MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN DE CITOMETRÍA HEMÁTICA

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ELABORA: Bautista Hernández QFB Emigdio REVISO: Cruz Rivera QFB Martha Guadalupe AUTORIZO: Castilla Sosa Dr José

Fecha: 2013-09-18 Fecha: 2013-11-12 Fecha: 2013-11-19

Proceso Selección y Sangrado del Donante Area: Predonación

MÉTODO PARA LA DETERMINACIÓN

DE CITOMETRÍA HEMÁTICA

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1 TERMINOLOGÍA Y DEFINICIONES

CALIBRACIÓN: Análisis de muestras de concentraciones conocidas, el registro en el instrumento

de los valores obtenidos, su uso en la construcción de una grafica frente a valores de concentración conocida para la medición de muestras de valor desconocido.

CETS: Centro Estatal de la Transfusión Sanguínea. CNTS: Centro Nacional de la Transfusión Sanguínea. EDTA: Ácido etilendiaminotetracético

LBS: Laboratorio de Banco de Sangre. S.S.I.: Solución Salina Isotónica.

VALORES DE ALERTA: Son resultados del banco de sangre que se encuentran en valores fuera

de rango que se consideran importantes para reportar al médico.

VALORES CRÍTICOS: También conocidos como valores de pánico, son resultados del banco de

sangre que indican una situación que compromete la vida del paciente.

MIELOBLASTOS: Células redondas u ovaladas de 20 a 25 micras de diámetro que normalmente

se encuentran en la medula ósea, su núcleo es grande, ovalado o redondo y excéntrico. Posee una membrana nuclear delgada y una cromatina granular de color púrpura, finamente dispersa con una paracromatina bien demarcada de color rosa; se encuentran de dos a cinco nucleolos de color azul-grisáceos claros, bien delimitados. La masa citoplasmática es pequeña en comparación al núcleo, produciendo una diferencia núcleo-citoplasma de 7:1, se tiñe basofilamente y muestra un halo paranuclear pequeño de color más claro (aparato de Golgi) y no posee gránulos.

PROMIELOCITOS: Células de 14 a 20 micras de diámetro, redondas u ovaladas; su núcleo

redondo, excéntrico y rodeado por una membrana delgada, aun es grande pero se empieza a empequeñecer. Dentro de la cromatina finamente granular de color púrpura pálido, aparecen condensaciones de cromatina y pueden observarse de uno a tres nucleolos. El citoplasma es azul pálido y más grande que el del mieloblasto, teniendo una diferencia núcleo-citoplasma de 4 o 5:1, la basofilia no es tan intensa como en los mieloblastos. En la periferia del centrosoma se observan gránulos azurofilos primarios que darán lugar a los gránulos secundarios específicos.

MIELOCITOS: Células redondas de 15 a 18 micras de diámetro. Poseen un núcleo condensado,

oval, discretamente indentado y excéntrico; la cromatina es gruesa y no existen nucleolos. El citoplasma es discretamente rosado, acidófilo que contiene gránulos neutrofilicos (secundarios) que pueden cubrir el núcleo y son gruesos en las células mas jóvenes pero se convierten en gránulos finos conforme la célula madura. También se pueden observar algunos gránulos azurofilicos. La diferencia núcleo-citoplasma es de cerca de 2:1 o 5:1.

METAMIELOCITOS: Esta es la ultima célula de la serie granulocitica capaz de división mitótica, la

cual posee un diámetro de 12 a 18 micras, con un núcleo excéntrico, condensado e indentado. La membrana nuclear es gruesa y pesada, y la cromatina se concentra en áreas irregulares gruesas y finas. El citoplasma es abundante, de color rosa pálido que contiene gránulos específicos que en los metamielocitos neutrofilos varían de tamaño, mientras que en los basofilos y eosinofilos son

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más grandes y de igual tamaño. La diferencia núcleo-citoplasma es de 1:1 Los gránulos neutrofilos aparentemente han desaparecido, aunque las enzimas presentes en ellos, como la mieloperoxidasa y la fosfatasa acida, son demostrables.

