BACILOS GRAM NEGATIVOS
CAMPYLOBACTER A· Características
Pertenece a un grupo de bacilos Gram negativos móviles, son bacilos cortos y tienen forma de coma ó yunque de bueyes. Una de las características más importantes es que es móvil, esto gracias a un flagelo únicos y polar (está en un polo).
Su reservorio es el tracto intestinal de muchos animales y producen infecciones gastrointestinales y algunas especies pueden llegar a provocar de forma rara infecciones extraintestinales a diferentes niveles cuya condición es que el paciente esté inmuno- deprimido.
No fermentan carbohidratos y son catalasa y oxidasa positivas. La especies más importantes son:
C. jejuni C. coli
C. fetus subespecie fetis C. laridis
B·- Aislamiento
Si viven en el tracto intestinal y producen enfermedades gastrointestinales, las muestras a analizar son heces.
Se siembra inmediatamente la muestra en medios selectivos, si hubiera que posponer el cultivo hay que conservarlo en medios de transporte especiales para esta bacteria (Cary- Blair, Campy Thio). En estos medios resisten de 1-2 semanas a 4ºC.
Condiciones que hay que aportar al medio para que crezcan bien: 1·- Empelo de medios selectivos
2·- Empleo de una atmósfera reducida de oxígeno porque son microaerófilos (Cantidades pequeñas de oxígeno)
1·- Medios selectivos que requieren los campylobacter:
1·- Medio Skirrow: tiene sangre de caballo, vancomicina, polimixina B y trimetropina.
2·- Medio Campy-BAP 3·- Medio Butzler
2·- Ambiente microaerófilo: para conseguirlo se pueden usar 3 sistemas: 1·- Evacuación-reemplazo 5% O2, 10% CO2 y un 85% N2
2·- Campanas de anaerobios dentro de las que se colocan una bolsas comerciales (campy-pack) que consiguen ese ambiente adecuado.
3·- Bolsas de plástico llamadas Biobag: se colocan dentro de una bolsa unas cuantas placas y dentro se genera el ambiente adecuado.
3·- Temperatura: se incuba a 42ºC y tenemos que esperar 72 horas para descartarlos como negativos. También pueden crecer a 37ºC pero a 42 crecen bien y se inhibe el crecimiento de otras.
Si lo que queremos cultivar otras especies de campylobacter que no sean jejuni, ni coli utilizamos 37ºC sin cefaloesporinas.
Hay otros 2 métodos alternativos para el cultivo de campylobacter.,
Ambos se basan en la utilización de filtros de acetato de celulosa que tienen un tamaño de poro determinado que permite el paso del campylobacter pero no de otras bacterias, ni coliformes.
1·- Un sistema sería diluir el filtrado y sembrarlo en las condiciones antes mencionada 2·- Otro consiste en dejar el filtro encima de la placa con una gota de heces y dejarlo una noche a la mañana siguiente se retira el filtro donde quedaron separadas de otras bacterias.
El campylobacter como es móvil y por gravead durante la noche se desplaza hasta la placa y luego se incuba.
También se puede cultivar a partir de sangre, ocurre en enfermedades que no son la diarrea producida por campylobacter sino cuando se trata de una sepsis. Ejemplo: pacientes con SIDA (fetus y laridis). Crecen bien en casi todos los medios que contengan sangre.
C·- Identificación
La morfología de las colonias no es ilustrativa, forma colonias grisáceos, con aspecto mucoso y no hemolíticos. A las que crezcan y sean sospechosas se les hace la tinción de Gram donde se observarán BGN y en forma de coma.
En cultivos viejos pueden perder esta forma y adquirir formas cocoides (redondos). Para diferenciarlos de otras especies utilizamos las siguientes pruebas:
• Crecimiento a diferente temperatura
• Sensibilidad al ácido nalidixico y cefalotina • Producción de SH en medio TSI
• Reducción de nitratos • Hidrólisis de hipuratos • Hidrólisis de indoxilacetato D·- Patogenia
El campylobacter jejuni: provoca infecciones gastrointestinales, es el que aparece con mayor frecuencia. Causa gastroenteritis con diarrea, eliminación de sangre en heces, dolor abdominal aguda, dolor de cabeza y fiebre.
