Efecto del extracto acuoso de hojas de Cordia lutea sobre células meristemáticas de Allium cepa

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(1)Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. Q. UI. M. IC. A. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA. BI. O. TESIS II. IA. Y. Efecto del extracto acuoso de hojas de Cordia lutea sobre células meristemáticas de. RM. AC. Allium cepa. DE. FA. PARA OPTAR EL GRADO ACADEMICO DE. AUTORES:. BI BL. IO. TE CA. BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA. LLAPO CHÁVEZ, Melissa Fiorella LLONTOP LÓPEZ, Nuria Gabriela. ASESOR:. MG. CRUZADO RAZCO, José Lizardo. TRUJILLO – PERÚ 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. DEDICATORIA. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A Dios quien me dio la fe, fortaleza necesaria para salir adelante pese a las dificultades, por iluminar cada paso de mi vida, por darme salud y por haber permitido llegar a una de mis metas en este largo camino para culminar mi carrera profesional.. A mis padres Ebert y Ana. A. Por su apoyo, confianza, sus consejos, sus valores,. IC. por su amor incondicional hacia mí. UI. M. y a mi hijo. Por su esfuerzo y sacrificio, por su. Q. ejemplo de perseverancia y constancia que los. BI. O. caracterizan y que me ha infundado siempre,. A mi Hijo Thiago Daniel.. RM. AC. IA. Y. por mostrarme el camino de la superación.. y felicidad, porque eres mi inspiración y mi fortaleza, una sonrisa tuya ilumina mi mundo y me da las fuerzas necesarias para luchar y conseguir mis metas.. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. Gracias por llegar a mi vida y llenarla de alegrías. A mi hermano Dani:. Por su apoyo en la educación de mi hijo y por su paciencia, gracias por cuidarlo, quererlo y jugar con él.. .. Melissa Fiorella Llapo Chávez iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. A Dios por ser quien me guío en el mejor camino, por hacer que nunca me rindiera y siguiera adelante siempre, porque a pesar de mis caídas, siempre está para levantarme.. A mis padres Eduardo y Dora Por todo el esfuerzo que han hecho para volverme una buena profesional, porque. A. siempre han estado cuando más los he. IC. necesitado, porque han sido padres y amigos. UI. M. para mí, porque me han demostrado que. Q. confían en mí, y siempre me han dejado. lo que soy ahora.. A mis hermanas Cristina y Ángeles. RM. Porque me han brindado su amor y apoyo. AC. IA. Y. BI. O. volar con mis propias alas, a ellos les debo. FA. incondicional, y siempre han estado a mi. BI BL. IO. TE CA. DE. lado para darme sus consejos, las amo mucho.. A Dieguito Josué mi bebé: Gracias a él porque me hizo una mejor persona, me enseñó lo que es amar sin conocer a alguien, me ayuda a jamás rendirme, porque lo tengo a él para que siga mis pasos, porque ha sido lo mejor que la vida me pudo dar, y con él aprendo cada día lo que es ser madre, te amo demasiado.. Nuria Gabriela Llontop López. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Nuestro más sincero y profundo agradecimiento a nuestro asesor, el profesor MG. Q.F. CRUZADO RAZCO, JOSÉ LIZARDO y profesora MG. Q.F. CARMEN ROSA SILVA CORREA, por su apoyo y sus grandes aportes durante el desarrollo de esta tesis, gracias por brindarnos sus tiempos y por siempre tenernos la paciencia adecuada, también. A. gracias por los valiosos consejos y sus críticas para convertirnos en mejores profesionales,. M. IC. a la vez expresarles nuestro más grande respeto y admiración.. Q. UI. Gracias también a los miembros del jurado Mg Q.F .César Gamarra Sánchez y Dr.. BI. O. Francisco Moisés Abanto Zamora por dedicarnos su tiempo y compartir sus grandes. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. conocimientos.. Los Autores. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. PRESENTACIÓN. Señores Miembros del Jurado Dictaminador:. Dando cumplimiento a lo establecido por el reglamento de grados y títulos de la Facultad de Farmacia y Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, nos es satisfactorio. IC. A. someter a vuestra consideración y elevado criterio profesional, el informe de Tesis I. Q. UI. M. titulado. RM. AC. IA. Y. Allium cepa”. BI. O. “Efecto del extracto acuoso de hojas de Cordia lutea sobre células meristemáticas de. FA. De modo muy especial agradecemos la colaboración de los señores miembros del jurado.. Trujillo, Marzo del 2019. BI BL. IO. TE CA. del presente informe.. DE. Dejamos a vuestra consideración señores Miembros del Jurado, la respectiva calificación. Llapo Chávez Melissa Fiorella. Llontop López, Nuria Gabriela. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. M. Mg Q.F .César Gamarra Sánchez. IC. A. JURADO DICTAMINADOR. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. Presidente. Asesor. BI BL. IO. TE CA. DE. Mg. Q.F. José Lizardo Cruzado Razco. Dr. Francisco Moisés Abanto Zamora Miembro. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN. En el presente trabajo se determinó el efecto del extracto acuoso de Cordia lutea a concentraciones de 0,06 %, 0,12%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4% y 8% sobre células meristemáticas de Allium cepa durante 48 y 72 horas. Para ello se obtuvieron raicillas de aproximadamente 2 a 3 cm de longitud, las cuales fueron expuestas a los tratamientos que. A. se indicaron en el diseño, que fueron nueve tratamientos (T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8 y. M. IC. T9): T1(agua), T2 (extracto acuoso de Cordia lutea al 0,06%), T3 (0,12%), T4 (0,25%),. Q. UI. T5 (0,5%), T6 (1%), T7 (2%), T8 (4%), T9 (8%) durante 48 horas y 72 horas a cada uno de. BI. O. ellos. Después de la exposición de las raicillas a los tratamientos, se realizó el montaje,. Y. coloración y posterior lectura microscópica, los cuales sirvieron para determinar el índice. AC. IA. mitótico (IM), de fases. Los resultados obtenidos muestran una disminución del. RM. crecimiento radicular de 1,77cm (T1) hasta 0,8cm (T7) a las 48 horas y 0.5cm (T5) a las 72. FA. horas donde alcanzaron la mínima disminución significativa y su máxima disminución. DE. significativa en el T9 hasta 0,3 cm y 0,2 cm a las 48 y 72 horas respectivamente. Lo. TE CA. mismo se observa en el índice mitótico donde el porcentaje va desde 12,6% (T1) hasta 7,. IO. 3% y 6% (ambos T9) a las 48 y 72 horas respectivamente, observándose una máxima. BI BL. disminución significativa, pero a la vez se evidenció un incremento del índice profásico de 47,5% (T1) hasta los 57,6% y 59,2% en el mismo tratamiento a 48 y 72 horas respectivamente. El extracto acuoso de hojas de Cordia lutea, tiene efecto citotóxico sobre el ciclo celular en meristemos radiculares de Allium cepa.. PALABRAS CLAVES: Cordia lutea, flor de overo, extracto acuoso, citotoxicidad, Allium cepa.