Determinación de la actividad antifúngica de extractos de Lantana camara frente a Candida spp.

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A RT I C U L O O R I G I N A L

Determinación de la actividad antifúngica de

extractos de

Lantana camara

frente a

Candida

spp

.

Cpc"Mctkpc"Rctfq3.4_{."Ljqp"Lcktq"Ctgpcu}3.4_{."Oknvqp"I„og|}3_{."Hcdkcpc"Oct c"Nqtc}4_{."Lqtig"Gptkswg"I„og|}4

Determination of antifungal activity of extracts of Lantana camara

against Candida spp.

3"" Itwrq"fg"D¿uswgfc"fg"Rtkpekrkqu"Dkqcevkxqu."Rtqitcoc"fg" Sw okec."Wpkxgtukfcf"fgn"Swkpf q."Ctogpkc."Eqnqodkc 4"" Itwrq"fg"Guvwfkq"gp"Rctcukvqnqi c"{"Okeqnqi c"Oqngewnct."

Egpvtq"fg"Kpxguvkicekqpgu"Dkqoﬁfkecu."Wpkxgtukfcf"fgn" Swkpf q."Ctogpkc."Eqnqodkc Tgekdkfq<"4412:14232="Cegrvcfq<"2;13314233 Eqttgurqpfgpekc<"Lqtig"I„og|/Oct p."IGRCOQN."Egpvtq"fg" Kpxguvkicekqpgu"Dkqoﬁfkecu."Wpkxgtukfcf"fgn"Swkpf q."Cxgpkfc" Dqn xct"34P."Ctogpkc."Eqnqodkc0"Fktgeek„p"gngevt„pkec<"igrcoqn4B wpkswkpfkq0gfw0eq Resumen

Objetivo. El objetivo del trabajo fue determinar si los extractos de la planta Lantana camara presentan actividad antifúngica frente a seis especies de Candida spp y un aislamiento humano de origen primario.

Materiales."Ug"qdvwxkgtqp"nqu"gzvtcevqu"gvcp„nkequ"vqvcngu"rqt"gn"oﬁvqfq"fg"rgteqncek„p"{"ug"jk|q"htceekqpcokgpvq"etqocvqit Þeq"eqp"gnw{gpvgu"fg"

fkhgtgpvg"rqnctkfcf0"Ug"ectcevgtk|ctqp"nqu"itwrqu"hwpekqpcngu"ogfkcpvg"gurgevtqueqr c"kphtcttqlc0"Nc"cevkxkfcf"cpvkh¿pikec"ug"gxcnw„"htgpvg"c"ugku"gurgekgu" de Cándida spp. (C. albicans, C. dubliniensis, C. krusei, C. guillermondii, C. tropicalis, C. parapsilosis y un aislamiento primario de C. albicans+0"Nc"rtwgdc"fg" inhibición del crecimiento se hizo con un ensayo en suero humano, observando con absorbancia a 600 nm las curvas de crecimiento relacionadas.

Resultados. El análisis por espectroscopíc"kphtcttqlc"fgoquvt„"nc"rtgugpekc"fg"àcxqpqkfgu"gp"nqu"vcnnqu"{"gp"ncu"jqlcu"fg"L. camara0"Ug"gpeqpvt„"wpc"

fracción de tallo que inhibió el crecimiento de C. dublinensis y C. albicans, tanto para la cepa de referencia como para el aislamiento primario, y otra que inhibió C. guillermondii. Una fracción de hojas inhibió C. krusei.

Conclusiones. Ug"gpeqpvtctqp"htceekqpgu"eqp"rtgugpekc"fg"àcxqpqkfgu"{"eqp"ghgevq"cpvkh¿pikeq"gp"gn"vcnnq"{"gp"ncu"jqlcu"fg"L. camara. Palabras clave: Candida albicans, extractos vegetales, anitifúngico, Lantana camara.

Abstract

Introduction: The aim of this study was to determine if Lantana camara extracts show antifungal activity against six Candida spp. species and one human isolate from primary origin.

Methods: We extracted the total ethanol extracts by the percolation method and a chromatographic fractionation was carried out using solvents of different polarities. Functional groups were characterized by infrared spectroscopy. The antifungal activity was evaluated against six species of

Candida spp. (C. albicans, C. dublinienses, C. krusei, C. guilliermondii, C. tropicalis, C. parapsilosis and a primary isolate of C. albicans+0"Vjg"itqyvj"

inhibition test was performed in human serum and by observing growth curves at an absorbance of 600 nm.