Esta especie es sensible al pH del estómago entonces para adquirir una infección de este tipo hay que ingerir un mayor número de esta bacteria (104 bacterias).
La transmisión es vía oral tanto por alimentos como en agua.
Es una infección autolimitada (Se cura sola) por lo que no es necesario hacer antibioterapia, únicamente reponer líquidos.
El campylobacter coli es similar o igual al anterior.
Los otros 2 además de diarreas pueden producir bacteriemias en inmunodeprimidos (C. fetus y C. laridis)
HELICOBACTER PYLORI A·- Características
Es reciente (1982), al principio se clasificó como campylobacter pylori (se aísla del estómago). Pero luego se dijo que era un género aparte.
Es un bacilo gram negativo, tiene forma espiral ó helicoidal. Una de las características más importante es que tiene un marcado carácter ureasa positiva. Es casi patenoimónico (que si aparece esa fuerte marcación es seguro que en un helicobacter pylori). Tienen flagelos polares (1-6). Está implicado en procesos infecciosos gástricos. Es microaerófilo (igual que campylobacter).
B·- Métodos de identificación
• Directos: son los que pasan por el cultivo. El helicobacter pylori está en los pliegues de la mucosa gástrica. Para aislarlo lo tenemos que obtener de biopsia. No es aconsejable cultivos de aspirados gástricos. El cultivo tiene que ser inmediatamente sembrado tras la biopsia; se lleva a los medios de transporte, los cuales se conservan a 4ºC un máximo de 5 hors. Estos medios de transporte pueden ser:
~ Solución glucosada a 20% ~ Solución salina al 0’85% ~ Caldo tioglicolato
~ Caldo brucella con suero de caballo
La biopsia se divide en 2 partes: una va a tinciones y la otra a cultivo. Con la tinción se hace un frotis, se tiñe con tinción de gram, gimes, plata metenamina,...
Con el resto de la biopsia se corta en trocitos ose machaca en mortero estéril con un poco de suero glucosado al 20% y se cultiva.
Se siembra en:
~ Agar BHI + 7% suero equino
~ Agar Muller-Hinton + 5% sangre carnero ~ Agar Brucella + 1 % de almidón soluble ~ Agar sangre
~ Agar chocolate ~ Medio de Skirrow ~ Agar Thayer-Martin
Estos 4 últimos mejor si se añade suero equino o almidón.
Aparte de estos medios es necesario utilizar otros medios selectivos: • Medio velo-horizonte (colonias doradas)
• Medio selectivo para helicobacter pylori
Son medios para que ‘solo’ crezca helicobacter pylori (en la medida de lo posible) Se incuba a 37ºC y en medio microaerófilo (5% O2, 10% CO2 y 85% N2) es mejor dejarlos hasta 7 días.
Una vez que esté crecido se realizan pruebas de identificación: • Catalasa
• Oxidasa
• Fuertemente ureasa • Sólo crece a 37ºC • Hidrólisis de hipurato
• Reducción de nitratos
• Es sensible a cefatotina (cefaloesporina) y resistente a ácido nalidixico • Indirectos: son tres métodos
~ Prueba de la ureasa rápido: se inocula la bacteria en un medio rico en urea con un detector de pH, a medida que la ureasa va hidrolizando el medio el pH se va alcalinizando. Tiene una elevada capacidad ureasa que en poco tiempo se va alcalinizando el medio. Se utiliza la urea de Christensen.
~ Prueba de la urea respiratoria: consiste en que le damos al paciente urea marcada con un isótopo de carbono, el helicobacter pylori si está va actuar sobre esta por medio de l urea y después este carbono se va a eliminar por el CO2 y podemos detectarlos. Estos carbono se miden por contadores de centelleos o con un espectrofotómetro:
~ Serología: se detecta IgG e IgA. Para el helicobacter pylori están estandarizan. C·- Factores de patogeneicidad:
• Ureasa: la urea al alcalinizar el medio permite que este microorganismo pueda vivir en el estómago (pH ácido)
• Proteasas • Hemoglutininas
• Citotoxina: cuya actividad no se conoce muy bien
D·- Patología: está implicada en diversos procesos infecciosos gástrica. Al principio se le empezó a achacar a enfermedad como gastritis, úlceras, ...