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT:. In the present work the effect of the aqueous extract of Cordia lutea at concentrations of 0,06%, 0,12%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4% and 8% on Allium cepa meristematic cells during 48 and 72 was determined. hours. For this, rails of approximately 2 to 3 cm in length were obtained, which were exposed to the treatments that were indicated in the. A. design, which were nine treatments (T1, T2, T3, T4, T5, T6, T7, T8 and T9): T1 (water),. M. IC. T2 (watery extract of Cordia lutea at 0.06%), T3 (0.12%), T4 (0.25%), T5 (0.5%), T6. Q. UI. (1%), T7 (2%), T8 (4%), T9 (8%) for 48 hours and 72 hours for each of them. After the. BI. O. exposure of the rootlets to the treatments, the assembly, coloration and subsequent. Y. microscopic reading were carried out, which served to determine the mitotic index (IM), of. AC. IA. phases. The results obtained show a decrease in root growth of 1.77cm (T1) up to 0.8cm. RM. (T7) at 48 hours and 0.5cm (T5) at 72 hours where they reached the minimum significant. FA. decrease and their maximum significant decrease in T9 up to 0.3cm and 0.2cm at 48 and. DE. 72 hours respectively. The same is observed in the mitotic index where the percentage goes. TE CA. from 12.6% (T1) to 7.3% and 6% (both T9) at 48 and 72 hours respectively, observing a. IO. significant maximum decrease, but at the same time an increase was evidenced from the. BI BL. profásico index of 47.5% (T1) to 57.6% and 59.2% in the same treatment at 48 and 72 hours respectively. The aqueous leaf extract of Cordia lutea has a cytotoxic effect on the cell cycle in radicular meristems of Allium cepa.. KEY WORDS: Cordia lutea, flower of overo, aqueous extract, cytotoxicity, Allium cepa.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. ii. AGRADECIMIENTO. v. PRESENTACIÓN. vi. JURADO DICTAMINADOR. vii. M. IC. A. DEDICATORIA. viii. O. Q. UI. RESUMEN. ix. Y. BI. ABSTRACT INTRODUCCIÓN. II.. MATERIAL Y MÉTODO. III.. RESULTADOS. IV.. DISCUSIÓN. 22. V.. CONCLUSIONES. 25. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 26. VII.. ANEXOS. 31. 1 7 12. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. I.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I.. INTRODUCCIÓN. A lo largo de la historia, el uso de plantas medicinales ha pasado de generación en generación a través de diversas costumbres y tradiciones, y fueron nuestros antepasados los que tomaron las plantas como fuente de alimento y medicina, por lo que en la actualidad se considera un recurso de suma importancia. Las propiedades terapéuticas que poseen muchas de estas especies vegetales son dotadas de una fuente rica en metabolitos. IC. A. secundarios, que sirven para la preservación y el cuidado de la salud, las cuales actúan por. M. sí solos o en conjunto y se encuentran en ciertas partes de la misma, ya sea, raíces, hojas,. BI. O. Q. UI. tallos, frutos y hasta semillas, etc 1,2,3.. Y. La Organización Mundial de Salud define a la medicina tradicional como una medicina. AC. IA. que abarca las prácticas y enfoques a base de plantas, que son transmitidas por costumbres. RM. y creencias generación tras generación. Además, se estima que un 80% de la población. FA. mundial usa la Medicina Tradicional sola o en combinación con la moderna, para tratar los. DE. problemas primarios de salud, a través de estrategias sanitarias que son implementadas por. TE CA. el gobierno, así como simplemente el uso mediante costumbres ancestrales y culturales. En países del tercer mundo, aproximadamente un 90% de la población tiene acceso a las. BI BL. IO. plantas medicinales y llegan a ser estas su primera línea para el tratamiento de diversas enfermedades. En el caso del Perú, existe una extensa tradición de uso de plantas medicinales para el tratamiento primario de diversas enfermedades; estas, pueden ser empleadas en forma de diversas preparaciones como son las infusiones, macerados, y/o decoctos; siendo estos conocimientos transmitidos y formando así parte de la tradición popular 1,4, 5.. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En un estudio titulado “Empleo de plantas medicinales en usuarios de dos hospitales referenciales del Cusco, Perú” realizado por Oblitas y col. se ha evidenciado una mayor frecuencia de uso de plantas medicinales en pacientes del tercer nivel de atención, estas cifras son mayores a las prevalencias de uso en el año pasado que se han reportado en países como Jamaica (72,6%) y Bolivia (60%). Estos resultados afirman lo ya antes mencionado, y recalca el hecho de que las plantas medicinales son el primer peldaño de la. A. población para aliviar sus males; tanto en población del primer nivel de atención como la. UI. M. IC. que acude a establecimientos de mayor complejidad en diversas regiones o países 6,7,8.. O. Q. En la mayoría de los casos las preparaciones con plantas medicinales no tienen un sustento. Y. BI. científico que pueda validar su uso, incluso suelen comercializarse sin ningún tipo de. IA. restricción, si bien es cierto muchas de estas cuentas con un valor terapéutico adecuado,. RM. AC. pero siempre es necesario que una investigación científica sea la que valide sus 9,10. .. FA. propiedades terapéuticas o compruebe su toxicidad. DE. Uno de los extractos comúnmente usados por la población en el Perú para una supuesta. TE CA. aplicación en la terapéutica del cáncer, específicamente de hígado se conoce como flor de. IO. overo. El interés de este proyecto de investigación es evaluar el efecto de este extracto en. BI BL. el modelo de células meristemáticas de Allium cepa, con miras a un trabajo futuro que valide o descarte su uso terapéutico 10. En el caso de la Cordia lutea “flor de overo”, es una planta de la familia boranginaceae, que se distribuye en países como Bolivia, Ecuador y Perú; es un arbusto de hasta 5 metros de altura, con muchas ramas desde la base por encima del suelo. Sus hojas son medianas a grandes de color verde claro, aterciopeladas; tiene flores amarillas en forma de campanas de 10 a 14 flores por grupo; su fruto es mediano de 1-2cm. Principalmente habitat en bosques secos, bordes de campos de cultivo en zonas costeras 11, 12.