CÉLULAS EN BANDA: Son las células mas jóvenes de la serie granulocitica que se encuentran

normalmente en sangre periférica, con un tamaño de 10 a 15 micras de diámetro. El núcleo es elongado, curvo y usualmente en forma de U, no es segmentado pero puede estar discretamente indentado en uno o dos puntos. La cromatina es continua, gruesa y rugosa; la paracromatina es escasa. Algunas bandas muestran un cierto grado de constricción nuclear, lo que hace difícil su diferenciación de las formas maduras. Sin embargo, la cromatina y paracromatina aun son visibles en el espacio de la constricción nuclear mas estrecha. Si el puente o filamento de cromatina entre los dos lóbulos nucleares consiste únicamente de membrana nuclear y mide menos de una micra de grueso, la célula es un leucocito polimorfonuclear segmentado. El citoplasma contiene gránulos específicos incoloros con una diferencia núcleo-citoplasma de 1:2.

GRANULOCITOS SEGMENTADOS: Células de 10 a 15 micras de diámetro con un núcleo

excéntrico, con masas de cromatina gruesas y cantidades pequeñas de paracromatina. El núcleo se divide en dos a cinco lóbulos unidos unos a otros por puentes delgados de membrana nuclear. Conforme la célula madura, el número de lóbulos se incrementa de dos a cinco. El citoplasma es abundante, discretamente eosinofilo e incoloro y contiene gránulos específicos que son muy finos en textura y no cubren el núcleo. La diferencia núcleo-citoplasma es de 1:2.

LINFOBLASTOS: Células de 15 a 20 micras de diámetro con un núcleo central, redondo u

ovalado, con una cromatina de color magenta y patrón delicado, con la presencia de uno a dos nucleolos bien delimitados. El citoplasma forma un anillo perinuclear de color azul sin gránulos, aunque puede contener algunos gránulos azul obscuros en la periferia.

PROLINFOCITOS: Células de 15 a 18 micras de diámetro, con núcleo oval pero discretamente

indentado y pueden observarse nucleolos. La cromatina esta discretamente condensada con un patrón en mosaico. El citoplasma basófilo y homogéneo forma un delgado borde alrededor del núcleo y puede mostrar unos cuantos gránulos azurofilos y vacuolas.

LINFOCITOS: Son células de 6 a 9 micras de diámetro (linfocitos pequeños) o de 17 a 30 micras

de diámetro (linfocitos grandes) que poseen un núcleo redondo u oval que ocupa la mayor parte del diámetro de la célula, localizado en forma central o excéntrica. Su cromatina es densa y en grumos, el citoplasma débilmente basófilo y algunos de ellos (10-20%) poseen gránulos azurófilos.

MONOBLASTOS: Células de 15 a 20 micras de diámetro con un núcleo redondo u oval y en

ocasiones achatado e indentado. El patrón de la cromatina puede ser similar al mieloblasto, con nucleolos grandes y redondos de color azul pálido en número de tres a cinco. El citoplasma es a menudo relativamente grande en cantidad, contiene unos cuantos gránulos azurofilicos que se tiñen de color azul o gris. El borde de la célula es irregular con seudópodos e indentaciones.

PROMONOCITOS: Es la primera célula perteneciente a la serie monocítica que puede ser

reconocida como tal, la cual es capaz de división mitótica cuyo producto, el monolito maduro, solo es capaz de madurar en un macrófago. Posee un tamaño de 15 a 25 micras de diámetro con un

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núcleo grande, ovoide o redondo, reniforme e indentado y la cromatina es más fina y filamentosa que en los metamielocitos; en el citoplasma azul grisáceo se observan gránulos azurófilos muy finos que no son siempre fácilmente visibles; cuando los monocitos salen a los tejidos se convierten en sus formas maduras que son los macrófagos, células presentadoras de antígenos u osteoclastos.

MONOCITOS: Células de 14 a 20 micras de diámetro con un núcleo excéntrico o central, en forma

reniforme, a menudo lobulado (con dos o más lóbulos) y a veces doblado en la periferia con circunvoluciones de forma cerebroide. La cromatina es fina, pálida y laxa que posee pequeñas áreas de engrosamiento en sus uniones. No se observan nucléolos y su citoplasma es abundante, opaco, azul-grisaceo y puede estar vacuolado. Contiene polvo azurofilo y a menudo material fagocitado y vacuolas.

LEUCOCITOSIS: Es la cuenta de leucocitos por arriba de 11,000/µL. Habitualmente al incremento

de un solo tipo de leucocitos se le otorga el nombre del tipo de célula que muestra el incremento: · Leucocitosis con neutrofilos o Neutrofilia,

· Leucocitosis con eosinofilos o Eosinofilia, · Leucocitosis con basofilos o Basofilia, · Leucocitosis con linfocitos o Linfocitosis, · Leucocitosis con monocitos o Monocitosis.

