Fase III: Experimentación en humanos

El principal objetivo de esta Fase fue evaluar el efecto de los tocotrienoles naturales adicionados a la dieta usual de individuos sanos sobre el perfil lipídico y la capacidad oxidativa de las LDL.

En esta etapa del estudio se ralizo unas selección de la muestra por conveniencia, en la cual se tomaron 30 mujeres voluntarias entre 18 y 30 años que cumplían con los siguientes criterios de inclusión: perfil lipídico normal ([en mg/dl]: TG <150, colesterol <200); IMC entre 18.5 y 25; ingesta habitual que cubriera sus necesidades nutricionales según edad, género y actividad física; no fumadoras; no consumidoras habituales de alcohol (máximo 50 ml etanol por semana); no consumo de medicamentos hipolipemiantes en los tres últimos meses ni suplementos vitamínicos; sanas por historia médica y familiar. Igualmente, a todas las participantes se les realizó una prueba de Proteína C reactiva (PCR) para descartar algún tipo de proceso infeccioso. Estos criterios de inclusión se determinaron para excluir factores que pudieran influir sobre el perfil lipídico de los individuos.

Todas las voluntarias que se presentaron para el estudio fueron informadas del propósito y de la metodología a seguir durante el desarrollo y firmaron el consentimiento informado (Anexo 6 /DV SHUVRQDV LQWHUHVDGDV HQ SDUWLFLSDU IXHURQ VRPHWLGDV D OD ³(QFXHVWD GH 6DOXG 1XWULFLyQ \ $OLPHQWDFLyQ´ TXH IXH GLVHxDGD SRU 0DUWKD 'tD] SURIHVRUD GHO Departamento de Nutrición y Bioquímica, la cual se ajustó para evaluar los factores de inclusión previamente establecidos en este estudio (Anexo 7). Esta encuesta ha sido utilizada durante más de 10 años en los estudios de nutrición realizados por el Departamento de Nutrición y Bioquímica de la Universidad Javeriana y fue diseñada en el

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marco del proyecto de Colciencias que evaluó el riesgo cardiovascular dependiente de factores nutricionales liderado por la Nutricionista Díaz.

Las voluntarias que cumplieron con los criterios de inclusión evaluados en esta etapa, fueron citadas para la evaluación del perfil lipídico que se realizó en el Laboratorio de Bioquímica Clínica de la Facultad de Ciencias, siguiendo las técnicas descritas en la fase anterior (Fase II).

Las voluntarias que cumplieron este último criterio de inclusión fueron citadas a consulta individual para iniciar el tratamiento al cual fueron asignadas al azar.

Característica Fuente de

Tocotrienoles

No fuente de Tocotrienoles Alto en AGS _{Aceite de palma}

Alto en AGPI _{Aceite de soya}

Durante la primera consulta, las participantes recibieron instrucciones de cómo realizar la inclusión de los aceites dentro de su patrón de alimentación y cómo llevar un diario de ingesta (Anexo 8). Para el entrenamiento en el llenado del diario se utilizaron tanto los modelos de alimentos de porciones promedio marca NASCO® (Anexo 9) como utensilios de medición como tazas, pocillos, cucharas, etc.

Cada grupo de sujetos mantuvo su dieta habitual por todo el periodo de tratamiento (30 días), pero la preparación de los alimentos la hicieron con el aceite suministrado. Las únicas modificaciones que debieron realizar a su patrón habitual de alimentación fueron eliminar el consumo de productos integrales con el fin de controlar la otra fuente posible de T3E diferente al aceite y evitar el consumo de preparaciones fritas cuando consumían alimentos fuera de su casa para disminuir el aporte de otros aceites.

A cada persona se le suministró semanalmente una cantidad medida de aceite que aportaba la cantidad de vitámeros recomendada diariamente para este grupo etáreo de la población colombiana (www.icbf.gov.co/icbf/directorio/portel/libreria/pdf/tabla- recomenda.pdf) para que lo utilizara en la preparación de sus alimentos. En los casos en que el sujeto vivía con su familia, se le suministró el aceite necesario para toda la familia con el fin de así facilitar el cumplimiento de la dieta.

Se determinó una intervención de 30 días teniendo en cuenta que de acuerdo con estudios reportados en la literatura para determinar el efecto de componentes de la dieta sobre el perfil lipídico en humanos el tiempo de intervención generalmente aceptado es de treinta días, período suficiente para que se manifiesten cambios o alteraciones. Adicionalmente, un período de sólo treinta días aseguró que la persona (y su familia en los casos en que viviera con ellos) cumpliera con el tratamiento puesto que aun cuando no debían hacer modificaciones drásticas en sus hábitos alimentarios, sí implicaba registrar todo lo consumido durante los días de tratamiento y esto se podía tornar dispendioso.

Debido a que la dieta podía ser un factor de confusión en el estudio, para su evaluación durante el período experimental los sujetos llevaron un diario de la ingesta de alimentos que se recogió cada semana al momento de entregar la porción de aceite correspondiente con el objetivo de constatar la manera como se estaban ciñendo a las indicaciones

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suministradas. Todas las entrevistas de tamizaje y seguimiento fueron realizadas por una nutricionista entrenada para evitar sesgos en la recolección de la información.

Los diarios de ingesta reportados semanalmente se analizaron para controlar que todos los sujetos mantuvieron una dieta lo más constante posible y así controlar un sesgo dietario que pudiera tener impacto sobre los resultados del estudio.

Teniendo en cuenta que los diarios fueron reportados en porciones comunes (taza, cuchara, etc), ésta información se convirtió a gramos/cc (Anexo 10) y se analizó utilizando un aplicativo del programa EXCEL en el cual previamente se había digitado el contenido nutricional en 100 gramos de los alimentos de uso común en Colombia reportados en la Tabla de Composición de Alimentos publicada por el Centro de Orientación Nutricional. Los nutrientes analizados fueron: proteínas, grasa total, grasa saturada, grasa monoinsaturada, grasa poliinsaturada, carbohidratos, calcio, fosforo, hierro, sodio, potasio, magnesio, zinc, cobre, retinol (vitamina A), tiamina (B1), riboflavina (B2), niacina (B3), piridoxina (B6), ácido fólico, cianocobalamina (B12), ácido ascórbico (C) y tocoferol (E) (Anexo 11).

Al finalizar el mes de tratamiento, se tomó una muestra de sangre a todos los sujetos previo ayuno de 12 horas. Con esta muestra se determinó el perfil lipidico y la capacidad oxidativa de las LDL siguiendo las técnicas descritas anteriormente.