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los usos que se le atribuye a esta planta, son a sus flores y hojas, las cuales son usadas contra ictericia, gripe, cicatrizante, dolores de estómago y riñones, pero el uso más común es el caso de las flores, para enfermedades como el cáncer hepático. La resina del fruto interrumpe lactancia en animales y la pulpa se usa como pegamento. Sus semillas son duras y leñosas sin dispersa, la madera es resistente, los frutos mucilaginosos, sirven para pegar como goma o engrudo. Se usa el mucilago de los frutos en cataplasmas externas y en. A. jarabes diluidos en agua caliente, el mucilago y el cocimiento de las hojas sirven como. M. IC. hemostático. Sin embargo pese a todos sus beneficios farmacológicos, se desconoce la. Q. UI. toxicidad de algunas preparaciones en las que se prepara pudiendo causar daño. La. BI. O. literatura científica muestra que en los estudios de toxicidad crónica se han evidenciado. Y. cambios en la conducta como salivación, horas de sueño, letargo; cambios en la apariencia. AC. IA. física, presencia de lesiones que ocasionen dolor o algún otro signo de enfermedad en los. FA. RM. animales de experimentación evaluados 13,14,15,16.. DE. Los efectos terapéuticos de esta planta pueden ser atribuidos a la presencia de flavonoides. TE CA. que componen la parte de la flor. Estos compuestos fenólicos que contienen un sistema C6C3-C6, atribuyen a la planta un acción antioxidante la cual se fundamenta porque los. IO. flavonoides inhiben oxidasas que liberan luego anión superóxido y peróxido de hidrógeno,. BI BL. además se consideran como compuestos eliminadores de radicales libres, debido a que sus grupos hidroxilos le permite atrapar estos radicales; cediendo un átomo de hidrógeno al radical agresor, también quelan iones metálicos, apagan singuletes y tripletes de oxígeno o descomponen peróxidos, evitando así la oxidación de proteínas y el daño al ADN, llegarían a inhibir también la proliferación celular, pudiendo actuar como un mecanismo subyacente que evitaría la oxidación de la xantina oxidasa, la COX evitando así la promoción tumoral, interrumpiendo el ciclo celular por la inhibición de quinasas que depende de ciclinas 17,18,19.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Un estudio realizado por Medina, L y col. en el año 2015, titulado: Estudio farmacognóstico y cuantificación de flavonoides totales de las flores de Cordia lutea (flor de overo) proveniente de Cormot distrito de Compin provincia de Gran Chimú región La Libertad. Determinó concentración de flavonoides totales en las flores de Cordia lutea, entre los cuales tenían quercetina 1,3%, rutina 0,4%, isoquercetina 0,7%; además de tener ácido clorogénico 0,45% y ácido cafeico 0,9% 17.. IC. A. Además poseen compuestos fenólicos como los taninos, que tienen una estructura química. UI. M. variada no nitrogenada, y son conocidos por su capacidad astringente que hacen que las. BI. O. Q. proteínas precipiten y su poder antiinflamatorio20.. Y. Para que se genere un crecimiento en cualquier tipo de tejido es indispensable que las. AC. IA. células puedan atravesar eventos moleculares que engloben en el ciclo celular, en donde. RM. existen genes que regulan de manera positiva dicho ciclo, como por ejemplo las CDK que. FA. son las que codifican a las proteínas del sistema de ciclinas y quinasas dependientes de. DE. ciclinas, las cuales son las posibles encargadas de formar los complejos moleculares como. TE CA. el MPF o factor promotor de la fase M, que está conformado por Ciclina B – Cdk1, el cual. IO. a su vez permite el paso de la interfase al periodo M de las células, y el APC o complejo. BI BL. promotor de la anafase, quien hace que las células pasen de la metafase a la anafase, adicionalmente son los que dejan a la célula salir de la mitosis y poder ingresar a un nuevo ciclo celular . Todas las proteínas que interfieren en el ciclo celular pueden verse afectadas por sustancias citotóxicas, antimitóticas y/o genotóxicas, causando una alteración en su normal desarrollo, y provocando así la aparición de figuras mitóticas anormales, e incluso llegan a causar daños a nivel cromosómico 19.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El ciclo celular consta de 4 etapas o transiciones que son: la iniciación de la proliferación (de Go a G1), iniciación de la replicación (G1 a S), iniciación de la mitosis (G2 a M), iniciación de la segregación cromosómica (de metafase a anafase). Para evaluar mecanismos regulatorios que pueden afectar este ciclo celular se introdujo en 1938 el uso de Allium cepa, un sistema de prueba biológico in vitro ideal, que determina efectos de diversos xenobióticos que generarían un efecto tóxico potencial frente a los procesos de. A. división celular, esto es posible debido al rápido crecimiento de sus raíces y a la respuesta. M. IC. que tiene su genoma frente a sustancias cito y genotóxicos. Debido a todo lo expuesto en el. Q. UI. presente trabajo, se busca evaluar el efecto del extracto acuoso de hojas de flor de overo. Y. BI. O. sobre células meristemáticas de Allium cepa1,19.. IA. Dada las consideraciones mostradas, en el presente trabajo de investigación, se buscó. RM. AC. determinar cuál es el efecto del extracto acuoso de hojas de Cordia lutea sobre células. FA. meristemáticas de Allium cepa después de 48 y 72 horas de exposición a concentraciones. BI BL. IO. TE CA. DE. de 0,06%, 0,12%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4% y 8% del extracto.. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. OBJETIVOS. 1. OBJETIVO GENERAL. -. Determinar el efecto del extracto acuoso de hojas de Cordia lutea sobre células meristemáticas de Allium cepa.. M. Medir el crecimiento radicular de las células meristemáticas de Allium cepa. UI. -. IC. A. 2. OBJETIVOS ESPECIFICOS. O. Q. después de 48 y 72 horas de exposición del extracto acuoso de hojas de Cordia. Calcular el índice mitótico en el modelo de Allium cepa después de 48 y 72 horas. IA. -. Y. BI. luteaa concentraciones de 0,06%, 0,12%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4% y 8%.. RM. AC. de exposición del extracto acuoso de hojas de Cordia lutea a concentraciones de. MATERIAL BIOLÓGICO:. TE CA. 2.1.. MATERIAL Y MÉTODO:. DE. II.. FA. 0,06%, 0,12%, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4% y 8%.. IO. 2.1.1. MATERIAL VEGETAL:. BI BL. o 72 bulbos de Allium cepa L. “cebolla”, con un peso aproximado de 60-80 gramos cada uno en condiciones adecuadas, las cuales serán adquiridas en el Mercado “La Hermelinda” del distrito de Trujillo o Hojas de Cordia lutea “flor de overo” que serán recolectadas del caserío de Huangabal, Simbal.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.2.. MATERIAL DE VIDRIO: •. De uso común en laboratorio, (matraz, vaso de precipitación, varilla de agitación, embudo). 2.3.. EQUIPOS: •. De uso común en laboratorio, (cocina eléctrica, estufa, balanza analítica, entre. UI. REACTIVOS:. BI. Reactivos de coloración de muestras (ácido acético glacial, ácido clorhídrico,. Y. •. O. Q. 2.4.. M. IC. A. otros.). MÉTODOS Y TÉCNICAS 1,19. RM. 2.5.. AC. IA. orceína A y orceína B).. DE. FA. 2.5.1. RECOLECCIÓN DE LA ESPECIE VEGETAL. TE CA. Se recolectaron muestras vegetales completas y también individualmente hojas. IO. de Cordia lutea “flor de overo” del caserío de Huangabal, Simbal.. BI BL. Coordenadas: ▪. Latitud Sur: 7° 55′ 47.1″. ▪. Longitud Oeste: 78° 43′ 56″. ▪. Altitud: 1552 msmn. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.2. SELECCIÓN E IDENTIFICACIÓN TAXONÓMICA. Una vez realizada la recolección de la muestra se transportó al Laboratorio de Toxicología de la Universidad Nacional de Trujillo y se procedió a la selección del material vegetal con el objetivo de realizar una separación de las partes deterioradas y evitar la mezcla con otra especie.. UI. M. IC. Nacional de Trujillo* para su identificación taxonómica.. A. La planta medicinal seleccionada fue llevada al Herbario de la Universidad. Equisetopsida C. Agardh. SUBCLASE:. Magnoliidae Novák ex Takht.. SUPERORDEN:. Asteranae Takht.. ORDEN:. Boraginales Juss. ex Bercht. & J. Presl. AC. RM. FA DE. TE CA. FAMILIA:. IA. Y. BI. O. Q. CLASE:. Cordia lutea. BI BL. IO. GÉNERO:. Boraginaceae Juss. *Código de depósito en el Herbarium Truxillensis: N°(HUT) 59735 (ANEXO 1). 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.3. SECADO, MOLIENDA Y TAMIZACIÓN DE MUESTRAS VEGETALES. Las muestras vegetales fueron lavadas y se colocaron sobre papel Kraft en un lugar fresco y seco durante 24 horas. Luego fueron llevadas a estufa a una temperatura de 40°C, durante 48 horas. Una vez desecado el material vegetal, se procede a realizar la molienda con la ayuda de un molino mecánico, después fueron almacenados en frascos de color ámbar en un lugar sin humedad y en. M. IC. A. oscuridad hasta su posterior utilización.. Q. UI. 2.5.4. PREPARACIÓN DE LOS EXTRACTOS ACUOSOS DE Cordia lutea. Y. BI. O. “flor de overo”. IA. Se prepararon infusos de hojas al 0,06 %, 0,12 %, 0,25%, 0,5%, 1%, 2%, 4%,. RM. AC. 8% (p/v), para ello se colocaron 2 g de la planta en 100 ml de agua. FA. previamente calentada, luego se enfrió y se filtró.. DE. 2.5.5. EVALUACIÓN DEL EFECTO CITOTOXICO:. TE CA. 2.5.5.1. Preparación de los ejemplares de Allium cepa. BI BL. IO. Se seleccionaron bulbos de cebollas de buenas condiciones y de tamaño uniforme, que permitió su cultivo en los vasos. Se lavaron y ubicaron en los vasos con suficiente agua para cubrir la parte inferior, de la cual brotaron las raíces. Se cultivaron a condiciones normales de laboratorio, con cambios de agua destilada cada 24 horas durante 3 días. Una vez que las raíces alcanzaron 1,5 a 2 cm de longitud se seleccionaron para los ensayos posteriores.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.5.2. Exposición de las raíces a diferentes concentraciones de extracto. Los 72 bulbos de cebollas fueron distribuidos aleatoriamente y expuestos a los extractos de Cordia lutea a las concentraciones de 0,06 %, 0,12 %, 0,25%, 0.5%, 1%, 2%, 4%, 8% (p/v) preparadas previamente. La exposición se realizó por 48 y 72 horas.. IC. A. 2.5.5.3. Medición de las raíces de Allium cepa. UI. M. Se utilizaron 4 bulbos de Allium cepa para cada concentración se registró el. IA. Y. 2.5.5.4. Obtención de preparados citológicos. BI. O. Q. crecimiento de las raíces a 48 h y 72 h. RM. AC. Finalizado los tratamientos, las raicillas con las diferentes concentraciones y. FA. tiempos indicados, se procedió a tomar las raicillas seccionadas debidamente. DE. con navajas “Schick” las raicillas fueron lavadas tres veces seguidas con agua. TE CA. destilada para colocarlas en la solución fijadora de Carnoy por espacio de 1 hora. Posteriormente se sacaron estas raicillas del fijador para ser lavadas. IO. nuevamente por tres veces consecutivas con agua destilada, para retirar de esta. BI BL. manera los restos del fijador. Se procedió a secarlas con papel toalla para eliminar los restos de agua en la superficie y así estar lista para depositarlas sobre una luna de reloj para su respectiva coloración de acuerdo a la técnica rápida de Tijo y Levan, que consistió en agregar Orceína al 2% - HCl 1N a cada una de las raicillas.