la expresión de FasL.
Desafortunadamente, no está muy claro cuales son los intermediarios que en los primeros pasos de la señal contribuyen a la activación de la ruta de NF-kB tras la estimulación del TCR. Se ha descrito que los ratones deficientes en Vav muestran un bloqueo en la inducción de NF-kB 85 y también que ZAP-70 y SLP-76 participan en dicha inducción puesto que en las células deficientes en cada una de las moléculas no se induce NF-kB ni la asociación Vav-SLP-76179. A partir de nuestros resultados, la única justificación razonable se adscribiría a la pobre asociación de fosfo-Vav-LAT en la inducción de NF-kB. La posibilidad de que este complejo participe en la inducción de NF-kB, adquire más valor si consideramos que: (1) ya se han relacionado a estos complejos con la activación de Rac Æ MEKK-1 Æ JNK 103 ; y que MEKK-1 está involucrado también en la activación del complejo IKK 116;187 y (2) en las células mutantes estimuladas, la vía MEKK-1 Æ JNK también está bloqueada puesto que la activación de JNK es deficiente. Sin embargo no hay constancia de que LAT esté relacionada con esta ruta de NF-kB. Otro candidato al que se le ha relacionado con la inducción de NF-kB es PKCθ, cuya activación está relacionada con la fosforilación de Vav 98 y recientemente con SLP-76 y ZAP-70 179. Dado que PKCθ permanece por más tiempo translocada en la membrana de las células mutantes, o bien PKCθ no es relevante ,frente a otros factores, en la inducción de NF-kB, o bien, el permenecer más tiempo en la membrana favorecería que un intermediario de la ruta de NF-kB que requiriese de la presencia de PKCθ en el citosol , se activara de forma retrasada y explicara así, una inducción también retrasada de NF-kB.
La activación de las MAPKs está alterada diferencialmente en las células mutantes en el dominio transmembrana TCRβ: mientras que ERK se activa más y permanece más activa en el tiempo, las activaciones de JNK y p38MAPK están disminuidas. La actividad sostenida de ERK correlaciona con las actividades de sus intermediarios anteriores en la vía, RafK y Ras. Incluso la sobreactivación de la vía está de acuerdo con los datos de la inducción de la expresión de CD69 que es una respuesta efectora dependiente de Ras, Rafk y ERK 182,181. Diversos estudios han demostrado que para la activación de la vía de Ras es imprescindible la participación de LAT y de las moléculas que recluta 71. Sin embargo, las células mutantes inducen deficientemente la fosforilación de LAT, así como el reclutamiento de PLCγ1 y SLP-76, ambas moléculas también involucradas en la activación de ERK 74. Hay constancia de que deben existir formas de activar a Ras independientes de los complejos Grb-2-Sos que son reclutados a la membrana por LAT71 puesto que en las células deficientes en
Discusión de Resultados
89 ruta de Ras, porque no existen diferencias en su fosforilación, pero podría ocurrir que otra molécula que interaccionase con SLP-76, y estuviera funcionalmente alterada fuese la responsable. Este podría ser el caso de Vav, que en las células mutantes está más fosforilada, incluso cuando interacciona con SLP-76, aunque para ello, habría que invoczr la participación de otra molécula adaptadora diferente de LAT para reclutar Vav a la membrana ( por ejemplo TRIM188). Además, la cinética de fosforilación de Vav en las células mutantes correlaciona bastante bien con la de activación de Ras y con el patrón de inducción de la expresión de CD69. Esto estaría de acuerdo con la demostración reciente de la importancia de la participación de Vav en la activación de ERK y en la inducción de CD69, en una ruta independiente de Rac 96. Otro intermediario diferente de SLP-76, que en su relación con Vav podría ajustarse a este modelo, es nuevamente PKCθ. La activación de esta PKC es capaz de sinergizar con Vav para inducir la expresión de CD69 y su propia translocación a la membrana es dependiente de Vav ( 98 También se ha sugerido que podría estar involucrada en la activación de AP-1 dependiente de Ras129. De hecho, los experimentos de subfracionamiento celular muestran que PKCθ se localiza por más tiempo en la membrana de las células mutantes en TCRβ estimuladas que de las salvajes estimuladas confirmando que podría ser uno de los intermediarios que participasen en la sobreactivación de la vía de Ras/Rafk/ERK/CD69.
Todo lo contrario sucede con las activaciones de JNK y p38MAPK que están seriamente deprimidas en las células mutantes en el dominio transmembrana de TCRβ. Diversos trabajos han relacionado a Vav con la activación de ambas quinasas
189,103,102. En concreto para p38MAPK se ha descrito recientemente que su activación via Rac, es dependiente del complejo ZAP-70-LAT-Vav189. De acuerdo con esto, la baja fosfo-Vav asociada a LAT en las células mutantes podría explicar la pobre activación de p38MAPK. La misma explicación podría corresponder a JNK, teniendo en cuenta que su activación depende también de Vav y de Rac 103,102.
De acuerdo con nuestros datos, podría pensarse que una dualidad funcional de Vav dependiendo de los linkers que la recluten diseccionando vías de señalización. De esta forma, la menor fosforilación del Vav asociado a LAT en la membrana podría explicar los déficits de activación de JNK y p38MAPK y al contrario, la mayor fosforilación de Vav asociado a SLP-76, o a otras moléculas que promueven la reorganización del citoesqueleto y posterior activación de PKCθ , podría justificar la sobre-activación de la ruta de Ras/RafK/ERK.
Quedaría por considerar la posible interacción que existe entre las tres vías de MAPKs. Así, se ha descrito que MEKK1 puede actuar sobre la ruta de ERK (190 y que ERK es capaz de activar a c-Jun 191. Por esta razón, cabría la posibilidad de que en el caso de que MEKK1 mantuviera intacta su actividad en las células mutantes, pudiera contribuir a la activación de ERK, al no poder dedicarse su actividad íntegramente a la