ii
UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
TESIS DE GRADO
PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE
MÉDICA VETERINARIA ZOOTECNISTA
TEMA
“PRESENCIA DE MALASSEZIA spp. E IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DE CÁNDIDA EN PERROS CON OTITIS
MEDIANTE CULTIVO EN AGAR SABOURAUD Y CHROMAGAR”
AUTORA
BENITEZ SALAZAR ANA MARÍA
DIRECTORA
M.V.Z GLENDA LLAGUNO LAZO, MSc.
GUAYAQUIL - ECUADOR
2018
iii
UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA APROBACIÓN DEL DIRECTOR
Yo, Dra. GLENDA LLAGUNO LAZO, Msc., docente de la Universidad Agraria del Ecuador, en mi calidad de directora, certifico que el presente trabajo de titulación: “PRESENCIA DE MALASSEZIA spp. E IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DE CÁNDIDA EN PERROS CON OTITIS MEDIANTE CULTIVO EN AGAR SABOURAUD Y CHROMAGAR” realizado por la estudiante ANA MARÍA BENÍTEZ SALAZAR; ha sido orientado y revisado durante su ejecución;
y cumple con los requisitos técnicos exigidos por la Universidad Agraria del Ecuador; por lo tanto, se aprueba la presentación del mismo.
Atentamente,
--- Dra. Glenda LLaguno Lazo, M.Sc DIRECTORA DE TESIS
iv
UNIVERSIDAD AGRARIA DEL ECUADOR
FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
TEMA:
“PRESENCIA DE MALASSEZIA spp. E IDENTIFICACIÓN DE ESPECIES DE CÁNDIDA EN PERROS CON OTITIS MEDIANTE
CULTIVO EN AGAR SABOURAUD Y CHROMAGAR”
AUTORA:
BENITEZ SALAZAR ANA MARÍA
TESIS DE GRADO SOMETIDA AL H. CONSEJO DIRECTIVO COMO REQUISITO PREVIO A LA OBTENCIÓN DEL TÍTULO DE
MÉDICA VETERINARIA ZOOTECNISTA
APROBADO POR:
--- Dra. Beatriz Cabrera Suárez, MSc.
PRESIDENTA
--- Dra. María Emén Delgado, MSc.
EXAMINADOR PRINCIPAL
--- Dra. Glenda LLaguno Lazo, MSc.
EXAMINADOR PRINCIPAL
v AGRADECIMIENTO
El año que pasó ha sido muy diferente al resto porque llegaron personas que supieron ganarse mi aprecio y otras con las que fui feliz pero que por diversos motivos se tuvieron que ir de mí vida. Por esto y muchas cosas más es que me siento agradecida con Dios porque me ha dado fortaleza y sabiduría para seguir adelante y no tirar la toalla a pesar de las adversidades.
Infinito al único que hace 3 años atrás me recibió en su consultorio cuando estaba buscando un lugar para hacer pasantías y que aún me sigue recibiendo.
Por sus enseñanzas, apoyo, confianza y consejos estaré siempre agradecida con usted Dr. Andrés Jouvin.
A la Dra. Katherine Chaguay por su apoyo en este proyecto, con la que he llegado aprender cosas nuevas y que siempre ha estado dispuesta a enseñarme lo que más le apasiona, la Dermatología Veterinaria.
Al Dr. Pablo Triviño por sus consejos, su paciencia y por abrirme las puertas de su consultorio para seguir aprendiendo más de él y del Dr. Paúl Escobar.
A mis amigas y en especial a una, que, aunque raras son las veces que nos peleamos por tonterías (ella dice eso) sabe que siempre podrá contar conmigo.
Las quiero ver a todas triunfando y haciendo lo que aman.
A los docentes que formaron parte de este proyecto y en especial al Dr. César Carrillo por brindarme su tiempo y ayudarme con todo lo requerido.
A mi directora de tesis y a la universidad por permitirme realizar el análisis de mi estudio en las instalaciones del laboratorio de bacteriología y micología.
vi DEDICATORIA
A la madre naturaleza que acoge en su manto a seres tan nobles como son los animales.
A mi familia, en especial a María Victoria Salazar porque fue la primera que con su corazón de madre supo lo que yo quería ser en el futuro sin antes habérselo dicho a nadie y la que me estuvo apoyando en toda la carrera estudiantil.
Aquellas personas que por vocación eligieron y elegirán esta noble profesión.
vii AUTORÍA Y RESPONSABILIDAD Toda la información y resultados que se encuentran en esta tesis de grado corresponden exclusivamente a la autora.
_______________________________
BENÍTEZ SALAZAR ANA MARÍA C.I: 095062259-7
viii
RESUMEN
Este estudio tuvo como población a 74 perros que presentaron otitis con la asociación de alguna patología dermatológica, no todos llegaron a presentar otitis bilateral por lo que el número de muestras tomadas fueron de 112. Cada una de las variables independientes se relacionó con el género Malassezia y con las especies de Cándida. Como resultado de las variables dependientes se obtuvo que el 73% de pacientes presentó Malassezia spp., 9% Cándida albicans, 47% Cándida krusei, 3% Cándida tropicalis y 35 (47%) tanto Malassezia spp. y Cándida spp. Los pacientes que presentaron mayor porcentaje de Malassezia spp. fueron 10 (19%) a los 60 meses de edad, 28 (52%) hembras y 26 (48%) machos y 21 (39%) con orejas caídas y cubiertas de pelo. En Cándida albicans los pacientes que más presentaron fueron 2 (29%) a los 120 meses de edad, 5 (71%) hembras, 2 (29%) machos y 7 (100%) con orejas caídas, caídas y cubiertas de pelo, caídas redondeadas en punta, erectas y gruesas, rectas, sin cortar y de tipo Mastín inglés correspondiendo cada uno él 14%. En Cándida krusei los pacientes que más presentaron fueron 6 (17%) a los 60 meses de edad, 22 (63%) hembras, 13 (37%) machos y 15 (43%) con orejas caídas y cubiertas de pelo. En Cándida tropicalis los pacientes que más presentaron fueron 2 (100%) uno a los 18 y otro a los 60 meses de edad, 2 (100%) entre hembra y macho y 2 (100%) siendo uno orejas rectas y otro con orejas altas y de rosa. Los signos clínicos (lesiones) que se presentaron en un alto porcentaje fueron en Malassezia spp. 50% pápulas y 40% eritema; En Cándida albicans hubo un 100% de pápulas y pústulas, y 50% de eritema; en Cándida krusei hubo 44% pústulas, 44% pápulas y 43% eritema; en Cándida tropicalis el 100% tuvo pústula, pápula, costras y eritema. Por la patología dermatológica se pudo concluir que el 39,19% de los pacientes tuvo Dermatitis atópica canina (DAC).
La prueba de Chi cuadrado nos indicó que no hubo relación entre las variables dependientes e independientes. La edad media de presentación de la otitis fue de 48 meses.
Palabras claves: otitis, cultivo, agar, Sabouraud, chromagar, Malassezia spp., Cándida.
ix SUMMARY
This study had 74 dogs that presented otitis with the association of some dermatological pathology, not all of them had bilateral otitis, so the number of samples taken was 112. Each of the independent variables was related to the Malassezia genus. and with the Candida species. As a result of the dependent variables it was obtained that 73% of patients presented Malassezia spp., 9%
Candida albicans, 47% Candida krusei, 3% Candida tropicalis and 35 (47%) both Malassezia spp. and Candida spp. The patients who presented a higher percentage of Malassezia spp. were 10 (19%) at 60 months of age, 28 (52%) females and 26 (48%) males and 21 (39%) with drooping ears and hair covers.
In Candida albicans the patients who presented the most were 2 (29%) at 120 months of age, 5 (71%) females, 2 (29%) males and 7 (100%) with drooping ears, falls and hair covers, Rounded, pointed, erect and thick, straight, uncut, and of the English Mastiff type, each one corresponding to 14%. In Candida krusei the patients who presented the most were 6 (17%) at 60 months of age, 22 (63%) females, 13 (37%) males and 15 (43%) with drooping ears and hair covers. In Candida tropicalis the patients who presented the most were 2 (100%) one at 18 and another at 60 months of age, 2 (100%) between female and male and 2 (100%) being one ears straight and another with ears tall and pink. The clinical signs (lesions) that occurred in a high percentage were in Malassezia spp. 50%
papules and 40% erythema; In Candida albicans there was a 100% of papules and pustules, and 50% of erythema; in Candida krusei there were 44% pustules, 44% papules and 43% erythema; in Candida tropicalis 100% had pustule, papule, scabs and erythema. Due to the dermatological pathology, it was concluded that 39.19% of the patients had canine atopic dermatitis (CAD). The Chi square test indicated that there was no relationship between the dependent and independent variables. The average age of presentation of otitis was 48 months.