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.5.5. Análisis citológico para la determinación de citotoxicidad. Los ápices de las raicillas así coloreados y tratados se colocaron entre láminas “porta” y “cubre” objetos para su aplastamiento o "squash"; para obtener de esta manera los preparados citológicos que fueron observados al microscopio compuesto tanto con el objetivo de 40 aumentos como el objetivo de inmersión. Posteriormente, se procedió a contar un total de 2000 células meristemáticas. IC. A. por cada uno de los diferentes tratamientos ensayados, y de igual manera para. Q. UI. M. los valores del índice mitótico y de las fases del ciclo celular.. BI. O. Los bioensayos se realizaron en tres repeticiones y los datos obtenidos se. IA. Y. expresaron en porcentaje.. RM. AC. Análisis estadístico 19. FA. Para la presente investigación se utilizarán las medias de los porcentajes del. DE. índice mitótico las cuales fueron sometidas a la prueba de Anova para. BI BL. IO. TE CA. determinar diferencia significativa en algún tratamiento.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS:. En el presente trabajo, se evidenció que el extracto acuoso de hojas de Cordia lutea a concentraciones de 0,5%, 1%, 2%, 4%, 8% presenta efecto citotóxico sobre el ciclo celular en meristemos radiculares de Allium cepa.. En la tabla 1 y 2 se muestran los datos de crecimiento radicular para las 48 y 72 horas de. IC. A. exposición respectivamente; cada uno corresponde al promedio de 5 raíces en cada una de. M. las 4 cebollas (C1-C3). Los datos del blanco corresponden a cebollas no sometidas a. Q. UI. ningún tratamiento. En la figura 1 y 2, muestra el gráfico de barras del crecimiento. BI. O. radicular y comparación de media, en el cual se nota una disminución significativa a partir. IA. Y. del T7 para las 48 horas y T5 para las 72 horas, alcanzando una disminución máxima en el. RM. AC. T9 con una medición de 0,3 cm y 0,2 cm a las 48 y 72 horas respectivamente.. FA. En la tabla 3, se observan los índices mitóticos y de fases en los meristemos radiculares de. DE. Allium cepa a las 48 horas y la tabla 4, nos lo muestra a las 72 horas. En las figuras 3 y 8. TE CA. observamos el gráfico de barras del índice mitótico a las 48 y 72 horas respectivamente, en las cuales para ambas se notan una disminución significativa a partir del T6, llegando a su. BI BL. IO. máxima disminución en el T9 con 7,3% y 6% respectivamente.. En las figuras 4 y 9 observamos el gráfico de barras del índice profásico a las 48 y 72 horas respectivamente, en las cuales se observa un aumento significativo a partir del T3 para las 48 horas y del T4 para las 72 horas, llegando a su máximo aumento en el T9 con 56,7% y 59,2% respectivamente.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. En las figuras 5 y 10 observamos el gráfico de barras del índice metafásico a las 48 y 72 horas respectivamente, en las cuales se observa una disminución significativa a partir del T6, llegando a su máxima disminución en el T9 con 10,6% y 9,6% respectivamente.. En las figuras 6 y 11 observamos el gráfico de barras del índice anafásico a las 48 y 72 horas respectivamente, en las cuales se observa una disminución significativa a partir del. A. T6, llegando a su máxima disminución en el T9 con 7,9% en ambos casos.. M. IC. En las figuras 7 y 12 observamos el gráfico de barras del índice telofásico a las 48 y 72. Q. UI. horas respectivamente, en las cuales se observa una disminución significativa a partir del. BI. O. T7, llegando a su máxima disminución en el T9 con 23,8% y 23,28% para las 48 y 72. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. horas respectivamente.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 1. Datos de crecimiento radicular de las células meristemáticas de Allium cepa expuesto a 48 horas a los diferentes tratamientos de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. CRECIMIENTO RADICULAR (cm) C2. C3. C4. Promedio. 1,26 0,33 1,48 1,4 1,3 0,44 0,9 0,74 0,74. 1,8 1,4 1,26 1,52 1,6 1,24 0,84 0,66 0,1. 2,32 2,02 1,42 1,22 1,36 1 0,86 0,62 0,2. 1,7 2,28 1,62 1,48 1,2 1,4 0,78 0,5 0,16. 1,77 + 0,435 1,507 + 0,867 1,44 + 0,149 1,405 + 0,133 1,365 + 0,17 1,02 + 0,42 0,845 + 0,05 0,63 + 0,1 0,3 + 0,296. O. Q. UI. M. IC. A. C1. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. Concentración del extracto de Cordia lutea (%) Blanco 0,06% 0,12% 0,25% 0,5% 1% 2% 4% 8%. Figura 1. Datos de crecimiento radicular de las células meristemáticas de Allium cepa expuesto a 48 horas a los diferentes tratamientos de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 2. Datos de crecimiento radicular de las células meristemáticas de Allium cepa expuesto a 72 horas a los diferentes tratamientos de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. CRECIMIENTO RADICULAR (cm) C2 C3 C4 Promedio. IC. A. 1,5 1,94 1,86 1,66 0,6 0,66 0,58 0,66 0. M. 2,2 1 0,86 1,88 0,34 0,36 0,42 0,14 0,34. UI. 2,42 1,42 1,6 1,84 0,36 0,64 0,56 0,48 0,5. O. 1,64 2,26 2,08 0,6 0,78 0,36 0,42 0,6 0. Q. C1. 1,95 + 0,44 1,65 + 0,557 1,6 + 0,53 1,495 + 0,604 0,535 + 0,209 0,505 + 0,167 0,495 + 0,08 0,47 + 0,23 0,2 + 0,251. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. Concentración extracto de Cordia lutea (%) Blanco 0,06% 0,12% 0,25% 0,5% 1% 2% 4% 8%. Figura 2. Datos de crecimiento radicular de las células meristemáticas de Allium cepa expuesto a 72 horas a los diferentes tratamientos de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 3: Índices mitóticos y de fases de meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 48 horas a los diferentes tratamientos de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea Tratamiento Índice / mitótico Parámetro T1 12,63 + 0,20. Índice profásico. Índice metafásico. Índice anafásico. Índice telofásico. 47,56 + 1,09. 14,82 + 0,923. 10,97 + 0,481. 26,67 + 0,504. 12,52 + 0,31. 48,5 + 0,571. 14,49 + 0,737. 10,61 + 0,48. 26,42 + 0,449. T3. 12,43 + 0,31. 49,27 + 0,47. 14,28 + 0,75. 10,212 + 0,33. 26,237 + 0,344. T4. 12,3 + 0,334. 49,51 + 0,47. 14,2 + 0,756. 