LEUCOPENIA: Es la cuenta de leucocitos por debajo de 4000/µL. 2 PRECAUCIONES DE SEGURIDAD

El usuario debe de tomar todas las medidas de seguridad que marca el Manual de Seguridad Personal y Manejo de Residuos Peligrosos Biológico Infecciosos.

2.1 EQUIPO DE PROTECCIÓN PERSONAL

Utilizar el Equipo de Protección Personal establecido en el Procedimiento para el Cumplimiento de las Reglas de Seguridad y Uso de Equipo de Protección Personal (EPP).

2.2 CONDICIONES DE MANEJO, ALMACENAMIENTO Y TRANSPORTE DE LAS MUESTRAS 2.2.1 CONDICIONES DE MANEJO Y ALMACENAMIENTO

Una vez obtenida la muestra de sangre se homogeiniza perfectamente, mezclando el anticoagulante con la sangre. Las muestras deben procesarse lo antes posible después de su extracción, dejándola como mínimo 2 minutos en el agitador mecánico, antes de ser analizado por el instrumento y en un plazo no máximo de dos horas. Todas las muestras deben ser manipuladas sólo por personal autorizado y manejarse como transmisores potenciales de agentes infecciosos. Las muestras ya analizadas, se desechan al término de las labores del día, de acuerdo al Manual de Seguridad Personal y Manejo de Residuos Peligrosos Biológico Infecciosos.

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2.2.2 TRANSPORTE

Para la recepción o envío de muestras, el transporte se realizará en tubos de vidrio colocados en posición vertical en una gradilla dentro de un contenedor de plástico rígido, perfectamente bien cerrado que proporcione seguridad y facilidad de transporte de la muestra.

3 PROPÓSITO DEL EXAMEN

Uniformar y establecer métodos, actividades y estrategias para la captación de candidatos a donar que cumplan con los requisitos establecidos por la NOM-003-SSA-1993 para la disposición de sangre humana y sus componentes con fines terapéuticos vigente, garantizando la obtención de componentes de calidad y con un máximo beneficio para el receptor.

3.1 APLICACIÓN CLINICA.

Un individuo promedio contiene alrededor de cinco litros de sangre que pueden dividirse en tres litros de plasma y dos litros de células. El volumen sanguíneo total de un individuo adulto se estima en un tercio de su peso corporal total. El estudio que mas frecuentemente solicitan los médicos en forma rutinaria es la Citometria Hemática, también llamada Biometría Hemática o BH (citos= célula; metros=medida y haema=sangre), la interpretación correcta de este estudio ofrece información valiosa para conocer el estado de salud del candidato a donador.

La Citometria Hemática consta de tres grandes grupos de datos: · SERIE BLANCA (Leucocitos)

· SERIE ROJA (Eritrocitos)

· SERIE PLAQUETARIA (Plaquetas)

3.1.1 SERIE BLANCA

La principal función de los leucocitos es combatir infecciones, defender al cuerpo por diferentes medios como la fagocitosis de organismos extraños, producir y distribuir anticuerpos en la respuesta inmune. Los leucocitos se dividen en dos grandes grupos.

Los granulocitos que reciben su nombre de los gránulos que están presentes en el citoplasma celular, clasificados como neutrofilos, basofilos y eosinofilos, sin embargo, cada una de estas células contienen núcleos multilobulados, de ahí que también reciban el nombre de leucocitos polimorfonucleares. El otro grupo es el de los agranulocitos, células que no contienen gránulos y no poseen un núcleo multilobulado; no son necesariamente esféricos, de ahí que reciban también el nombre de leucocitos mononucleares, La vida media de los leucocitos varia de 13 a 20 días, después de los cuales son destruidos en el sistema linfático y muchos de ellos son excretados del cuerpo a través de las heces.

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Neutrofilos 40-70% Monocitos 2-6% Bandas 0-5% Eosinofilos 1-4% Linfocitos 20-40% Basofilos 0 -1%

Los granulocitos y agranulocitos se desarrollan a través de la siguiente progresión:

3.1.1.1 LEUCOCITOSIS

Un incremento de los Leucocitos circulantes raramente es debido a un aumento proporcional de todos los tipos de leucocitos. Cuando esto ocurre se debe a una hemoconcentración. En ciertas enfermedades (sarampión, pertussis y sepsis) el incremento de leucocitos es tan grande que el cuadro hematológico sugiere una leucemia. Las leucocitosis temporales se deben distinguir de las leucemias, en que estas últimas son permanentes y progresivas.

