Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

Consenso Internacional sobre Nomenclatura Estandarizada de Patrones de Células HEp-2 de los

Anticuerpos (ICAP) 2014-2017 y Consenso sobre nomenclatura en España (SEQC/SEI-GEAI)

Ángela Carrasco Sayalero F.E.A. en Inmunología Servicio de Inmunología, Hospital Ramón y Cajal

Málaga 2017

SE DENOMINAN AC NATURALES A LOS AC QUE ESTAN PRESENTES EN EL SUERO DE INDIVIDUOS SANOS EN

AUSENCIA DE INMUNIZACION DELIBERDA DE CUALQUIER ANTIGENO, UNA GRAN MAYORIA DE AC NATURALES REACCIONA CON UNO O MAS AUTO-ANTIGENOS Y SON DENOMINADOS AUTOANTICUERPOS NAURALES… ESTA

DEMOSTRADO QUE LOS AUTOANTICUERPOS REACTIVOS DE CELULAS «B» Y CELULAS «T» ESTAN PRESENTES EN

INDIVIDUOS SANO Y VIRTUALMENETE EN TODOS LOS VERTEBRADOS

ANA/Hep2

Hep2 son líneas de células tumorales epiteliales obtenidas de carcinoma de laringe humana, que se utilizan como

sustrato antigénico estandarizado para la determinación de

los anticuerpos antinucleares

ANA grupo heterogéneo de Auto-ac dirigidos frente

antígenos localizados en el núcleo celular y citoplasma que se detecta en pacientes con diferentes EAS y especialmente las enfermedades del tejido conectivo (CTD) como prueba

diagnostica

Lisosomas membrana plasmática Centriolo microfilamentos mitocondria Ribosomas

ret. endoplásmico liso

núcleo

nucleolo

membrana

nuclear ANTI-CELL PATTERNS

(AC)

Golgi

cromatina

ret. endoplásmico rugoso

ANA EN LA PRÁCTICA CLÍNICA

Infecciones

ANA

+

ANA/IFI

• ANA mediante IFI es obligado en el diagnóstico de CTD según el Colegio Americano de Reumatología

• ANA mediante IFI es un marcador de inflamación inespecífico

• La IFI exige un tratamiento de la muestra individualizado

e interpretación de resultado por expertos.

• La detección de ANA mediante IFI en HEp-2 es necesario

ESTANDARIZAR

Wiik AS. Proposal of partipants in the CANTOR project 2000

• Taxonomía y clasificación de 29 patrones IFI diferentes.

• Programa de «sofftware» DOORS. • Lecturas de imagines digitalizadas

de patrones Hep2 en un monitor LCD.

• Respaldado por proyecto CANTOR (UE) ( junio1998-julio2000) • Consenso entre centros de

expertos de inmunología clínica. • Colaborar y lograr una versión

para evaluar cualitativa y cuantitativamente el

reconocimiento de imágenes.

The first Brazilian consensus for standardization of ANA in HEp-2 cells

Jornal Brasileiro de Patologia e Medicina Laboratorial (2001) 38:207–16

3° Consenso Brasileiro para pesquisa de autoanticorpos em células HEp-2

Rev Bras Reumatol (2009) 49:89–109.

Padrões de PAAC-IFI em HEp-2, descrição, principais autoanticorpos associados e associações clínicas mais frequentes

Patrones/ Descripcion/ Relevancia clinica

First Argentine consensus for standardization of antinuclear antibodies by indirect immunofluorescence-HEp-2. Acta Bioquím Clín Latinoam (2012)

.

Padrões de PAAC-IFI em HEp-2, descrição, principais autoanticorpos associados e associações clínicas mais frequentes

Consideraciones metodológicas para la calidad de los IFI, Recomendaciones técnicas , Patrón obligatorio

Brazilian guidelines for autoantibodies on HEp-2 cells.

Rev Bras Reumatol (2014) 54:44–50.

