MEDIOS DE CULTIVO
MEDIOS DE CULTIVO
1.
1. OBJETIVOS
OBJETIVOS
Conocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes para el crecimiento deConocer los diferentes tipos de medios de cultivo existentes para el crecimiento de microorganismos en el laboratorio.
microorganismos en el laboratorio.
Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un medio de cultivo.Identificar los diferentes pasos a seguir en la elaboración de un medio de cultivo.
2.
2. INTRODUCCION
INTRODUCCION
En los laboratorios de Microbiología se utiliza una gran variedad de medios de cultivos para En los laboratorios de Microbiología se utiliza una gran variedad de medios de cultivos para mante
mantener ner las las cepas, aislar cepas, aislar o o identiidentificar microorgficar microorganismanismos os con varias con varias finalfinalidadesidades: : detedeterminar larminar la existencia de contaminación de alimentos, medicamentos o cosméticos diagnosticar alguna existencia de contaminación de alimentos, medicamentos o cosméticos diagnosticar alguna enfermedad, elaboración de vacunas bacterianas, etc.
enfermedad, elaboración de vacunas bacterianas, etc.
3.
3. MARCO
MARCO TEÓRICO
TEÓRICO
!e
!e mamanenera ra gegeneneraral l se se dedenonomiminana
“Medio de Cultivo
“Medio de Cultivo
a a cuacual"ul"uier ier matmaterierial al prepresensente te unauna adecuada combinación de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento del n#mero de adecuada combinación de nutrientes para permitir el crecimiento o el incremento del n#mero de células de una población microbiana.células de una población microbiana.
El ob$etivo #ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación. %no de El ob$etivo #ltimo del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación. %no de los
los sistsistemaemas s m&s m&s impimportortantantes es parpara a la la ideidentintificficaciación ón de de micmicrooroorgarganismnismos os es es obsobservervar ar susu crecim
crecimiento en iento en sustansustancias alimenticiacias alimenticias s artifartificialeiciales s prepapreparadas en radas en el el laborlaboratorioatorio. . El El matermaterialial alimenticio en el "ue crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo ' el crecimiento de los alimenticio en el "ue crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo ' el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. (e )an preparado m&s de *+.+++ medios de cultivo diferentes. microorganismos es el Cultivo. (e )an preparado m&s de *+.+++ medios de cultivo diferentes.
ara "ue las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una ara "ue las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de )umedad ' presión de oxígeno adecuado, serie de condiciones como son: temperatura, grado de )umedad ' presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. %n medio de cultivo debe contener los así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. %n medio de cultivo debe contener los nutrientes ' factores de crecimiento necesarios ' debe estar exento de todo microorganismo nutrientes ' factores de crecimiento necesarios ' debe estar exento de todo microorganismo contaminante.
CLASI!ICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
SE"#N SU ESTADO !$SICO
%& L$'UIDOS(
%sualmente se denominan caldos 'a "ue contienen los nutrientes de suelos en agua. ermiten obtener suspensiones con un elevado n#mero de microorganismos. E$.: caldo nutritivo.
)& SOLIDOS(
S
e pueden preparar a partir de medios lí"uidos a los cuales se les a-aden *. a / 0 de agentes solidificantes como agar, gelatina o sílica gel. (e utilizan con frecuencia en el aislamiento ' mantenimiento de los microorganismos en el laboratorio. E$.: 1gar nutritivo.*& SEMISÓLIDOS(
(e pueden preparar a partir de medios lí"uidos a los cuales se les a-aden +.* a +.20 de agentes solidificantes como agar, gelatina o sílica gel.
SE"#N LA NATURALE+A DE SUS CONSTITU,ENTES
%& NATURALES(
son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de te$idos o infusiones ' cu'a composición "uímica no se conoce exactamente.)& SINT-TICOS(
son los medios "ue contienen una composición "uímica definida cualitativamente ' cuantitativamente. (e utilizan para obtener resultados reproducibles.*& SEMISINT-TICOS(
son los sintéticos a los "ue se les a-aden factores de crecimiento ba$o una forma de un extracto org&nico comple$o, como por e$emplo extracto delevadura.
