su recogida debe utili1arse frascos estriles y debe recolectarse cantidades comprendidas entre 566 y &666 ml.

•  Agua de los grifos: =e tiene que dejar correr el agua durante un periodo de & a ) minutos. estape el frasco esterili1ado con los cuidados necesarios a modo de no contaminar el medio y luego cirrelo.

=i el agua estuviera clorada (piscinas* el frasco con el que se tomara la muestra de &66 ml deber/ contener 6.& ml de solución de tiosulfato de sodio al 3I para neutrali1ar el cloro residual.

• +o1os: "uando no 4ay grifos u otro tipo de conducción% amarre una cuerda esterili1ada al frasco de toma de muestras y recolecte la muestra. El frasco debe estar lleno 4asta sus 95 de su volumen.

•  Agua de superficie: Becolecte la muestra contra la corriente% lo m/s distante de la orilla y siempre bajo la superficie (m/s o menos a 36 cm de profundidad*. =u an/lisis debe comen1ar antes de que 4ayan transcurrido J 4 desde el momento de la toma de muestras. En circunstancias e,cepcionales% las muestras pueden conservarse a una temperatura de 98" durante un periodo m/,imo de )9 4 antes de su an/lisis.

Le&t!" e ite!%!et"&i+ /e #o$ !e$#t"/o$

Franscurrido el tiempo de incubación pertinente se cuentan todas las colonias crecidas en las placas. =e elige aquella dilución en la que el nmero de colonias por placa se encuentre entre 36 y 366 descartando las otras diluciones para el recuento. =olo se contaran las colonias de aquellas placas que posean menos de 36 en el caso de que sea una muestra sin diluir.

El resultado se e,presara en unidades formadoras de colonias (D>"* por ml A la 4ora de obtener este resultado 4ay que tener en cuenta que se 4an sembrado 6.& ml y el factor de dilución.

Keamos un caso pr/ctico: =e 4an contado las tres placas sembradas de la dilución &609 y se 4a obtenido un recuento de 93% 95 y 9@ colonias respectivamente en las tres placas. +ara e,presar el resultado del recuento% primeramente se 4ace la media de las tres placas (93959@:3M95* que sería de 95 colonias. +uesto que se 4a sembrado 6.& ml. para saber el nmero de colonias por mililitro ser/ necesario multiplicar por &6% por tanto ser/ 95,&6M9.5N&6) en el mililitro de la dilución &60)_{. Así% en la muestra} original el nmero de unidades formadoras de colonias por mililitro (D>" ml* ser/ de 9.5,&6) ,&69 es decir% 9.5,&6J D>"ml

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 Becoger en 3 frascos esterili1ados muestras de agua de distintos lugares.

 "oger cierto volumen de agua de cada muestra y diluirlo con agua destilada 4asta tener las siguientes concentraciones: & ml2 6%&ml% 6%6&ml

 +reparar el agar nutritivo y vertirlo en 3 placas +etri esterili1adas.

 Kerter & ml de cada una de las nuevas concentraciones en las placas.

 Gncubar las placas con muestra de agua durante 56 4oras variando la temperatura de )) 0 )O" segn sea el lugar del muestreo.

 espus de 4aber transcurrido las 9 4oras reali1ar el respectivo conteo de colonias. =i el recuento debe ser postergado temporalmente% guardar las placas a 5 ; &6O" por un período no mayor de )9 4oras% pero evitar que sea sta una pr/ctica de rutina

RESULTADOS 

Me$t!"$ /e "g"

M(estra

Fe$ha

,ora

Temperat(ra

E$t"e /e

 A!ite&t!"

-./01/-2

3450

pm

667C  

E$t"e /e %"be##+

&et!"# 

-./01/-2

3451

am

667C  

G!i'o 3IA

-./01/-3

-6408 pm

667C  

C"!"&te!4$ti&"$ /e #"$ &o#oi"$

M(estra

Dil($i&n

U.3.C

Ob$e!v"&ioe$

1*L

15  

_*L

₁₅  

_*L

E$t"e /e

 A!ite&t!"

669

19

-6

E$t"e /e

 %"be##+ &et!"# 

-99

9

2

Tama;o de la $olonia46:3 mm

Color4 Cremas T"OBS496 horas Tiempo de in$(ba$i&n4

G!i'o B"7o$

V"!oe$ 3IA

-80

1.

-

Tama;o de la $olonia4-:3 mm

Color4 Cremas T"OBS496 horas Tiempo de in$(ba$i&n4

+ara reali1ar el contaje se escogen las placas que muestren entre 36 y 366 colonias. +ara visuali1ar mejor es conveniente ubicar la placa sobre una caja con tapa de vidrio y lu1. ar el resultado en ufcml (no en bacterias por gramo*:

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Ho se puede determinar las unidades formadoras de colonias (D>"* por 

mililitro de muestra% pues los datos obtenidos est/n muy dispersos y si

se calcula así los resultados obtenidos no son viables.



=e puede precisar que el agua del estanque de arquitectura est/ muc4o

m/s contaminada que el agua de la >GA2 pero no se puede precisar qu

nivel de contaminación que tiene cada muestra.



Los resultados obtenidos no son fiables2 y se debe reali1ar nuevamente

el laboratorio.



E,iste una inconsistencia entre los datos obtenidos a partir del agua del

grifo >GA y los estanques de arquitectura y pabellón central2 ya que este

presenta en varias de las muestras valores que no guardan relación con

cantidad de colonias en agua potable que por norma de ser 6 D.>.".

RECOMENDACIONES

 =e recomienda 4acer una limpie1a constante del estanque del pabellón central.

 =e debe reali1ar un monitorio constante del grifo de >GA a fin de eliminar las colonias de bacterias.

 =e sugiere reali1ar adicional a la prueba reali1ada la prueba de coliformes totales a fin de obtener una base referencial de la calidad bacteriológica.

 =e recomienda mantenimiento de reservorios de agua de la >GA a fin de evitar  posibles infecciones gastrointestinales2 ya que las muestras presentaron presencia de colonias en registro.

 ANE8OS 

1. Límites máximos permisibles de parámetros

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