GUIA DE PROCEDIMIENTOS DE ANALISIS QUIMICO PROXIMAL Y FISICOQUIMICAS

DETERMINACIÓN DE HUMEDAD

Materiales y equipos:

- Vaso de precipitado de 50 ml.

- Estufa.

- Balanza de precisión.

PROCEDIMIENTO:

Pesar un vaso de 50 ml y agregarle 5g de muestra, colocarlos en una estufa a 100 – 105°C por 6 horas. Por la diferencia de peso se obtiene la humedad de la muestra y luego se lleva a porcentaje. La determinación de materia seca se hace por diferencia de peso entre el peso inicial de muestra (100%) y el porcentaje de humedad hallada, obteniéndose de esta manera y en forma directa el porcentaje de materia seca.

CÁLCULOS:

1. Peso de vaso.

2. Peso total = peso de vaso + peso de muestra.

3. Peso final = (después que sale de la estufa).

% Humedad = Peso total – Peso final x 100 Peso muestra

Bibliografía: AOAC, 1990. Parte 950.46

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNA CRUDA (Método semi- Micro kjeldahl)

FUNDAMENTO:

Se obtiene por destrucción de la materia orgánica, ya sea de un concentrado, forraje o cualquier compuesto, por acción del ácido sulfúrico en caliente, obteniéndose como resultado sulfato de amonio, en cual después es destilado a amoniaco.

a.- digestión de la naturaleza: por ebullición con H

2𝑆𝑂₄ concentrado y en presencia de catalizadores la materia orgánica (M.O.) se oxida a C𝑂₂ y agua, mientras que una parte del ácido se reduce a S𝑂_2.

M.O. + 𝐻₂S𝑂₄ = C𝑂₂₊ 2𝐻₂O + N𝐻₃

El nitrógeno transformado en N𝐻₃ se combina con la parte restante del ácido sulfúrico para formar sulfato de amonio.

2N𝐻₃ + 𝐻₂S𝑂₄ = S𝑂₄ (N𝐻₄) ₂

b. - Destilación: Mediante esta operación el nitrógeno que está en forma de sulfato de amonio, se ataca con un álcali fuerte que es la soda caustica (NaOH) para liberar el amoniaco. El vapor de agua arrastra el amoniaco y después de la condensación lograda con la ayuda del refrigerante, el hidrato de amonio se recibe en Erlenmeyer.

S𝑂₄ (N𝐻₄) ₂ + 2NaOH= S𝑂₄Na₂ + 2N𝐻₃ + 2𝐻₂O

El Erlenmeyer contiene: ácido bórico, con lo siguientes indicadores de pH, rojo de metilo y verde de bromocresol, formándose borato de amonio.

c.- titulación: se hace con ácido clorhídrico de normalidad conocida. El ácido clorhídrico reacciona con el borato de amonio y un pequeño exceso de ácido clorhídrico provocara un cambio del pH y el consiguiente viraje de la mezcla (verde turquesa→ rojo)

REACTIVOS Y EQUIPOS:

- Ácido sulfúrico concentrado.

- Catalizador (sulfato de potasio (100 g ) + sulfato de cobre (0.25 g).

- Ácido bórico + indicador de pH.

- Ácido clorhídrico, aprox. 0.05 N.

- Balones de digestión.

- Aparato de destilación de Kjeldahl y Bureta.

- Ácido bórico al 4%. (preparación: 1. Pesar 40 g de ácido bórico en fiola de 1 L. Disolver en agua caliente. 2. Adicionar 20 ml de verde de bromocresol al 0.1%. agitar. 3.

Adicionar 8ml de rojo de metilo 0.1%. agitar. 4. Enrazar a volumen (1 L).

Los indicadores deben ser, en lo posible, recientemente preparados. No mayor de tres meses).

PROCEDIMIENTO:

Pesar 0.2 – 0.3 g de muestra, luego agregar 1g del catalizador de oxidación (mezcla de sulfato de potasio y sulfato de cobre) para acelerar la reacción. Limpiar con un poco de agua el cuello del balón de digestión, agregar 2.5 ml de ácido sulfúrico concentrado y colocar el balón en la cocina de digestión. La digestión termina cuando el contenido del balón es completamente cristalino (si es necesario añadir gotas de peróxido) esto es cuando la digestión es muy lenta y difícil.

Colocar la muestra digerida en el aparato de destilación, agregar 5 ml de hidróxido de sodio concentrado e inmediatamente conectar el vapor para que se produzca la destilación. Conectar el refrigerante y recibir el destilado en un Erlenmeyer de 125 ml conteniendo 5 ml de la mezcla de ácido bórico más indicadores de pH. La destilación termina cuando ya no pasa más amoniaco y hay viraje con ácido clorhídrico valorado (aproximadamente 0.05 N). Anotar el gasto.

CÁLCULOS:

La cantidad de nitrógenos de la muestra se obtiene por la siguiente formula:

% de nitrógeno = ml de HCl gastado x Normalidad x Meq de 𝑁₂x 100 Gramos de muestra

Para obtener la cantidad de proteína total, se multiplica por el factor 6.25 (6.38 para la leche)

% proteína cruda = % nitrógeno x 6.25

Bibliografía: AOAC, 1990. Parte 984.1

DETERMINACIÓN DE EXTRACTO ETÉREO (Método de Soxhlet)

El solvente (hexano ó eter) extrae el extracto etéreo de la muestra y la deposita en el matraz previamente tarado (pesado) y por diferencia de peso se obtiene la cantidad de extracto etéreo de la muestra.