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Las leucocitosis se presentan en las infecciones agudas en las cuales el grado de incremento depende de:

· La severidad de la infección, · La resistencia del paciente, · La edad del paciente,

· La eficiencia y reserva medular. Otras causas de leucocitosis incluyen a:

· Hemorragia,

· Traumatismo o daño tisular (cirugía),

· Enfermedades malignas, especialmente del tracto gastrointestinal, hígado, hueso y metástasis,

· Toxinas, uremia, coma , eclampsia,

· Drogas especialmente ether, cloroformo, quinina, adrenalina y factores estimulantes de colonias celulares,

· Necrosis tisular e inflamación, · Leucemia.

En forma ocasional se encuentra una leucocitosis aun cuando no exista evidencia de enfermedad clínica, tales hallazgos sugieren la presencia de:

· Enfermedades ocultas,

· Leucocitosis fisiológica debida a excitación, ejercicio, dolor, frío, calor o anestesia. La terapia con esteroides modifica la respuesta de los leucocitos:

· Cuando la hormona adrenocorticotrofica (ACTH) es dada a personas sanas,

· Cuando la ACTH es dada a un paciente severamente infectado; la infección se puede diseminar rápidamente sin producir la esperada leucocitosis.

Enfermedades hematológicas; recuperación de una supresión medular, hemolisis, y enfermedades mieloproliferativas.

3.1.1.2 LEUCOPENIA

La Leucopenia se puede presentar en las siguientes condiciones: · Infecciones virales,

· Hiperesplenismo,

· Depresión de la medula ósea debida a: o Drogas: § Anti-metabolitos, § Barbitúricos, § Antibióticos, § Antihistamínicos, § Anticonvulsivantes

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§ Drogas anti-tiroideas, § Drogas para quimioterapia § Drogas cardiovasculares § Diuréticos

§ Analgésicos y drogas antiinflamatorias · Enfermedades primarias de medula ósea:

o Leucemia, o Mieloma, o Anemia aplasica, o Síndromes mielodisplasicos, · Enfermedades congénitas: o Síndrome de Kostmann, o Síndrome de Shwachman-Diamond, o Síndrome de Chediak-Higashi · Neutropenia inmune

4 PRINCIPIO DEL MÉTODO

La medición de cada uno de los parámetros que conforman la citometria Hemática se realiza en un hemocitometro, el cual es un contador automatizado para el uso diagnostico in vitro en el Área de Predonación del Laboratorio de Banco de Sangre.

4.1 PRINCIPIO BASICO DEL CONTEO Y CLASIFICACION POR ANALIZADOR ELECTRONICO.

Se utiliza la impedancia eléctrica para el recuento y clasificación volumétrica (por tamaño) de células sanguíneas de plaquetas y eritrocitos. Este método está basado en el análisis de los cambios en la resistencia eléctrica producidos por una partícula suspendida en el diluyente conductor a medida que pasa por la abertura de dimensiones conocidas.

El sistema de medición consiste en un electrodo sumergido en el líquido a cada lado de la abertura que crea una conducción eléctrica, a medida que cada partícula pasa por la abertura, se produce un cambio transitorio en la resistencia entre los electrodos, produciendo un impulso eléctrico analizable. El número de impulsos generado indica el número de partículas que pasa a través de la abertura, la amplitud de cada impulso es esencialmente proporcional al volumen de la partícula, cada impulso se amplifica y se compara a los canales de voltaje de referencia internos, estos canales están delineados por tipificadores de tamaño calibrados para aceptar el impulso de cierta amplitud y poder ser tipificados en varios tamaños según la amplitud.

PARÁMETROS DEL HEMOGRAMA Parámetro Descripción

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RBC Recuento de eritrocitos

HGB Concentración de hemoglobina HCT Porciento de hematocrito MCV Volumen corpuscular medio MCH Hemoglobina corpuscular media

MCHC Concentración de hemoglobina corpuscular media RDW Índice de distribución de los eritrocitos

PLT Recuento de plaquetas MPV Volumen plaquetario medio

PDW Índice de distribución de las plaquetas

4.1.1 RECUENTO DE LEUCOCITOS

El método de impedancia eléctrica se utiliza para obtener los datos de conteo de leucocitos. Las células se tipifican por tamaños a medida que pasan por la abertura.la diferenciación y clasificación de leucocito en sus diferentes líneas celulares se realizan por el método óptico de desviación de luz, causada por los criterios de; complejidad, lobularidad y granularidad de la célula. Toda esta información proporciona un patrón que permite diferenciar las células en 5 líneas Revisar manual de operación de equipo analizador hematológico.