Keywords: otitis, culture, agar, Sabouraud, chromagar, Malassezia spp., Candida.
1 INDICE DE CONTENIDO
I. INTRODUCCIÓN ... 8
1.1 IMPORTANCIA DEL TEMA ... 9
1.2 PLANTEAMIENTO DE LA SITUACIÓN PROBLÉMICA ... 9
1.3 JUSTIFICACIÓN DEL ESTUDIO ... 10
1.4 DELIMITACIÓN DEL PROBLEMA ... 10
1.4.1. Delimitación espacial ... 10
1.4.2 Delimitación temporal ... 11
1.5 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA ... 11
1.6 OBJETIVOS ... 11
1.6.1 Objetivo General ... 11
1.6.2 Objetivos Específicos ... 11
1.7 HIPÓTESIS ... 12
1.8 APORTE TEÓRICO ... 12
1.9 APLICACIÓN PRÁCTICA ... 12
II. CAPÍTULO ... 12
MARCO TEÓRICO ... 13
2.1 ESTADO DEL ARTE. ... 13
2.2 GÉNERO MALASSEZIA ... 16
2.2.1 Nomenclatura ... 16
2.2.2 Taxonomía y Clasificación ... 17
2.2.3 Características Generales ... 18
2.2.4 Estructura Celular ... 18
2.2.5 Metabolismo y Patogénesis ... 19
2.2.6 Diagnóstico ... 19
2.3 GÉNERO CÁNDIDA ... 21
2.3.1 Nomenclatura ... 21
2.3.2 Taxonomía y Clasificación ... 21
2.3.2.1 Cándida albicans ... 22
2.3.2.2 Cándida krusei ... 22
2.3.2.3 Cándida tropicalis ... 23
2.3.3 Características Generales ... 24
2.3.4 Estructura Celular ... 24
2
2.3.5 Metabolismo y Patogénesis ... 24
2.3.6 Diagnóstico de Cándida ... 26
2.4 OTITIS CANINA ... 28
2.4.1 Agente Etiológico ... 28
2.4.2 Epidemiología ... 29
2.4.3 Características Generales ... 29
2.4.4 Diagnóstico ... 29
2.4.5 Tratamiento ... 31
2.5 CONFORMACIÓN ANATOMICA DEL OIDO ... 32
2.5.1 Oído Externo ... 32
2.5.2 Oído Medio ... 33
2.5.3 Oído Interno ... 34
2.5.4 Tipos De Orejas ... 35
III. CAPÍTULO ... 36
ASPECTOS METODOLÓGICOS ... 36
3.1 AREA DE TRABAJO ... 36
3.1.1 Lugar De Estudio ... 36
3.1.2 Situación geográfica ... 36
3.1.3 Coordenadas Geográficas ... 36
3.1.4 Tiempo de Estudio ... 36
3.2 MATERIALES ... 37
3.2.1 Recursos Bibliográficos ... 37
3.2.2 Materiales Y Equipos... 37
3.2.3 Recursos Económicos ... 37
3.2.4 Recursos Humanos ... 37
3.3 METODOLOGIA ... 38
3.3.1 Modalidad Y Tipo De Investigación ... 38
3.3.2 Población Y Muestra ... 38
3.3.2.1 Población ... 38
3.3.2.2 Muestra ... 38
3.3.3 Técnica ... 39
3.4 VARIABLES ... 40
3.4.1 Variables Independientes ... 40
3.4.2 Variables Dependientes ... 40
3.4.3 Operacionalidad De Las Variables ... 40
3
3.5 ESTADISTICA DESCRIPTIVA Y DISEÑO EXPERIMENTAL ... 40
3.6 CRONOGRAMA DE ACTIVIDADES ... 41
IV. RESULTADOS ... 42
V. DISCUSIÓN……...………...………...59
VI. CONCLUSIONES ... 60
VII. RECOMENDACIONES ... 62
VIII. BILIOGRAFIA CITADA ... 63
4 INDICE DE TABLAS
Tabla 1. Frecuencia de Malassezia spp. ... 42
Tabla 2. Relación de pacientes con Malassezia spp. y la edad ... 43
Tabla 3. Relación de pacientes con Malassezia spp. y sexo ... 43
Tabla 4. Relación de pacientes con Malassezia spp. y el tipo de oreja ... 44
Tabla 5. Frecuencia de Cándida spp. ... 44
Tabla 6. Frecuencia de pacientes con Malassezia spp. y Cándida spp. ... 45
Tabla 7. ´Frecuencia de Cándida albicans. ... 45
Tabla 8. Relación de pacientes con Cándida Albicans y la edad. ... 46
Tabla 9. Relación de pacientes con Cándida Albicans y sexo ... 46
Tabla 10. Relación de pacientes con Cándida Albicans y el tipo de oreja ... 47
Tabla 11. Frecuencia de Cándida krusei. ... 47
Tabla 12 Relación de pacientes con Cándida krusei y la edad. ... 48
Tabla 13. Relación de pacientes con Cándida krusei y sexo. ... 48
Tabla 14. Relación de pacientes con Cándida krusei y tipo de oreja ... 49
Tabla 15. Frecuencia de Cándida tropicalis. ... 49
Tabla 16. Relación de pacientes con Cándida tropicalis y la edad. ... 50
Tabla 17. Relación de pacientes con Cándida tropicalis y el sexo. ... 51
Tabla 18. Relación de pacientes con Cándida tropicalis y el tipo de oreja ... 51
Tabla 19. Frecuencia de lesiones en pacientes con Malassezia spp. ... 52
Tabla 20. Frecuencia de lesiones en pacientes con Cándida albicans. ... 53
Tabla 21. Frecuencia de lesiones en pacientes con Cándida krusei. ... 54
Tabla 22. Frecuencia de lesiones en pacientes con Cándida tropicalis. ... 55
Tabla 23. Patologías dermatológicas asociadas a la otitis ... 56
Tabla 24. Prueba de chi cuadrado asociado a las variables dependientes e independientes ... 57
Tabla 25. Determinación de medidas de tendencia central con la edad (meses)………..58
5 INDIDE DE GRÁFICOS
GRÁFICO 1. Pacientes positivos y negativos a Malassezia spp. ... 68 GRÁFICO 2. Pacientes positivos a Malassezia spp. con relación a la edad. ... 68 GRÁFICO 3. Pacientes positivos a Malassezia spp. con relación a sexo. ... 69 GRÁFICO 4. Pacientes positivos a Malassezia spp. con relación al tipo de oreja………69 GRÁFICO 5. Pacientes positivos y negativos a Cándida. ... 70 GRÁFICO 6. Pacientes positivos y negativos a Malassezia spp. y Cándida spp………..70 GRÁFICO 7. Pacientes positivos y negativos a Cándida albicans. ... 71 GRÁFICO 8. Pacientes positivos a Cándida albicans con relación a la edad. . 71 GRÁFICO 9. Pacientes positivos a Cándida albicans con relación a sexo. ... 72 GRÁFICO 10. Pacientes positivos a Cándida albicans con relación al tipo de oreja………72 GRÁFICO 11. Pacientes positivos y negativos a Cándida krusei. ... 73 GRÁFICO 12. Pacientes positivos a Cándida krusei con relación a la edad. ... 73 GRÁFICO 13. Pacientes positivos a Cándida krusei con relación a sexo ... 74 GRÁFICO 14. Pacientes positivos a Cándida krusei con relación al tipo de oreja………74 GRÁFICO 15. Pacientes positivos y negativos a Cándida tropicalis. ... 75 GRÁFICO 16. Pacientes positivos a Cándida tropicalis con relación a la
edad………75 GRÁFICO 17. Pacientes positivos a Cándida tropicalis con relación a sexo. .. 76 GRÁFICO 18. Porcentaje de pacientes positivos a Cándida tropicalis con
relación al tipo de oreja. ... 76 GRÁFICO 19. Pacientes con lesiones primarias positivas a Malassezia spp. . 77 GRÁFICO 20. Pacientes con lesiones secundarias positivas a Malassezia spp………..77 GRÁFICO 21. Pacientes con lesiones primarias a Cándida albicans. ... 78 GRÁFICO 22. Pacientes con lesiones secundarias positivas a Cándida
albicans………..78 GRÁFICO 23. Pacientes con lesiones primarias positivas a Cándida krusei. .. 79 GRÁFICO 24. Pacientes con lesiones secundarias positivas a Cándida
krusei………..79 GRÁFICO 25. Pacientes con lesiones primarias positivas a Cándida
tropicalis……….80 GRÁFICO 26. Pacientes con lesiones secundarias positivas a Cándida
tropicalis……….80
6 GRÁFICO 78. Patologías dermatológicas asociadas a la otitis canina. ... 81
7 INDICE DE APÉNDICES
APÉNDICE 1. Lugar de estudio y análisis de resultados ... 82
APÉNDICE 2. Recursos económicos ... 84
APÉNDICE 3. Base de datos de pacientes muestreados ... 85
APÉNDICE 4. Toma de muestras y lectura de resultados ... 88
APÉNDICE 5. Variables ... 94
8 I. INTRODUCCIÓN
El oído es el órgano de la audición y el equilibrio encargado de transmitir el estímulo sonoro desde el pabellón auricular hasta el órgano de Corti,
transformar la energía mecánica en eléctrica y de llevar esa energía hacia la corteza cerebral. (Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009).
