PROPÓSITO:
Demostrar por medio de cultivo, la presencia de Campylobacter jejuni. A partir de 1977, se considera a esta bacteria como un importante agente causal de diarrea humana. C. jejuni es más frecuente que Shigella y Salmonella en coprocultivos. Estu- dios efectuados por el autor en Guatemala, revelan que en heces de niños menores de cinco años de edad con diarrea, esta bacteria se aisla aproximadamente en el 10 por ciento. Estos resultados son comparables con otros estudios similares en Lati- no-américa; la frecuencia mundial de aislamiento a partir de coprocultivos varía del 4 al 30 por ciento. Sin embargo, debido a que su aislamiento requiere de un medio de cultivo y condiciones de incubación especiales, su búsqueda no se efec- túa rutinariamente, lo cual debería hacerse debido a su importancia epidemiológica. Campylobacter jejuni es un bacilo gram-negativo, curvo, en espiral o en forma de “S”. Presenta dos flagelos, uno en cada extremo de la célula, lo que le proporciona un movimiento rápido y helicoidal, que lanza a la bacteria a manera de dardo. Es una bacteria estrictamente microaerofílica, oxidasa-positivo, que no fermenta ni oxida los carbohidratos. Crece a 36 grados centígrados, pero se utiliza su capacidad diferencial (termófila) de crecer mejor a 42 grados centígrados, para su aislamiento.
La infección intestinal por este bacilo causa diarrea con dolor abdominal, fiebre y ocasionalmente vómitos. Puede haber sangre macroscópica en las heces, especialmente en las muestras pediátricas. La infección se adquiere por vía oral, al consumir agua o alimentos contaminados, especialmente carne mal cocinada y leche no pasteurizada. La infección puede adquirirse de otro humano, o ser una zoonosis, pues también puede adquirirse de los animales. C. jejuni es muy frecuen- te en animales domésticos y mascotas. Especialmente coloniza pollos y otras aves; causa enteritis en ganado bovino, y aborto en ovejas. En el humano, además de enteritis, ocasionalmente causa septicemia, artritis séptica, meningitis y otras infecciones.
El diagnóstico de campilobacteriosis puede efectuarse presuntivamente por la observación directa de bacterias con “movimiento de dardo” en las heces con
campo oscuro o contraste de fases. Un frote coloreado con Gram, muestra abun- dantes bacilos gram-negativo curvos. El diagnóstico definitivo se establece por medio del aislamiento e identificación de C. jejuni.
MUESTRA:
En vista que para el aislamiento de C. jejuni se deben aplicar procedimientos especializados, las muestras deben ser heces frescas, que deben procesarse antes de dos horas de haber sido emitidas. Las heces no deben estar contaminadas con orina. También puede utilizarse hisopo rectal, si la inoculación se efectúa inmedia- tamente.
CONDICIONES NECESARIAS:
El procedimiento para el aislamiento eficaz de esta bacteria, debe incluir los siguientes aspectos:
1. Un agar sangre de carnero selectivo, recientemente preparado. Se recomienda el Agar Skirrow modificado, que contiene como inhibi- dores: vancomicina (10 mg/lt), polimixina-B (2,500 UI/lt) y trimeto- prim (5 mg/lt). Idealmente debe prepararse con la siguiente base: Blood Agar Base No. 2 (Oxoid), adicionada de 10% de sangre de carnero desfibrinada/estéril. La sangre de carnero remueve formas tóxicas de oxígeno en el medio de cultivo. La mezcla de antibió- ticos que hacen al medio selectivo para C. jejuni puede obtenerse comer- cialmente.
2. Incubación en microaerofilia estricta. Idealmente: 5% de oxígeno, 10% de anhídrido carbónico y 85% de nitrógeno. La forma más fácil y efecti- va de lograr esta atmósfera, es usar el jarro Gas-Pak (BBL), sin catalítico ni indicador. Según las instrucciones del productor, usar el sobre rojo generador de anaerobiosis (BBL). La incubación en jarro con candela no es adecuada, pues proporciona una atmósfera con demasiado oxígeno (12%-17%) para permitir el crecimiento de C. jejuni.