4.1.1.1 HISTOGRAMA DE LEUCOCITOS

Los datos de glóbulos blancos (WBC) se representan en un histograma con datossobre la distribución por tamaño de los leucocitos en el eje X y el número relativode células en el eje Y. Los valores provenientes de los dos detectores determinaran la complejidad celular y su tamaño para procesarotro gráfico, el mejor denominado escatergrama, donde cada punto representa una célula. Los resultados de cada recuento se visualizan en la pantalla del equipo.Una vez analizado el recuento total de leucocitos, el instrumento calcula el númeroabsoluto de células en cada subpoblación multiplicando el recuento leucocitariopor el porcentaje de cada subtipo. Estos resultados se expresan del siguiente modo:

• Leucocitos (WBC) n° K/μl (miles por microlitros) • Linfocitos (LYM) % (porcentaje)

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• Granulocitos (GRAN) % (porcentaje) • Región media (MID) % (porcentaje)

4.1.2 RECUENTO DE ERITROCITOS

El método de impedancia eléctrica se utiliza para obtener datos de conteo celular en la muestra analizada. Las células se cuentan y tipifican por tamaños a medida que pasan por la abertura. Revisar manual de operación de equipo analizador hematológico.

4.1.2.1 HISTOGRAMAS DE ERITROCITOS

Los datos de eritrocitos (RBC) se representan en un histograma con datos sobre la distribución por tamaño de los eritrocitos en el eje X y número relativo de células en el eje Y. Revisar manual de operación de equipo analizador hematológico.

4.1.2.2 HEMOGLOBINA (HB)

Para la determinación colorimétrica de hemoglobina se utiliza un método de metahemoglobina modificada. Revisar manual de operación de equipo analizador hematológico.

4.1.2.3 HEMATOCRITO (HTC).

El hematocrito es la proporción porcentual de eritrocitos empaquetados con respecto al volumen total de muestra donde se incluye el plasma. Los resultados del hematocrito son calculados por el analizador hematológico. Revisar manual de operación de equipo analizador.

4.1.2.4 PARÁMETROS ERITROCITARIOS.

La hemoglobina corpuscular media (MCH) es la cantidad media de hemoglobina contenida en los eritrocitos. La concentración de hemoglobina corpuscular media (MCHC) es la proporción del peso de HGB con respecto al volumen medio de eritrocitos. El volumen corpuscular medio (MCV) es el volumen medio de los eritrocitos individuales. La amplitud de la distribución de tamaño de los glóbulos rojos (RDW) es un análisis de la heterogeneidad de la población de eritrocitos. Los valores de MCH, MCHC y MCV, se calculan automáticamente cuando se analizan los parámetros apropiados, por ejemplo, el recuento de eritrocitos (RBC), hematocrito (HCT) y hemoglobina (HGB). Revisar manual de operación de equipo analizador hematológico.

4.1.3 RECUENTO DE PLAQUETAS

El recuento de plaquetas se obtiene del histograma de plaquetas una vez analizados los datos con el algoritmo de plaquetas.Revisar manual de operación de equipo analizador hematológico.

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4.1.3.1 HISTOGRAMA PLAQUETARIO

El histograma de la difusión de los datos PLT se representa con la distribución por tamaño PLT en el eje X y el número relativo de células en el eje Y.Revisar manual de operación de equipo

5 ESPECIFICACIONES DE DESEMPEÑO 5.1 LINEALIDAD

Describir esta sección.

5.2 PRECISIÓN

5.3 EXACTITUD

Definir Expresandola como incertidumbre de la medición

5.4 LÍMITE DE DETECCIÓN Describir esta sección.

5.5 INTERVALO DE MEDICIÓN

5.6 VERACIDAD DE LA MEDICIÓN

5.7 SENSIBILIDAD ANALÍTICA

5.8 ESPECIFICIDAD ANALÍTICA

5.9 LIMITES DE ACEPTABILIDAD

Los límites de aceptabilidad corresponden a ± 2 DE, en función de la medida de la media establecida en el inserto, o bien, calculada a partir de 20 datos obtenidos, estableciendo como límite de imprecisión un coeficiente variación máximo de 4%.

La media de cada analito puede variar de lote a lote, sin embargo, los límites aceptables son de ± 2 DE con un coeficiente de variación máximo de 4%. Estos límites se pueden observar en gráficas de Levey- Jennings elaboradas por el personal del área de pre-donación. Cuando uno o más niveles del control exceden ± 2 DE, deben aplicarse las multireglas de Westgard.

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6 SISTEMA DE MUESTRA PRIMARIA 6.1 PREPARACIÓN DEL DONANTE

· No requiere de instrucciones especiales. · Ayuno mínimo de 4 horas.

· Obtención de la muestra de acuerdo Procedimiento para la toma de muestras.

6.2 CARACTERÍSTICAS Y TIPO DE MUESTRA 6.2.1 TIPO DE MUESTRAS

Sangre completa.

6.2.2 CARACTERÍSTICAS DE LAS MUESTRAS

- muestra no hemolizadas

- muestra etiquetada correctamente (nombre completo del paciente, fecha de la toma, numero de ID).

- muestra suficiente (volumen de acuerdo a la Sección 5.2.3 de este documento) - muestra no contaminada de cualquier objeto extraño a la misma.

6.3 VOLUMEN REQUERIDO

TIPO DE MUESTRA VOLUMEN OPTIMO VOLUMEN MÍNIMO Sangre Completa 3.0 ml. 1.0 ml.

7 TIPO DE CONTENEDOR Y ADITIVOS 7.1 CONTENEDOR

Tubo de vidrio estéril al vacío con aditivo líquido, en spray o liofilizado, con capacidad de 2.7, 5 ó 7 mL con tapón de seguridad de color lila.

La cantidad de muestra ideal u óptima es la especificada para cada tubo, independientemente de la marca comercial; el volumen de drenado de cada tubo debe ser respetado ya que la cantidad de aditivo es proporcional al volumen de sangre extraido. Si la cantidad de sangre extraida es menor, el exceso de aditivo afecta en forma adversa, la exactitud de los resultados de la prueba y si la cantidad de sangre extraída es mayor, la cantidad de aditivo puede ser insuficiente para su propósito y puede afectar adversamente los resultados de la prueba.

7.2 ADITIVOS

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8 MATERIALES, EQUIPOS Y REACTIVOS 8.1 MATERIALES Y EQUIPOS

· Hemocitómetro

· Equipo de cómputo e impresión · Mezclador para tubos por inversión, · Guantes desechables,

· Gradillas de metal o plástico para tubos de 13x100 mm. · Gasa no estéril de 10x10 cm.

· Pipeta automática volumen variable · Pipe-tips o pun

8.2 REACTIVOS

Ver Manual de Operación/Guía Rápida de Usuario del Hemocímetro para los reactivos utilizados.

8.2.1 REACTIVOS CONTROL

· Control hematológico BAJO (L), · Control hematológico NORMAL (N), · Control hematológico ALTO (H).

8.2.2 ALMACENAMIENTO Y ESTABILIDAD

· El equipo de reactivos es estable hasta la fecha de caducidad que especifique la etiqueta y debe conservarse a temperatura ambiente entre +15 a +25 °C.

· Cuando se abren o preparan reactivos, es necesario anotar en el empaque o en una etiqueta que se adhiera al empaque: Las iniciales de la persona que lo preparó, la fecha de colocación del reactivo en el instrumento de medición.

8.2.2.1 ALMACENAMIENTO DE CONTROLES

Cuando se almacenan a temperatura de +2 a +8°C, sin abrir los frascos, los controles son estables hasta la fecha de caducidad impresa en su etiqueta. Una vez que el frasco es abierto, posee una estabilidad de 8 días. Dichos controles son almacenados en el refrigerador que tiene la leyenda: “REFRIGERADOR DE REACTIVOS PRE-DONACIÓN”.

9 PROCEDIMIENTOS DE CALIBRACIÓN

Dependiendo del Hemocitómetro que se esté empleando, la calibración puede ser realizada por el personal operativo del área de Predonación o por la empresa responsable del mantenimiento del instrumento de medición.

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10 PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE LA CALIDAD 10.1 PREPARACION DEL CONTROL

Los controles hematológicos son materiales de referencia a base de una suspensión celular

estabilizada que contienen eritrocitos humanos, leucocitos de mamífero y artificiales y un componente plaquetario en un conservador, los cuales no requieren de preparación y vienen ya listos para su uso.