Results:"Kphtctgf"urgevtqueqr{"eqpÞtogf"vjg"rtgugpeg"qh"àcxqpqkfu"kp"vjg"ngcxgu"cpf"vjg"uvgo"qh"L. camara. A fraction from the stem inhibited C. dublinensis growth and another inhibited C. albicans and C. guillermondii growth. One fraction from the leaf inhibited C. krusei.

Conclusions: Chromatographic fractions obtained from the stem and leaves of L. camara"eqpvckpgf"àcxqpqkfu"ykvj"cpvkhwpicn"ghhgev0 Key words: Candida albicans, plant extracts, anitifungal, Lantana camara

Introducción

Candida albicans es el hongo aislado con mayor

frecuencia de las muestras clínicas en Colombia

*3.4+_{. A pesar de que la sensibilidad a los}

antifún-ikequ"Ïrtkpekrcnogpvg."cn"àweqpc|qnÏ"gu"cnvc"rctc"

C. albicans, las especies que no son C. albicans

guv p" cwogpvcpfq" ukipkÞecvkxcogpvg" {" owejcu" de ellas presentan baja sensibilidad a los antifún-gicos utilizados tradicionalmente, especialmente las especies C. krusei y C. glabrata *5+. En un es-tudio llevado a cabo en el Instituto Nacional de

Cancerología entre 2002 y 2004, se demostró que :4"'"fg"nqu"ckuncokgpvqu"gtcp"ugpukdngu"cn"àweq-nazol, 4 % eran sensibles según la dosis y 14 % eran resistentes *6+0"Fg"guvc"ocpgtc."gu"rtkqtkvctkc" la búsqueda de nuevos antifúngicos.

Wpc"guvtcvgikc"rctc"kfgpvkÞect"pwgxqu"eqorwgu-tos con propiedades antifúngicas es el análisis de los compuestos derivados de los productos metabólicos de las plantas *7+. Los compuestos esenciales para la supervivencia de los organis-mos vegetales, son los metabólicos primarios:

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pero, además de la ruta del metabolismo prima-rio, las plantas pueden seguir otras rutas meta-bólicas que llevan a la formación de compuestos usualmente característicos *7+. Estas rutas consti-tuyen el metabolismo secundario y sus produc-tos se denominan metaboliproduc-tos secundarios. La biosíntesis de los metabolitos secundarios uwgng"guvct"tguvtkpikfc"c"guvcfqu"gurge Þequ"fgn" desarrollo, respectivamente del organismo y de células especializadas, y a periodos de estrés ecwucfqu"rqt"nc"fgÞekgpekc"fg"pwvtkgpvgu"q"rqt"gn" ataque de microorganismos *7+. Muchos metabo-litos secundarios están implicados en relaciones ecológicas, es decir, en la relación de la planta productora con otros organismos de su ámbito natural. Ejemplo de ellos son los pigmentos de ncu"àqtgu"swg"cvtcgp"c"nqu"kpugevqu"rqnkpk|cfqtgu" y los compuestos que inhiben el crecimiento de qvtqu"qticpkuoqu"*uwuvcpekcu"cngnqr vkecu+"q"swg" rtqvgigp"c"nc"rncpvc"fg"kphgeekqpgu"*Þvqcngzkpcu+" q"fg"fgrtgfcfqtgu"*fkuwcuqtkqu"pwvtkvkxqu+0" El metabolismo primario proporciona un núme-ro de pequeñas moléculas, entre las que cabe destacar el ácido shikímico, el acetato y los ami-noácidos, los cuales constituyen los materiales de partida para las rutas más importantes del metabolismo secundario *7+.

Para el hombre, el metabolismo secundario ve-getal es una fuente importante de principios activos de medicamentos y de otros valiosos productos químicos. Este trabajo tuvo como propósito analizar metabolitos segundarios de la planta Lantana camara (nombre vulgar: ven- vwtquc."dcpfgtc"fg"Gurc‚c+."wpc"rncpvc"ow{"eq-mún, de fácil acceso, perteneciente a la familia Xgtdgpcegcg" {" gp" nc" ewcn" ug" jcp" kfgpvkÞecfq" sesquiterpenoides *8+, los cuales han demostrado actividad antifúngica *9+, por lo cual nos intere-samos en determinar este tipo de actividad an-timicrobiana en los metabolitos de esta planta.