3. Incubación a 42° C por 48 horas. Inhibe la microbiota intestinal, y permite el crecimiento termófilo de Campylobacter jejuni, C. coli y C. laridis.
PROCEDIMIENTO:
1. Analizar microscópicamente la muestra fecal, para buscar la presencia de leucocitos polimorfonucleares. Si no los hay, no vale la pena efectuar el cultivo para C. jejuni, pues las posibilidades de aislarlo son muy bajas. 2. Analizar macroscópicamente la muestra fecal, y tomar con asa o hisopo estéril, las porciones con moco, sangre o pus. Inocular por estrías dos cajas de Agar Skirrow, y una de agar chocolate.
3. Inmediatamente colocar las tres cajas en atmósfera microaerofílica, por medio del jarro Gas-Pak sin catalítico ni indicador, con sobre generador de anaerobiosis (BBL). Es necesario quitar la canastilla con paladio iridiado (catalítico) del jarro.
4. Incubar a 42 grados centígrados exactos, por no menos de 48 horas. INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:
1. Retirar las cajas de la incubadora y del jarro Gas-Pak. Con microscopio estereoscópico, o al menos con lupa, examinar detenidamente las colo- nias aisladas. Buscar colonias con la siguiente morfología típica: húme- das o ligeramente mucosas, muy aplanadas, blanco-grisáceas o incolo- ras, no hemolíticas, rodeadas de un “velo” de crecimiento que se espar- ce sobre el agar circundante a la colonia, bordes irregulares y poco per- ceptibles. Menos frecuentemente las colonias son más secas, convexas y amarillentas; con incubación prolongada se transforman en rugosas. Si no se encuentran colonias típicas, incubar por otras 24 a 48 horas antes de descartar el cultivo como negativo.
2. De una colonia aislada con morfología típica, hacer inmediata y cuida- dosamente un frote (de preferencia del “velo” circundante), en una pe- queña gota de agua. Colorear con Gram (dejar la safranina por tres mi- nutos, pues la bacteria se tiñe pálidamente), o con fuchsina básica al 1% por 10 a 20 segundos, después de fijar al calor.
3. Si el frote presenta bacilos gram-negativo curvos, algunos en forma de “gaviota”, en forma de “S”, o en espiral (ondulante), presuntivamente se ha aislado Campylobacter jejuni. Reportar este hallazgo de inmediato. En los cultivos expuestos al aire predominan las formas cocoides.
4. De otra colonia típica, subcultivar con el asa en hilo a otra caja de Agar Skirrow, y a una caja de agar sangre de carnero, e inocular un tubo de agar TSI. Estriar e incubar los tres medios en atmósfera microaerofílica a 42° C, según ya fue descrito.
5. El cultivo puro que resulta del subcultivo en Skirrow o agar sangre de carnero generalmente es una “capa” blanquecina de crecimiento; sirve para confirmar de nuevo la morfolofía bacteriana típica, y efectuar las siguientes pruebas confirmativas:
- Oxidasa y catalasa: ambas deben ser positivas, y se consideran como suficientes. Campylobacter jejuni, C. coli y C. laridis dan ambas pruebas positivas.
- El tubo de TSI debe ser K/K, sin gas, y sin ácido sulfídrico. - No es indispensable, pero si existen facilidades, hacer la prueba de
hidrólisis del hipurato. Es positiva para C. jejuni, y negativa para C. coli.
- C. jejuni es susceptible a un disco de 30 microgramos de ácido nalidíxico, mientras que C. laridis es resistente; esta diferenciación tampoco se considera indispensable.
- Eventualmente algunas cepas de Pseudomonas aeruginosa pueden crecer en el medio Skirrow microaerofílico/termófilo, sin embargo, éstas se diferencian por su pigmento verdoso y su olor característico.
INFORME:
Al detectar la morfología bacteriana típica en las colonias que desarrollan a las 48 horas de incubación, informar:
Se aisló Campylobacter jejuni, confirmación pendiente. Al efectuar las pruebas confirmatorias, reportar:
Se aisló Campylobacter jejuni, se recomienda considerar el tratamiento con eritromicina.