SE"#N SU !ORMULACIÓN(
%& 'u/i*%/e0te dei0ido(
se conoce la cantidad exacta de cada uno de los compuestos "ue )a' en el medio.
b3
Co/le4o(
se realizan a partir de extractos naturales 4extracto de levadura, sangre, etc.3 no se conoce exactamente cu&l es la composición del medio sin embargo, presenta la venta$a de "ue 'a est&n presentes todos o casi todos los elementos "ue unacélula puede re"uerir.
SE"#N SUS 5RO5OSITOS DE USO(
%& Medio 6e0e7%l(
medio en donde crecen todo tipo de microorganismos, excepto los "ue necesitan condiciones especiales 4por e$emplo, agar C5E!3.)& Medio ele*tivo(
permite seleccionar el crecimiento de una especie o grupo determinado 4)ongos, bacterias entéricas, protozoos...3.*& Medio die7e0*i%l(
permite identificar una especie con otra, ambas en el mismo medio. uede ser por su crecimiento, su metabolismo, su respiración, etc. 4por e$emplo, medio de McCon6e'3.d& Medio de e07i8ue*i/ie0to(
contiene los nutrientes necesarios para apo'ar el crecimiento de una amplia variedad de microorganismos, se utiliza para la cosec)a de diferentes tipos de microorganismos en un mis mo medio.e& Medio /0i/o(
contiene la mínima cantidad de nutrientes posible "ue permite el crecimiento de una especie.f3
Medio de t7%0o7te(
preparado para servir como almacenamiento temporal a especímenes transportados o en transferencia mantienen su viabilidad ' su concentración simple.5RE5ARACIÓN DE MEDIOS DE CULTIVO
(iempre es recomendable ' se inclu'e como una regla b&sica la de leer las instrucciones de las eti"uetas de los medios de cultivo, por ello no se recomienda re envasar los medios sino, mantenerlos en los recipientes originales.
ara lograr una preparación adecuada de los medios de cultivo es recomendable seguir las siguientes instrucciones:
5RE5ARACION DE LA SOLUCION
5os medios de cultivo deben ser mezclados o )idratados en recipientes limpios, libres de detergente. El agua "ue se utiliza para su mezclado debe ser destilada o desmineralizada.
5os medios de cultivo "ue no contienen agar ni gelatinas, 4li"uidos3 pueden ser disueltos en agua fría o ligeramente caliente. ero si contienen alguna de las dos sustancias deben ser
calentados )asta ebullición para solubilizar el agar. 7unca sobre calentar por"ue se puede alterar su composición.
5os medios "ue presentan turbidez debido a sus componentes insolubles, deben ser agitados para )omogenizarlos adecuadamente.
ESTERILI+ACION
(e esteriliza por autoclave o por ebullición de acuerdo a las instrucciones para cada preparación. Cuando se esterilizan vol#menes grandes de medio se debe aumentar el tiempo de esterilización para permitir la penetración del calor al interior del recipiente.
SERVIDO DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
%na vez estéril los medios de cultivo deben ser enfriados a t emperatura promedio de 89 9C para ser adicionados en los recipientes finales teniendo en cuenta nuevamente las técnicas
asépticas.
9. MATERIALES
• 8 Erlenme'er de *++ml • ; ca$as de etri
• 8 pipeta de *+ ml • 8 probeta de *++ml • Esp&tula
• <alanza
• 1utoclave, estufa ' )orno
• 1gar nutritivo EM< ' caldo nutritivo
:. 5ROCEDIMIENTO
• =ealizar los c&lculos respectivos para agar ' caldo teniendo en cuenta "ue para para
cada ca$a deben servir **; ml de agar ' para cada tubo entre >*+ ml de caldo.
• E$emplo: ara preparar ; ca$as con agar, multipli"ue ; po* ml ? */+ml • Mida el volumen de agua destilada seg#n sus c&lculos.
• @eniendo en cuenta el volumen de agua a utilizar, )aga la relación de polvo de agar "ue
debe pesar de acuerdo a lo especificado en la eti"ueta del medio.
• ese la cantidad del medio necesario de acuerdo a los c&lculos.
• Mezcle el polvo con la mitad del volumen de agua medida anteriormente, agite '
adicione el restante de agua
• 5leve a )ervir si es necesario
• Esterilizar en el autoclave a * lb de presión a */* 9C por * min.