Materiales y métodos

Recolección y selección del material vegetal

La recolección de la planta L. camara *Þiwtc"3+" se hizo en los alrededores del laboratorio de poscosecha de la Universidad del Quindío, don-fg" ug" gpewgpvtc" gp" itcp" cdwpfcpekc0" Ug" fgek-dió recolectarla después de las 6 p.m., pues a esta hora no se ven afectados los metabolitos secundarios. Posteriormente, se seleccionaron el tallo y las hojas, a los cuales se les practicaron nqu"cp nkuku"Þvqsw okequ0

Secado, molienda y tamización del material vegetal

Una vez seleccionado el material, se envolvió en papel periódico y se puso a secar en el horno a una temperatura de 40 0_{C durante una semana,}

haciéndole seguimiento todos los días y cam-biando el papel para evitar la posible formación de hongos. Posteriormente, se molió el material vegetal y se tamizó hasta obtener partículas de un tamaño homogéneo.

Figura 1. Lantana camara (nombres comunes: cinco negritos, ewcuswkvg." àqt" fg" owgtvq." lctcn." oqtc" fg" ecdcnnq." uqvgttﬁ." wxkvc." dcpfgtc"gurc‚qnc."dcpfgtkvc"gurc‚qnc."eqpÞvg."htwvknnq+0"

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Obtención de los extractos totales y fracciones cromatográficas

Ug" rguctqp" 572" i" fgn" ocvgtkcn" fg" vcnnqu" {" :72" i" fgn" ocvgtkcn" fg" jqlcu0" Ug" qdvwxkgtqp" nqu" gz-tractos etanólicos de cada una de las partes de la planta por medio del método de percolación, utilizando percoladores de un litro para los tallos y de dos litros para las hojas, y usando como uqnxgpvg"gvcpqn"cn";8"'0"Guvg"rcuq"hwg"tgevkÞecfq" previamente, por medio de un equipo de des-tilación fraccionada acoplado a un recirculador de agua. La percolación se llevó a cabo hasta el agotamiento total del material, lo cual duró un mes para los tallos y dos meses para las hojas. El extracto obtenido se iba concentrando me-diante un rotaevaporador, recuperando el etanol para recircularlo a la extracción. El extracto con-centrado se secó en cápsula de porcelana por medio de baño de María. Una vez obtenido el extracto seco, se hizo partición con diclorometa-no y agua destilada, para separar los carbohidra-vqu"rtgugpvgu0"Nc"hcug"qti pkec"*fkenqtqogvcpq+" se evaporó hasta eliminar el solvente; el residuo obtenido se pesó para, posteriormente, montar la cromatografía en columna.

Para la obtención de las fracciones cromatográ-Þecu."ug"rtgrct„"wpc"columna con 50 g de sílica ign" 82" *2.28" c" 2.4" oo+" {" nwgiq" ug" rguctqp" 7i" de extracto, tanto de hojas como de tallos, y 5 i" fg" u nkec" ign" 82" *2.285/2.422" oo+" rctc" ecrc" delgada, lo cual fue adicionado a la columna. Posteriormente, se inició su elución con diclo-rometano.

Las fracciones se recolectaron en viales y se hizo seguimiento de las mismas por medio de cro-matografía en capa delgada, visualizando de guvc"ocpgtc"uk"rtgugpvcdcp"wp"rgtÞn"ukoknct"rctc" reunirlas y observar si el eluyente aún estaba ugrctcpfq" nqu" eqorwguvqu0" Fg" nq" eqpvtctkq." ug" ecodkcdc"fg"rqnctkfcf0"Ug"wvknk|ctqp"fkhgtgpvgu" eluyentes con grados variables de polaridad, para tallos y hojas.

Los grupos funcionales de algunas de las frac-ciones etqocvqit Þecu"se caracterizaron me-diante espectroscopía infrarroja.

Obtención del extracto etanólico para las marchas fitoquímicas

Los extractos etanólicos se obtuvieron según la ogvqfqnqi c"gzrwguvc"rqt"Ucpcdtkc"*7+

0"Ug"cpcnk-zaron los alcaloides a partir del extracto etanóli-co, análisis de esteroides y tripertenoides libres, de naftoquinonas y antraquinonas, de saponinas y de taninos. Para cada una de las reacciones, tanto de las hojas como de los tallos, los resulta-dos se valoraron de manera semicuantitativa en cruces, de acuerdo con la apreciación subjetiva del evaluador de la intensidad del color y relativa a un control sin extractos, así:

̋" -<"rtgugpekc"guecuc"fgn"ogvcdqnkvq"ugewpfctkq= ̋" --<"rtgugpekc"oqfgtcfc"fgn"ogvcdqnkvq"ug-cundario; ̋" ---<" rtgugpekc" cdwpfcpvg" fgn" ogvcdqnkvq" secundario, y ̋" /<"cwugpekc"fgn"ogvcdqnkvq"ugewpfctkq0 Aislamientos de Candida spp.

