Regresión y correlación entre las características evaluadas

70

71 porque los coeficientes de determinación son bastante bajos, aun que la regresión lineal es significativa por tanto la prueba de vitalidad no nos facilitaría hacer la predicción con confianza.

Pero en la regresión de Host post-congelado vs Host en semen fresco se obtuvo resultados superiores al de la prueba de vitalidad y mucho mejor del Host post- congelado vs Host post-refrigerado con regresión lineal altamente significativa, donde se obtuvo coeficientes de regresión de 0,51 y coeficientes de determinación de 0,49, valores superiores a los obtenidos con MIP y vitalidad, lo que significa que el promedio de Host post-congelado aumentara en 0,51% cuando el Host post-refrigerado aumenta en 1% y el coeficiente de determinación indica que el 49% de los cambios en Host post congelado se asocian a los cambios del host post-refrigerado, resultando, 51% de variabilidad que no es explicada por la regresión; hecho que no sucede al regresionar MIP o vitalidad los cuales muestran valores más bajos y no podrían a ayudar a predecir el porcentaje de espermatozoides hábiles al post congelado.

Las correlaciones entre las características evaluadas en semen fresco, semen post refrigerado y post congelado se muestran en el anexo N° 28. Donde se obtuvo correlaciones medias entre MIP vs vitalidad y MIP vs Host, pero al correlacionar vitalidad vs Host se obtuvo correlaciones altas, ejemplo Vitalidad en semen puro vs Host en semen puro una correlación de 0,88 a un (P<0,01) y todas tienen correlación positiva.

Resultados similares fueron encontrados por Bedoya et al., (2003) en Colombia y pudo evidenciar que hay una asociación positiva entre los espermatozoides con integridad funcional de la membrana plasmática y porcentaje de espermatozoides vivos.

72 CONCLUSIONES

Según los resultados del presente trabajo de investigación, se puede deducir las siguientes conclusiones:

1. A la evaluación de motilidad individual progresiva en semen al post refrigerado, con el dilutor Bioxcell se obtuvo 85,64 ± 2,32 % y con AndroMed 86,54 ± 2,24 %, que a la prueba de comparaciones de medias t Student se encontró diferencias significativas (P<0,05), mientras al post congelado con Bioxcell se obtuvo 63,70 ± 1,85 % y con AndroMed 65,04 ± 2,05 %, que a la prueba de medias, se encontró diferencias altamente significativas (P<0,01), con mejor efecto del dilutor AndroMed al post refrigerado y post congelado.

2. Con la prueba de vitalidad con el dilutor Bioxcell se obtuvo 77,38 ± 4,31 % de espermatozoides vivos y con AndroMed 78,85 ± 4,52%, encontrándose diferencias estadísticas significativas (P<0,05), mientras al post congelado con Bioxcell se obtuvo 60,73 ± 5,07 % y con AndroMed 63,47 ± 4,61 % de espermatozoides vivos, que a la prueba de comparaciones de medias t Student se encontró diferencias altamente significativas (P<0,01) entre dilutores, con mejor efecto del dilutor AndroMed en los dos momentos.

3. Con la prueba hipo-osmótica (Test de Host), que permitió evidenciar espermatozoides con membrana intacta y osmóticamente activa, al post refrigerado con el dilutor Bioxcell se obtuvo 66,00 ± 4,98 % y con AndroMed 67,90 ± 5,40 % de espermatozoides que reaccionaron positivamente al test de Host, que a la prueba de medias se encontró diferencias estadísticas significativas (P<0,05), mientras al post congelado con Bioxcell se obtuvo 43,44 ± 3,29 % y con AndroMed 45,93 ± 3,61 % que al prueba de t Student se

73 encontró diferencias altamente significativos (P<0,01) entre dilutores. Además que del semen puro al post congelado con Bioxcell se perdió 39% de espermatozoides viables y con AndroMed 36%, con mejor efecto al post refrigerado y post congelado del dilutor AndroMed. De aquí que esta prueba de Host debe considerarse en el criterio de selección de toros donadores de semen.

