MATERIAL Y METODOS 1. Equipos y Materiales

 Autoclave

 Tubos de prueba

 Micropipetas

 Solución peptonada al 0,1%

 Placas petrifilm

2. Procedimiento

a. Refrigerar las bolsas cerradas y usar antes de la fecha de caducidad impresa en la bolsa. Mantener las bolsas cerradas de nuevo a <21´C, a<50%HR. No refrigerar las bolsas abiertas.

b. Preparar una dilución del producto alimenticio a 1:10 o superior.

Pesar o pipetear la muestra en una bolsa Whirlpac, bolsa

136

Stomacher, botella de dilución o cualquier otro contenedor estéril apropiado.

c. Añadir una cantidad adecuada de diluyente (agua peptonada al 0.1%)

d. Mesclar u homogenizar la muestra mediante los métodos usuales.

e. Colocar la placa petrifilm en una superficie plana. Levantar el film superior.

f. Con una pipeta perpendicular a la placa petrifilm colocar 1ml de muestra en el centro de film inferior.

g. Bajar el film superior con cuidado evitando introducir burbujas de aire. No dejarlo caer.

h. Con cuidado, ejercer una presión sobre el aplicador en el film superior sobre el inoculo.

i. Con cuidado, ejercer una presión sobre el aplicador para repartir el inoculo sobre el área circular. Girar ni deslizar el aplicador.

j. Levantar el aplicador, esperar un minuto a que solidifique el gel.

k. Incubar las placas petrifilm cara arriba en pilas de hasta 20 placas, según las normas locales de incubación x 24 ± 2 horas y realizar el recuento de coliformes y E.coli. Algunas colonias E.coli necesitan más tiempo para que se evidencie la precipitación azul, entonces reincubar las placas por 24 ± 2 horas y realizar nuevamente el recuento.

l. Leer las placas petrifilm en un contador de colonias standard.

137 ANEXO 4

BALANCE DE MATERIA DEL ACEITE ESENCIAL DE PACHA MUÑA

PACHA MUÑA

SECADO SELECCIONADO

MOLIENDA

RECOLECCIÓN TAMIZADO

EXTRACCIÓN DEL ACEITE CON SOLVENTE CO2

30 Kg.

28 Kg.

21 Kg.

19,4 Kg.

19 Kg.

0.66 kg.

100 %

Plantas con daño biológico

93.3 %

70.0 %

Liberación de agua en forma de vapor. (4 kg.)

Perdida por equipo (1.6 kg.)

Perdida por equipo (0.4 kg.) 64.7 %

63.3 %

Fibra de la planta + otros residuos

2.2 %.

Rendimiento de la operación = 2.2%

Bach = 150g Masa = 3.3g Volumen = 2.75

138 ANEXO 5

CROMATOGRAFÍA DE GASES DEL ACEITE ESENCIAL DE PACHA MUÑA

139

140

141

142 ANEXO 6

FOTOGRAFÍA CORRESPONDIENTE A LA OBTENCIÓN DEL ACEITE ESENCIAL DE PACHA MUÑA (Hedeoma Mandoniana Wedd)

Foto 1.Recolección de la Pacha Muña(Hedeoma Mandoniana wedd).

Foto 2. Secado de la Pacha Muña (Hedeoma Mandoniana wedd).

Foto 3. Tamizado de la Pacha Muña (Hedeoma Mandoniana wedd).

Foto 4. Extracción del aceite esencial de pacha muña (Hedeoma Mandoniana wedd)

por el método de fluidos supercríticos.

Foto 5. Recepcion del aceite pacha muña (Hedeoma Mandoniana wedd).

Foto 6. Aceite de pacha muña (Hedeoma Mandoniana wedd).

143 ANEXO 7

FOTOGRAFÍA CORRESPONDIENTE AL ANÁLISIS BIOMÉTRICO DE LA LECHUGA (Lactuca Sativa L.)

Foto 7. Clasificación de la Lechuga (Lactuca Sativa L.).

Foto 8. Pesado de la Lechuga (Lactuca Sativa L.).

Foto 9. Diámetro de la Lechuga (Lactuca Sativa L.)