Para la evaluación de la actividad antifúngica, se utilizaron aislamientos de referencia de

Candi-da spp.de seis especies diferentes: C. albicans

IP121580 – ATCC28516, C. tropicalis M 0500391,

C. parapsilosis M 0500396, C. krusei ATCC6258, C. dubliniensis M 0500378, C. guillermondi 3483

y un aislamiento de C. albicans obtenido de una paciente con vaginitis. Los aislamientos se cul-vkxctqp"gp"cict"Ucdqwtcwf"eqp"uwrngogpvq"fg" cloramfenicol a 37 0_{C durante 48 horas.}

Poste-riormente, se tomó una colonia de cada especie de Candida con un asa de aluminio estéril y se adicionaron a tubos tipo Eppendorf, que conte-p cconte-p"3"on"fg"RDU"3Z"guvﬁtkn"rJ"9.60"Fgurwﬁu."ug" comparó cada tubo con la escala de McFarland, desde el tubo 1 con 0 colonias, hasta el tubo número cinco, que contenía 1.500 millones de células por mililitro.

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Evaluación de la actividad antifúngica

Inicialmente, se hizo una tamización para obser-xct" uk" ncu" htceekqpgu" etqocvqit Þecu" rtgugpvc-ban un efecto inhibitorio frente a las especies de

Candida spp. Ug"ugngeekqpctqp"fqeg"htceekqpgu"

etqocvqit Þecu" fg" fkhgtgpvgu" rqnctkfcfgu." fg" hojas y de tallos.

La tamización inicial se llevó a cabo en placas de 96 pocillos, usando tres concentraciones di-ferentes de las fracciones diluidas en dimetilsul-h„zkfq"*FUOQ+"gp"eqpegpvtcekqpgu"fg"322."472"{" 722"©i1on0"C"ecfc"rqeknnq"ug"ng"cfkekqpctqp"322" ©n"fg"ogfkq"Ucdqwtcwf"eqp"uwrngogpvq"fg"enq-tcohgpkeqn"rtgxkcogpvg"guvﬁtkn."72"©n"fg"htceek„p" {"72"©n"fg"ecfc"wpc"fg"ncu"gurgekgu"fg"Candida. Luego, se incubó a 37 0_{C y se observó a las 24}

horas. El control negativo fue el medio solo con FUOQ0"

La lectura se hizo de manera visual, se consideró crecimiento donde había turbidez del medio y sin crecimiento si el medio permanecía claro. Las fracciones en las que no se observó crecimiento de las levaduras se seleccionaron para un nuevo ensayo, utilizando suero humano como medio de crecimiento de las especies de Candida spp. C"ecfc"vwdq"fg"gpuc{q"ug"ng"cfkekqpctqp"422"©n" fg"uwgtq"jwocpq"{"322"©n"fg"Candida spp. que contenían 1 x 106_{levaduras, y se llevó a cabo la}

kpewdcek„p" fwtcpvg" wpc" jqtc0" Fgurwﬁu" ug" cfk-ekqpctqp"322"©n"fg"ecfc"htceek„p"etqocvqit Þ-ec"fknwkfc"gp"FUOQ"{"ug"ng{„"nc"cduqtdcpekc"gp" un espectrofotómetro a 600 nm de cada uno de los tubos, luego de 24 horas de incubación. Este procedimiento se hizo por triplicado. A mayor crecimiento de la levadura, se observaba au-mento de la absorbancia.

Ug" vqoctqp" fqu" eqpvtqngu." gn" eqpvtqn" pgicvkxq" para crecimiento que contenía suero humano,

Candida urr0"{"àweqpc|qn"*Ncdqtcvqtkq"Nc"Ucpvﬁ."

Dqiqv ." nqvg" 2;2;+" gp" kiwcn" eqpegpvtcek„p" swg" ncu"htceekqpgu"gpuc{cfcu"*722."472"{"322"©i1on+0" El control positivo de crecimiento sólo

conte-nía suero y las diferentes especies de Candida. Con las lecturas de las absorbancias se efectuó gn"cp nkuku"fg"xctkcp|c"*CPQXC+"eqp"oqfgnqu"nk-neales generalizados, por medio del programa

Statgraphics Centurion"ZXÆ0

Resultados

Análisis fitoquímico preliminar

Gn"cp nkuku"Þvqsw okeq"rtgnkokpct"fg"nqu"gzvtcevqu" etanólicos de las hojas y de los tallos de la espe-cie L. camara, demostró la existencia de una gran xctkgfcf"fg"ogvcdqnkvqu"ugewpfctkqu"*vcdnc"3+."nq" swg"lwuvkÞe„"gn"htceekqpcokgpvq"etqocvqit Þeq0

Tabla 1. Fgvgtokpcek„p"ugokewcpvkvcvkxc"fg"ogvcdqnkvqu"ugewpfctkqu"

en los extractos de hojas y tallos de acuerdo con la intensidad colorimétrica evaluada por un observador.

