y 2: Examen coproparasitológico

Objetivo específico

Practicar el montaje de muestras de heces, así como el reconocimiento de protozoarios y helmintos en las muestras.

Descripción

La parasitología es una rama que ha perdido auge en el país en los últimos años. Las políticas de salud, así como las campañas de información y los cambios de hábitos de los habitantes ha causado una disminución drástica en la incidencia y prevalencia de las parasitosis. Sin embargo, continúa siendo un examen de rutina ya que es de muy bajo costo y puede proveer gran información sobre el estado del paciente y evidenciar la presencia de microorganismos que pueden causar desde diarreas hasta obstrucciones intestinales, así como disenterías.

A pesar de que las técnicas comunes como el montaje directo y la técnica de Kato son sencillas y de bajo costo, el expertiz que se requiere para el hallazgo y diferenciación de los parásitos es el que limita la utilidad de la técnica, pues en ocasiones puede ser difícil la diferenciación de los microorganismos. El examen coproparasitológico va a permitir el diagnóstico de gran cantidad de protozoarios (usualmente quistes) y helmintos, dentro de los que se pueden mencionar:

Entamoeba coli: Es una ameba relativamente grande y fácil de identificar. El quiste suele medir entre 17 y 20 um y puede ser uni, bi u octonucleado, según su estado de maduración y no presenta cromatoidales.

Entamoeba histolytica/ E. dispar: Son amebas morfológicamente idénticas, por lo cual su hallazgo se debe reportar como E. histolytica/ E. dispar, dado que E. histolytica es patógena y puede causar cuadros invasivos, que cursan con diarrea sanguinolenta e incluso puede penetrar a hígado y entrar a torrente sanguíneo hasta alcanzar el cerebro. Por otra parte, E. dispar no es patógena. Por esto se deben reportar juntas, ya que puede ser de gran importancia en salud o ser irrelevante, según sea la especie de que se trate. El único caso en que se reporta E. histolytica como tal es en casos de diarrea sanguinolenta donde se encuentren los trofozoítos gigantes característicos.

Los quistes de estas amebas suelen medir de 8 a 15 um, y son tetranucleados generalmente, aunque se pueden presentar casos uni y binucleados. Pueden tener cromatoidales en forma de barras con extremos romos.

Endolimax nana: Es una ameba comensal, al igual que Entamoeba coli, cuyo quiste ovalado mide entre 8 y 12 um. No presenta cromatoidales y sus núcleos no se definen bien, sino que se observan como círculos refringentes en lugol.

Iodamoeba butschlii: Es una ameba comensal cuyo quiste uninucleado mide de 8 a 15 um, no presenta cromatoidales y tiene una característica patognomónica observable en lugol: Una gran vacuola de glucógeno, muy bien definida, la cual se observa como un círculo u óvalo café.

Giardia intestinalis: También conocida como Lamblia intestinalis. Es un flagelado cuyo trofozoíto y quiste son muy particulares. En el caso del trofozoíto, mide de 10 a 20 um, es binucleado y posee 8 flagelos, posee forma de gota. El quiste mide de 8 a 19 um, es ovalado y tetranucleado, tiene una característica patognomónica que es la presencia de cuerpos mediales, los cuales se ven en forma de cuña de martillo.

Ascaris lumbricoides: Se puede encontrar en las muestras de heces tanto los huevecillos como el verme. El adulto mide de 15 a 30 cm, de un color blanquecino amarillento. Los huevecillos miden de 45 a 75 um usualmente, son de pared doble gruesa, en ocasiones se puede ver la larva en su interior, al igual que mamelones en la cobertura (proyecciones redondas). Los huevecillos infecundos suelen ser ovalados y más grandes y tienden a indicar la presencia de solo hembras en el hospedero.

Trichocephalus trichiurus: El adulto suele medir de 30 a 45 mm de longitud. El huevecillo tiene forma de barril, con un tapón mucoide translúcido en cada extremo. Se suele ver de un color rojizo.

Uncinarias: Comprenden microorganismos de los géneros Ancylostoma y Necator. Se pueden encontrar las larvas y los huevecillos. Las larvas deben ser diferenciadas de las de Enterobius vermicularis, mientras que los huevecillos tienden a confundirse con artefactos y con huevecillos de Ascaris lumbricoides. Los huevecillos miden de 40 a 60 um, tienen cápsula delgada y ovoide.