4. Al hacer las regresiones lineales entre las características evaluadas , con el Test de Host se obtuvo regresiones lineales altamente significativos (P<0,01), con coeficientes de regresión y determinación medios a altos, mayores que cuando se hace la regresión lineal con la prueba de MIP y vitalidad, entonces la prueba de Host sería un buen indicador de la calidad seminal y se podría predecir mejor, espermatozoides hábiles al post congelado.

5. En semen puro se encontró correlación alta, positiva y altamente significativa (P<0,01) entre porcentaje de espermatozoides vivos y porcentaje de espermatozoides con membrana intacta (test de Host). También se observó correlaciones positivas moderadas y significativas al post refrigerado y al post congelado entre MIP, Vitalidad y espermatozoides que reaccionan positivamente al test de Host.

74 RECOMENDACIONES

En base a los resultados y conclusiones del estudio, se dan las siguientes recomendaciones:

1. Continuar evaluando la composición de los dilutores usados en la congelación de semen para ver qué elementos están influenciando en los resultados favorables.

2. Emplear el dilutor AndroMed como dilutor de semen bovino, por haber mostrado mejores resultados en la viabilidad espermática al post congelado.

3. Aplicar otras pruebas especializadas para evaluar la capacidad fecundante del semen post descongelamiento, para obtener mejores resultados en los parámetros reproductivos post inseminación.

4. Incluir pruebas complementarias de funcionalidad de los espermatozoides, en la evaluación rutinaria del semen; ya que proporcionan información adicional sobre la capacidad fecundante de las muestras seminales.

5. Realizar evaluaciones de fertilidad de los dilutores en campo por inseminación Artificial.

6. Evaluar otros dilutores.

75 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

AIRES VA, HINSCH KD, MUELLER-SCHLOESSER F, BOGNER K, MUELLER- SCHLOESSER S, HINSCH E. 2003. In vitro and in vivo comparison of egg yolkbased and soybean lecithin-based extenders for cryopreservation of bovine semen. Alemania. Theriogenology; 60: 269–79.

AMIRAT L, TAINTURIERA D, JEANNEAUA L, THORINA C, GE´RARDB O, COURTENSC J, MARC A, 2004. Bull semen in vitro fertility after cryopreservation using egg yolk LDL: a comparison with Optidyl1, a commercial egg yolk extender. Laboratory of Biotechnology and Pathology of Reproduction, National Veterinary School of Nantes, BP 40706, 44307 Nantes, France Theriogenology 61: 895–907.

ALVARADO E, PROSPERO C. 2005. Manual de Inseminación Artificial en Vacunos Universidad Nacional Agraria la Molina. Servicio de Reproducción Animal–

Programa de Mejoramiento Animal. Lima – Perú. 62 p.

ALTHOUSE, GC, LU KG, 2005. Bacteriospermia in extended porcine semen.

Theriogenology; 63: 573–84.

ARAUCO F. 1995. Manual de inseminación en el ganado vacuno de leche. Facultad de Zootecnia UNCP. Perú.

BARACALDO M, BARTH A, Y BERTRAND W. 2007. Steps for freezing bovine semen:

from semen collection to the liquid nitrogen tank In: Ivis reviews in veterinary medicine, I.V.I.S. (Ed.). International veterinary information service, ITHACA NY (www.ivis.org), last updated: 30-jan.-2007; r0105.0107.

76 BRAGA M, FRANCO R, RODRIGUES L, GALELI G, OLIVEIRA K, REIS F, NISHIKAWA M AND MOURA E. 2006. Comparison of Andromed^®, Bioxcell^®, and Botu-Bov^® extenders for cryopreservation of bull sexed semen. Goyaike Brazil agropecuaria ltd, Uberaba, minas Gerais, Brazil Reproduction, Fertility and Development 19(1) 172–172.

BEDOYA E, VASQUEZ A, RIVERA M, CORREA G, TRUJILLO A. 2003. Evaluación de la integridad funcional de la membrana plasmática de espermatozoides bovinos mediante el Test Hiposmotico (Host). Revista de la facultad nacional de agronomía. Volumen 56, nº 2.

BRITO LFC, BARTH AD, BILODEAU S, PANICH PL, KASTELIC JP. 2003. Comparison of methods to evaluate the plasmalemma of bovine sperm and their relationship with in vitro fertilization rate. Theriogenology 60: 1539-1551.

BORQUE M, SAGUEZ A. 1992. Variaciones estacionales de los niveles de fructosa, ácido cítrico y proteínas totales en eyaculados de moruecos de raza Manchega.

Invest Agr Prod Sanid Anim 7(3): 235-240.

BUSCH W, LÖHLE K, PETER W. 1982. Künstliche Besamung bei Nutztieren. 1. Aufl.

Gustav Fischer Verlag, Jena; 230–363.

CATENA M, CABODEVILA J. 1999. Evaluación de semen de bovino congelado. Fac.

de Cs. Veterinarias. Univ. Nac. del Centro de la Prov. de Bs. As. Campus Universitario, (7000) Tandil. Trabajo presentado en el Simposio Internacional de Reproducción Bovina (UNCPBA), Tandil, 6 de agosto de 1999.

77 CABRERA P, MELLISHO, E. 2001. Evaluación seminal de toros del Banco Nacional de Semen -2000. Programa de Mejoramiento Animal la Molina. Servicio de reproducción animal. Junio 2001.

CHEN Y, FOOTE R.H, BROCKETT C.C.1993. Effect of sucrose, trehalose, hypotaurine, taurine and blood serum on survival of frozen bull sperm. Cryobiology 30: 423- 431.

CORREA JR, ZAVOS PM. 1994. The hipoosmotic swelling test: Its employment as an assay to evaluate the functional integrity of the frozen-thawed sperm characteristics assessed via the routine semen analysis, sperm functional test and fertility of bulls in an artificial insemination program. Theriogenology. 48:

721-731.

CORREA J.R., HEERSCHE G. Y ZAVOS P.M. 1997. Sperm Membrane Functional Integrity and response of frozen-thawed bovine spermatozoa during the hipoosmotic swelling tets incubation at varying temperatures. Theriogenology;

47: 715-721.

COLENBRANDER B, GADELLA BM, STOUT T. 2003. The predictive value of semen analysis in the evaluation of stallion fertility. Vol 38 Issue 4 page 305 august 2003. Disponible en la world wide web: htto//www.blackwell- synergy.

Com/doi/abs/ 10.1046/j.1439-0531.2003.00451.

DECUADRO - HANSEN. 2001a. Proper steps for bull semen dilution and freezing. IMV Technologies France.

78 DECUADRO-HANSEN G, CAMUS G, DELHOMME P, AND DUMONT B. 2001b. Can good fertility be achieved with low concentration bull sperm frozen with egg yolk free extender IMV Technologies France.

DEJARNETTE, MEL. 2007. Artificial Insemination Technique in Cattle. Select Sires, INC, 11740 – USA, 42, Plan City OH.

DE LEEUW F.E, COLENBRANDER B, VERKLEIJ A.J. 1990. The role membrane plays in cold shock and freezing injury. Reprod Dom Anim Suppl 1: 95-104.

DUCCI M, GAZZANO A, VILLANI C, CELA V, ARTINI PG, MARTELLI F, GENAZZANI AR. 2002. Membrane integrity evaluation in rabbit spermatozoa. Eur J Obst Gynecol Reprod Biol [Internet], [10 abril 2007]. Disponible en:

http://www.ncbi.nlm.nih. gov/entrezlquery.fcgi.

ENGLAND, G. 1993. Cryopreservation of dog semen: a review. J Reprod Fertil Suppl 47:

243–55.

FISER, P.S. Y FAIRFULL, R.W. 1986. The effect of rapid cooling (cold shock) of ram semn, photoperiod, and egg yolk in diluents on the survival of spermatozoa before and after freezing. Criobology. Vol. 23 (6):518-24.