Reacción o proceso utilizado Extracto de hojas Extracto de tallos Ekcpkfkpc"*rtwgdc"fg"Ujkpqfc+" kfgpvkÞec<"臥/dgp|qrqtkpc" *àcxqpcu."àcxqpqngu."àcxqpqpcu." àcxqpqpqngu."kuqàcxqpqkfgu"{" zcpvqpcu+ --- -éekfq"enqtj ftkeq"*JEn+"kfgpvkÞec" antocianidinas --- ---Dqtpvt igt/Mtcwuu"kfgpvkÞec" antraquinonas y naftoquinonas --- ---Rtwgdc"fg"gurwoc"kfgpvkÞec" saponinas -- ---Prueba de taninos --- ---Reactivo de Lieberman-Dwtejctf"kfgpvkÞec"guvgtqkfgu"{" triterpenoides --- -Reactivo de vainillina-ácido-hquh„tkeq"kfgpvkÞec"ncevqpcu" terpénicas --- -*/+<"cwugpekc."*-+"guecuc."*--+"oqfgtcfq."*---+"cdwpfcpvg

Fraccionamiento del extracto etanólico de los tallos

Los tallos de la planta se fraccionaron usando inicialmente el diclorometano como eluyente. En los siete viales recolectados de las primeras fracciones procedentes de la columna, se nota-ron diferencias en las tonalidades luego de co-rrerlas sobre una placa de sílice. Posteriormente, se realizó cromatografía en capa delgada

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usan-45;

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do como fase móvil diclorometano y, luego, se asperjó con vainillina-etanol de en ácido orto- hquh„tkeq0"Ug"qdugtx„"nc"rtgugpekc"fg"uguswkvgt-rgpncevqpcu"*ocpejcu"fg"eqnqt"xkqngvc+0

Fraccionamiento del extracto etanólico de las hojas

El procedimiento para fraccionar el extracto en-tero de las hojas fue similar al de los tallos. En los gzvtcevqu"fg"jqlcu."nc"rtwgdc"fg"Ujkpqfc"hwg"pg-gativa y la prueba de tricloruro férrico fue positiva.

Análisis por espectroscopía infrarroja

Ug" ugngeekqpctqp" ncu" htceekqpgu" fg" vcnnqu" {" jqlcu" con resultados positivos para las pruebas químicas fg"àcxqpqkfgu"{"ug"rtcevke„"gurgevtqueqr c"kphtc-rroja en la cual se observó un pico a 3.118,35 cm-1

*itwrq"hwpekqpcn"QJ+"{"qvtq"c"30852.88"eo-1 _(grupo

hwpekqpcn"fg"xkdtcek„p"fg"cncticokgpvq"E?E+0"Guvqu" fqu"rkequ"uqp"ectcevgt uvkequ"fg"nqu"àcxqpqkfgu"{" eqpÞtoctqp"nqu"jcnnc|iqu"fg"ncu"rtwgdcu"sw okecu0

Tabla 2. Fracciones usadas en la tamización inicial de la actividad antifúngica N° de fracción Parte de la planta N° de eluidos Eluyente

1 Tallos *3"c"34+ Acetato de etilo ogvcpqn"*3<3+ 2 Tallos *3"c"53+ Acetato de etilo 3 Hojas *8+ Metanol 4 Hojas *3"c"44+ Fkenqtqogvcpq 5 Hojas *3D"c"5D+ Acetato de etilo

ogvcpqn"*3<3+ 6 Hojas Fracción 2 H1A Cloroformo acetona

*;<3+

7 Tallos *43"c"48+ Fkenqtqogvcpq" cegvcvq"fg"gvknq"*6<3+ 8 Tallos *"38"c"42+ Acetato de etilo

ogvcpqn"*;<3+ 9 Tallos *"4"c"5+ Fkenqtqogvcpq 10 Hojas *3"c"4;+ Acetato de etilo 11 Hojas *45"c"74+ Fkenqtqogvcpq 12 Tallos *62"c"68+ Fkenqtqogvcpq