Materiales • Muestras de heces • Portaobjetos • Cubreobjetos • Microscopio • Reactivo de Kato • Palillos de madera • Solución salina • Lugol

Procedimiento:

Revisión de muestras de heces

1. Realice el montaje de las muestras de heces, tanto en directo en solución salina y lugol, como Kato 2. Observe la muestra en lente de 40X en busca de amebas y quistes (directo) así como huevecillos de

helmintos (kato).

Montaje directo

1. Coloque una gota de solución salina y una de lugol en lados opuestos de un portaobjetos 2. Con un palillo de madera, proceda a picar varias veces la muestra de heces en diferentes zonas 3. Coloque una muy pequeña porción en la solución salina y homogenice

4. Quiebre el palillo o cámbielo y repita en el lugol 5. Coloque cubreobjetos en ambos

6. Observe al microscopio con lente de 40X en busca de amebas

Concentración de Kato

1. Coloque una pequeña porción de heces sobre el portaobjetos

2. Coloque sobre la muestra, una tira de papel celofán con reactivo de Kato

3. Presione el portaobjetos contra un papel toalla para distribuir la muestra en una capa delgada 4. Deje secar durante 10 minutos

5. Observe con lente de 10X en búsqueda de huevecillos Tema 3: Tinción de Ziehl-Neelsen

Objetivo específico

Reconocer la aplicación, realización y observación de la tinción de Ziehl-Neelsen.

Descripción:

En microbiología es común la aplicación de tinciones para la visualización de microorganismos. Ésta práctica está principalmente en el área de la Bacteriología, pero la parasitología también hace uso de ella. Tenemos, por ejemplo, las tinciones para helmintos adultos de utilidad para colecciones, así como otras más aplicadas a la práctica clínica. Entre ellas se encuentra la tinción de Ziehl-Neelsen.

Ésta se basa en la capacidad de ciertas estructuras de absorber el tinte en presencia de calor, a tal punto que son capaces de retenerlo aún al desteñir con alcohol-ácido. Ésta técnica se utiliza en bacteriología para teñir bacterias como Mycobacterium tuberculosis, que son ácido - resistentes; al igual que se utiliza en parasitología para observar ooquistes de coccidios.

1. Cryptosporidium spp: Presenta un ooquiste redondo de 4 a 6um, sin esporoquistes y con 4 esporozoítos (0:4).

2. Cyclospora cayetanensis: Presenta un ooquiste redondo, muy similar a Cryptosporidium spp, pero de mayor tamaño (7 a 10um), el cual contiene dos esporoquistes con dos esporozoítos cada uno (2:2)

3. Cystoisospora belli: El más grande de los tres. El ooquiste es ovalado y puede medir hasta 28um. Contiene dos esporoquistes con cuatro esporozoítos cada uno (2:4)

Materiales • Muestras de heces • Portaobjetos • Cubreobjetos • Microscopio • Palillos de madera • Fucsina • Alcohol-ácido • Azul de metileno • Láminas de coccidios Procedimiento

1. Realice un frotis de la muestra de heces

2. Fije el frotis utilizando alcohol metílico o la llama suavemente

Tinción de Ziehl-Neelsen

1. Cubrir el extendido con fucsina

2. Con la llama de un mechero, calentar suavemente por debajo de las láminas cubiertas con fucsina, hasta que se produzca emisión de vapores blanquecinos visibles.

3. Dejar de calentar y repetir el procedimiento por 5 minutos.

Importante: En ningún caso la fucsina debe hervir o secarse sobre las láminas. Si disminuye por evaporación o derrame, hay que reponerla.

4. O cubrir el extendido con fucsina por 20 minutos (Modificado) 5. Eliminar la fucsina lavándola con agua corriente.

6. Cubrir la totalidad de la superficie del extendido con la mezcla alcohol-ácido de 1 a 2 minutos. Se puede mover suavemente en forma de vaivén para que se vaya produciendo la decoloración. 7. Lavar con agua corriente.

8. Realice la contratinción utilizando azul de metileno por un minuto 9. Lave con agua y seque

10. Observe al microscopio con lente de inmersión (100X) en busca de coccidios

Observación de láminas: