Efecto Antibacteriano In Vitro Del Extracto Etanólico De Stevia Rebaudiana Sobre Streptococcus Mutans Atcc 25175

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(1)Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. MA TI. FACULTAD DE MEDICINA. CA. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IN. FO R. ESCUELA DE ESTOMATOLOGÍA. E. “Efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico. MA S. de Stevia rebaudiana sobre Streptococcus mutans. DE. SI S. TE. ATCC 25175.”. Pérez Guevara, Sara Patricia. IC. IN. A. AUTORA:. OF. ASESORA:. Dra. Teresa E. Ríos Caro.. TRUJILLO – PERÚ 2013. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. MA TI. CA. DEDICATORIA. FO R. A mi Padre y Amigo, Jehová Dios, quien en su infinito amor, me ha guiado, cada día, durante todos estos años, fortaleciéndome y enseñándome que. MA S. E. IN. con humildad, paciencia y perseverancia todo es posible.. TE. A mis padres: GENOVEVA Y OSWALDO; ejemplos de vida.. A mi querida hermana, ANA, por su cariño y comprensión.. OF. IC. IN. A. DE. SI S. Por su amor y apoyo incondicional.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. MA TI. CA. AGRADECIMIENTOS. FO R. Agradezco a la Dra. Teresa Ríos Caro, por su valiosa guía y asesoramiento en la realización de esta tesis.. MA S. E. IN. A mis maestros, gracias por su tiempo y por transmitirme sus amplios conocimientos y sabios consejos, en el desarrollo de mi formación profesional.. SI S. TE. A Tony Luján, gracias por su apoyo incondicional como amigo y compañero de trabajo, en el transcurso de mi carrera universitaria.. OF. IC. IN. A. DE. A Diana Jiménez y César Loyaga, gracias por brindarme su amistad sincera y hacer de esta experiencia una de las más especiales.. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. RESUMEN El presente estudio de tipo experimental in vitro, tuvo como objetivo. CA. determinar la actividad antibacteriana de extractos etanólicos de hojas de. MA TI. Stevia rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. Los extractos se obtuvieron a partir de hojas frescas de Stevia rebaudiana,. FO R. seis concentraciones en etanol de 70° y seis concentraciones en etanol de 30°. La concentración inhibitoria mínima se obtuvo por el método de dilución. IN. en caldo y agar y para el efecto bactericida se empleó la técnica de difusión. E. de discos de Kirby y Bauer. Los hallazgos de los 3 ensayos realizados en los. MA S. cuales se trabajó con las 12 concentraciones del extracto para determinar la CMI y 12 concentraciones para determinar la CMB, permitieron seleccionar a. TE. la CMI en 1,07mg/mL en el extracto en etanol de 70° y la concentración de. SI S. 4,28mg/ml, en el extracto en etanol de 30° y a la CMB en 10mg/mL en el extracto en etanol de 70° y la concentración de 42,8mg/mL en el extracto en. DE. etanol de 30° (p< 0.01). Concluyendo que el extracto etanólico de Stevia rebaudiana posee efecto antibacteriano sobre Streptococcus mutans ATCC. IN. A. 25175.. OF. IC. Palabras clave: Bactericida, extracto,Stevia, Streptococcus mutans. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. ABSTRACT. This experimental study in vitro was to determine the antibacterial activity of. MA TI. ethanol extracts of Stevia rebaudiana leaves on Streptococcus mutans ATCC. FO R. 25175.. The extracts were obtained from fresh leaves of Stevia rebaudiana, six. IN. concentrations of ethanol 70 ° and six concentrations in ethanol 30 °. The minimum inhibitory concentration was obtained by the broth dilution method. MA S. E. and agar and the bactericidal effect of the disk diffusion method of Kirby and Bauer was employed. The findings of the 3 trials in which we worked with 12. TE. concentrations of the extract to determine the MIC and 12 concentrations to determine the CMB , allowed choise the MIC 1.07 mg / mL in ethanol extract. SI S. of 70 ° and concentration of 4.28 mg / ml , ethanol extract at 30 ° and the cmb. DE. in 10mg/mL in ethanol extract of 70 ° and a concentration of 42.8 mg / mL in the extract in ethanol 30 ° ( p < 0.01). Concluding that the ethanol extract of. OF. IC. 25175.. IN. A. Stevia rebaudiana has antibacterial effect on Streptococcus mutans ATCC. Palabras clave: Bactericide, extract, Stevia, Streptococcus mutans. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. ÍNDICE. MA TI. DEDICATORIA AGRADECIMIENTOS RESUMEN. IN. FO R. ABSTRACT. INTRODUCCIÓN……………………………………………….….7. II.. MATERIAL Y MÉTODOS………………………………………..22. III.. RESULTADOS…………………………………………………….41. IV.. DISCUSIÓN………………………………………………………..46. V.. CONCLUSIONES…………………………………………………52. VI.. RECOMENDACIONES…………………………………………...53. SI S. TE. MA S. E. I.. DE. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS…………………………….54. OF. IC. IN. A. VIII. ANEXOS…………………………………………………………….59. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. I. INTRODUCCIÓN. Los datos epidemiológicos sobre caries dental siguen siendo altos,. CA. según (OMS-WORLD Health Report 2003), 5 mil millones de personas. MA TI. padecen caries dental, lo que equivale aproximadamente a un 80 % de la población mundial; otros estudios plantean que la caries dental la padece. FO R. aproximadamente el 99 % de la población de América Latina, lo cual representa un 96 % del mundo1. Esta situación no es diferente en el Perú,. IN. según Juan Vásquez Izquierdo, jefe del servicio de Odontoestomalogía de. E. Hospital Nacional Dos de Mayo, dijo que el 95.5% de la población padece de hace que la investigación sobre el. MA S. algún tipo de caries2. Esta situación. control de la enfermedad sea permanente. Se han ensayado diferentes. TE. métodos, uno de ellos es el uso de propiedades de algunos fitoquimicos. SI S. entre los que se cuentan el estudio que realizara Bazalar y col (1998) 3 en el cual utilizaron dos plantas medicinales de nuestro medio: Erythroxilum. DE. novogranatense var. truxillense (Hoja de coca de Trujillo) y Plantago major (Llantén), evaluando la acción inhibitoria de la asociación de dichas. IN. A. sustancias frente al crecimiento de bacterias y hongos. También Moromi y. IC. col 4(2006), analizaron el efecto del té verde en la formación de la placa. OF. bacteriana por Streptococcus mutans ATCC 25175; Pretel S.5 en 2011 investigó el efecto antibacteriano del extracto butanólico de Mauria heterophylla (gian) sobre la cepa standard de Streptococcus mutans ATCC. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. 25175, determinando una concentración mínima inhibitoria de 16 mg/ml y la concentración mínima bactericida de 32 mg/ml.. CA. En este contexto el presente estudio centra su interés en evaluar la. MA TI. capacidad antibacteriana de un fitoquímico como la Stevia Rebaudiana cuyo cultivo ya ha sido introducido en nuestro país hace ya una década mediante numerosos proyectos dado que es perfectamente adaptable a las regiones. FO R. tropicales y subtropicales del Perú, que presentan condiciones ideales en altitud, clima, suelo y situación geográfica para el cultivo de esta planta,. IN. actualmente su cultivo ha sido incluido en el portafolio de pequeñas. E. extensiones de Cajamarca, Amazonas, San Martin, Ucayali y Apurímac6.. MA S. Dado que existen estudios sobre sus propiedades antibacterianas, es de interés en el ámbito odontológico el conocimiento de su acción sobre el. TE. patógeno principal de la caries dental, como alternativa en el tratamiento. SI S. preventivo de la enfermedad.. DE. Según la OMS “caries es aquella lesión patológica que reblandece los tejidos duros del diente y que llega a formar una cavidad en estos tejidos”7. IN. A. También se afirma que la caries dental es una enfermedad de origen. IC. multifactorial en la que existe interacción de tres factores principales: el. OF. huésped (higiene bucal, la saliva y los dientes), la microflora (infecciones bacterianas) y el sustrato (dieta cariogénica). Además de estos factores, deberá tenerse en cuenta uno más, el tiempo8. Es una enfermedad de elevada frecuencia, de mucha consideración en la población infantil. Se. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. produce cinco veces más a menudo que la siguiente enfermedad más común, el asma (CDC, 2000)9.. CA. Tinanoff y Palmer en el año 2000, reportaron que la caries dental en los. MA TI. niños responde a la combinación de varios factores que incluyen la colonización de bacterias, el tipo de alimentos y la frecuencia de consumo de. FO R. los mismos así como la susceptibilidad del diente. También indicaron que el riesgo de caries aumenta con el consumo de frecuente de azúcares y con el. IN. tiempo que éstos permanecen en boca. Se hizo mención a la sacarosa como. E. el azúcar más cariogénico10.. MA S. El paso más importante para que se produzca la caries, es la adhesión inicial de la bacteria a la superficie del diente. Esta adhesión está mediada. TE. por la interacción entre una proteína del microorganismo y algunas de la. SI S. saliva que son adsorbidas por el esmalte dental. Para la colonización bacteriana, es imprescindible la formación previa de una fina película de. DE. proteínas salivales sobre la superficie del diente: la ya mencionada película. A. adquirida. La interacción se produce en cierta medida a través de cargas. IN. electrostáticas. La carga eléctrica de las proteínas se relaciona con la. IC. presencia de grupos ionizables en sus aminoácidos constituyentes. Se ha. OF. observado que mientras mayor es la capacidad de adherencia del microorganismo, mayor es la experiencia de caries dental8.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Abelson y Mandel (1981) indican que el pH salival y la capacidad buffer están relacionados a la presencia de caries11, pues ayudan a proteger a los. CA. tejidos bucales contra la acción de los ácidos provenientes de la comida o de la placa dental, por lo tanto, puede reducir el potencial cariogénico del. MA TI. ambiente12.Ericsson et al mostraron asociación del flujo y pH salival con la prevalencia de caries, cuyas concentraciones en la cavidad bucal podrían. la. boca. de. un. solo. individuo. hay. frecuentemente. más. IN. En. FO R. influir en la resistencia o susceptibilidad a la caries dental13.. E. microorganismos que personas hay en el mundo entero. El crecimiento de. MA S. estos microorganismos, en la boca de un infante, sigue un patrón de sucesiones ecológicas microbianas, análogas a la sucesión que ocurre en los praderas. y. otros. ecosistemas.. La. mayor. parte. de. los. TE. bosques,. SI S. microorganismos de la cavidad bucal son cocos y bacilos grampositivos y gramnegativos aerobios, anaerobios facultativos y anaerobios estrictos; de. DE. todos ellos, los Streptococcus constituyen el grupo más numeroso en la cavidad bucal, y de éstos, los Streptococcus mutans (SM) son de los más. IN. A. relevantes por estar íntimamente ligados a la producción de la caries. IC. dental14.. OF. Streptococcus mutans (SM) es el principal microorganismo que. contribuyen a la caries dental en los pacientes libres de caries, el cual se encuentra como flora normal en la cavidad oral, además es dominante en la placa de pacientes con múltiples lesiones de caries activas. El período crítico 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. de la colonización de SM se produce a la edad de 19 a 31 meses en los que se establece la ventana de infectividad. Sin embargo, las pruebas mostraron. CA. que SM se podría encontrar poco después de la erupción del diente, incluso. MA TI. en bebés de 6 meses de edad que no tienen ningún diente 15.Los Streptococcus mutans son los encargados de la formación de la capa de glucano insoluble a través de la síntesis de la glucosiltransferasa. Esta capa. FO R. de glucano insoluble es esencial para la adherencia de los microorganismos a las superficies de los dientes16.Otra característica del Streptococcus. IN. mutans es su corto efecto post-pH, que puede definirse como el tiempo. E. necesario para recuperar su actividad de crecimiento habitual, tras estar. MA S. sometido a un bajo pH éste vuelve a la normalidad. Según lo expuesto, no es de extrañar que estas especies bacterianas sean las que consigan alcanzar. partir. SI S. desmineralización7.A. TE. más rápidamente el pH crítico 4.5 necesario para iniciar el proceso de del. metabolismo. de. la. sacarosa. estos. microorganismos, en particular el SM, producen principalmente ácido láctico,. DE. el cual es fundamental en la virulencia debido a que, aparentemente, es el. A. ácido más potente que interviene en la desmineralización del diente,. IN. causando daño en la presencia de hidratos de carbono fermentables tales. IC. como sacarosa, fructosa, y glucosa 11, 17.. OF. El control de la dieta es uno de los factores más importantes en la. prevención de la caries