Evaluación de la actividad anti-Candida

Ug"gxcnw„"nc"cevkxkfcf"cpvkh¿pikec"fg"nqu"gzvtce-tos obtenidos en el fraccionamiento cromato-it Þeq"*vcdnc"4+0"Fg"ncu"34"htceekqpgu"ugngeekq-nadas, nueve presentaron alguna actividad

anti-Candida en la tamización inicial y luego se

lleva-ron al ensayo por absorbancia de acuerdo con la especie a la que mostraron alguna actividad. Para C. albicans, en el ensayo por absorbancia en suero humano, la fracción 1 de tallos no presen-tó ninguna actividad en la concentración de 500 ©i1on"rctc"nc"egrc"fg"tghgtgpekc"fg"C. albicans *Þiwtc"4+."pk"vcorqeq"rctc"nc"gurgekg"C.

guiller-mondii *Þiwtc"5+."rgtq"kpjkdk„"gn"etgekokgpvq"fg" C. dublinienses"*Þiwtc"6+"gp"nc"eqpegpvtcek„p"fg"

472"©i1on0"Nc"htceek„p"4"fg"nqu"vcnnqu"rtgugpv„" buena actividad frente a la cepa de referencia de

C. albicans

*Þiwtc"3+."rgtq"ogpqt"htgpvg"cn"ckunc-okgpvq"jwocpq"fg"qtkigp"rtkoctkq"*Þiwtc"7+."{" gran inhibición para C. guillermondii"*Þiwtc"5+0" La fracción 3 tuvo efecto sobre la cepa de refe-rencia de C. albicans"*Þiwtc"4+"{"C. guillermondii *Þiwtc"5+."rgtq"pq"uqdtg"gn"ckuncokgpvq"rtkoctkq" de C. albicans"*Þiwtc"7+0"Rctc"nc"gurgekg"C.

pa-rapsilosis *Þiwtc"8+."pkpiwpc"htceek„p"vwxq"ghgevq"

ukipkÞecvkxq" g." kpenwuq." nc" htceek„p" 4" nngx„" c" wp"

Figura 2." Cevkxkfcf" cpvkh¿pikec" fg" ncu" htceekqpgu" etqocvqit Þecu"

1, 2 y 3 frente a Candida albicans *KR3437:2/CVEE4:738+." eqp" wpc" eqpegpvtcek„p" fg" 722" ©i1o" nwgiq" fg" 46" jqtcu" fg" ewnvkxq0" Nc" absorbancia aumenta de manera proporcional al crecimiento de nc" ngxcfwtc0" Eqoq" eqpvtqn" rqukvkxq" fg" etgekokgpvq" *E-+." ug" wvknk|„" la levadura sin ningún tratamiento y, como control negativo de etgekokgpvq"{"fg"cevkxkfcf"cpvkh¿pikec"*E/+."gn"àweqpc|qn"gp"nc"okuoc" eqpegpvtcek„p"fg"ncu"htceekqpgu0"Vguv"fg"CPQXC"rctc"ncu"fkhgtgpekcu" en absorbancia entre los grupos, p=0,000.

(6)

462 CUQEKCEKïP"EQNQODKCPC"FG"KPHGEVQNQIëC Kphgevkq0"4233="37*6+<"457/464 Figura 3." Cevkxkfcf" cpvkh¿pikec" fg" ncu" htceekqpgu" etqocvqit Þecu"

frente a Candida guillermondi *56:5+." eqp" wpc" eqpegpvtcek„p" fg" 722"©i1o"nwgiq"fg"46"jqtcu"fg"ewnvkxq0"Nc"cduqtdcpekc"cwogpvc"fg" manera proporcional al crecimiento de la levadura. Como control rqukvkxq" fg" etgekokgpvq" *E-+." ug" wvknk|„" nc" ngxcfwtc" ukp" pkpi¿p" tratamiento y, como control negativo de crecimiento y de actividad cpvkh¿pikec" *E/+." gn" àweqpc|qn" gp" nc" okuoc" eqpegpvtcek„p" fg" ncu" htceekqpgu0"Vguv"fg"CPQXC"rctc"ncu"fkhgtgpekcu"gp"cduqtdcpekc"gpvtg" los grupos, p=0,000.

Figura 4. Actividad antifúngica de la fracción 1 frente a Candida

dublinensis *O" 272259:+." eqp" wpc" eqpegpvtcek„p" fg" 472" ©i1on"

luego de 24 horas de cultivo. La absorbancia aumenta de manera proporcional al crecimiento de la levadura. Como control positivo fg" etgekokgpvq" *E-+." ug" wvknk|„" nc" ngxcfwtc" ukp" pkpi¿p" vtcvcokgpvq" y, como control negativo de crecimiento y de actividad antifúngica *E/+."gn"àweqpc|qn"gp"nc"okuoc"eqpegpvtcek„p"fg"ncu"htceekqpgu0"Vguv" fg" CPQXC" rctc" ncu" fkhgtgpekcu" gp" cduqtdcpekc" gpvtg" nqu" itwrqu." p=0,000.