GARCÍA JV. 1984. Criopreservadores concepto y manejo. Biol Clin Hematol; 6 (219).

Guyton, A. 2006. Fisiología Médica. 11va Edición Elsevier.

HAFEZ, E.S.E. 2000. “Reproducción e Inseminación Artificial en Animales”. Séptima

79 edición. Editorial Interamericana Mc Graw- Hill. México. Pp387-395.

HAMMERSTEDT R H, GRAHAM J K AND NOTAN, J P. 1990. Cryopreservation of mammalian sperm: what we ask them to survive. j. Androl. 11: 73-88.

HIDALGO C, TAMARGO C, DÍEZ C. 2007. Análisis del semen Bovino, información ganadera Área de Genética y Reproducción Animal. [email protected], Boletín informativo del serida - Nº 2.

HOLY, L. 1983. Bases biológicas de la reproducción bovina. Editorial Diana. México DF 464 P.

ILLERA, M. 1994. Reproducción de los animales domésticos. Editorial Aedos, S.A.

Barcelona.390 p.

JANETT F, KEO S, BOLLWEIN H, HÄSSIG M, THUN R. 2005. Comparison of

AndroMed, Bioxcell and Triladyl extender for cryopreservation of bull semen.

Schweiz Arch. Tierheilk. 147: 62 (Abstract, Poster).

JONES R.C, STEWART D.L. 1979. The effects of cooling to 5ºC and freezing and thawing on the ultrastructure of bull spermatozoa. J Reprod Fertil 56: 233-238.

LOZANO J, DELGADO L , GÓMEZ C, ÁVILA L, MADERO J. 2006. Fundamentos de Criopreservación . Basic Points in Cryopreservation. Revista Colombiana de Obstetricia y Ginecología Vol. 57 No. 4 (291-300).

MATHEWS K.M, 2003. Biochemistry. Third edition. Addison Wesley; 2003 p. 363-92.

80 MAXWELL, W.M.C.; STOJANOV, T. 1996 - Liquid storage of ram semen in the absence

or presence of some antioxidants. Reprod Fertil Dev 8: 1013-20.

MENDOZA JA, DULIN P, WARREN T. 2000. The lower hydrolysis of ATP by the stress protein GroEL is a major factor responsible for the diminished chaperonin activity at low temperature. Cryobiology. 41:319-23.

NECMETTIN, T. 2001. Boga Spermalarinin Farkh Sulandiricilar ile Dondurulmasi ve in vitro Degerlendirilmesi. Freezing of bull semen with different extender and in vitro evaluation. Ankara Universities Saglik Bilimleri Enstitus. 2001ANKARA.

OMEGA C, JUAREZ-MOSQUEDA M, HERNANDEZ J, VALENCIA J, 2005.

Cryopreservation of bull spermatozoa alters the perinuclear theca. Departamento de reproducción, facultad de medicina veterinaria y zootecnia, universidad nacional autónoma de México. Theriogenology 66 (2006).7: 2-3.

PÉREZ B.; GONZÁLEZ J.L.; CLEMENTE M.J. Y GARCÍA- CASADO P. (1999). El test de endósmosis (HOST) en semen de ganado porcino. Albéitar; 30:16-17.

PESCH S. HOFFMANN B. 2007. Cryopreservation of Spermatozoa in Veterinary Medicine, J. Reproduktionsmed. Endokrinol. 2007; 4 (2), 101-105

PEGG DE. 2002. The history and principles of cryopreservation. Semen Reproduction Med; 20: 5–13.

PORCU E. 2001. Oocyte Criopreservation. En: Gardner DK, Weissman A, Howles CM, Shoham Z (eds). Textbook of Assisted Reproductive Techniques: Laboratory and Clinical Perspectives. London, UK: Martin Dunitz.

81 RADO C.M 2006. Prueba de integridad de membrana citoplasmática (endosmosis) en células espermáticas de toros jóvenes. Tesis para optar grado de magister en producción animal Universidad Nacional Agraria la Molina. Lima-Perú. 2006.