dental, así como para la prevención de otras enfermedades crónicas, tales como la obesidad, la diabetes y otros. Estas enfermedades están estrechamente relacionadas con la dieta y la ingesta de 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. grandes cantidades de azúcar. Los hábitos alimentarios son difíciles de cambiar, especialmente cuando se relaciona con el consumo de productos. CA. dulces. La búsqueda de un sustituto saludable del azúcar es una forma. MA TI. importante de contribuir a la prevención de las enfermedades dentales y de otro tipo. La sacarosa se metaboliza fácilmente por las bacterias orales, que se encuentran en los tejidos de la placa dental en el proceso dinámico de la 18. .El consumo excesivo de azúcares refinados, especialmente. FO R. caries. sacarosa, promueve un balance calórico positivo, la pérdida del control del. IN. peso corporal, aumento de peso excesivo y la obesidad. Además, este hábito. E. dietético contribuye a las etiologías de la la caries dental, diabetes tipo 2,. MA S. cáncer, patogénesis de las enfermedades inflamatorias del intestino y candidiasis19. Azúcares de la dieta, especialmente sacarosa, causan la caries. TE. dental. La bioquímica, microbiología animal y humana apoya la evidencia. SI S. clínica y epidemiológica de causalidad que relaciona el consumo de azúcar y la formación de la caries dental. La sacarosa, identificada como el azúcar. DE. más cariogénico, en su forma de glucano, promueve la firme adhesión. A. bacteriana a los dientes y límites ácidos de la placa y tampón. El riesgo de. IN. caries se relaciona tanto con la cantidad y la frecuencia de la ingesta de. IC. sacarosa, con un fuerte incremento en la ocurrencia/concurrencia con el. OF. aumento de consumo de sacarosa. El aumento de la disponibilidad de sustitutos eficaces y seguros de sacarosa en la dieta durante períodos. críticos del desarrollo dental es de vital importancia para la salud pública a largo plazo19. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Ha sido bien documentado que las plantas medicinales confieren. CA. actividad antimicrobiana para bacterias orales. Algunos estudios han. MA TI. reportado que los antibióticos como la penicilina y la eritromicina, pueden prevenir eficazmente la caries dental en animales y los seres humanos, pero nunca se utilizan clínicamente debido a sus muchos efectos adversos. La. FO R. introducción reciente de remedios naturales, elaborados a base de plantas medicinales, que son buenos reservorios de agentes quimioterapéuticos,. IN. puede ser una alternativa para evitar los efectos adversos de estos. tinciones dentales17.. MA S. E. antibióticos como la reacción de hipersensibilidad, suprainfecciones, y las. TE. Un conjunto considerable de evidencia científica apoya la eficacia y la. SI S. seguridad en la promoción de la salud humana de los extractos de la hoja de la "hierba dulce" Stevia (Stevia rebaudiana Bertoni), es no calórico, no. DE. sintético y un potente edulcorante. Estos extractos contienen varios glucósidos diterpenoides de la aglicona, steviol, incluyendo esteviósido (300. IN. A. veces más dulce que la sacarosa), rebaudiósido A (Reb A, 250 - a 450 veces. IC. más dulce), reb B (300 - a 350 veces más dulce), Reb C (50 - a 120 veces. OF. más dulce), reb D (250 - a 450 veces más dulce), reb E (150 - a 300 veces dulce), steviobioside (100 - a 125 veces más dulce), dulcósido A (50 - a 120 veces más dulce), isosteviol y dihydroisosteviol. Los procedimientos para la. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. extracción y purificación de estos compuestos y la revisión de su farmacocinética son proporcionados por Chatsudthipong y Muanprasat19.. fructosa, miel y jarabe de maíz que califican como edulcorantes. MA TI. blanco,. CA. Stevia es un edulcorante no calórico efectivo mientras que el azúcar. naturales, ninguno de ellos es libre de calorías, ni son los componentes. FO R. dietéticos beneficiosos para aquellos que sufren de trastornos de azúcar en la sangre y otras condiciones La propiedad más importante de la Stevia se. IN. encuentra en sus hojas. Se trata del edulcorante natural llamado esteviósido,. E. que está constituido por una mezcla de ocho glucósidos diterpénicos 19. .La