aumento paradójico en el crecimiento. Para C.

tropicalis tampoco se encontró inhibición de las

fracciones ensayadas; por el contrario, la frac-ek„p":"cwogpv„"uw"etgekokgpvq"*Þiwtc"9+0"Rctc"C.

krusei sólo la fracción 6 de las hojas tuvo efecto

kpjkdkfqt"ukipkÞecvkxq"*Þiwtc":+0"

En síntesis, las fracciones más interesantes con actividad antifúngica fueron las fracciones del tallo: la fracción 1 que inhibió el crecimiento de

C. dublinensis, la fracción 2 que mostró

resulta-dos constantes de inhibición para C. albicans, tanto para la cepa de referencia como para el aislamiento primario, y para C. guillermondii, y la fracción 6 que inhibió C. krusei.

Discusión

Lantana camara es una especie poco estudiada

Þvqsw okecogpvg0"Gp"wpq"fg"nqu"guvwfkqu"ug"gp-contró que contenía dos nuevos triterpenoides: los ácidos camarílico y el camaracínico *8+_{. Esto es}

similar a nuestros resultados, ya que también se encontraron triterpenoides.

En otros estudios revisados, se reporta la activi-dad antipalúdica de los extractos acuosos cru-dos de tres especies de plantas L. camara, junto a otras plantas usadas en la medicina tradicional

xgpg|qncpc"rctc"vtcvct"nc"ocnctkc"q"nc"Þgdtg"*:+_{. En}

este estudio se utilizaron ratones suizos albinos inoculados con Plasmodium berghei, a los cuales les administraron oralmente los extractos. Los resultados mostraron que el extracto de

Lanta-na."gp"wpc"fquku"fg"722"oi1mi1f c."vgp

c"cevk-vidad antipalúdica, disminuyendo los niveles de parásitos, pero sin mejorar la supervivencia de los ratones *:+_{. En este mismo estudio}

venezola-no, se determinó la actividad antioxidante de los

Figura 5. Cevkxkfcf"cpvkh¿pikec"fg"nc"htceekqpgu"etqocvqit Þecu"4"{"

5"eqp"wpc"eqpegpvtcek„p"fg"722"©i1o"htgpvg"cn"ckuncokgpvq"rtkoctkq" de Candida albicans de una paciente con vaginitis, luego de 24 horas de cultivo. La absorbancia aumenta de manera proporcional al crecimiento de la levadura. Como control positivo de crecimiento *E-+." ug" wvknk|„" nc" ngxcfwtc" ukp" pkpi¿p" vtcvcokgpvq" {." eqoq" eqpvtqn" pgicvkxq"fg"etgekokgpvq"rqt"kpjkdkek„p"eqp"cpvkh¿pikeq"*E/+"ug"wvknk|„" gn"àweqpc|qn"gp"nc"okuoc"eqpegpvtcek„p"fg"nc"htceek„p0"Vguv"fg"CPQXC" para las diferencias en absorbancia entre los grupos, p=0,000.

(7)

463

Kphgevkq0"4233="37*6+<"457/464

metabolitos secundarios volátiles de tres plan-vcu"fg"nc"hcoknkc"Xgtdgpcegcg"*Lippia alba,

Aloy-siatriphylla y Lantana camara) y se obtuvieron

sus aceites por diferentes técnicas de extracción. El aceite esencial de L. camara fue de tipo ses-quiterpenoide; más de 60 % de la mezcla lo re-presentan hidrocarburos sesquiterpénicos y sus análogos oxigenados. Los aceites esenciales de ncu"vtgu"rncpvcu"fg"nc"hcoknkc"Xgtdgpcegcg"oqu-traron un efecto protector antioxidante in vitro, siendo el aceite de L. camara el más activo de todos, seguido del aceite de L. alba *:+_.

Los sesquiterpenoides han demostrado activi-dad antifúngica, la cual se ha relacionado con su grupo h-metileno- -lactona, la cual es aumen-tada por un grupo aceptor de Michaelle que lo hace más liposoluble y le permite pasar a través de la pared de la levadura *9+_.

El número de especies de plantas conocidas osci-la entre 250.000 y 500.000 *;.32+_{. Esta riqueza es un}

recurso que no se aprovecha totalmente, a pesar de que su uso en el tratamiento de diversas en-hgtogfcfgu"gu"cpeguvtcn0"Fkejc"equvwodtg"ug"jc" conservado hasta nuestros días, principalmente en poblaciones rurales, lo que ha permitido acu-mular un amplio conocimiento

etno-farmacoló-gico, punto importante de partida en las inves-tigaciones dirigidas a la búsqueda de productos naturales con actividad biológica *33/36+_{. En otros}

estudios también se reporta la actividad antifún-gica de metabolitos contra Candida spp., a partir de extractos de hojas y de aceites, y a partir de guvqu"ug"jcp"gncdqtcfq"Þvqh tocequ"*;.33+_.