Presenta en su biota bacterias gram positivas como Staphylococcus
intermedius., Streptococuus spp., Bacillus spp., coliformes ocasionales y la levadura Malassezia pachydermatis. La alteración de la biota en los oídos ocasiona la proliferación de microorganismos residentes naturales como de microorganismos patógenos ocasionando la enfermedad llamada otitis.
(Sánchez Chávez 2007).
La otitis externa es originada por la interacción de factores que ocasionan cambios en la fisiología y biota en el oído llegando a inflamar el conducto auditivo externo, las lesiones presentes por un largo periodo de tiempo suelen agravar el problema causando otitis media e interna. Las infecciones causadas por levaduras como Cándida albicans y Malassezia pachydermatis suelen ser secundarias a causas subyacentes como la atopía o defectos inmunológicos. (Gallo, y otros 1994).
La Malassezia es una levadura que forma parte de la biota normal en la piel y mucosas de seres humanos y animales, si su medio se encuentra
alterado va a comportarse como patógeno oportunista.
La Cándida es un hongo comensal de mucosas que ocasiona
candidiasis si el ser humano o animal se encuentra inmunodeprimido, si ha hecho uso de fármacos cototóxicos o antibióticos de amplio espectro. La especie más patógena es la albicans encontrándose en un 50% de los
pacientes, seguido por las especies tropicalis, parasiplosis y glabrata en un 15- 30%, y con 1% la especie krusei.
El objetivo de esta investigación es dar a conocer por medio del cultivo la presencia de Malassezia spp. y las especies de Cándida en los perros que presentan otitis, sus signos clínicos enfocado a las lesiones dermatológicas y que patología dermatológica se encuentra en un mayor porcentaje.
9 1.1 IMPORTANCIA DEL TEMA
El conducto auditivo al ser una continuidad de la piel puede afectarse al igual que el resto del cuerpo cuando existen problemas dermatológicos. La anamnesis, exploración física minuciosa conjunto a los exámenes de piel ayudará al diagnóstico definitivo de patologías.
La otitis es una patología frecuente en el perro y el gato que se produce por la interacción de 3 tipos de factores: predisponentes, iniciadores y
perpetuantes, en la cual los dos síntomas más característicos son la otalgia y la otorrea y estos están ligados a la consecuente pérdida de la audición se no se llega a tratar a tiempo. (López Hernández 2015).
Este estudio tiene como finalidad acoger a todos los perros positivos a otitis que presenten a su vez problemas dermatológicos, para realizar los cultivos respectivos y determinar la presencia de Malassezia spp. y que especie de Cándida está afectando al paciente.
1.2 PLANTEAMIENTO DE LA SITUACIÓN PROBLÉMICA
La dermatosis, se denomina así a las enfermedades que se producen en la piel por diferentes causas como las alergias, parásitos, bacterias, hongos, enfermedades virales e inmunológicas, congénitas, endócrinas, neoplásicas e idiopáticas. (Wilkinson y Harvey, Lesiones zoonóticas 1998).
Algunas de ellas pueden ser zoonóticas, por lo que el diagnóstico basado en las lesiones es crucial para saber de qué agente se está tratando y si es o no de tipo zoonótico. (Cabañes 2008)
Entre las patologías zoonóticas se encuentran las dermatofitosis, criptococosis, las alergias por la picadura de la pulga, Los ácaros del género Sarcoptes spp. Cheyletiella spp. Otodectes cynotis, Tricacarus caviae y Chirodiscoide caviae.
Dentro de las enfermedades micóticas zoonóticas se encuentra la malasseziosis y la candidiasis, la primera es una infección superficial cuya presencia se da cuando la biota de la piel y mucosas se encuentran alteradas, produciendo que proliferen las Malassezias spp. y la segunda es una infección
10 oportunista que aprovecha cuando el sistema inmune ha bajado o cuando se exponen a los factores iatrogénicos. (Cabañes 2008).
1.3 JUSTIFICACIÓN DEL ESTUDIO
Al momento de recoger información acerca de Cándida en el oído de los perros esta es escasa; es por ello que al investigar Cándida por medio de cultivo en agar chromagar se podrá dar una pauta para investigaciones futuras y así ampliar más la bibliografía de esta levadura en el campo de la veterinaria.
En cuanto a la Malassezia spp. al realizar más investigaciones beneficia a los profesionales en el área con datos actualizados de dicha levadura.
1.4 DELIMITACIÓN DEL PROBLEMA
La otitis canina se da por la interacción de factores que favorecen la proliferación de microorganismos que son comensales en la piel. Al alterarse su medio por diversos motivos causa la enfermedad. El diagnostico a tiempo hace que la enfermedad no se agrave porque de lo contrario si no es tratada a
tiempo puede llegar a provocar sordera. También el aplicar una medicación adecuada hace que el paciente llegue a curarse al cien por ciento sin crear resistencia a fármacos.
1.4.1. Delimitación espacial
La toma de muestras se llevó a cabo en el oeste de la ciudad de Guayaquil, específicamente en el Consultorio Veterinario “SCOTTY 2”, en el cual se procedió a recoger muestras en oídos de perros positivos a otitis clínica y se los analizó mediante técnica de cultivo en agar sabouraud y chromagar, para la determinación de Malassezia spp. y especies de Cándida.
11 1.4.2 Delimitación temporal
La toma de muestras y la investigación tuvo una duración de dos meses.
1.5 FORMULACIÓN DEL PROBLEMA
¿Cuál es la frecuencia de Malassezia y Cándida en perros con otitis?
¿Cómo se relaciona la edad, sexo y tipo de oreja con la otitis de origen micótico?
¿Cómo se caracteriza clínicamente a un paciente con otitis?
¿Cómo se asocia la otitis con los problemas dermatológicos?
¿Cuáles son las especies de Cándida que se pueden presentar en los perros con otitis?
1.6 OBJETIVOS
1.6.1 Objetivo General
Determinar la presencia de Malassezia spp. e identificar las especies de Cándidas en perros con otitis mediante cultivo en agar Sabouraud y Chromagar
1.6.2 Objetivos Específicos
• Relacionar la presencia de Malassezia spp. y las especies de Cándida con la edad, sexo y tipo de oreja.
• Caracterizar los signos clínicos (lesiones) en pacientes positivos.
• Asociar la otitis con problemas dermatológicos.
• Detallar las especies de Cándida encontradas en el estudio.
12 1.7 HIPÓTESIS
Un alto índice de otitis en perros se encuentra relacionada con la presencia de Malassezia spp. y Cándida albicans.
1.8 APORTE TEÓRICO
El estudio contó con una recopilación actualizada de información que ayudó a los profesionales a conocer más sobre Malassezia spp. y las especies de Cándida.
1.9 APLICACIÓN PRÁCTICA
Los resultados que se obtuvieron de la investigación fueron de vital importancia porque se conoció que sí puede haber la presencia de Cándida en perros con otitis, presentándose más la especie Cándida krusei, además de que también puede encontrarse Malassezia spp. asociada a la especie de Cándida ya mencionada.
13 II. CAPÍTULO
MARCO TEÓRICO 2.1 ESTADO DEL ARTE.
La otitis externa es la inflamación del epitelio que reviste al conducto auditivo externo, existen tres factores que llegan a desencadenar el cuadro clínico, pero uno de ellos facilita la presentación de la otitis como son los
factores predisponentes, que al asociarse con los factores primarios aparece la inflamación auricular. (Fidalgo Álvarez, y otros 2003).