Foto 10. Largo de la Lechuga (Lactuca Sativa L.)

144 ANEXO 8

FOTOGRAFÍA CORRESPONDIENTE AL TRATAMIENTO DE LAS LECHUGAS (Lactuca Sativa L.) CON ACEITE ESENCIAL DE PACHA MUÑA

(Hedeoma Mandoniana Wedd).

Foto 11. Pesado el aceite esencial de pacha muña (Hedeoma Mandoniana wedd)

Foto 12. Pesado del polisorbato 80 (Tween)

Foto 13. Unimos el Tween 80 con agua destilada.

Foto 14. Unimos el Tween 80, agua destilada y el aceite esencial de pacha muña (Hedeoma

Mandoniana wedd)

foto 15. Solucion de acete esencial de pacha muña (Hedeoma Mandoniana wedd).

nm

foto 16. Primer lavado de la lechuga (Lactuca Sativa L.).

145 foto 17. escurido de la lechuga (Lactuca Sativa

L.).

s ddqeeeeeeeeeeeeeeeeeeeer e

foto 18. Sumergido de la lechuga (Lactuca Sativa L.) en las concentraciones.

Foto 19. centrifugado de la lechuga (Lactuca Sativa L.) con el tratamiento

Foto 20.llena de las lechuga (Lactuca Sativa L.) con el tratamiento en las bolsas de

polietileno.

Foto 21. Envasado al vacio de la lechuga (Lactuca Sativa L.) con el tratamiento.

Foto 22. Envasado al vacio de la lechuga (Lactuca Sativa L.) con el tratamiento.

Foto 23. Almacenado de las lechugas (Lactuca Sativa L.) a 4°C

Foto 24. Las lechugas (Lactuca Sativa L.) a los 15 Días de almacenamiento.

146 ANEXO 9

FOTOGRAFÍA CORRESPONDIENTE A LOS ANÁLISIS FISICOQUÍMICOS DE LAS LECHUGAS (Lactuca Sativa L.) CON ACEITE ESENCIAL DE

PACHA MUÑA (Hedeoma Mandoniana Wedd).

Foto 25. Preparación de la muestra de

lechuga (Lactuca Sativa L.). con tratamiento. Foto 26. Licuado de la muestra de lechuga (Lactuca Sativa L.). con tratamiento.

Foto27. Filtrado de la muestra de lechuga (Lactuca Sativa L.) con tratamiento.

Foto 28. Análisis de acidez, se añadió 3 gotas de fenolftaleína.

Foto 29. titulación de las lechugas (Lactuca Sativa L.) con tratamiento.

Foto 30. Análisis de acidez de las lechugas (Lactuca Sativa L. con tratamiento.

Foto 31. Análisis de Ph de las lechugas (Lactuca Sativa L. con tratamiento.

Foto 32. Humedad de las lechugas (Lactuca Sativa L. Pesado de la muestra.

147 Foto 33. Humedad de las lechugas (Lactuca Sativa L. con tratamiento. Pesado del crisol.

Foto 34. Deshidratado de las lechugas (Lactuca Sativa L. con tratamiento.

Foto 35. Humedad de las lechugas (Lactuca Sativa L. con tratamiento.

148 ANEXO 10

FOTOGRAFÍA CORRESPONDIENTE A LOS ANÁLISIS MICROBIOLÓGICO DE LAS LECHUGAS (Lactuca Sativa L.) CON ACEITE ESENCIAL DE

PACHA MUÑA (Hedeoma Mandoniana Wedd).

Foto 36. Preparación del caldo nutritivo para Determinación de Salmonella sp.

Foto 37. Agregar 25g de muestra en el caldo nutritivo.

Foto 38. Agregar en tubos de precipitación 10ml de caldo selenito cistina y caldo

tetrationato para agregar el caldo enriquecido en los tubos.

Foto 39. Preparación del SS. Agar para sembrar en el medio el selenito cistina y

caldo tetrationato.

Foto 40. Sembrar en el medio el selenito cistina y caldo tetrationato.

Foto 41. Incubar a 35°C x 24 +/- 2.

Foto 42. Determinación de Salmonella sp.

Foto 43. Determinación de Salmonella sp.