87p.

SANTIANI, A.; SANDOVAL, R.; RUIZ, L. Y CORONADO, L. 2002. Estudio de la integridad de membrana en espermatozoides de ovino mediante la prueba de estrés hiposmótico.

http://www.appaperu.org/appa2004/resumenes/fisiologia/057.doc

SANCHEZ A.; RUBILAR J. AND GATICA M.V.2002. Evaluation of fresh and frozen canine semen by hypoosmotic swelling test. Arch Med Vet; 34 (1): 123-130.

SALAMON, S.; MAXWELL, WMC. 1995. Frozen storage of ram semen. I processing freezing, thawing and fertility after cervical insemination. Animal Reproduction Science. Pg 185-249.

SEPÚLVEDA, N. 1999. Biotecnología reproductiva. Curso de Ganadería, Temuco, Diciembre de 1999.

SEIDEL, G. 2006. Modifying oocytes and embryos to improve their cryopreservation.

Therioqenology. 65:228-35.

SILVA PF, GADELLA, BM. 2006. Detection of damage in mammalian sperm cells.

Theriogenology; 65: 958–78.

82 SIMMET, C. 2006 a. Minitüb Tecnología de Reproducción Animal Bovino Abfüll- und Labortechnik GmbH & Co. KG Hauptstraße 41 84184 Tiefenbach Germany.

www.minitube.de.

SIMMET, C. 2006 b. Triladyl® Medio de conservación para la Congelación de semen bovino El estándar para la producción de semen bovino con diluyente con yema de huevo. Abfüll- und Labortechnik GmbH & Co. KG Hauptstraße 41 84184 Tiefenbach Germany.

STEEL R. G. D Y TORRIE J. H, 1980. Principles and Procedures of Statistics. A biometrical approach. 2nd Ed. McGraw Hill Inter. Book Co.Tokyo, Japan.

STRADAIOLI G., NORO T., SYLLA L., MONACI M. 2007. Decrease in glutathione (GSH) content in bovine sperm after cryopreservation: Comparison between two extenders. Dipartimento di Scienze Animali, Universita` di Udine, via delle Scienze 208, 33100 Udine, Italy. Received in revised form 17 January 2007;

accepted 20 January 2007. Theriogenology 67 (2007) 1249–1255.

STORNELLI M.C., CM TITTARELLI, CA SAVIGNONE, MA STTORNELLI. Efecto de los procesos de criopreservación sobre la fertilidad seminal. Analecta Veterinaria 2005; 25 (2): 28-35.

TAMULI MK, WATSON PF. 1992. Effects of temperature of incubation on the development of resistance to cold stress in boar spermatozoa incubated for up 24 hours. Proc 12th ICAR Congress. The Hague. p 1484-1486.

83 TYLER JP, KIME L, COOKE S, DRISCOLL GL. 1996. Temperature change in cryo-

containers during short exposure to ambient temperatures. Hum Reprod; 11:

1510–12.

VÁSQUEZ JM, MARTÍNEZ EA, ROCA J, BLANCO O, LUCAS X, MATAS C. 1997.

Hypoosmotic swelling of boar spermatozoa compared to other methods for analyzing the sperm membrane. Theriogenology 47: 913-922.

VAN WAGTENDONK-DE A, HARING R, KAAL-LANSBERGEN L Y DEN DAAS J. 1999.

Fertility results using bovine semen cryopreserved with extender based on Egg Yolk y Soy bean extract. Elseiver science. Therogenology 2000 Jul 54: 57-67.

WHITE, I.G., 1993. Lipids and calcium uptake of sperm in relation to cold shock and preservation: a review. Reprod Fertil Dev 5: 639-658.

WOELDERS H., 1997. Fundamentals and recent development in cryopreservation of bull and boar semen. Veterinary Quarterly 19 135–138.

WATSON, P.F. (1995) - Recent develpoments and concepts in the cryopreservation of spermatozoa and the assessment of their post-thawing function. Reprod Fert Dev 7: 871-891.

84