Cada oído es un órgano independiente lo cual significa que ambos oídos no van a presentar los mismos gérmenes, por ello su estudio se realiza de manera individual.
Tanto factores predisponentes como factores primarios van a crear un ambiente propicio para la proliferación de bacterias y levaduras provocando que el cuadro ótico siga su curso y que si no llega a tratarse va a dar paso a la cronicidad de la otitis. (Fogel y Manzuc 2009).
Entre los factores se encuentran los predisponentes, los cuales no llegan a desencadenarse por sí solos, pero sí facilita la presentación de otitis. Entre ellos está la humedad excesiva en los oídos, forma y tamaño de las orejas, conformación del conducto auditivo externo, clima, edad y malos hábitos de limpieza por parte de los dueños de las mascotas. (Rejas López, y otros 2010).
Se da en perros que les gusta nadar, perros de caza y, con más frecuencia después de realizársele el baño al perro y no se seca
adecuadamente. (López Hernández 2015).
Los perros con orejas caídas y pelaje largo como es en el caso de los Cocker, Basset Hound, french poodle, Shih tzu, etc. tienden a ser más susceptibles a la otitis, porque el conducto auditivo al no recibir aire ni sol comienza acumularse humedad y en casos de que ingrese algún cuerpo extraño el que salga con facilidad va a ser difícil.
Es más frecuente en conductos auditivos largos, estrechos, y que presentan pliegues como en el Sharpei. A veces la solución es el tratamiento quirúrgico. (Besignor, Pierre y Germain 2009).
La limpieza diaria y el uso hisopos hace que el cerumen se introduzca hacia la parte interna del oído provocando irritación y desencadenando la otitis
14 Aún no está comprobado que hay predisposición a la estación, según estudios es frecuente en climas cálidos y templados.
La otitis que se presenta entre los 6 meses y 3 años son causadas por alergias o seborreas primarias, los que se producen en la edad adulta lo relacionan con problemas hormonales o gonadales y si se presenta otitis en cachorros menores de 6 meses puede deberse a ácaros. (Besignor, Pierre y Germain 2009).
Los factores primarios son los que pueden desencadenar por si solos el cuadro ótico. Dentro de este factor encontramos factores locales y sistémicos.
(Machicote Goth, Power y Prélaud 2011).
Los tumores y cuerpos extraños son factores locales causantes de otitis unilateral
En los perros es más frecuente el histiocitoma, mastocitoma y tumores de glándulas sebáceas lo que hace que la otitis llegue a la cronicidad, los tumores pequeños predisponen a la presencia de otitis causando obstrucción, mientras que los grandes que provocan irritación o están ulcerados son causa primaria de otitis.
Cuando el perro frecuenta jardines y hay presencia de flores, las semillas y las espigas pueden llegar a introducirse en el interior del conducto auditivo provocando malestar y resultado de eso arquea la cabeza hacia el lado que está afectado. (Court 1988).
Los factores sistémicos son causantes de otitis bilateral y entre ello se encuentran las enfermedades dermatológicas y parasitarias, alergias,
traumatismos, trastornos de la queratinización, endocrinopatías, afecciones autoinmunes
El conducto auditivo al ser la continuidad de la piel puede afectarse conjunto al resto del cuerpo.
En perros atópicos la alergia corresponde el 50- 80%, de los cuales el 3% presenta síntomas de otitis externa y, el 80% alergia por alimento de los cuales presenta otitis externa el 20% de ellos; también en dermatitis por picadura de pulga, y sensibilización a componentes de preparados óticos.
(Fidalgo Álvarez, y otros 2003)
Aquí se encuentran los ácaros Demodex canis, Notoedres cati y el agente principal de la otitis parasitaria es el ácaro Otodectes cynotis el cual es
15 causante del 10% de otitis en perros y el 50% en gatos, con mayor afectación a perros jóvenes. (Besignor, Pierre y Germain 2009)
En casos de peleas y cuando el perro presenta prurito y comienza con el rascado frecuente. (Fidalgo Álvarez, y otros 2003)
Se da en ciertas razas las cuales llegan a presentar trastornos
seborreicos con otitis externa ceruminosa como el Cocker y el Basset Hound;
Alaska Malamute y Husky Siberiano presentan otitis externa por exceso de descamación cuando tienen dermatopatías sensibles al cinc. (Fidalgo Álvarez, y otros 2003)
Los desequilibrios hormonales, hipotiroidismo, hiperadrenocorticismo, etc. causan trastornos seborreicos.
El complejo pénfigo y el lupus eritematoso provocan otitis cuando la afectación del pabellón auricular se extiende. (Fidalgo Álvarez, y otros 2003)
Los factores perpetuantes son aquellos que si se mantienen pueden agravar el proceso inflamatorio en el conducto auditivo. Aquí encontramos gérmenes habitan normalmente en el conducto auditivo (Malassezia pachydermatis, Staphylococcus intermedius) y gérmenes oportunistas
(Escherichia coli, Proteus spp. Pseudomonas aeruginosa, etc.) que aprovechan la alteración del microclima para proliferar y causar una infección asociada, mayormente estos son capaces de generar resistencia a los antibióticos.
(Fidalgo Álvarez, y otros 2003).
Con menor frecuencia se han encontrado Cándida albicans y hongos pertenecientes al género Aspergillus, Trichopyton y Microsporum. (Fidalgo Álvarez, y otros 2003).
16 2.2 GÉNERO MALASSEZIA
2.2.1 Nomenclatura
En 1846 Eichstedt fue el primero en reconocer la naturaleza fúngica de la pitiriasis versicolor y con las muestras obtenidas de los pacientes afectados comenzó a describir la presencia de levaduras y micelios. En 1853 Robin lo nombró Microsporum furfur porque observó en pacientes con caspa células redondeadas. En 1874 el histólogo y fisiólogo francés Malassez determinó que su naturaleza es levaduriforme observando que hay células que brotan en el estrato córneo de pacientes con diversas enfermedades de piel (Giusiano 2006). En 1889 Baillon dio origen al género Malassezia teniendo como el primer tipo de especie a Malassezia furfur. (G. P. Tártara 2016).
En 1904 Sabouraud se dio cuenta que en las muestras de lesiones de piel estaban presentes 2 morfologías por la cual creó 2 géneros, llamando Pityrosporum ovale a la fase de levadura y mantuvo el nombre de Malassezia furfur para la fase de micelio (G. Tártara 2011). Aparte las levaduras
presentaban también distintas morfologias por lo que en 1913 Castellani y Chalmers nombraron Pityrosporum ovale a la forma oval y en 1951 Morris Gordon nombró Pityrosporum orbiculare a las de forma esférica. (G. P. Tártara 2016).
Castellani y Chalmers en 1913 fueron los primeros en cultivar el agente de pitiriasis versicolor. En 1925 Weidman aisló Malassezia pachydermatis en la piel de un rinoceronte. En 1928 Macleod y Dowlin obtuvieron los primeros cultivos de Pityrosporum ovale y Malassezia furfur en medio Petroff modificado.
En 1933 Huang y en 1934 Rhoda demostraron la lipofilia de Pityrosporum ovale cuando lo aislaron. En si Pityrosporum ovale, Malassezia furfur, Pityrosporum orbiculare pertenecen a la misma especie solo que varían en su morfología.
Yarrow y Ahearn en 1984 consideraron a la división de basidiomicotina y a la familia cryptococcaceae pertenecientes al género Malassezia. En 1989 Guého y Meyer demostraron que el ADN de Pityrosporum ovale y Pityrosporum orbiculare tienen más del 85% de complemento. En 1990 Guého y Simmons dieron a conocer una nueva especie lipofílica llamada Malassezia sympodialis
17 que tiene gemación simpodial y cuyo contenido de guanina y citosina es del 54% comparado con Malassezia furfur que tiene 66%. EN 1996 Guého agregó cuatro nuevas especies que son Malassezia globosa, Malassezia slooffiae, Malassezia restricta y Malassezia obtusa. En el 2002 investigadores japoneses describieron otra nueva especie llamada Malassezia dermitis la cual fue aislada en una persona con dermatitis atópica mediante secuencia del gen ARNr, y al año siguiente Malassezia japónica fue identificada por método de PCR. En el 2004 el grupo Hirai, Kano, Makimura, Yamaguchi y Hasegawa describió a Malassezia nana en animales mediante secuencia de ADNr y en el mismo año el mismo grupo de japoneses que describieron a Malassezia dermitis
caracterizaron una nueva especie llamándola Malassezia yamatoensis. En el 2006 se aislaron nuevas variedades por medio de genética la una aislada en cabras llamada Malassezia caprae y otra aislada en caballos llamada
Malassezia equina. Cabañes y Castellá en el 2010 presentaron la última especie lipodependiente llamada Malassezia cuniculi sp. nov. (G. P. Tártara 2016)
2.2.2 Taxonomía y Clasificación
Este género pertenece al reino fungi, división basidiomycota, clase ustilaginomycetes y orden malasseziales.