Se sabe que el helicobacter pylori es el factor etiológico de la úlcera gástrica y (no como se pensaba antiguamente que sólo agrava la enfermedad). Es el agente causal de la gastritis aguda y está presente en la gastritis crónica, con la dispersia (mala digestión) no ulcerosas, carcinomas gástrico.
Hay gente sana que tiene helicobacter pylori en su estómago (hasta un 50% de la población adulta)
E·- Sensibilidad antibiótica: es sensible a muchos antibióticos pero hoyo se aplica politerapia y aún así no se consigue eliminar de todo.
VIBRIO
Las especies más importantes es vibrio cholerae. Es un bacilo gram negativo, anaerobios facultativos, móviles gracias a su flagelos. Son oxidasa positiva y reducen nitratos a nitritos. Son capaces de crecer en medio con sal. Tienen un cierto parecido (en lo referente a las pruebas) a las enterobacterias; se diferencian de ellas por la oxidasa. Las aeromonas y plesiomonas dan oxidasa positiva pero se distinguen del vibrio porque no crecen en medio con sal. Por el patrón de fermentación de hidratos de carbono se diferencia el vibrio de las pseudomonas. Está muy distribuido su localización en el género y vive en aguas en general (ríos, charcas,..) es decir, en medios acuáticos.
Produce el cólera que lo produce el vibrio cholerae tipo 01. otros tipos menos importantes producen infecciones en general (septicemias, bacteriemias, abscesos)
A·- Estructura antigénica: es bastante característica: • Antígeno flagelar H: termolábiles
• Antígeno somático O: es termoestable, además este antígeno es el que se utiliza en la serotipificación. La tipificación de vibrio cholerae tipo 01 se debe al antígeno somático O. Solo este sero-tipo causa cólera (epidemias) los demás no son tan graves.
Existe una variante del vibrio cholerae tipo 01 que se llama El Tor, esta variante es la que causó la última gran epidemia de cólera (años 60). Produce la enfermedad pero un poco más leve que la variante clásica. Se distingue de al variante clásica por que produce hemolisna y porque dan positivas las pruebas de Voges-Proskawer y es resistente a polimixina B.
B·- Toxinas:
Vibrio cholerae: produce una enterotoxina a nivel del intestino que provoca una gran secreción de agua y electrolitos
Vibrio parahaemolyticus: producen toxina extracelular C·- Aislamiento:
• Transporte: debe realizarse en medios exentos de glicerol como el de Cary-Blair son viables hasta 4 semanas y debe evitarse en todo momento la exposición al aire porque son muy sensible a la desecación. También se pueden utilizar tiras de papel secante humedecidas con heces líquidas.
• Cultivo: crecen bien en agar sangre y en agar Mac-Conkey aparecen como lactosa negativas. El medio de elección en vibrio cholerae es el agar TCBS (triptosa-citrato-bilis- sacarosa).
Para los pacientes que estén tratados se recomienda caldos enriquecidos como agua de peptona alcalina con 1% de Cloruro sódico (ClNa). Si un paciente está tratado va a haber menos bacterias detectables en al muestra.
A las colonias sospechosas se le hacen las pruebas bioquímicas. La más importante es la de contra-anti-suero tipo 01 (más importante).
D·- Identificación: nos vamos a basar en 2 elementos:
• Tinción de gram (BGN corto, recto ó curvado, pero en general muy pleomórfico • Pruebas bioquímicas:
~ Oxidasa
~ Requerimiento de cloruro sódico
~ Pruebas de lisina, ornitina, arginina descarboxilasas (son aminoácidos) ~ Fermentación de hidratos de carbono
~ Voges-Proskawer ~ Ureasa
~ Indol
• Pruebas serológicas: ~ Anti-suero tipo 01
Dependiendo de la combinación del resultado será una especie u otra de vibrio
E·- Patología del vibrio cholerae tipo 01: produce cólera, es una infección enteral ó gastrointestinal. Toda la acción patógena se fundamenta en la enterotoxina, lo que hace es aumentar la secreción de agua y electrolitos y es lo que provoca las graves diarreas. Es una enfermedad endémica de los países del tercer mundo (Debido a falta de agua potable,...). La vía de transmisión es oral (ingesta de agua contaminado). Es necesaria una ingesta elevada del orden de 108-1010 bacterias, porque la acidez gástrica la destruye. Los que pasan por el estómago y no sin destruidos pasan al intestino delgado y se adhiere a los microvilli y ahí coloniza. Para ello incuba de 1-4 días.