REACTIVOS Y EQUIPOS:

- 150 ml de solvente orgánico (hexano o éter) - Un extracto soxhlet.

- Papel de filtro - Matraz.

PROCEDIMIENTO

Para la determinación de grasa por este método se deben usar muestras deshidratadas por cualquier método indicado por la AOAC, pero en lo posible, la muestra debe ser previamente secada a peso constante a 95-100°C en una estufa al vacío a una presión de 25 Ib/(pulg cuadra) por un periodo de 5 horas y enfriadas posteriormente en una campana que contengan una sustancia deshidratante.

- Poner a secar en una estufa a 110°C el número de matraces que se van a usa.

- Luego de una hora, sacar los matraces de la estufa y ponerlas a enfriar en una campana que contengan una sustancia deshidratante.

- Pesar los matraces fríos.

- Pesar 3-5 g de muestra secada como se indica más arriba, empaquetarla en un pedazo de papel filtro Whatman #2.

- Colocar el paquete en el cuerpo del aparato soxhlet y luego agregar hexano hasta que una parte del mismo sea sifoneado hacia el matraz.

- Seguidamente, conectar la fuente de calor (cocina eléctrica).

- El solvente (hexano ó éter) al calentarse se evapora y asciende a la parte superior del cuerpo. Allí se condensa por refrigeración con agua y cae sobre la muestra, regresando posteriormente el matraz por sifón, arrastrando consigo el extracto etéreo. El ciclo es cerrado y la velocidad de goteo del hexano debe ser de 45-60 gotas por mínimo.

- El proceso dura 3 horas. El matraz debe secarse del aparato cuando contiene poco hexano o éter (momentos antes de que este sea sifoneado desde el cuerpo).

- Evaporar el hexano remanente en el matraz en una estufa y enfriarla en una campana que contenga sustancias deshidratantes.

CÁLCULOS:

%Extracto Etéreo = Peso matraz con grasa – Peso matraz vacío x 100

Gramos de muestra

Bibliografía: AOAC, 1990. Parte 948.16

DETERMINACIÓN DE FIBRA CRUDA

La fibra cruda se determina eliminando los carbohidratos solubles por hidrolisis a compuestos más simples (azucares) mediante la acción de los ácidos y álcalis débiles en caliente, y las cenizas (por diferencia de peso después de la ignición de la materia fibrosa obtenida).

REACTIVOS Y EQUIPOS - Ácidos sulfúrico 1.25%.

- Hidróxido de sodio 1.25%.

- Etanol.

- Agua destilada.

- Vasos de 600 ml.

- Papel de filtro.

- Capsula de porcelana.

- Bomba de vacío.

- Papel de fenolftaleína.

- Estufa.

- Mufla.

- Cocina eléctrica.

PROCEDIMIENTO:

1.- Digestión acida:

Pesar 3 gramos de muestra (libre de grasa) en un vaso de 600 ml. Hervir durante 30 minutos con 200 ml de 𝐻₂S𝑂₄ al 1.25%. Luego de 30 minutos de hervido, filtrar y lavar con agua destilada caliente neutralizar la acidez.

2.- Digestión alcalina:

Añadir 200 ml de NaOH 1.25%. Hervir por 30 minutos (cuidar durante todo este tiempo). Filtrar al vacío en una capsula de cerámica porosa, lavando con agua destilada caliente. Luego poner a la estufa por 2 horas y pesar. Este peso se llamara 𝑃₁. Luego se coloca a la mufla para eliminar la materia orgánica y obtener las cenizas. Pesar el residuo y este peso será 𝑃_2. La cantidad de muestra que se use depende de la naturaleza de ella.

CÁLCULOS:

𝑃₁ = Peso de capsula + muestra (desecada) (g).

𝑃₂ = Peso de capsula + muestra incinerada (ceniza) (g).

W = Peso de muestra (g).

% Fibra Cruda = 𝑃₁-𝑃₂ x 100 W

Bibliografía: AOAC, 1990. Parte 962.09

DETERMINACIÓN DE CENIZA

La muestra se incinera a 600°C para quemar todo el material. El material inorgánico, que no se destruye a esta temperatura se le llama ceniza.

EQUIPOS:

a) Horno de incineración (Mufla).

b) Crisol de porcelana.

c) Desecador, con desecante de perclorato de magnesio o silicagel.

PROCEDIMIENTO:

a) Coloque el crisol limpio en un horno de incineración a 600°C durante una hora. Luego traslade el crisol del horno al desecador y enfríelo a la temperatura del laboratorio.

Péselos tan pronto como sea posible para prevenir la absorción de humedad, usando siempre pinzas de metal para manejar los crisoles después de que incineran o secan.

b) Pesar 2.0 g de muestra en un crisol de porcelana previamente tarado. Colóquelo en un horno incinerador y manténgalo a temperatura de 600°C durante 3 a 5 horas.

c) Luego se saca de la mufla y se traslada el crisol a un desecador para enfriarse a temperatura ambiente. Cuando este frio, pese el crisol tan pronto como sea posible para prevenir la absorción de humedad y registre el peso.

d) Guarde la muestra de ceniza para el caso que se deseen realizar determinaciones de minerales posteriormente.

CALCULO:

% de ceniza = (Peso de crisol + ceniza) – Peso de crisol x 100 Peso de la muestra

Bibliografía: AOAC, 1990. Parte 942.05