En 1996 Guillot y Guého por medio de estudios genónicos y ribosomales pudieron clasificar y caracterizar las especies del género Malassezia (Hernández Escareño 2005), y estas son: Malassezia furfur, Malassezia sympodialis, Malassezia globosa, Malassezia slooffiae, Malassezia restricta y Malassezia obtusa, Malassezia dermitis, Malassezia yamatoensis, Malassezia japónica, Malassezia pachydermatis, Malassezia nana, Malassezia caprae, y Malassezia equi, Malassezia cuniculi sp. nov. (Carrión Betancourt 2011).
18 2.2.3 Características Generales
Las Malassezias son levaduras patógenas facultativas que forman parte de la biota de seres humanos y animales, especialmente se encuentran en partes del cuerpo ricas en glándulas sebáceas como áreas interdigitales, pliegues
cutáneos, conducto auditivo externo y en mucosa oral y anal. Ciertos factores como la elevada humedad estimulan su sobrepoblación, desarrollándose así su acción patógena. Macroscópicamente las colonias son pequeñas de color amarillo o cremoso, algunas pueden presentarse lisas y otras rugosas umbilicadas. Microscópicamente pueden observarse alargadas, cilíndricas u ovaladas. (MEGACOR 2016).
Se reproduce asexualmente produciendo blastoconidios y son capaces de desarrollarse tanto en condiciones aerobias como anaerobias. (Hernández Escareño 2005).
El tamaño varía de acuerdo a la especie, pero aproximadamente son de 2-7 μm de largo por 1-2μm de ancho. El crecimiento de M. sympodialis, M.
pachydermatis, M. slooffiae, M. furfur es a 40°C., mientras que otras especies llegan a crecer con facilidad a 37°C. (Hernández Escareño 2005).
Entre las infecciones por Malassezia spp. se encuentra la dermatitis seborreica y otitis. (Rejas López, Juan 2008).
2.2.4 Estructura Celular
Presenta una pared interna corrugada que representa del 26% al 37%
del volumen celular, este a su vez está compuesto por 20% de lípidos, 10% de proteínas, 2% de quitina con cantidades pequeñas de nitrógeno y sulfuro, y 70% de manoproteínas. Lo que hace que el sistema inmune aumente o disminuya van a ser las cantidades de lípidos presentes en la pared celular.
(Ochoa de Quinzada 2006).
19 2.2.5 Metabolismo y Patogénesis
Las especies de Malassezia producen enzimas, metabolitos y
fosfolipasas, la actividad de estas puede ser causantes de virulencia jugando el rol de invadir tejidos del hospedador, llegando afectar las funciones celulares cuando se ven expuestos. (Giusiano 2006).
Las fosfolipasas comienzan a liberar acido araquidónico, cuyos metabolitos están comprometidos en los procesos inflamatorios de la piel.
(Giusiano 2006). También, la capacidad queratolítica que tiene la levadura hace que se dé la ruptura de la queratina de las células que han sido invadidas, aparte que la producción de lipoperóxidos comienzan a dañar la membrana celular causando interferencia en la actividad celular. (Giusiano 2006)
2.2.6 Diagnóstico
Las muestras se toman con un bisturí estéril, raspando las lesiones o colocando cinta de acetato sobre ellas haciendo presión y luego de pocos segundos se lo retira y se coloca sobre un portaobjeto.
El diagnóstico directo puede realizarse con la tinción azul de lactofenol que permitirá identificar adecuadamente los componentes del hongo y sus estructuras. (López-Jácome, y otros 2014)
También se podrá emplear la técnica de Blanco de Calcoflúor en la que la fluorescencia que emite aparte de facilitar la observación de los elementos presentes en el hongo también permite observar el tipo de brotación y/o filamentos teniendo un parecido a letras chinas. (RAMOS, y otros 2000).
Los cultivos se pueden realizar con Agar sabouraud glucosa, Agar GP 850 que permiten aislar, identificar y conservar hongos saprófitos y patógenos, también es indicado para el cultivo de levaduras, cuya incubación es durante 5 días a 32°C.
20 Para la observación de las características fisiológicas se usa el test de catalasa, test de la esculina, el test de asimilación de tween 20,40,60,80 y la termo tolerancia a 37°C y 42°C.
Para realizar el test de catalasa se coloca sobre el portaobjeto el
extendido de la colonia de la levadura y encima se agrega una gota de H2O2 de 10 volúmenes. Si comienza a producirse gas el resultado es positivo. (G. P.
Tártara 2016)
En el test de la esculina se colocan 3 ml de agar bilis esculina en tubos de ensayo, una vez que el medio se ha vuelto sólido se lo inocula en
profundidad con la levadura que se está estudiando y se lo incuba por 5 días a 32°C., producto del desdoblamiento de la esculina en esculetina y glucosa se observa que el medio se oscurece porque se liberan sales férricas. (G. P.
Tártara 2016)
El test de asimilación de tween 20,40,60,80 consiste en colocar en caja Petri una suspensión de 107 ufc ml-1 con agar sabouraud glucosa, se mezcla y se espera que se sodifique, luego dentro de las cajas se realizan 4 pocillos de 2 mm de diámetro con sacabocados y se comienzan a llenar con una gota de tween 20,40,60,80, luego se incuban por una semana a 32°C., el desarrollo de las levaduras alrededor de los pocillos indica resultado positivo. (G. P. Tártara 2016)
La termo tolerancia se aplica para evaluar el crecimiento de la levadura a diferentes temperaturas, el aislamiento se incuba en el medio agar Dixon a 37°C durante 3 días. (G. P. Tártara 2016).
21 2.3 GÉNERO CÁNDIDA
2.3.1 Nomenclatura
Langenbeck en 1839 halló hongos en lesiones bucales de un paciente y fue en 1841 que se establece sus etiologías fúngica inoculando material de membranas en recién nacidos sanos, dos años más tarde Robin la llamó Oidum albicans, desde ese entonces se han utilizados 100 sinónimos y ha pasado por 18 géneros de los cuales 2 han prevalecido, una llamada género Monilia cuya especie es Monilia cándida empleado en 1890 por Zopf y el otro género Cándida albicans que fue propuesto por Berkhout en 1923 y aceptado por el Congreso Internacional De Microbiología En New York en 1939 y fue desde ese entonces que todas las especies del género Monilia pasaron al género Cándida. El primer caso de infección sistémica por Cándida fue descrito por Zencker y el 1940 Joachim describió el primer caso de endocarditis
producida por Cándida y desde ese entonces aumentó la incidencia de candidiasis. (Pardi y Cardozo 2002).
2.3.2 Taxonomía y Clasificación
El género Cándida pertenece al reino fungi a la división Deuteromycota, a la clase Blastomycetes y a la familia Cryptococcaceae.
Este género está compuesto por 150 especies de desarrollo unicelular, de las cuales 12 son capaces de adaptarse a la temperatura de 37°C por lo que pueden llegar a ser patógenas para el hombre y los animales (Pardi y Cardozo 2002). Entre ellas tenemos: Cándida albicans, Cándida dubliniensis, Cándida glabrata, Cándida krusei, Cándida kefur, Cándida guilliermondii, Cándida lusitaniae, Cándida milleri, Cándida Oleophila, Cándida parapsilosis, Cándida tropicalis y Cándida utilis. (Mujica 2016).
22 2.3.2.1 Cándida albicans
Es un hongo saprófito di mórfico que pertenece al phylum Ascomycota, clase Hemiascomycetes, orden Saccharomycetales y familia
Saccharomycetaceae.
Se relaciona con todos los seres vivos de sangre caliente, aunque los principales reservorios son los seres humanos, se lo llega a encontrar en
mucosas de la cavidad oral, gastrointestinal, genitourinario, deyecciones y en la microflora de la piel. El aislamiento del hongo no necesariamente indica la existencia de infección a excepción de los inmunodeprimidos o aquellos que presentan una enfermedad latente. (Bial- Arístegui 2003).
En estado natural su crecimiento se da a temperaturas de 25°C con aspecto filamentoso y, en el huésped a 37°C con aspecto de levaduras
redondas u ovaladas agrupadas llegando a medir de 3- 8µ por 2- 7 µ. (INSSBT 2012).