10,145 + 0,23. 26,142 + 0,316. T5. 12,23 + 0,37. 49,7 + 0,531 14,105 + 0,725 10,09 + 0,265. 26,093 + 0,311. T6. 10,7 + 0,165. 52,5 + 0,854. 12,57 + 0,837. 9,187 + 0,627. 25,66 + 0,502. T7. 10,11 + 0,04. 54,28 + 0,89. 11,85 + 0,919. 8,782 + 0,568. 25,0875 + 0,31. T8. 9,14 + 0,579. 55,413 + 0,6. 11,587 + 0,8. T9. 7,39 + 0,792. 57,68 + 0,72. 10,6 + 0,771. UI. M. IC. A. T2. O. Q. 8,38 + 0,481. 23,787 + 0,317. Y. BI. + DV (desviación estándar). 7,925 + 0,37. 24,62 + 0,578. IA. *leyenda: Tratamientos. AC. T1: Blanco, 48 horas de exposición. RM. T2: 0,06% de extracto acuoso de Cordia lutea 48 horas de exposición. FA. T3: 0,12% de extracto acuoso de Cordia lutea 48 horas de exposición. DE. T4: 0,25% de extracto acuoso de Cordia lutea 48 horas de exposición. TE CA. T5: 0,5% de extracto acuoso de Cordia lutea 48 horas de exposición. IO. T6: 1% de extracto acuoso de Cordia lutea 48 horas de exposición. BI BL. T7: 2% de extracto acuoso de Cordia lutea 48 horas de exposición T8: 4% de extracto acuoso de Cordia lutea 48 horas de exposición T9: 8% de extracto acuoso de Cordia lutea 48 horas de exposición. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IA. Y. Figura 3. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice mitótico y. AC. meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 48 horas a los diferentes tratamientos de. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 4. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice profásico y meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 48 horas a los diferentes tratamientos de. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. FA. Figura 5. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice metafásico y. DE. meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 48 horas a los diferentes tratamientos de. BI BL. IO. TE CA. extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Figura 6. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice anafásico y meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 48 horas a los diferentes tratamientos de. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. TE CA. Figura 7. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice telofásico y meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 48 horas a los diferentes tratamientos de. BI BL. IO. extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 4. Índices mitóticos y de fases de meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 72 horas a los diferentes tratamientos de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea Índice telofásico 26,71 + 0,524 26,51 + 0,404 26,237 + 0,344 26,117 + 0,358 26,093 + 0,311 25,538 + 0,709 25,087 + 0,311 24,45 + 0,806 23,787 + 0,317. BI. O. Q. + DV (desviación estándar). Índice anafásico 10,98 + 0,471 10,56 + 0,483 10,212 + 0,32 10,15 + 0,298 10,1 + 0,3043 9,138 + 0,531 8,782 + 0,568 8,325 + 0,532 7,925 + 0,37. A. Índice metafásico 14,82 + 0,8902 14,35 + 0,576 14,28 + 0,751 14,21 + 0,756 13,93 + 0,646 12,08 + 0,686 11,6 + 1,412 11,225 + 0,85 9,6 + 0,891. IC. Índice profásico 47,5 + 1,046 48,59 + 0,62 49,27 + 0,46 49,51 + 0,47 49,91 + 0,47 53,25 + 0,51 54,53 + 1,29 56 + 1,4537 59,21 + 0,47. M. Índice mitótico 12,57 + 0,174 12,48 + 0,228 12,413 + 0,33 12,375 + 0,32 11,89 + 0,551 10,563 + 0,29 10,045 + 0,10 9,863 + 0,556 6,075 + 0,386. UI. Tratamiento/ Parámetro T1 T2 T3 T4 T5 T6 T7 T8 T9. Y. *leyenda: Tratamientos. AC. IA. T1: Blanco, 72 horas de exposición. RM. T2: 0.06% de extracto acuoso de Cordia lutea 72 horas de exposición. FA. T3: 0.12% de extracto acuoso de Cordia lutea 72 horas de exposición. DE. T4: 0.25% de extracto acuoso de Cordia lutea 72 horas de exposición. TE CA. T5: 0.5% de extracto acuoso de Cordia lutea 72 horas de exposición T6: 1% de extracto acuoso de Cordia lutea 72 horas de exposición. IO. T7: 2% de extracto acuoso de Cordia lutea 72 horas de exposición. BI BL. T8: 4% de extracto acuoso de Cordia lutea 72 horas de exposición T9: 8% de extracto acuoso de Cordia lutea 72 horas de exposición. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Y. Figura 8. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice mitótico y. AC. IA. meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 72 horas a los diferentes tratamientos de. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. Figura 9. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice profásico y meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 72 horas a los diferentes tratamientos de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. BI. O. Figura 10. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice metafásico. Y. y meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 72 horas a los diferentes tratamientos. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. Figura 11. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice anafásico y meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 72 horas a los diferentes tratamientos de extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RM. Figura 12. Análisis de varianza y Prueba de comparación de Medias del índice telofásico y. FA. meristemos radiculares de Allium cepa expuesto a 72 horas a los diferentes tratamientos de. BI BL. IO. TE CA. DE. extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. Q. UI. M. IC. A. Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DE. FIGURA 13: Índice de fases en meristemos radiculares de Allium cepa expuesto al. BI BL. IO. TE CA. extracto acuoso de las hojas de Cordia lutea. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSIÓN:. Citotoxicidad abarca un concepto que suele aplicarse a diversas situaciones como: muerte celular la alteración de su propio metabolismo. Actualmente se emplean ensayos que determinen esta citotoxicidad, que son de bajo costo, fácil cuantiﬁcación y reproducibilidad. Mediante este tipo de experimentos es posible determinar el potencial citotóxico de compuestos de interés, que podrían tener futuras aplicaciones terapéuticas.. IC. A. Los modelos experimentales empleados para valorar la toxicidad de compuestos químicos. UI. M. se fundamentan en el sustrato biológico y en los indicadores de toxicidad. Entre los. Q. organismos de prueba usados para estos ensayos se incluyen las plantas superiores como. BI. O. Allium cepa, la cual es reconocida como excelente bioindicador de genotoxicidad y efectos. AC. IA. Y. mutágenicos 9.. RM. Cuando un bulbo de cebolla se rehidrata se produce una incitación en la división de las. FA. células, lo que produce el crecimiento de las raíces de las plantas. La población de células. DE. meristemáticas de cebolla se encuentran sujetas a un equilibrio dinámico estable,. TE CA. hallándose asincrónicamente distribuidas a través del ciclo. Estas células meristemáticas presentes en los ápices radiculares de Allium cepa ¨cebolla¨ constituyen un modelo ideal. BI BL. IO. para el estudio de los fenómenos celulares debido a que se encuentran en constante equilibrio proliferativo; de esta manera es como el número de células que se encuentran en una fase determinada es también constante y proporcional a la duración de la misma pero cuando se lleva a cabo en presencia de sustancias antimitóticas, citotóxicas o genotóxicas, altera su normal desarrollo e incluso ocasionan daño a nivel cromosómico, ocasionando que la división celular de los meristemos radiculares pueda inhibirse, retardarse u ocasionar apoptosis 20, 21,22.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Después de analizar los resultados que se obtuvieron a partir de los diferentes tratamientos del extracto acuoso de Cordia lutea “flor de overo”; tanto en 48 como en 72 horas, se observó una disminución en el crecimiento radicular para ambos tiempos. En las tablas 1 y 2 se pueden observar los datos de crecimiento radicular para las 48 y 72 horas de exposición respectivamente; cada uno corresponde al promedio de 5 raíces en cada una de las 4 cebollas (C1-C3). Los datos del blanco corresponden a cebollas no sometidas a. A. ningún tratamiento. En la figura 1 y 2, muestra el gráfico de barras del crecimiento. M. IC. radicular y comparación de media, en el cual se nota una disminución significativa a partir. Q. UI. del T7 para las 48 horas y T5 para las 72 horas, alcanzando una disminución máxima en el. BI. O. T9 con una medición de 0,3 cm y 0,2 cm a las 48 y 72 horas respectivamente. Se concluye. Y. que los efectos de las concentraciones de 1%, 2%, 4% y 8% tanto en 48 como 72 horas y. AC. IA. 0,5 % en 72 horas presentan diferencias significativas respecto al control , sin presentar. RM. diferencias entre sí (p<0,01). Esta disminución en longitud de las raíces observadas se. FA. puede explicar por mecanismos relacionados con el funcionamiento de la membrana. DE. plasmática, y que involucran diferentes especies químicas, todas ellas de importancia en la. TE CA. fisiología vegetal, tales como el cinc (Zn2+), magnesio (Mg2+) y al calcio (Ca2+). Las. IO. bajas concentraciones de iones zinc favorecen un aumento de la auto-oxidación de la. BI BL. membrana plasmática, órgano en el cual están ubicados los principales sitios de selectividad en la adquisición de cationes y aniones, provocando graves perturbaciones del ambiente celular; en consecuencia un tránsito desordenado de elementos metálicos o metaloides, que conducen finalmente a la inactivación de enzimas específicas en la síntesis de proteínas y de ARN responsables directos del desarrollo de las raíces. 23,24. .. El análisis de los resultados de los bioensayos de las raíces del grupo de bulbos de Allium cepa que han sido considerados como controles, muestran una cinética en equilibrio durante las 48 y 72 horas. En un panorama general de observación se registró un alto. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. índice mitótico, con elevado porcentaje de fases de proliferación, como profase, metafase, anafase, y telofase siguiendo el patrón normal del ciclo celular del Allium cepa. En el análisis de las raíces tratadas con una dosis de 1% (T6) de Cordia lutea y a 48 horas de exposición se ha podido determinar la mínima concentración que genera una disminución significativa respecto al control (12,63%) llegando a un porcentaje de 10,69%; patrón que se observa de la misma manera a las 72 horas, donde de tener un porcentaje de 12,57% en. A. el blanco, disminuye hasta 10,5% en el T6 que corresponde a la concentración de 1%.. M. IC. Siendo esta disminución progresiva conforme la concentración de Cordia lutea aumenta,. Q. UI. hasta llegar a valores de 7,39% y 6,075%, con respecto al control (T1). (Tabla 3, Tabla 4).. BI. O. La disminución del índice Mitótico (IM) podría deberse a alteraciones en la maquinaria. Y. molecular que controla el paso de la célula de interfase a mitosis, consecuentemente. AC. IA. conllevando a alteraciones de los índices de fases en células meristemáticas de A. cepa. El. RM. Índice Mitótico, caracterizado por el número total de células en división, es el criterio. FA. fundamental para evaluar la citotoxicidad del agente investigado, esta disminución se. DE. debería probablemente, a que las concentraciones ensayadas del extracto acuoso de hojas. TE CA. de flor de overo, contiene metabolitos como taninos y flavonoides. Estos componentes. IO. estarían ejerciendo un efecto oxidativo que estaría afectando la formación del complejo. BI BL. CdK1-ciclina B; el cuál forma a su vez forma el Factor Promotor de la Mitosis (FPM); lo que traería como consecuencia que las células no transiten normalmente de la fase G2 (segundo punto de control del ciclo celular) hacia la mitosis; disminuyendo consecuentemente el número de células en division26, 27,33.. En relación al índice profásico en las figuras 4 y 9 observamos el gráfico de barras a las 48 y 72 horas respectivamente, en las cuales se observa para ambas un aumento significativo respecto a su control que tenían valores de 47,56% y 47,5% respectivamente a partir del T3 para las 48 horas (concentración de 0,12% de Cordia lutea) que logró alcanzar un 49,27%,. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. y del T4 (concentración de 0,25% de Cordia lutea) para las 72 horas que obtuvo un valor de 49,5%, llegando a su máximo aumento en el T9 para ambas horas (concentración de 4% de Cordia lutea con 56,7% y 59,2% respectivamente. Estos resultados denotan en principio el efecto oxidativo de los compuestos antes mencionados, los cuales inactivarían la formación del complejo Ciclina B- cdk1, que entre otras funciones es responsable de activar a las proteínas del mantenimiento estructural cromosómico (SMC) conocidas como. A. condensinas, que traería como consecuencia que los procesos de condensación del material. M. IC. genético y de polimerización de microtúbulos para la formación del huso se vean. Q. UI. afectados, no transitando entonces las células normalmente desde la profase hacía la. Y. BI. O. metafase22,28.. IA. En el caso del índice metafásico su disminución se pudo observar en todos los tratamientos. RM. AC. a las 48 y 72 horas, en las cuales se observa una disminución significativa a partir del T6. FA. con unos porcentajes de 12,57% y 12,08%, llegando a su máxima disminución en el T9. DE. con 10,6% y 9,6% respectivamente, se debería a la inhibición del FPM, disminuyendo el. TE CA. ensamblaje del huso mitótico. Ello desencadenarían un cambio súbito en la funcionalidad de los cinetocoros, dejando de inducir la polimerización de microtúbulos que se elaboran. IO. perpendicularmente al eje mayor del cromosoma y que se anclan por una de sus. BI BL. extremidades en el cinetocoro; logrando alcanzar un menor número de células la metafase con respecto a T1, tal como lo experimentaron basto et al (2000), quienes afirmaron durante sus ensayos que en la metafase los cromosomas están sujetos por el centrómero a los microtúbulos del huso acromático, de tal forma que si este no se organiza los cromosomas pierden orientación y no migraran a los polos; a su vez estos mecanismos vienen siendo monitoreados usando una serie de inhibidores que mantienen los cromosomas en una fase determinada de la mitosis. Además el IMet disminuye como una consecuencia de la interferencia del ciclo celular desde el aumento de la profase29.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los índices anafásicos también disminuyen a las 48 y 72 horas respectivamente, en las cuales se observa una disminución significativa a partir del T6, llegando a su máxima disminución en el T9 con 7,9% en ambos casos, esto ocurriría ya que el incremento del número de células en la profase generaría una disminución en metafase y por ende en la anafase. Además la Cordia lutea actuaría inhibiendo el FPM, el complejo promotor de la anafase (APC), con lo que el proceso de segregación de cromátidas hermanas se vería. IC. A. afectado y las células no podrían transitar hacia la anafase.. UI. M. Además, se observa la disminución del índice telofásico de los tratamientos a las 48 y 72. O. Q. horas respectivamente, en las cuales existe una disminución significativa a partir del T7,. Y. BI. llegando a su máxima disminución en el T9 con 23,8% y 23,28% para las 48 y 72 horas. IA. respectivamente. La disminución en este índice, se originaría debido al detenimiento del. RM. AC. proceso de profase que ya se discutió anteriormente30,31,32.. FA. Todos estos resultados nos muestran la potente actividad citotóxica del extracto acuoso de. DE. las flores de Cordia lutea lo que conlleva a tomarle especial interés, ya que una planta que. TE CA. cuenta con propiedades para detener o disminuir las diferentes fases del ciclo celular y por. IO. tanto el crecimiento acelerado de células cancerígenas están alcanzando gran interés por. BI BL. parte de los investigadores.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. V.. CONCLUSIONES:. 1. El extracto acuoso de hojas de Cordia lutea muestra una evidente disminución sobre el crecimiento radicular y el índice mitótico en el modelo de Allium cepa 2. Las concentraciones de 2% a 48 horas y 0,5% a 72 horas del extracto acuoso de hojas de Cordia lutea muestran una disminución significativa del crecimiento. A. radicular llegando a ser máximo en la concentración de 8% en ambos tiempos.. M. IC. 3. Las concentraciones del índice mitótico en el modelo de Allium cepa después de. Q. UI. 48 y 72 horas de exposición del extracto acuoso de hojas de Cordia lutea. BI BL. IO. TE CA. DE. FA. RM. AC. IA. Y. BI. O. disminuye de manera significativa a concentración de 1 %.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Chávez M. Efecto del extracto etanólico de Annona muricata a diferentes tiempos y concentraciones sobre el ciclo celular en Allium cepa. UNITRU [Internet]. 2015. [Visto. el. 5. de. Octubre. del. 2018].. Disponible. en:. http://dspace.unitru.edu.pe/handle/UNITRU/4933 2. Arroyo J y col. Estudio de toxicidad a 28 días, del extracto atomizado de rizoma de. IC. A. Curcuma longa (A4R), flores de Cordia lutea (A4F) y hojas de Annona muricata. 2018].. Disponible. Q. Octubre. http://rpmi.pe/wp-. Y. content/uploads/2016/04/v01n01-31-37.pdf. en:. O. [Acceso:. BI. 2016.. UI. M. (A4L) en un modelo murino. Revista Peruana de Medicina integrativa [Internet].. IA. 3. Coria A y col. Annona muricata: A comprehensive review on its traditional. RM. AC. medicinal uses, phytochemicals, pharmacological activities, mechanisms of action. FA. and toxicity. Arabian Journal of Chemistry. [Internet]. 2016. [Acceso: Agosto. DE. 2018]. Disponible en: http://dx.doi.org/10.1016/j.arabjc.2016.01.004. tradicional. TE CA. 4. Organización Mundial de la Salud (OMS). Estrategia de la OMS sobre medicina [Internet].. 2002.. [Acceso:. Agosto. 2018].. Disponible. IO. en:http://apps.who.int/medicinedocs/es/m/abstract/Js21201es/. BI BL. 5. Fernández V y col. Evaluación citotóxica de Psidium guajava L. utilizando como bioensayo el Allium test. Pubmed.[Internet].2009. [Acceso: Agosto 2018]. Disponible. en:. https://www.researchgate.net/publication/222091685_Cytotoxic_Evaluation_of_Psi dium_guajava_L_using_as_bioassay_the_Allium_Test. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/.

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