Gp"guvg"vtcdclq"ug"qdvwxkgtqp"htceekqpgu"fg"àc-vonoides con actividad antifúngica contra C.

al-Figura 6. Cevkxkfcf"cpvkh¿pikec"fg"ncu"htceekqpgu"etqocvqit Þecu"4.":."

9 frente a Candida parasilopsis *O"27225;8+."eqp"wpc"eqpegpvtcek„p" fg" 472" ©i1o" {" nwgiq" fg" 46" jqtcu" fg" ewnvkxq0" Nc" cduqtdcpekc" aumenta de manera proporcional al crecimiento de la levadura. Eqoq" eqpvtqn" rqukvkxq" fg" etgekokgpvq" *E-+." ug" wvknk|„" nc" ngxcfwtc" sin ningún tratamiento y, como control negativo de crecimiento por kpjkdkek„p"eqp"cpvkh¿pikeq"*E/+."ug"wvknk|„"gn"àweqpc|qn"gp"nc"okuoc" eqpegpvtcek„p"fg"nc"htceek„p0"Vguv"fg"CPQXC"rctc"ncu"fkhgtgpekcu"gp" absorbancia entre los grupos, p= 0,019.

Figura 7. Evaluación de la actividad antifúngica frente a Candida

tropicalis *O"27225;3+"fg"nc"htceek„p":"eqp"wpc"eqpegpvtcek„p"fg"472"

©i1o."nwgiq"fg"46"jqtcu"fg"ewnvkxq0"Nc"cduqtdcpekc"cwogpvc"fg"ocpgtc" proporcional al crecimiento de la levadura. Como control positivo de etgekokgpvq"*E-+."ug"wvknk|„"nc"ngxcfwtc"ukp"pkpi¿p"vtcvcokgpvq"{."eqoq" eqpvtqn"pgicvkxq"fg"etgekokgpvq"rqt"kpjkdkek„p"eqp"cpvkh¿pikeq"*E/+."ug" wvknk|„"gn"àweqpc|qn"gp"nc"okuoc"eqpegpvtcek„p"fg"nc"htceek„p0"Vguv"fg" CPQXC"rctc"ncu"fkhgtgpekcu"gp"cduqtdcpekc"gpvtg"nqu"itwrqu."r?2.2450

Figura 8. Cevkxkfcf"cpvkh¿pikec"fg"ncu"htceekqpgu"etqocvqit Þecu"4"

y 3 frente a Candida krusei *CVEE847:+."eqp"wpc"eqpegpvtcek„p"fg" 722" ©i1o." nwgiq" fg" 46" jqtcu" fg" ewnvkxq0" Nc" cduqtdcpekc" cwogpvc" de manera proporcional al crecimiento de la levadura. Como eqpvtqn" rqukvkxq" fg" etgekokgpvq" *E-+." ug" wvknk|„" nc" ngxcfwtc" ukp" ningún tratamiento y, como control negativo de crecimiento por kpjkdkek„p"eqp"cpvkh¿pikeq"*E/+."ug"wvknk|„"gn"àweqpc|qn"gp"nc"okuoc" eqpegpvtcek„p"fg"nc"htceek„p0"Vguv"fg"CPQXC"rctc"ncu"fkhgtgpekcu"gp" absorbancia entre los grupos, p=0,000.

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bicans, C. dublinensis y C. guillermondi. Algunas

fracciones tuvieron un efecto contrario y logra-ron, incluso, aumentar el crecimiento de algunas especies de Candida. Esto resalta la necesidad fg"qdvgpgt"eqorwguvqu"ow{"rwtkÞecfqu"{"fku-criminar los efectos de cada uno. También, vale la pena anotar la diferenciación de los efectos de cada compuesto para cada especie, lo cual sugiere que no se tratan de efectos generales sobre levaduras. La comprensión de los meca-nismos de acción de estos compuestos sobre cada especie, podría utilizarse para entender las diferencias metabólicas entre estas especies del género. Las fracciones obtenidas ameritan estu-dios adicionales de toxicidad in vitro e in vivo, y continuar su análisis.

Gp"eqpenwuk„p."gp"gn"rtgugpvg"guvwfkq"ug"kfgpvkÞec-ron fracciones del tallo de L. camara con potencial antifúngico, que ameritan ser evaluadas en un mo-delo animal y, posteriormente, en humanos.

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