Dentro de todas las especies de cándida esta es la más patógena
porque tiene la capacidad de esquivar las barreras de defensa del cuerpo y por tanto resistir a los tratamientos que se realicen con antifúngicos si no son los apropiados. (Bial- Arístegui 2003).
La virulencia de esta especie está controlada por el gen de la
hexosaminidasa (HEX1) que es responsable de la enfermedad de Tay-Sachs, genes de proteínas aspárticas (SAP1, SAP2, SAP3, SAP4) que permiten al hongo nutrirse, digerir y facilitar la adhesión e invasión al sistema inmune, y el gen que concede al hongo producir tubos germinales y aumentar su adhesión (αINT1). (Bial- Arístegui 2003).
2.3.2.2 Cándida krusei
Es una levadura patógena oportunista que pertenece al phylum Ascomycota, clase Saccharomycetes, orden Saccharomycetales y familia
Saccharomycetaceae. Llega a provocar infección a inmunodeprimidos o
23 aquellos que presentan alguna enfermedad maligna en la sangre, ganglios linfáticos o médula ósea. Presentan dos formas de crecimiento, la primera es en forma de levadura unicelular, las cuales llegan a ser redondas u ovoides, y la segunda forma es la de pseudohifas en la que las células son más largas y se unen entre sí. (Samaranayake y Samaranayake 1994).
Su pared celular presenta seis capas de polisacáridos que se comportan como antígenos, la membrana celular es hidrófoba por lo que la unión se verá más fuerte en las superficies no polares. Tienen contiene ribosomas y pequeñas vesículas. (Samaranayake y Samaranayake 1994).
Esta especie de levadura solo puede crecer hasta los 45°C y en medios no vitaminizados. Es capaz de producir etanol a partir de la glucosa cuando se encuentra en condiciones aeróbicas y semiaeróbicas. (Samaranayake y
Samaranayake 1994).
Esta levadura ha llegado a ser resistente a los antifúngicos porque se adapta de manera rápida aquellos tratamientos. (Samaranayake y
Samaranayake 1994).
La ventaja que tiene esta levadura es que se la ha llegado a usar en la producción chocolatera por los altos niveles de etanol que generan ciertas cepas de esta especie. (Samaranayake y Samaranayake 1994).
2.3.2.3 Cándida tropicalis
Pertenece al phylum Ascomycota, clase Saccharomycetes, orden Saccharomycetales y familia Saccharomycetaceae. A lo largo de las pseudohifas crecen de forma individual o en pequeños racimos los blastoconidios. Es sensible al fluconazol. (Kothavade, y otros 2010).
24 2.3.3 Características Generales
La Cándida es un hongo dimórfico y patógeno oportunista que reside naturalmente en la piel y mucosas de seres humanos y animales, su
proliferación conlleva a la enfermedad llamada candidiasis.
La enfermedad llamada candidiasis al afectar la mucosa produce uniones mucocutaneas erocionadas o superficialmente ulceradas que no se llegan a curar, cubiertas por placas de coloración blanco grisáceo con eritema en los bordes. En la piel se observan lesiones cutáneas, erosionadas,
eritematosas, húmedas, con exudado y costras. (Fogel y Manzuc 2009).
Su forma es redondeada o ligeramente alargada, pueden llegar a medir de 2-6 µm x 3-9 µm. Se reproducen asexualmente por gemación produciendo un nuevo material celular que proviene de la superficie del blastoporo. Su crecimiento se da en medios aerobios con temperaturas de 20°C a 38°C y con un ph de 2.5 a 7.5. (Olea Barrionuevo 1995).
2.3.4 Estructura Celular
Su dimorfismo hace que el espesor de su pared varíe. Su pared celular presenta quitina que ayuda a que las células se formen cuando la célula madre e hijo entran en gemación, glucano que le da a la pared resistencia y rigidez cuando hay algún cambio mecánico u osmótico y manoproteínas que hacen que estos se adhieran a los tejidos protegiéndolos de algún ataque enzimático o químico.
2.3.5 Metabolismo y Patogénesis
Las especies de este género utilizan glucosa como fuente de carbono.
La colonización se da como consecuencia de la administración de antibióticos
25 de amplio espectro o cuando aparece algún daño o alteración en el epitelio intestinal lo que induce cambios en el fenotipo de la levadura emitiendo un tubo germinativo que invade membrana basal y epitelio, lo que se verá favorecido por la producción de fosfolipasas y proteinasas. En un paciente con el sistema inmune normal la invasión se verá limitada por las primeras barreras de
defensa y/o polimorfonucleares, en cambio en un paciente con sus defensas bajas la levadura comienza a diseminarse y a invadir el torrente sanguíneo. La diseminación también puede ser directa cuando se usa un catéter contaminado o cuando rosa la piel del paciente o del médico que lo manipula. (Biasoli 2013).
Los factores de patogenicidad van a cooperar con una o más etapas de la infección, entre ellas tenemos la interacción que tiene la adhesina de la levadura con el receptor de la célula huésped, la producción de enzimas como proteinasas y fosfolipasas, en la cual Cándida albicans presenta 10 iso enzimas con actividad proteinasa de las cuales el 1-3 causan una infección superficial y 4-6 son causantes candidiasis invasiva, la producción de hifas y pseudohifas que aumenta la adherencia e invasión de la levadura haciéndola resistente a la fagocitosis y aumentando las células killer del huésped y por último la
variabilidad antigénica y fenotípica que se aprecia en la morfología de las colonias. (Mujica 2016).
Los mecanismos de defensa del huésped son: inmunes y no inmunes.
En los inmunes se encuentra la inmunidad humoral y la mediada por células y en los no inmunes está la integridad funcional del estrato córneo, la interacción con otros miembros de la flora microbiana y el proceso de descamación
inducida por la inflamación. (Biasoli 2013).
Las causas que predisponen a la enfermedad son la mala higiene, la edad (recién nacidos y personas con edad avanzada), mujeres embarazadas, personas con diabetes e hipotiroidismo, el uso de corticoides, antibióticos, enfermedades virales y enfermedades producidas por la alteración en la serie roja y blanca de la sangre. (Naglik, Callacombe y Hube 2003).
26 2.3.6 Diagnóstico de Cándida
Las muestras se pueden tomar de la piel, faneras, mucosas, materia fecal, punción de hígado, líquido cefalorraquídeo, biopsia, lavado
broncoalveolar, esputo, etc. (Castañón Olivares 2016).
El examen directo puede ser: en fresco o por tinción
Las muestras en el examen en fresco pueden ser todas las nombradas anteriormente, en el caso de faneras se usa una solución de hidróxido de potasio al 20% caliente para disgregar y clarificar el material, en caso de materia fecal o muestras de mucosas el examen se realiza en portaobjetos, para las muestras de líquido cefalorraquídeo la utilización de tinta china pone en evidencia la cápsula del Cryptococcus spp., en la muestra positiva se observan elementos de la levadura de 3 a 5 micras de diámetro con o sin hifas o pseudomicelio. (Castañón Olivares 2016).
En el examen por tinción se coge la secreción de las mucosas, se realiza el frotis respectivo y se tiñen con Gram, es positivo cuando hay cuatro
levaduras por campo, cuando se las observa con el objetivo 40x y/o hay existencia de pseudomicelio. (Castañón Olivares 2016).
Los cultivos pueden realizarse con agar Sabouraud, cuyas colonias aparecen entre las 24 y 36 horas de ser sembradas presentan aspecto
cremoso y húmedo, liso y suave con tamaño de 1,5 a 2 milímetros de diámetro.
Después de 4-5 días toma el olor característico a levadura. (Castañón Olivares 2016).
El agar de patata y dextrosa al cual se le tiene que aplicar antibióticos como el cloranfenicol o ácidos para evitar el crecimiento bacteriano, este agar es muy nutritivo lo que permite la esporulación y la producción de pigmentos en ciertos dermatofitos. (Castañón Olivares 2016).
El medio lactrimel contiene leche, harina de trigo, miel e inhibidores que impiden el desarrollo de bacterias y se la usa en muestras de piel para aislar dermatofito. (Castañón Olivares 2016).
27 Al momento de ya tener las colonias se utiliza CHROmagar candida para observar si existe una o más especies de levaduras en una misma muestra, cuya identificación se da por colores, siendo color verde para Cándida albicans, color azul metálico para Cándida tropicalis, color rosa rizada para Cándida Krusei, color de malva a marrón para Cándida glabrata y kefyr y color blanco a malva para otras especies. (Castañón Olivares 2016).
