Alimento experimental

Con base a los resultados del bioensayo 1 (ver sección 6.1.4.) fue seleccionado el alimento con 38% de proteína cruda (PC), utilizándolo para el segundo experimento en el cual se utilizó alimento comercial (PIASA) como control. En la tabla I sección 5.2.4, se muestra la composición del alimento utilizado.

La metodología para la fabricación del alimento, fue igual a la descrita en la sección 5.2.3.

5.5.1. Sistema experimental

El segundo bioensayo consistió en evaluar la dieta seleccionada del bioensayo anterior que fue de 38% PC, para el cual se eligieron 3 tratamientos: 1) alimento con 38% PC; 2) dieta con 38%PC + mix de bacilos 1x10⁶ UFC/ml; 3) dieta con

40 38% PC+ mix levaduras; 1x10⁶ UFC/ml; 4) dieta control, (alimento comercial, PIASA, 35% PC).

El sistema de cultivo consistió en 12 acuarios de fibra de vidrio con capacidad de 60 litros (50 x 55 x 38 cm); cada uno con malla mosquitero para evitar la fuga de organismos, un calentador sumergible de 200 W (EBO-JAGER, Eheim GmbH y Co., KG Deizisau, Alemania) ajustable para mantener la temperatura promedio del agua a 28 ± 0.5 °C. Un exhaustor externo para airear el agua por medio de un soplador con 5 HP de capacidad y con ello conseguir valores de oxígeno disuelto iguales o mayores a 5 mg/L en los tanques de cultivo.

Los acuarios se abastecieron con agua de mar filtrada a través de un filtro de arena de 70 micras (Cristal-Flo, Modelo T240BP1 Santa Rite Industries Inc., Delavan, WI, EUA). El agua se bombeó hacia los acuarios, pasando previamente a través de filtros de arena (70m), de cartuchos (10 y 5m) y luz ultravioleta. Se realizó control artificial del fotoperiodo con un reloj automático (timer) con 12 horas de luz constante a partir de las 6:00 am y 12 horas de oscuridad con un sistema de iluminación de luz de neón de 200 W.

El segundo bioensayo tuvo una duración de 45 días se utilizaron juveniles de camarón con un peso inicial promedio de 0.14 ± 0.02 g, colocados aleatoriamente a una densidad de 10 organismos por acuario, con tres réplicas (acuarios) por tratamiento, (120 organismos en total). Los camarones tuvieron un periodo de aclimatación en los acuarios por dos días antes de iniciar el bioensayo.

Los tratamientos fueron adicionados diariamente, suministrando el alimento al 10% de la biomasa total de los organismos. Posteriormente la cantidad de alimento suministrada se ajustó en función del consumo diario, de tal forma que siempre hubiera un pequeño excedente. El alimento fue distribuido en tres raciones al día (9:00, 13:00 y 17:00 hrs).

41 Diariamente antes del recambio de agua y de las labores de limpieza, se monitorearon parámetros fisicoquímicos en el agua de cada acuario: temperatura, salinidad y oxigeno disuelto con un oximetro portátil (YSI, modelo 550A, YSI Incorporated, Yellowspring, OH, EUA). Se realizó la limpieza de los acuarios por sifoneo, eliminando mudas, organismos muertos, heces excretadas y restos de alimento, se realizó diariamente un recambio del 60% del volumen total del agua, esto se hizo por la mañana antes de ofrecer la primera alimentación; se contaron diariamente los organismos y el alimento residual, para estimar la supervivencia y el alimento consumido.

Se realizaron biometrías a los 15, 30 y 45 días de cultivo, pesando por separado a cada uno de los organismos de cada acuarios utilizando una balanza analítica de precisión de d= 0.01 g y un máximo de 200 g.

5.5.2. Obtención y conteo total de hemocitos circulantes (CTH)

Al finalizar cada uno de los bioensayos, se tomaron tres organismos al azar por tratamiento (primer bioensayo) y seis organismos por tratamiento (segundo bioensayo). La hemolinfa se extrajo de la base del pleopodo del primer segmento abdominal cerca del poro genital, utilizando una jeringa de 3.0 ml conteniendo un volumen de 500 µl de solución anticoagulante pre enfriada a 4°C la cual fue diseñada con base a los valores iónicos y osmóticos de la hemolinfa del camarón (450 mM NaCl, 10 mM KCl, 10 mM EDTA-Na2, 10 mM HEPES, pH 7.3, 850 mOsm kg^-1) Vargas-Albores et al. (1996). Posteriormente después de la extracción de hemolinfa, la muestra fue colocada en tubos Eppendorf estériles de 1.5 ml y se mantuvo en una cama de hielo, para su procesamiento inmediato.

42 El conteo total de hemocitos se realizó de acuerdo con la técnica descrita por Campa-Córdova et al, (2002). Se tomaron 100 µl de hemolinfa y se colocó en un tubo de Eppendorf conteniendo 400 µl de solución fijadora (anticoagulante + formaldehido, al 10%). Los hemocitos fueron contados por observación al microscopio utilizando una cámara Neubahuer, se depositó en la cámara un volumen conocido de muestra, y se contó el número de hemocitos totales (sin diferenciar hemocitos hialinos, semi-granulares y granulares) en cada cuadrante.

El número o conteo total de hemocitos se expresó en millones de hemocitos por ml.

5.5.3. Evaluación de parámetros zootécnicos

Se evaluaron los parámetros zootécnicos de los dos bioensayos realizados, donde los organismos fueron pesados individualmente utilizando una balanza modelo QT-200 con una capacidad máxima de 200 g y una precisión de 0.01 g. Después de haberles eliminado el exceso de agua con papel absorbente, se determinó:

supervivencia, peso corporal, consumo aparente de alimento y conversión alimenticia.

Supervivencia (%) = número final de organismos X 100 Número inicial de organismos

Consumo aparente de alimento= alimento suministrado – alimento residual Estimación visual del alimento residual en los acuarios.

Conversión alimenticia (CA) = alimento aparente consumido (g) Incremento en peso corregido (g)

43 5.5.4. Análisis estadísticos

Los resultados obtenidos de ambos bioensayos relacionados con las variables de peso final, conversión alimenticia y supervivencia fueron sometidas a un análisis de varianza de una vía (ANOVA Statistica versión 6.0). Cuando se encontraron diferencias entre los tratamientos, se utilizó la prueba de Tukey para determinar qué tratamientos fueron distintos o similares entre sí.

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