• (irva **; ml aproximadamente de agar en cada ca$a cuando la temperatura este a +
9C, t&pelas ' de$e solidificar, 5o mismo con los caldos sirva >*+ ml en cada tubo ' t&pelos.
• !é$elos enfriar ' gu&rdelos en la nevera )asta su utilización.
;. CUESTIONARIO
1.<
='u> e A6%7? de do0de e e@t7%e
A6%7<A6%7
, es un extracto de color blancocrema "ue se obtiene de distintos tipos de algas ro$as, como el Aelidium, ' aun"ue principalmente se recogen en el Bcéano 1tl&ntico, también se puede encontrar en el Mar Cant&brico ' Bcéano acífico. Es mu' rico en fibra soluble ' minerales, por lo "ue a'uda a regular el tr&nsito intestinal, colesterol, diabetes, ' prevenir el sobrepeso. !ebido a su capacidad de absorber agua, se utiliza en cocina para espesar' gelificar alimentos, 'a sean dulces o salados, sin a-adir ning#n sabor, como la gelatina.
2.<
='u> e 6el%ti0% de do0de e e@t7%e
5a gelatina es una proteína natural "ue se obtiene del col&geno procedente de los te$idos conectivos de animales 4la gelatina vegetal se conoce como agaragar3. ara su obtención, se extraen por )idrólisis las proteínas del col&geno obtenidas de la piel, )ueso )ervido ' molido, pezu-as, )uesos, tendones ' vísceras de ganado vacuno, porcino, ovino, e"uino ' avícola. Es decir, todo lo "ue no vale de los animales para venderlos en las carnicerías.
2
.<
=5o7 8u> e utili% %6u% detil%d% e0 l% 7e%7%*i0 de lo /edio de *ultivo
ara la preparación de medios, soluciones ' tampones, debe utilizarse agua destilada "ue )a'a sido sometida a controles periódicos "ue aseguren su calidad.• =e"uisitos del agua destilada: (e debe llevar un registro actualizado de los mis mos
Conductividad, p,
Contaminación microbiana,
5ibre de sustancias bactericidas
In)ibidoras o interferentes,
9.< El%)o7e u0% t%)l% i0di*%0do /edio de *ultivo? %*%7 e7/e0t%)le? ite/% i0di*%do7.
MEDIO DE
CULTIVO
M.O 'UE
CRECE
A+#CAR
!ERMENTAB
LE
TI5O DE
MEDIO
SISTEMA
INDICADOR
1gar EM< E.coli 5actosa 'Do sacarosa Medio de cultivo selectivo ' diferencial Indicadores: eosina ' azul de metileno. 1gar MacCon6e' E. coli, Citrobacter, (almonella, ()igella 5actosa Medio de cultivo selectivo ' diferencial Indicadores: cristal violeta, ro$o neutro.
1gar citrato de (imons lebsiella pneumoniae, (. t'p)imurium. citrato Medio de cultivo diferencial Indicadores: azul de bromotimol
1gar 5I1 (almonella spp glucosa Medio de cultivo diferencial Indicador: citrato de )ierro ' amonio, ' el tiosulfato de sodio, purpura de bromocresol 1gar (( (almonella ' ()igella. lactosa Medio de cultivo diferencial Indicadores: ro$o de metilo
1gar @(I . mirabilis, (. t'p)imurium, (. enteritidis. Alucosa o sacarosa, lactosa Medio de cultivo diferencial Indicadores: ro$o de fenol 1gar @CE( 41gar @iosulfato Citrato <ilis (acarosa3 Fibrio c)olerae, Fibrio para)emol'ticu s. sacarosa Medio de cultivo selectivo Indicadores: azul de timol ' azul de bromotimol
1gar manitol (tap)'lococcus aureus,
Manitol Medio de cultivo
Indicador ro$o de fenol
(tap)'lococcus epidermidis, lebsiella pneumonia. selectivo ' diferencial.
1gar bilis verde brillante. Coliformes totales ' fecales, lebsiella pneumoniae, Enterobacter spp. 5actosa ' sacarosa Medio selectivo Indicadores: ro$o de fenol