In vitro las colonias de cándida crecen a Ph de 2,5 y 7,5 y a temperatura de 20°C a 38°C., a las 48 y 72 horas se observa el crecimiento. (Castañón Olivares 2016).
28 2.4 OTITIS CANINA
Se denomina así a la inflamación del oído por diferentes causas, tiene tres formas de presentación, una es la otitis externa que afecta el pabellón auricular inflamando el epitelio que reviste al conducto auditivo externo, la otitis media se da en el perro que ya viene sufriendo un cuadro de otitis externa por cualquiera de los factores mencionados anteriormente, presentándose en estas dos formas la otorrea, y la otitis interna caracterizada por pérdida del equilibrio o sordera parcial o total. (Jiménez Peláez 2014) (Sánchez Chávez 2007).
Existe también otitis que a pesar de realizarse el tratamiento no llegan a responder a la terapéutica, y estas se clasifican en otitis refractaria y
recidivante.
Es recidivante cuando el animal aparentemente llega a curarse, pero con el tiempo vuelve a tener el mismo problema y esto se debe a que los factores primarios no fueron diagnosticados o fueron mal diagnosticados y por ende no se trataron correctamente y también si se pasó por alto una posible otitis media.
Es refractaria cuando el animal no llega a curarse por completo y esto puede deberse a la resistencia de los antibióticos por parte de gérmenes perpetuantes, por presencia de factores primarios no manejados
correctamente, la no identificación de tumores y cuerpos extraños, por cambios en la proliferación llegando a la cronicidad y en caso de posible otitis media.
(Wilkinson y Harvey 1994).
2.4.1 Agente Etiológico
Los causales de otitis externa pueden ser bacterias del género Pseudomona, Escherichia y Staphylococcus, estos provocan supuración en los oídos y hacen que se presente úlceras en el conducto. (Cristina 2005).
Las de tipo micótico son aquellas otitis que la producen los del género
Malassezia y Càndida causando el olor rancio en los oídos y presentándose el cerumen de color café. (Cristina 2005).
29 La otitis parasitaria causada por Otodectes cynotis hace que se produzca
prurito y el cerumen se presente de color café oscuro, pajoso, seco. (Cristina 2005).
2.4.2 Epidemiología
La otitis en el perro representa la cuarta parte de las consultas
dermatológicas veterinaria y en el gato representa la sexta parte, su incidencia va entre el 6 y el 20%, presentándose más en zonas tropicales y templadas.
(Fidalgo Álvarez, y otros 2003).
2.4.3 Características Generales
El perro se muestra inquieto y con dolor, sacude la cabeza por el malestar, se producen lesiones por el rascado que se presentan producto del purito, hay mal olor, puede llegar a presentarse hematomas auriculares o eczema húmedo.
Dermatológicamente se observa eritema en la cara interna del pabellón auricular, secreción de acuerdo al microorganismo presente, descamación, y cambios en la pigmentación de la piel e hipertrofia cuando la otitis externa se agrava. (Medleau y Hnilica 2007).
2.4.4 Diagnóstico
El diagnóstico se basa en la identificación de los 3 factores que llegan a intervenir en la otitis, manejando a cada oído como órgano independiente y, mediante la exploración física minuciosa acompañada de la anamnesis.
(García-Martos, y otros 2001)
Existen métodos complementarios que ayudan al diagnóstico como la otoscopia que antes de su utilización hay que ver si el paciente presenta o no tan inflamado el/los oídos, si está bien inflamado se recomienda realizar una terapia con glucocorticoide por unos 5- 7 días y de ahí se llega hacer uso del
30 otoscopio que se aplica con el paciente sedado, porque al introducirlo en el oído el animal puede llegar a sentir dolor. Con este instrumento se observará si existe o no masas tumorales, cuerpos extraños, parásitos, cambios en la
membrana timpánica, cambios patológicos en la piel e identifica y elimina el exudado que se encuentra en las paredes del conducto auditivo externo.
También se puede proceder a tomar muestras para estudios citológicos.
Mientras el otoscopio se va introduciendo simultáneamente se va realizando la limpieza ya sea inyectando a presión suero fisiológico o mediante pinzas con algodón para lograr ver con más detalle las paredes del conducto auditivo.
(Fogel y Manzuc 2009)
La endoscopia ótica permite ver la membrana timpánica más nítida y las características del conducto auditivo externo.
La citología permite observar e identificar en el microscopio
microorganismos perpetuantes. La muestra se toma con un hisopo de algodón y se rota sobre dos portaobjetos las cuales serán teñidos con diferente tinción;
la una con tinción T-15, Giemsa y la otra con tinción de Gram. Entre los
resultados que se pueden obtener son la presencia de células de descamación que indican que hay un proceso alérgico que está desencadenando la otitis, levaduras en la cual es más común encontrar Malassezia pachydermatis, cuerpo celular de bacterias cocoides y bacilares asociada a una reacción inflamatoria, presencia de bacterias bacilares en el oído indica alteración en el conducto auditivo porque en un oído sano la presencia de este es inexistente y existencia de polimorfonucleares que suelen acompañarse de macrófagos o linfocitos que llegan a observarse en otitis exudativa o purulenta. (Fogel y Manzuc 2009).
También pueden observarse acantocitos, células neoplásicas y queratinocitos nucleados.
Para la realización del cultivo bacteriano el paciente no deber estar tomando antibióticos, se lo realiza de manera estéril cortando los pelos que se crea que van a tocar el hisopo y limpiando con alcohol el exudado que se encuentre en el conducto auditivo externo. El cultivo tiene que ir acompañado con la realización de otros métodos de diagnóstico para que no haya fracaso en la terapia. (Fogel y Manzuc 2009)
31 La radiografía de ampolla timpánica que se realiza con el paciente
sedado y el fin de este método es determinar la asociación de la otitis media con el cuadro clínico. (Medleau y Hnilica 2007).
2.4.5 Tratamiento
Si se diagnostica otitis alérgica el tratamiento es a largo plazo con
prednisolona a dosis de 1 mg/kg/día bajando la dosis conforme pasan los días, este ayudará tanto a desinflamar como a evitar el prurito. (Paterson 2009).
En caso de presencia de levaduras los más utilizados son el ketoconazol y miconazol que se aplica por 3 a 4 semanas o hasta cuando se vea que la proliferación se ha controlado. (Paterson 2009).
En presencia de bacterias el tratamiento es meticuloso por la resistencia que puede generarse. En caso de cocos gramnegativos los fármacos como enrofloxacina, gentamicina y ciprofloxacina son adecuados (Court 1988). La cefalotina aplicada en el conducto auditivo cada 12 horas durante 2- 3 semanas es eficaz al igual que la cefalexina vía oral que controla el sobre crecimiento de bacterias gram positivos sensibles y de S. intermedius; en casos de presencia de bacilos gram negativos el tratamiento tiene que basarse en el resultado del estudio de sensibilidad bacteriana porque este tipo de bacilo llega a generar fácilmente resistencia. (Fogel y Manzuc 2009).
En casos de que el paciente presente en el epitelio del conducto auditivo una mínima cantidad de hiperplasia o pequeñas áreas de lesiones neoplásicas en la zona lateral del canal vertical se recomienda la técnica de zepp el cual es un procedimiento quirúrgico que va a permitir que el conducto auditivo esté mejor ventilado y facilita que la medicación tópica llegue a la rama horizontal del conducto. (ARGOS 2014).
32 2.5 CONFORMACIÓN ANATOMICA DEL OIDO
Al nacer los cachorros presentan el conducto auditivo externo cerrado, entre los 9 días de edad se va abriendo hasta que al día 17 ya todo el conducto está formado, permitiendo que el cachorro comience a captar las ondas
sonoras provenientes del mundo externo.
El oído es uno de los 5 órganos de los sentidos el cual se encarga de la audición y de mantener el cuerpo en equilibrio. Consta de 3 partes que son el oído externo, oído medio, el oído interno. Cada una de ellas va a cumplir funciones diferentes.
2.5.1 Oído Externo
Protege el oído de posibles cambios en el ambiente, recibe el sonido del exterior y lo lleva hacia el oído interno. Consta de pabellón auricular y canal auditivo externo. (Bianchi 2015).
El pabellón auricular capta las vibraciones del sonido exterior, está formado por tejido cartilaginoso y elástico recubierto por piel delgada que presenta glándulas sudoríparas, sebáceas y folículo piloso.