Va a aparecer náuseas, vómitos, diarrea acuosas, dolores abdominales, retortijones,... Se describe la diarrea como agua de arroz, muy abundante con lo que pierde agua y electrolitos por lo que se deshidrata y puede llegar a morirse en horas, por lo que hay que hidratarlo.
Vibrio parahaemolyticus: invade el colon y causan diarreas acuosas con dolor abdominal menos importantes que el vibrio cholerae. Es poco importante aquí pero tiene importancia en Japón (por comer pescado crudo).
F·- Tratamiento: reposición de líquido, manteniendo el equilibrio hidroelectrolítico. Si se quiere acortar el tiempo de diarrea entonces se utiliza antibióticos.
Es sensible a tetraciclinas, toxiciclinas, cotrimoxazol (trimetropin + sulfametoxazol). G·- Epidemiología:
Vibrio cholerae: endémico de ciertas zonas (sur-este asiático) por falta de agua, de infraestructuras, y falta de control.
Vibrio parahaemolyticus: Japón por comer pescado crudo H·- Vacunas:
1·- La primera que se utilizó fue de vibriones (formas vegetativas del vibrio) da cierto grado de inmunidad más o menos durante 1 año. Con adyuvantes de aluminio que mejoran la vacuna pero ni mucho.
2·- Es de fracción polisacárido: dura unos 2 años
3·- De toxoide: se administran vía oral y protege durante 1 año. El haber pasado la infección si confiere protección, no total pero si un alto grado de protección.
4·- Vacuna recombinante (es nueva) y es más activa. Algunas especies no son halofílicas (afinidad por la sal). AEROMONAS
A·- Características: género relacionado con vibrio, campylobacter y helicobacter. Es por tanto un bacilo gram negativo, es aerobio facultativo, es oxidasa positiva, fermenta la glucosa (también pueden fermentar la lactosa) y pueden producir gas ó no. La mayoría son móviles por un flagelo polar.
B·- Aislamiento: crece bien en medios convencionales como agar sangre ó agar MacConkey. Se aísla bien de cualquier líquido, secreción, sangre,... pero presenta algún problema para su aislamiento a partir de heces, porque se inhibe su crecimiento en los medios para entero- bacterias.
Otros medios son:
• Agar tripticasa-soja con 5% de sangre de carneo y ampicilina • Agar sangre con ampicilina
• Agar CIN (cefsulodín-irgarsan-novobiocina) • Agar sulfito-dextrina-fucsina
• Agar pril-xylosa-ampicilina
Si se sospecha que hay un número pequeñas de bacterias (portador, persona tratada) se cultiva en agua de petona alcalina. Se deja toda la noche y al día siguiente se sub-cultiva.
En el agar sangre puede dar b-hemolíticos ó no
En el agar MacConkey pueden aparecer colonias rosa, indica lactosa positivas ó incoloras (lactosas negativas)
En TSI pueden fermentar glucosa, lactosa o ambas y producir gas o no. No producen SH2.
C·- Identificación: la mayoría de las presentaciones comerciales de entero-bacterias incluyen pruebas para identificar aeromonas (oxidasa para poder combinarlas con otras pruebas y conseguir así identificar estas).
D·- Patología: puede producir un poco de todo, son inespecíficas. Tienen importancia en al producción de diarreas agudas, dentro de las que se llaman diarreas del viajero; celulitis e infecciones de heridas, septicemias (En inmuno-deprimidos) y otras.
PLESIOMONA
Plesiomona Shigelloides: es un bacilo gram negativo, es facultativo y se asocia a diarreas, tropicales y subtropicales.