planta. MA S. (principalmente el esteviósido y el rebaudiósido, entre otros). Stevia rebaudiana Bertoni es una hierba perenne y pertenece a la familia. TE. Asteraceae20. Durante su desarrollo inicial no posee ramificaciones,. SI S. tornándose multicaule después del primer ciclo vegetativo, llegando a producir hasta 20 tallos en tres a cuatro años; puede alcanzar hasta 90 cm. DE. de altura en su hábitat natural y en los trópicos puede llegar a tener alturas superiores a 100 cm. La raíz es, pivotante, filiforme, y no profundiza,. IN. A. distribuyéndose cerca de la superficie17. Es originario de ciertas regiones de. IC. América del Sur sobre todo en Paraguay y Brasil. Stevia hoy se cultiva en. OF. otros países debido a los beneficios económicos20. La Stevia en su estado natural, crece en la región subtropical, semihúmeda de América, con precipitaciones que oscilan entre 1.400 a 1.800 mm., distribuidos durante. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. todo el año, temperaturas que van desde los 24 a 28°C y humedad relativa de 75% a 85%21.. CA. El principal producto de esta planta es la hoja de Stevia, cuya siembra y. MA TI. cosecha serán preferentemente orgánicas y sin ningún empleo de agrotóxicos lo que dará un mayor valor agregado al producto. Como cultivo. FO R. orgánico alcanza hasta US $ 3.50 dolares por Kg. de hoja seca. La industria local ya está presente con los mates filtrantes de Stevia, néctares de Stevia, y otros que demandan la hoja de Stevia.. IN. hoja micropulverizada,. E. La planta no es muy exigente en macro y micronutrientes. Cuando se tenga. MA S. la plantación completa con la densidad de plantas y en las condiciones indicadas es posible alcanzar hasta 7,000 kilogramos de hoja seca de Stevia. TE. por hectárea y por año; a partir del segundo año22. En Perú se ha. SI S. demostrado que es un cultivo viable en la amazonía alta, es muy rentable. Su ciclo de vida es de 8 años y rinde en promedio 7 TM de hoja seca por Ha/año. DE. a partir del año 2 y en esteviósido 700 kgr/ha/año (10% del peso de las hojas) 21. En otros países como Paraguay y Brasil se efectúan 3 ó 4 cortes. IN. A. por Ha/año, siendo los rendimientos mucho menores (3 TM /Ha/año) 22. IC. Las hoja de Stevia en América del sur contiene en promedio de 8 a 12%. OF. de esteviósido, en cambio las hojas de China contiene de 5 a 6% de esteviósido que es compensado con el gran volumen de producción.. La. variedad peruana contiene hasta un 80% de rebaudiósido A. Las stevias tradicionales poseen 30% de este elemento23.Otra ventaja para producir. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Stevia en el Perú es su clima. La Amazonía es apta para el cultivo, mucho más que en Paraguay, Brasil y Argentina, razón por la que rinde más por. CA. cosecha que en esos países (mayor productividad): hasta siete toneladas de hoja seca por hectárea frente a 1.5, 3 y 4 toneladas en otras regiones. MA TI. sudamericanas24.. A nivel nacional, se comercializa en bolsas plásticas transparentes,. FO R. básicamente en tiendas naturistas y ferias. Los envases son de 15 grs con un precio al público de S/. 2.0 c/u y de 50 grs al precio de S/. 10 c/u. En la. IN. actualidad hay solamente 3 empresas que comercializan la hoja de Stevia. E. seca en esta forma. Se debe indicar que muchos de estos industriales no. MA S. producen Stevia sino que compran a un promedio de S/. 20 soles el Kg 22.. TE. Hay un interés creciente en el uso de compuestos naturales,. SI S. especialmente extraídos de plantas, para la conservación de alimentos, medicamentos y otros productos. Extractos de Stevia son aprobados. DE. oficialmente como aditivos alimentarios en Brasil, Corea, Japón, Estados Unidos e Irán (Debnath, 2008). Stevia rebaudiana es rica en trepenes y. IN. A. flavonoides20.. IC. La Stevia está aumentando su renombre fuera de Estados Unidos. OF. después de haberse probado a conciencia la ausencia de toxicidad, y la mayor parte del mundo se considera totalmente segura para el consumo humano (OVIEDO, 1970)21.