Prof.
INTRODUCCIÓN
En los organismos se encuentran cuatro tipos diferentes de moléculas orgánicas en gran
cantidad: carbohidratos, lípidos, proteínas y nucleótidos. Todas estas moléculas contienen
Carbono, Hidrógeno y Oxígeno. Además, las proteínas contienen Nitrógeno y Azufre, y los
nucleótidos, así como algunos lípidos, contienen Nitrógeno y Fósforo.
Diversos análisis de laboratorio permiten reconocer la presencia de estas moléculas en
muestras biológicas, los cuales se basan en la constitución química de los compuestos y su
reacción con algunos reactivos y colorantes.
OBJETIVOS
Realizar la determinación de biocompuestos como carbohidratos, grasa, proteínas y vitaminas
en muestras biológicas que representan diferentes grupos celulares.
Identificar diferentes procedimientos cualitativos para el reconocimiento de polímeros y
monómeros basados en la constitución química de estas moléculas.
MATERIALES QUE DEBE LLEVAR EL ESTUDIANTE
Bata de laboratorio, Cuaderno de laboratorio, guantes, tapabocas, gorro, marcador vidriográfico
Muestras biológicas (muestras problema)
Grupo 1:
porción de leche (5 mL), porción de manzana, jugo de naranja
Grupo 2:
porción de carne de res o cerdo, porción de harina de trigo leudante, jugo de guayaba
Grupo 3:
porción de pan, huevo, porción de aguacate
Grupo 4:
salchicha, porción de fríjoles frescos, porción de melón
METODOLOGÍA
1.
Ingresar al Laboratorio de Biología con su guía de trabajo, materiales, muestras
requeridas, su bata y cuaderno de laboratorio.
y proteínas utilizando el reactivo puro representativo de cada una de las
biomoléculas en cuestión y un patrón donde no se adicionará el biocompuesto para revisar el
desarrollo de la reacción únicamente con agua.
Para esto se tendrá en cuenta la guía de preparación de la Tabla 1. Se utilizarán dos tubos para
cada uno de los procedimientos, ya que en uno de ellos se adiciona el biocompuesto y en el
otro únicamente agua como se describe en el siguiente ejemplo:
Tubo 1. Presencia de Glucosa Tubo 2. Ausencia de Glucosa
El tubo 1 mostrará la reacción de Benedict si hay Glucosa y el tubo 2 mostrará la reacción si
no hay glucosa.
Se preparán todos los tubos con soluciones patrón para tener una guía que nos permita comparar
la reacción con una muestra de la que no conozcamos si tiene o no el biocompuesto
(muestra problema).
1mL de solución Glucosa
+ de
1mL de
+
Biología General
Laboratorio. Reconocimiento cualitativo de biocompuestos
Prof. Diana Cárdenas Caro
Tabla 1. Preparación de reacciones patrón para el reconocimiento de biocompuestos
Tubo Biocompuesto Reactivo
patrón
Reactivo revelador
Resultado Fundamento
1 Carbohidrato
monosacárido: Azúcar reductor
1 mL Glucosa (10%)
2 mL Benedict (CuSO4) + Calentamiento en baño serológico (+)Amarillo, naranja, terracota
Los monosacáridos tienen poder reductor porque su grupo carbonilo (C=O) se puede oxidar a ácido (COOH), debido a la reducción de otros compuestos como el Fe3+ o Cu2+. Como el reactivo de Benedict está compuesto de carbonato de sodio, citrato de sodio y sulfato de cobre el cual es de color azul, cuando reaccionan con el azúcar reductor se forma óxido de cobre (I), de color rojo.
2 Carbohidrato
monosacárido: Azúcar reductor
1 mL Agua (-) Azul No hay azúcar reductor, por lo tanto el color resultante sigue siendo el del reactivo de Benedict: azul.
3 Carbohidrato
Polisacárido: Almidón
1 mL Almidón (1%)
2 ó 4 gotas Lugol
(+) Violeta, negro
El almidón es un polisacárido que puede formar complejos coloreados con el yodo que está presente en el reactivo de Lugol. Este reactivo se entrelaza en las cadenas ramificadas del almidón generando esta coloración.
4 Carbohidrato
Polisacárido: Almidón
1 mL Agua (-) Amarillo No hay almidón, por lo tanto el color resultante sigue siendo el del reactivo de Lugol: amarillo
5 Proteína:
Reacción de Biuret
2 mL Albúmina de
huevo 2 mL NaOH (10%) + 3 ó 5 gotas de
CuSO4 (0,5%)
(+) Rosado, violeta
Los enlaces peptídicos que unen los aminoácidos de las proteínas cuando se ponen en contacto con un álcali concentrado, forman una molécula compleja denominada biuret. Esta a su vez, en contacto con CuSO4 genera una coloración azul-violeta.
6 Proteína:
Reacción de Biuret
2 mL Agua (-) Azul No hay enlaces de aminoácidos, por lo tanto el color resultante sigue siendo el del CuSO4: azul o un precipitado amarillo
7 Proteína: Xantoprotéica
2 mL Albúmina de
huevo 3 gotas HNO3
(+) Coagulación
amarillenta
8 Proteína: Xantoprotéica
2 mL Agua (-) Incoloro No hay aminoácidos bencénicos, por lo tanto no se genera reacción.
9 Lípido: Grasa 1 mL de aceite +
2 mL Agua 4 ó 5 gotas Sudán III
(+) Anillo rojo en la superficie
El Sudán III es un reactivo que puede colorear las grasas desde naranja hasta rojo.
10 Lípido: Grasa 2 mL Agua (-) Rosado sin
anillo
No hay grasas, por lo tanto el color resultante sigue siendo el del reactivo de Sudán III: rosado.
11 Vitamina C 5 gotas de
solución de ácido ascórbico (vitamin C)
5 mL de solución de lugol + almidón (azul)
(+) Clarificación de la coloración
azul
La solución lugol + almidón oxida la vitamina C (ácido ascórbico) hasta ácido deshidroascórbico e iones de yoduro.
12 Vitamina C 5 gotas de de
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Laboratorio. Reconocimiento cualitativo de biocompuestos
Prof. Diana Cárdenas Caro
3. Analizar las muestras biológicas (muestras problemas) para reconocer cuáles
biocompuestos están presentes y cuáles no.
Cada grupo tendrá 18 tubos de ensayo que se
deberán repartir de la siguiente forma:
Preparación de las muestras:
Si la muestra es líquida, adicionar 2 mL en cada tubo con pipeta Pasteur.
Si la muestra es sólida, se debe macerar en el mortero y se adicionará agua destilada para
obtener una muestra acuosa, y se adicionará ahora a cada tubo.
Para el
análisis de grasas
se realizará un procedimiento adicional como se describe a
continuación: en un beaker adicionar una porción de muestra y 2 mL de ácido acético.
Luego filtrar y retener la fracción sólida. A esta fracción retenida en el papel filtro,
adicionar 2 mL de éter. En el volumen filtrado quedarán las grasas extraídas. Adicionar el
Sudán III para la determinación de las grasas.
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Cada tubo con la inicial de la muestra, por ejemplo, Manzana: M1, M2, M3, M4, M5, M6
Cada tubo con la inicial de la muestra, por ejemplo, Naranja: N1, N2, N3, N4, N5, N6
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