ICAP

(Consenso internacional en patrones de anticuerpos antinucleares)

GRUPO DE TRABAJO PARA LLEGAR A UN CONSENSO SOBRE PATRONES MORFOLOGICOS OBSERVADOS EN LA IFI DE Hep2

• SE ESTABLECIO EN EL 12 SIMPOSIUM IWAA ( interantional workshop autoantibodies and autoimmunity) BRASIL 2014

• SE INSPIRO EN EL SISTEMA DE ESTRANDARIZACION DE PATRONES ANAs, CON 10 AÑOS DE HISOTIRA FORMADO POR

MIEMBROS DE ASC ( comité de estandarización de anticuerpos ) IUIS (subcomité de la unión internacional de las

sociedades de inmunología) y QAS (control de estandarización y calidad )

ICAP ACTUA COMO SUBCOMITE DE ASC NIVEL DE MIEMBROS

• APORTAR IDEAS Y CONTRASTAR INICIATIVAS DE LA ICAP

• CORREGIR ERRORES PONTECIALES Y PROMOCIONAR LA IMPLANTAICON DE LA CLAISFICACION ICAP • ESTAR AL IDA DE LAS ACTIVIDADES DE ICAP Y DESCARGARSE POSTER Y ARCHIVOS DE LA WEB DE ICAP

MIEMBROS PLENOS: COMITÉ EJECUTIVO DE ICAP

MIMBROS ASOICADOS : DESIGNACION DEL COMITÉ EJECUTIVO PARA CONSTRUIR MANTNER Y AVANZAR EN EL ICAP MIEMBROS AFILIADOS : USUARIOS DE ICAP REGISTRADOS

QAS ( COMITÉ DE CONTROL DE ESTANDARIZACION Y CALIDAD)

• MANTENER EL APOYO AL SUBCOMITE EXISTENTE

• HACER PUBLICO LAS ACITVIDADES DE ESTNDARIZACION A TRAVES DE LA ORGANIZACIÓN DE SIMPOSIUM EN IUIS • CONTRIBUIR CON ARTICULOS DE REVISON GENERAL EN LA REVISTA « FRONTIERS IN INMUNOLOGY»

• BUSQUEDA DE INVERSORES PARA INCREMENTAR ACTIVIDADES

2019 IUIS BEIJING ( CHINA) EN EL 17º CONGRESO INTERANCIONAL DE INMUNOLOGIA

El 1º ICAP

Se crea el comité internacional de estandarización de patronas ANAs con una pagina web titulada ANApatterns.org con imágenes de patrones e información relacionada con cada patrón de ANA Congreso Nacional del Laboratorio Clínico 2017

Nivel competente: Deben ser

reconocidos fácilmente.

Clínicamente relevantes.

Nivel experto: Difíciles de reconocer

Nivel de experiencia considerable.

Marcadores diagnósticos : E. Neurológicas , Miositis inflamatorias, E. Neuromusculares Estandarización de Test de Anticuerpos ; IAS, ICAP

Valor de los Ac. a nivel de Predicción , Pronostico y Prevención

3º ICAP, oct del 2016, 13 IWAA EN Kyoto (Japan)

• PROMOCIONAR EL USO DEL GLOSARIO ANA-PATTERNES

• UTILIZAR NIVELES DE COMPETENTE Y EXPERTO EN LOS LABORATORIOS EN FUNCION DE SU

COMPLEJIDAD

• AUMENTAR TRADUCCIONES A TURCO, JAPONES Y ALEMAN EN LA WEB • PROMOBER LA INCLUSION DE NUEVAS IMÁGENES

• NUEVOS SUSTRATOS PARA HEP2 ( INDUSTRIA)

• EDUCACION ON-LINE CON DIFERENTES NIVELES DE MODULOS • CONSENSO EN INFORMES DE ANA

AC-1 Nuclear homogéneo 2.1 Nuclear homogéneo

2.1.1 2.1.2

AC-2

NUEVO

AC-3 2.2.6 Patrón centromérico

Puntos discretos bastante uniformes localizados en todo el núcleo (de 40 a 60 puntos por núcleo). Las células en telofase y metafase siempre muestran estos puntos en el cinetocoro de los cromosomas, y pueden reconocer varias proteínas centroméricas (CENP-A, B, C, D, E).