10.2 FRECUENCIA DEL USO DE CONTROLES

Se deben analizar por lo menos 2 de los niveles de control todos los días, así como con cada nueva calibración, después de realizar el procedimiento específico de mantenimiento o localización de fallas.

10.3 PROCEDIMIENTO}

Responsable No.

Actividad Descripción de Actividades Registro

Personal químico que determina Citometría hemática 1

Los controles se procesan al inicio del día, verificando que los resultados obtenidos se encuentren dentro de las cartas control del fabricante.

NA

2

En caso de invalidar la corrida, ésta debe repetirse completa (controles y muestras de donadores).

2.1 Si nuevamente se invalida la corrida, se debe verificar el procedimiento pre, trans y postanalítico en forma estricta factores tales como: reactivo caducado, mala calibración y/o almacenamiento inadecuado del reactivo.

2.2 Si el error persiste, debe buscarse alguna falla sencilla en el equipo, sin embargo, si esto continúa, se da aviso al servicio técnico especializado del proveedor del instrumento. Registro de Controles Diarios de Hemoglobina y Hematocrito 3

Los resultados de Hemoglobina y Hematocrito de cada control son anotados en el Registro de Controles de Hb y Hto, son recolectados para control estadístico, obteniendo la media del control y las desviaciones estándar a través de un gráfico de Levey-Jennings, la cual puede ser impresa para los fines que convengan.

Registro de Controles Diarios de Hemoglobina y Hematocrito 4

Los registros y documentación relacionada a este método son controlados y conservados de acuerdo al Procedimiento para la Elaboración y Control de Documentos y Registros.

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11 PASOS DEL MÉTODO

Personal químico que

determina Citometría hemática

5 Iniciar el procedimiento de acuerdo a las indicaciones del manual de operación del equipo analizador. NA 6 Mezclar la muestra de sangre de 2-3 minutos para homogeneizarla

y dar inicio a la corrida. NA 7

Al término del proceso los resultados obtenidos e impresos por el sistema en una hoja tamaño media carta, introducirlos al sistema de cómputo de forma automática por la interfase o manual.

Sistema de Banco de Sangre

8

Los resultados que no sean validados correrlos por duplicado en la siguiente corrida y valorarlos nuevamente.

8.1 Una vez validados, se introducen los datos en el sistema de cómputo.

Sistema de Banco de Sangre

11.1 TECNICA DEL MICROHEMATOCRITO

Personal químico que

determina Citometría hemática

9 Mezclar la sangre por inversión, no agitarla. NA 10 Llenar las dos terceras partes de un tubo capilar por el lado no

marcado. NA

11

Sellar el extremo opuesto (marcado con una banda de color) con una flama de mechero, encendedor o cerillos.

Nota: Esto se hace girando el tubo capilar para lograr que el

sellado sea uniforme y el fondo quede redondeado y no en punta. NA 12 Centrifugar en la microcentrifuga según condiciones del equipo. NA 13

Se lee, usando una regla o el lector para microhematocrito, las alturas del volumen de eritrocitos y del volumen total de la muestra.

NA

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Predonación o en la Libreta Donantes Voluntarios de Sangre no Remunerados, según corresponda.

Predonación Libreta Donantes Voluntarios de Sangre no Remunerados 15

Los registros y documentación relacionada a este método son controlados y conservados de acuerdo al Procedimiento para la Elaboración y Control de Documentos y Registros.

NA

12 INTERPRETACIÓN DEL EXAMEN

Los resultados reportados por el equipo son interpretados de acuerdo al intervalo de referencia correspondiente.

13 INTERFERENCIAS Y REACCIONES CRUZADAS

Si se cumplen las características de la muestra descritas en la Sección 6.2.2, no deben existir interferencias para la determinación de citometría hemática.

14 CÁLCULO DE RESULTADOS

Al terminar el proceso, el equipo reporta los resultados de las muestras y controles en valores numéricos, por lo que no se requiere realizar cálculos ni conversiones.