El canal auditivo externo encargado de llevar el sonido desde el tímpano hacia el oído medio y la membrana timpánica la cual vibra cuando siente las ondas sonoras del exterior. Va desde el pabellón auricular hasta la membrana timpánica ambos sostenidos por cartílago elástico y tejido óseo, la piel que reviste la membrana presenta glándulas sebáceas, ceruminosas, folículos y pliegues que hace que la luz sea irregular. El cerumen está formado por células descamadas del epitelio, sebo y las propias glándulas ceruminosas. (Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009)
33 2.5.2 Oído Medio
Constituido por membrana timpánica, cavidad timpánica y trompa auditiva. (Bianchi 2015).
La membrana timpánica es un fino tabique que separa el conducto auditivo de la cavidad timpánica, puede llegar a medir 10- 15 mm y está
recubierta en su parte externa por epitelio estratificado plano y en el interior por epitelio simple plano que sigue hasta la cavidad timpánica (Díaz Sánchez, Anet Rosado y Andreu Ramírez s.f.). Entre ambos epitelios hay tejido conectivo con fibras de colágeno, la parte dorsal de la membrana timpánica es flácida porque no hay fibras de colágeno. Las vibraciones que se dan en el tímpano son recogidas por el oído medio a través de los huesecillos. (Bianchi 2015).
La cavidad timpánica constituido por los huesecillos yunque, martillo y estribo, encargados de transmitir el sonido desde el oído externo hasta la cóclea. Es una cavidad llena de aire situada en la caja del tímpano que se comunica con el oído externo y se comunica con el oído interno a través de la cóclea. La membrana timpánica, la cara interior y el hueso temporal conforman las paredes de la cavidad comunicándose con la nasofaringe a través de la trompa auditiva, la cavidad está recubierta por epitelio simple plano y en ciertas zonas por epitelio pseudoestratificado ciliado. (Bianchi 2015).
La trompa auditiva comunica la cavidad timpánica con la nasofaringe, está limitada por la canaleta cartilaginosa invertida excepto en su borde ventral.
En el caballo la pared membranosa se evagina por el borde ventral formando el saco gutural el cual se sitúa dorsolateral a la nasofaringe. (Bianchi 2015).
En las paredes de la nasofaringe se encuentran las aberturas faríngeas las cuales presentan tejido linfoide, el cartílago presente en la trompa auditiva se introduce en la pared medial de la abertura faríngea dándole rigidez.
(Bianchi 2015).
34 2.5.3 Oído Interno
El oído interno está conformado por el laberinto óseo y la cóclea, ambos ubicados en la cápsula ótica cuyo hueso que lo conforma es el haversiano.
(Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009)
Dentro del laberinto óseo se encuentran el vestíbulo, 3 canales
semicirculares y el acueducto vestibular. (Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009)
El vestíbulo y el acueducto se relaciona con el tímpano hacia afuera, con el conducto auditivo interno hacia adentro, con la cóclea hacia abajo y adelante y con los canales semicirculares hacia arriba. (Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009).
Los 3 canales semicirculares superior, posterior y externo tienen forma de embudo y están dispuestos en ángulo recto relacionándose entre sí.
(Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009).
La cóclea se relaciona por detrás con el vestíbulo y el conducto auditivo interno, por arriba con la cara anterosuperior del peñasco, por fuera con la pared interna de la caja timpánica y por abajo y adentro con el conducto carotídeo y la carótida interna. Presenta 3 partes que son el núcleo, la lámina de los contornos y la lámina espiral ósea. (Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009).
El núcleo se encuentra en el centro de la cóclea con forma de cono macizo y múltiples orificios pequeños que deja pasar las ramas del nervio coclear. Estos orificios se continúan con pequeños conductos que al
aproximarse a la lámina espiral se agrandan formando un conducto espiral llamado Rosenthal el cual está ocupado por el ganglio de Corti. (Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009).
La lámina de los contornos es un tubo óseo hueco que se enrolla
alrededor del núcleo, se relaciona con la pared interna de la caja timpánica, por encima con la ventana redonda dirigiéndose hacia abajo y adentro con el
35 gancho de la cóclea hasta alcanzar el núcleo. (Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009).
La lámina espiral ósea se introduce en la lámina de los contornos dividiéndose en anteroposterior o timpánico y anterosuperior o vestibular. El borde interno llega a confundirse con la pared interna de la lámina de los contornos y con la pared externa del núcleo, el borde externo se dirige hacia la pared externa de la lámina de los contornos, encontrándose entre el borde y la pared el laberinto membranoso. (Sánchez Terradillos, Pérez Sáez y Carcedo Sañudo 2009).
2.5.4 Tipos De Orejas
Las orejas se encuentran ubicados en la parte superior de la cabeza y a ambos lados de ella, nacen de la nuca, frente y parótida. Todas las formas y tipos de orejas están destinadas a la protección del oído, entre ellas tenemos orejas erectas y gruesas como en los dóberman pincher, caídas y cubiertas de pelo como el de los french poodle, caídas redondeadas en punta como los de bedlington terrier, pequeñas y gruesas como en los chow chow, largas y colgantes como en los basset hound, altas y de rosa como el de los bulldog inglés, dobladas hacia atrás en forma de rosa como los whippet, caídas como los staby hound, rectas como en los pastores alemanes, lobulares como en el Cocker spaniel inglés, de lobo como en el Malamute de alaska, penduladas como en el Braco Italiano, tipo mastín inglés, de flama como los yorkshire terrier, sin cortar como los bóxer, cortadas como los Dóberman, de murciélago como los Bulldog francés, colgantes y dobladas hacia adelante como los Collie.
(Arozamena Montfort 2009).
36 III. CAPÍTULO
ASPECTOS METODOLÓGICOS 3.1 AREA DE TRABAJO
La toma de muestras se llevó a cabo en el consultorio veterinario
“SCOTTY 2” ubicado en Gómez Rendón 4910 entre la 26 y la 27.
La investigación se realizó en el laboratorio de bacteriología y micología de la Universidad Agraria del Ecuador ubicado en la Av. 25 de Julio y Pio Jaramillo.
Ver apéndice 1.
3.1.1 Lugar De Estudio
3.1.2 Situación geográfica
El lugar de estudio se encuentra ubicado en el suroeste del cantón Guayaquil provincia del Guayas.
3.1.3 Coordenadas Geográficas
2°24′28″S 80°21′56″O
3.1.4 Tiempo de Estudio
Las muestras de cada paciente que integran el estudio, al igual que la investigación se recolectaron por el periodo de dos meses.
37 3.2 MATERIALES
3.2.1 Recursos Bibliográficos
Toda la información presente en este proyecto fue una recopilación de libros, tesis de grado, sitios web, artículos y revistas científicas.
3.2.2 Materiales Y Equipos
Los materiales de campo que se requieren son: libreta para anotaciones, bolígrafo, lápiz graso.
Entre los materiales y equipos médicos se requiere de guantes, alcohol metílico, papel de cocina, mascarillas, mandil, asa de platino, Medio Stuart, cajas bipetri con agar chromagar, tubos semitendidos con agar sabouraud, porta tubos, incubadora, portaobjetos, cubreobjetos, hidróxido de potasio, microscopio.
3.2.3 Recursos Económicos
Descrito en el apéndice 2.
3.2.4 Recursos Humanos
Directora de Tesis: M.V.Z. Glenda Llaguno Lazo, MSc.
Redactor Técnico: M.V.Z. Fabrizio Arcos Alcívar, Msc.
Tutor Estadístico: M.V.Z. César Carrillo Cedeño, Msc.
Colaboradora externa: M.V.Z Katherine Chaguay Villamar, MSc.
Investigadora: Egda. Ana María Benítez Salazar.
38 3.3 METODOLOGIA
3.3.1 Modalidad Y Tipo De Investigación
El estudio es de tipo descriptivo e inferencial no experimental transversal, se tomaron como factor de inclusión a todos los pacientes con Otitis Clínica que a su vez presentaban alguna patología dermatológica.
3.3.2 Población Y Muestra
3.3.2.1 Población
Para esta investigación se realizó un muestreo no probabilístico en el consultorio veterinario “SCOTTY 2”, en el cual se tomaron como factor de inclusión todos los perros que llegaron con presencia de otitis clínica, con toda la signología clínica, y se lo desarrolló por el periodo de 2 meses.
El número de pacientes que fueron sometidos al estudio es de 74, de los cuales no todos presentaron otitis bilateral, llegándose a tomar 112 muestras.
Apéndice 3.
3.3.2.2 Muestra
Las muestras fueron tomadas en los oídos de los perros.