Centrómero

GLOSSARIO PATRONES ANA-HEp2

ICAP 2016 Wiik AS (CANTOR project, 2000)

NUCLEARES

Nuclear homogeneous

Fluorescencia homogénea y regular a través de todo el nucleoplasma, los nucléolos pueden o no fluorecer dependiendo del sustrato celular. Las células en mitosis (metáfase, anáfase y telófase) tienen la cromatina intensamente fluorescente de manera homogénea.

Fluorescencia difusa uniforme cubriendo la totalidad del nucleoplasma. Se asocia con distintos anticuerpos, principalmente dirigidos contra componentes cromosómicos (DNA, histonas,…). Marcaje nucleolar homogéneo. En metafase y telofase, puede observarse marcaje homogéneo o periférico de la

dsADN, histonas, nucleosomas Patrón nuclear homogéneo con nucléolos negativos.

Patrón nuclear homogéneo con marcaje nucleolar homogéneo

LES, lúpus inducido por medicamentos, artritis idiopática juvenil.

Nuclear granular fino denso

Nuclear dense fine speckled

Patrón granular distribuido por todo el núcleo de las células en interfase, con heterogeneidad en tamaño, brillo y distribución de los gránulos. A lo largo del núcleo en interfase, hay algunas zonas más densas y más débiles de los gránulos (rasgo muy característico). La placa metafásica muestra un fuerte patrón granular destacándose algunas manchas

DFS70/LEDGF

Raro en SSj, ES y LES

Centrómero

Centromere

Granular grueso discreto (40-80/célula) dispersos en los núcleos de las células en interfase y alineados en la masa de la cromatina en las células mitóticas. Por ejemplo anti-CENP-B

CENP-A/B (C)

ES cutánea limitada, CBP

DFS 70/LEDGFp75

Clinica Técnica %

Cistitis Intersticial IFI WB 9

Dermatitis atópica IFI WB ELISA 16 – 38

Dermetitis atópica con cataratas

IFI WB ELISA 100

Alopecia Areata IFI WB ELISA 19,8

Vogt-Koyanagi-Harada

ELISA 66,7

Behcet ELISA 34,4

Asma IFI WB 16

ANA + IFI 7,8- 38 Robert L.Ochs et al. Clin Exp Med (2016) 16: 273-293

Anti DFS 70 en diferentes grupos de pacientes

Proteína relacionada con la respuesta al Stress Radiación UV

Peróxido de Hidrogeno Alcohol ..

SIDA, Cáncer, inflamación..

Autoimmun Highlights (2016)

4ªICAP, Sep26 2017, 13º Simposio de Autoanticuerpos Dresden ( Alemania)

• ESTABLECER GUIA DE RECOMENDACIONES Y UTILIDAD CLINICA DE AC-1 a AC-14 P. Nuclear y AC-15 a AC-23 P. Citoplasmático

• ESTABLECESR 2 NUEVOS PATRONES AC- 0 NEGATIVO y AC- 29 DNA-TOPOISOMERASAS, DESCRIPCION Y RELEVANCIA CLINICA

• DESARROLLAR CONSENSO DE INFORMES ANA CON PATOLOGIA

AC-0

SE CONSIDERA NEGATIVO CUANDO NO EXIXSTE ESTRUCTURAS CELULARES CLARAMENTE DEFINIDAS Y DELIMITADAS (SUBJETIVO Y SEMICUANTITATIVO)

IMPORTANTE EL TIPO DE SUSTRATO UTILIZADO POR LOS DISTINTOS LABORATORIOS FABRICANTES Y LOTES ,

DILUCION DE SUERO, CONJUGADO, Y CARACTERISTICAS DE MICOROSCOPIO Y CAMARA

AC-29

Sinónimo : Scl-70-like

Antígeno asociado: DNA topoisomerasa I

Descripción subcelular: Patrón Topo I-like, ( se observan 5 regiones subcelulares)

1.Punto fino prominente tipo AC-4. 2. Cromatina en células mitóticas. 3. NORs .

