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92 ANEXO
ANEXO 1
EXTRACCIÓN DE CAPSAICINOIDES POR MACERACION FUNDAMENTO
El proceso de maceración consiste en remojar el material a extraer, debidamente fragmentado, con un disolvente apropiado, hasta que este penetre en los tejidos ablandando y disolviendo las porciones solubles (Lamarque et al., 2008).
MATERIALES Y METODOS:
MATERIA PRIMA
Venas de ají previamente acondicionadas MATERIALES
Matraces Erlenmeyer
Matraces con tapa rosca de 250 mL
Pipetas graduadas
Probetas
Vasos de precipitación
Peras de decantación
Capsulas de porcelanas EQUIPOS
Rotaevaporador
Balanza analítica con precisión 0.0001 g
Tamices
Molino
Shaker
93 REACTIVOS
Etanol Absoluto PA (99.9 %)
Perlas de cristal METODOS
Se toma 4 g de chile secado y molido, y se coloca en un matraz Erlenmeyer, añadiéndose 30mL de etanol para análisis al 99,9% de pureza.
Se coloca en agitación en el shaker a una temperatura de 60 ºC, 270 RPM, por un tiempo de 25 horas.
Se realiza una reextracción de la torta con 30 mL de etanol absoluto por 25 horas
Se dejó enfriar y posteriormente se filtra con papel filtro de paso rápido.
Se toma una alícuota de 6 mL y se procede a evaporar el extracto etanólico por destilación al vacío en rotaevaporador, a una temperatura de 40º C y a una presión de vacío de 20 inHg. por un tiempo aproximado de 15 min.
CUANTIFICACIÓN DE CAPSAICINOIDES POR CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA DE ALTA EFICIENCIA (HPLC)
AOAC- 995.03 con algunas modificaciones
Para el análisis de capsaicinoides, se inyectó muestras de 20 L preparadas de acuerdo a los análisis serán desarrolladas usando una columna Pinnacle II (C18, 5µm, 4,6x250mm, Restek). La elución de los solventes se operó a 1,5 mL/min con una fase móvil de 50% acetonitrilo y 50% agua acidificada (con 1,0% de ácido acético). La separación se realizó a temperatura ambiente. Antes de la inyección de la muestra, se filtró con membranas de nylon de 0,425 μm de porosidad y 47 mm de diámetro, Millipore Co. Los capsaicinoides fuerón monitoreados usando un detector a 280 nm.
Tiempo de separación: 20 min.