14.1 PARA LA TÉCNICA DEL MICROHEMATOCRITO:

Calcular el microhematocrito de la siguiente manera

14.2 UNIDADES Y REDONDEO DE NÚMEROS

Las unidades varían de acuerdo al analito estudiado:

Parámetro Unidades Símbolo de Unidades Hemoglobina Millones por microlitro 106_{/ µL}

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Glóbulos rojos Porcentaje o porcentual % VCM Femtolitros fL HCM Picogramos pg CMHC Gramos por decilitro g / dL Indice de Distribución de GR Porcentaje o porcentual %

Glóbulos blancos Miles por microlitro 103_{/ µL}

Linfocitos Porcentaje o porcentual % Monocitos Porcentaje o porcentual % Eosinófilos Porcentaje o porcentual % Basófilos Porcentaje o porcentual % Neutrófilos Porcentaje o porcentual %

Plaquetas Miles por microlitro 103_{/ µL}

Volumen Plaquetario Medio Femtolitros fL

15 INTERVALOS BIOLÓGICOS DE REFERENCIA

Los intervalos de referencia de los parámetros de la citometría hemática aplicados al Banco de Sangre están establecidos en la NOM- 253- SSA1- 2012. Para la disposición de sangre humana y componentes con fines terapéuticos.

HEMOGLOBINA Y HEMATOCRITO MINIMOS PARA FLEBOTOMIA EN DISPONENTES ALOGENICOS ALTITUD SNM SEXO MASCULINO SEXO FEMENINO

Hemoglobina Hematocrito Hemoglobina Hematocrito

0- 1500 m 13.5 g/dL 41.0 % 12.5 g/dL 38.0 % Mayor de 1500 m 14.5 g/dL 44.0 % 14.0 g/dL 42.0 %

16 INTERVALOS REPORTABLES

El reporte de la linealidad del instrumento así como los valores reportables se consultan en el Manual Operaciones del equipo analizador.

17 VALORES DE ALERTA/CRÍTICOS

Por tratarse de donadores clínicamente sanos, los resultados con valores fuera de lo establecido por la NOM-253-SSA1-2012, para la disposición de sangre humana y componentes con fines terapéuticos, se tomarán como valores de alerta.

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18 FUENTES POTENCIALES DE VARIABILIDAD

El equipo utilizado para la determinación de citometría hemática es fotosensible, por lo cual se debe utilizar con las cubiertas protectoras colocadas en su lugar.

19 INFORME DE RESULTADOS

Los resultados del ensayo son impresos por medio del software del equipo en una impresora. El equipo tiene conectada una interfase con el servidor del sistema de cómputo y de esa forma transfiere los resultados al sistema de cómputo.

El personal del área de predonación transfiere manualmente los resultados al sistema de computo en el caso de ser necesario.

El personal del área de predonación transfiere manualmente los resultados en el Libro de ingresos y egresos.

Los resultados impresos obtenidos del equipo, se archivan por mes en la historia clínica de cada donador en un recopilador que tiene a resguardo el área de selección de donador (Ver Procedimiento para la Elaboración y Control de Documentos y Registros).

19.1 INFORME DE RESULTADOS DE VALORES DE ALERTA/CRÍTICOS

Los resultados no reportarlos vía telefónica. Mantener la confidencialidad de los resultados.

Reportar solamente vía correo electrónico solamente a centros de procesamiento el mismo día de la corrida ya que ellos se encargan de liberar sus unidades; posteriormente hacerlos llegar por escrito.

20 DIAGRAMA DE FLUJO

No aplica.

21 REFERENCIAS Y/O BIBLIOGRAFÍA 21.1 REFERENCIAS

a) Procedimiento para la Toma de Muestras

b) Manual de Seguridad Personal y Manejo de Residuos Peligrosos Biológico Infecciosos c) Procedimiento para la Elaboración y Control de Documentos y Registros

d) Procedimiento para el Control de Calidad de Equipos e Instrumentos

21.2 BIBLIOGRAFÍA

a) Manual de operación del Equipo Analizador. b) Programa de aseguramiento de la calidad (PACAL) c) Manual AABB Press. Bethesda, Maryland 2001.

(19)

d) Manual de Control de Calidad CNTS.

e) NOM-253-SSA1-2012, Para la disposición de sangre humana y sus componentes con fines terapéuticos.

f) NOM-087-ECOL-SSA1-2002 Protección ambiental - Salud ambiental - Residuos peligrosos biológico-infecciosos - Clasificación y especificaciones de manejo.

g) NMX-CC-9001-IMNC-2008. Sistemas de Gestión de la Calidad – Requisitos.

h) NMX-EC-15189-IMNC-2008. Laboratorios Clínicos – Requisitos particulares para la Calidad y Competencia.

22 CONTROL DE CAMBIOS

No hay cambios.

23 ANEXOS 23.1 ANEXO 1

a) Bitácora de uso de equipos b) Registro de estudios predonación