4. Citoplasma debil en C.interfase y mitóticas. 5. Nucleolar en células en interfase.

Diagnostico

Afectación cutánea asociada o difusa Esclerosis Sistémica 30%

LES

Autoimmun Rev.2013;12:340-54

EASI

Actividades European Autoimmunity Standardisation Initiative (2002)

OPTIMIZAR LA COMUNICACION ENTRE CLINICOS Y ESPECIALISTAS DE LABORATORIO • PREGUNTAS Y RECOMENDACIO EN DE EASI

• PRACTICA CLINICA DE LOS CUESTIONARIOS DE ANA, RF, ACPA • CONSENSO INTERANCIONAL DEL “TEST“ DE ANCA

• PROYECTOS LOCALES DE LOS 15 GRUPOS QUE FORMAN PARTE DE EASI • APOYO EN LA CERTIFICACION DE LABORATORIO

ARMONIZAR & ESTANDARIZAR

• EN EL PROCESO DE PREPARCION DE ESTANDARES PARA MAXIMIZAR LAS COMPATIBILIDADES DE LOS RESULTADOS Y TENDER A LA UNIFORMIDAD DE RESULTAODS

• ARMONIZAR Y AJUSTAR DIFERENCIAS ENTRE METODOS DE MEDIDA Y PROCEDIMIENTOS, HACERLOS MAS

UNIFORMES Y COMPATIBLES (RECOMENDACIONES Y/O GUIAS )

LOS RESULTADOS HAN SIDO POSIBLE ARMONIZARSE POR RECOMENDACIONES Y CONSENSO

OPTIMIZAR COMUNICACIÓN :

SIMPOSIUM DRESDEN EN AUTOANTICUERPOS CONGRESO INTERANCIONAL DE AUTOINMUNIDAD

LIBROS : GUIA PRACTICA DEENFERMEDADES AUTOINMNES (INGLES 2012/ ALEMAN 2014/ RUSO 2017)

GEAI

Grupo español de enfermedades autoinmunes

Constituye una red de cooperación entre especialistas

implicados en el diagnóstico y tratamiento de las

enfermedades autoinmunes. Coordina iniciativas y

realiza proyectos comunes destinados a expandir el

conocimiento de estas enfermedades y mejorar la

calidad de la atención a los pacientes.

ACTIVIDADES DE GEAI

• TRABAJOS MULTICENTRICOS

• COMITES DE EXPERTOS ( EAS, TRATAMIENTO CON INMUNOGLOBULINAS,MIOSISTIS) • TALLERES NACIONALES (Patologías Autoinmunes e Imágenes por IFI)

• CURSOS DE FORMACION, MESAS REDONDAS • FORO DE DEBATES Y DUDAS

• DIRECTORIO DE LABORATOIRIOS DE REFERENCIA PARA DETERMINACIONES POCO FRECUENTES • ESTUDIOS EUROPEOS( EASI)

Método y valoración clínica para informar los ANA, ENA, anti-ds DNA (según informe Delphi)

Determinación, Interpretación, Especificidad de Auto-Ac Estudio de ANCAs (MPO,PR3)

• REFERENTE EN GUIAS CLINICAS

• EDICION

Monografías

Casos clínicos en autoinmunidad

CONCLUSIONES

Promover el uso del «Consenso Internacional sobre

nomenclatura estandarizada de Patrones de células Hep2» Utilizar los algoritmos de consenso internacionales para el diagnóstico de enfermedades autoinmunes

Establecer objetivos para armonizar y consensuar guías que compartan criterios internacionales