4. Búsqueda de mutaciones que modifican un fenotipo de toxicidad a las
4.2. Análisis de los genes que presentan interacción genética dominante
4.2.2. Reguladores de la estructura de la cromatina
jumeaux
Según la base de datos de Drosophila (http://www.flybase.org) el elemento P j8B6 se inserta en el primer intrón del gen jumu, posiblemente afectando la función de este gen (Figura 4.6). Este alelo se identificó como un supresor del fenotipo de expresión de la expansión (CTG)480 en ojo.
Resultados
Figura 4.6. Región genómica de jumu y la inserción del elemento transponible utilizado. Se
muestra la posición de la inserción del elemento transponible P ensayado (círculo rojo). El gen jumu sólo presenta un transcrito. Las regiones codificantes se muestran en naranja, las no codificantes en gris y el intrón se representa con una línea horizontal. Imagen obtenida en la base de datos de Drosophila (http://www.flybase.org).
En un rastreo genético de modificadores del fenotipo de ojo rugoso producido por la sobreexpresión de mblC en ojo se identificó el alelo jumuL70 como un supresor
de este fenotipo (Pascual, 2005). Probamos este alelo con el recombinante sev-GAL4 UAS-(CTG)480 y observamos que el alelo jumuL70 suprimía el fenotipo con respecto a
sus hermanos que recibían el cromosoma TM3 pero no con respecto a controles externos. Como el cromosoma equilibrador TM3 aumenta en ocasiones los fenotipos de manera inespecífica no podemos confirmar la interacción entre jumuL70 y la
expresión de RNAs (CUG)480 en ojo. Sin embargo, trabajos independientes en el laboratorio confirmaron que un alelo de jumu, jumu4312, interaccionaba suprimiendo el
fenotipo producido tanto por la expresión de mblC como por la de la expansión (CTG)480 en ojo (Pascual, 2005). De modo que conocíamos dos alelos de falta de función de jumu, jumuL70 y jumu4312 que suprimían dominantemente el fenotipo de ojos
rugosos producido por la expresión del transgén UAS-mblC y UAS-(CTG)480 (Tabla
4.4). El hecho de que observáramos interacción del gen jumu en la expresión de los dos transgenes y que jumu no interaccionara con otros fenotipos sensibilizados (Muñoz-Descalzo, comunicación personal) nos indica que se trata de una interacción específica.
Resultados
Alelos sev-GAL4 UAS-mblC sev-GAL4 UAS-(CTG)480
jumuj8B6 - Supresor
jumuL70 Supresor ¿Supresor?
jumu4312 Supresor Supresor
Tabla 4.4. Alelos de jumu ensayados en la expresión de RNAs (CUG)480. En la columna de la
izquierda se muestran los alelos utilizados, en la columna central se indica el sentido de la modificación del ojo rugoso producido por la sobreexpresión de mblC y en la columna de la izquierda se indica como modificaba cada alelo el fenotipo inducido por la expresión de (CTG)480.
El gen jumu codifica una proteína que tiene dominios de unión a DNA del tipo FKH/WH (Forkhead/ winged-helix family) normalmente asociados a proteínas que actúan como factores de transcripción como Foxp3, Foxg1 y Foxn4 entre otros. Esta proteína actúa como supresor dominante del fenotipo de variegación por efecto de posición (PEV) y se acumula en loci específicos de eucromatina. Su efecto sobre el PEV junto con la localización en los cromosomas politénicos sugiere que jumu tiene una función como remodelador de la cromatina en el establecimiento y/o mantenimiento de su estructura (Strodicke et al., 2000).
La interacción sugiere que es específica debido a:
■ Se realizó un ensayo de dos híbridos entre más de 4500 proteínas de Drosophila y se presentó un mapa de las interacciones proteicas. muscleblind fue uno de los cDNAs ensayados que interaccionó con jumu aunque la interacción fue débil (Giot et al., 2003).
■ El patrón de expresión de jumu solapa con el de muscleblind en los tejidos de disco de imaginal de ojo, SNC y SNP (Strodicke et al., 2000).
■ Se observó un solapamiento parcial entre las señales de MblC y Jumu en los cromosomas politénicos (Pascual, 2005).
■ El alelo por falta de función jumu4312 interaccionó génicamente con la
sobreexpresión de mblC suprimiendo el fenotipo de ojo rugoso (Pascual, 2005).
Todos estos datos sugerían que Muscleblind y Jumu podrían estar relacionados funcionalmente de una manera directa y que la posible relación entre jumu y la expresión de las repeticiones CTG fuera a través de las proteínas Muscleblind. Sin embargo, en un ensayo de coinmunoprecipitación se observó que Jumu y MblC:GFP no interaccionaban físicamente (Pascual, 2005).
Resultados
Nucleosome remodeling factor (Nurf-38)
Identificamos en el rastreo de modificadores dominantes del fenotipo ojo rugoso al alelo Nurf-38 k16102 como supresor (Figura 4.7).
Figura 4.7. Región genómica de Nurf-38 y la inserción del elemento transponible utilizado. Se
muestra la posición de la inserción del elemento transponible P ensayado (círculo rojo). El gen Nurf-38 sólo presenta un transcrito. Las regiones codificantes se muestran en naranja y el intrón se representa con una línea horizontal. Imagen obtenida en la base de datos de Drosophila (http://www.flybase.org).
Nurf es un complejo de cuatro polipéptidos que median la unión dependiente de ATP del factor GAGA a varios promotores heat-shock. Nurf-38 es una subunidad (polipéptido) del complejo NURF que codifica para una pirofosfatasa inorgánica (PPasa), un enzima esencial para dirigir reacciones biosintéticas críticas como la transcripción, replicación y reparación del DNA. Experimentos in vitro demuestran que Nurf38 tiene un papel estructural o de regulador en el complejo NURF el cual facilita, junto con el complejo SWI/SNF, la unión de los factores de transcripción al DNA nucleosomal sin expulsar a las histonas asociadas (revisado en Devine et al., 1999).
No pudimos confirmar con ningún otro alelo de Nurf-38 la interacción porque no existen mutantes para este gen salvo el ensayado, aunque el hecho de que en otros dos rastreos independientes realizados en el laboratorio no se encontrara interacción con Nurf-38 sugiere que la interacción era específica.