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Además de su origen natural, ser un edulcorante no calórico, los extractos de la hoja de Stevia han producido efectos como. hipotensor,. CA. antidiabético, antioxidante, no cariogénico, quimioprotector, antiinflamatorio,. MA TI. digestiva, y vasodilatadora19, 21.. En 1931, los investigadores franceses Bridel y Lavielle cristalizaron el. FO R. principio edulcorante y llegaron a la conclusión de que el esteviósido, en su estado más puro, es 300 veces más dulce que la sacarosa y no posee. IN. efectos tóxicos para la salud. Demostraron que el esteviósido, compuesto por. E. carbono, hidrógeno y oxígeno, es el edulcorante más dulce que existe en la. MA S. naturaleza. En los estudios humanos, el dulzor medido de 1 g de extracto crudo de hoja de stevia disuelto en agua ha variado de 100 a 150 veces. TE. mayor que las concentraciones equivalentes de sacarosa19, 21.. SI S. Los resultados de otros estudios indican que el principal cariogénico organismo, Streptococcus mutans, experimenta la supresión del crecimiento. DE. y segrega menos ácido cuando se cultivan en medios de comunicación que. A. contiene esteviósido que cuando se cultiva en sacarosa, glucosa o fructosa 19.. IN. Los fitoquímicos presentes en Stevia rebaudiana son austroinulina, β-. OF. IC. caroteno, dulcósido, niacina, riboflavina, steviol, esteviósido y tiamina. Estas sustancias nutritivas afectan la flora microbiana de la boca (Soderling et al., 2008)22. Se cree que la Stevia puede inhibir el crecimiento de ciertas bacterias20. El uso de Stevia, no produce caries, pues no es fermentado por. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. las bacterias orales, ayuda a prevenir la aparición de caries dentales mediante la prevención de la formación de la placa25. En un estudio en la. CA. Universidad de Purdue, USA, en el año 2007, se halló que la Stevia Rebaudiana es compatible con el flúor, detiene el crecimiento de las. MA TI. plaquetas y evita la caries22. Algunos estudios indican su actividad antibiótica, especialmente contra las bacterias que atacan las mucosas. FO R. bucales y los hongos que originan la vaginitis en la mujer 21.. IN. En un estudio in vivo, se midió la acumulación de la placa dental. E. después de enjuagar con una solución de sacarosa al 10% cuatro veces al. MA S. día durante 5 días y se comparó con un enjuague de solución al 10% de la Stevia rabaudiana Bertoni cuatro veces al día, durante 5 días; El análisis de después de 5 días del. uso de la. TE. los índices de Silness-loe y O'Leary. SI S. solucion de Stevia demostró una menor capacidad para la formación de la placa dental. El nivel de placa fue de 57, 82% menos en el índice de Silnessy. 10,. 40%. menos. en. el. índice. de. O'Leary18.. DE. LOE. La transmisión y colonización de SM en la cavidad oral son factores. IN. A. importantes para prevenir la caries dental teniendo en cuenta que SM tiene. IC. un papel potencial en la formación de caries inicial15.. OF. Sato, en Japon en 2000, reportado por Jarma A, Rengifo T, Araméndiz-. Tatis. H23,. determinaron. que. el. extracto. de. estevia. tenía. acción. antimicrobiana: eliminó E coli, salmonella, Estafilococus, bacilos, y no afectó bacterias útiles, lo que indica una acción selectiva.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Mohammadi-Sichani M, Karbasizadeh V, Aghai F, Mohammad M. en 2012,20 reportó que extractos de Stevia rebaudiana, tienen actividad. CA. antibacteriana moderada contra SM, comparada con la concentración de. MA TI. 1% del antibiótico empleado (tetraciclina). El estudio mostró que los extractos de Stevia rebaudiana en acetona y etanol presentan un efecto inhibidor mejor en S. mutans que los de cloroformo y metanol. Por otra parte, el extracto. FO R. acuoso de hojas de Stevia rebaudiana, era prácticamente ineficaz contra SM. Sathishkumar et al. (2008)26 evaluaron la actividad antibacteriana de la. IN. Stevia rebaudiana, extraída por medio de diversos disolventes frente a. E. Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y. MA S. Vibrio cholerae; encontrando que el extracto de acetona mostró una mayor actividad contra las bacterias Gram positivas que las bacterias Gram. SI S. TE. negativas.. En el ámbito odontológico, el importante crecimiento mundial de la. DE. fitoterapia dentro de programas preventivos y curativos ha estimulado la investigación con el fin de avalar la actividad antimicrobiana de distintos. IN. A. extractos de plantas con el fin de ayudar en el control de la placa bacteriana. IC. y por consiguiente en la disminución de la incidencia de caries dental y. OF. enfermedad periodontal27. Se considera importante este estudio pues, dado que existe relación. directa entre el metabolismo de la sacarosa y su influencia en crear un ambiente propicio para el desarrollo de la caries dental, y en especial para el. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. establecimiento de niveles nocivos de Streptococcus mutans en cavidad oral; buscamos investigar una especie vegetal con propiedades bactericidas que. CA. pueda ser utilizada como agente preventivo para disminuir el índice de. MA TI. caries dental en nuestro medio, además de ser un cultivo rentable y cuya industrialización es prometedora en el marcado nacional e internacional, proyectándonos a su utilización como componente de gomas de mascar,. FO R. pastas dentífricas y enjuagues bucales, por su acción antibacteriana bucal. Por tanto, de acuerdo con lo anteriormente descrito, el propósito del. IN. presente estudio es determinar el efecto antibacteriano in vitro, del extracto. E. de Stevia rebaudiana sobre una cepa estándar de Streptococcus mutans. SI S. 1.1 PROBLEMA. TE. MA S. ATCC 25175.. DE. ¿Cuál es el efecto antibacteriano, in vitro del extracto etanólico de Stevia. rebaudiana sobre Streptococcus mutans. IN. A. ATCC 25175?. OF. IC. 1.2 HIPÓTESIS El extracto etanólico de Stevia Rebaudiana si presenta efecto. antibacteriano in vitro sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. CA. 1.3 OBJETIVOS. MA TI. 1.3.1 Objetivo General:. Determinar el efecto antibacteriano in vitro del etanólico. de. Stevia. Rebaudiana. sobre. FO R. extracto. Streptococcus mutans ATCC 25175.. Determinar la concentración mínima inhibitoria. E. 1.3.2.1. IN. 1.3.2 Objetivos Específicos:. MA S. (CMI) in vitro del extracto etanólico de Stevia Rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC. SI S. TE. 25175.. Determinar la concentración mínima bactericida (CMB) in vitro del extracto etanólico de Stevia rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. OF. IC. IN. A. DE. 1.3.2.2. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. MA TI. CA. II. MATERIAL Y MÉTODOS. 2.1 TIPO DE ESTUDIO. FO R. La presente investigación es básica de acuerdo a su orientación, experimental de acuerdo a su diseño de contrastación y. E. IN. transversal en el tiempo.. MA S. 2.2 DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN MUESTRAL: La población bajo estudio estuvo conformada por el conjunto de. TE. placas petri que contenían cada una de las diferentes concentraciones. SI S. del extracto etanólico de la Stevia Rebaudiana con siembra adecuada de Streptococcus mutans (3x108 UFC), en el laboratorio de. DE. Microbiología, de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional. IN. A. de Trujillo.. OF. IC. 2.2.1 Criterios de Inclusión -. Placas con siembra adecuada de Streptococcus mutans (3x108 UFC/mL) a priori al enfrentamiento con el extracto.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. -. Placas que contenían el extracto etanólico de y que presentaron inhibición o no del crecimiento bacteriano. CA. (ausencia o presencia de halos de inhibición de un. Placas que después del proceso de incubación, no mostraron. contaminación. (hongos). -. Placas. utilizadas. por. otros. FO R. -. MA TI. diámetro mayor a 8mm). para. la. microbios. determinación. de. la. IN. Concentración Mínima Bactericida (CMB), que no. E. presentaron crecimiento bacteriano ni contaminación. MA S. por otros microbios. 2.2.2 Criterios de Exclusión Placas que después del proceso de incubación,. TE. -. SI S. mostraron. contaminación. por. otros. microbios. DE. (hongos).. IN. A. 2.3 CONSIDERACIONES ÉTICAS:. IC. Para la ejecución de la presente investigación se siguió los. OF. principios de la Declaración de Helsinki de la asociación médica mundial, adoptada por la 18a Asamblea Medica Mundial (Helsinki. 1964), revisada por la 29a Asamblea Médica Mundial (Tokio, 1975) y enmendada por la 35a Asamblea Medica Mundial (Venecia, 1983),. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. la 41a Asamblea Medica Mundial (Hong Kong, 1989), la 48 a Asamblea General Somerset West (Sudáfrica, 1996) y la 52 a. CA. Asamblea General Edimburgo (Escocia, 2000). Además, dicha. MA TI. declaración presenta una nota de clarificación del párrafo 29, agregada por la Asamblea General de la AMM (Washington 2002), una nota de clarificación del párrafo 30, agregada también por la. FO R. Asamblea General de la AMM (Tokio 2004) y 59a Asamblea general. IN. (Seúl 2008). E. Esta investigación contó a su vez con la autorización del. MA S. Comité Permanente de Investigación de la Facultad de Medicina de. SI S. TE. la Universidad Nacional de Trujillo.. 2.4 DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO:. DE. 2.4.1 Unidad de análisis. OF. IC. IN. A. La unidad de análisis para determinar la CMI lo. constituye cada uno de las placas petri utilizados. Los que contenían caldo de cultivo tioglicolato, extracto etanólico de Stevia Rebaudiana a una determinada concentración, y el inóculo de Streptococcus mutans ATCC 25175.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. La unidad de análisis para determinar la CMB lo constituye cada una de las placas petri inoculadas con. 2.4.2 Unidad de muestreo:. conformadas. unidades por. las. de. muestreo. unidades. de. FO R. Las. MA TI. CA. las suspensiones obtenidas a partir de la CMI.. estuvieron. análisis.. Estas. E. 2.4.3 Marco de muestral. IN. cumplieron con los criterios de selección.. MA S. El marco muestral es el listado o registro de las. TE. unidades de muestreo, es decir de las placas petri.. SI S. 2.4.4 Tamaño de muestra Para determinar el tamaño de muestra se hizo uso. OF. IC. IN. A. DE. de la fórmula para comparar dos o más medias:. n = 2(Zα/2 + Zβ)2 (DE)2 / d2. n. : Tamaño de cada grupo de estudio.. α. : Probabilidad de cometer error tipo I.. β. : Probabilidad de cometer error tipo II.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. : Valor estándar de la distribución normal asociada. Z. a un tipo de error. : Desviación estándar.. d. : Diferencia entre promedios para rechazar la. MA TI. FO R. igualdad de medias.. CA. DE. IN. Considerando los requerimientos de una confianza. E. del 95% (α = 0.05, Zα/2= 1.96), una potencia en la prueba. MA S. del 80% (β =0.20, Zβ= 0.84), para (DE/d)=0.50, se obtiene:. SI S. TE. n = 2(1.64+0.84)2 (0.5)2 = 3. Con estos valores se determinó una muestra de 3. DE. repeticiones para cada concentración utilizada.. OF. IC. IN. A. El total de placas Petri que se utilizó como muestra,. estuvo determinado por el número de concentraciones que. se. utilizaron. en. el. experimento.. Estas. concentraciones fueron en número de 16 para la determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria y en número de 16 para la determinación de la Concentración. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Mínima Bactericida, incluyendo los controles positivo y. CA. negativo. Por tanto la muestra total fue de:. Para CMI:. FO R. n = 16 x 3= 48 placas petri. MA TI. n = nº de concentraciones x 3 repeticiones. IN. Para CMB:. MA S. E. n = 16 x 3 = 48 placas petri.. TE. 2.4.5 Diseño de contrastación:. SI S. El presente estudio es un diseño experimental, con. varios grupos de estudio y medición posterior. El. Grupo. OF. IC. IN. A. DE. esquema puede representarse:. V. dependiente. Variable independiente:. Concentración X. I. UFC Diámetro de halo 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. X1. CA. UFC. II. X2. MA TI. Diámetro de halo. UFC. III. X3. FO R. UFC. Diámetro de halo. V. MA S. E. X4. IN. IV. Diámetro de halo. Diámetro de halo. SI S. TE. X5. UFC. UFC. X6. Diámetro de halo. OF. IC. IN. A. DE. VI. X: Concentración X1: 1,07% usando etanol de 70º y 2,14% usando etanol de 30º. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. X2: 5% usando etanol de 70º y 4,23% usando etanol de 30º. CA. X3: 10% usando etanol de 70º y 10,7% usando etanol de. MA TI. 30º. X4: 25% usando etanol de 70º y 21,4% usando etanol de. FO R. 30º. IN. X5: 50% usando etanol de 70º y 32,1% usando etanol de. E. 30º. MA S. X6: 75% usando etanol de 70º y 42,8% usando etanol de. SI S. TE. 30º. 2.5 PROCEDIMIENTO E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE. DE. DATOS:. OF. IC. IN. A. 2.5.1 Recolección e identificación taxonómica Las hojas de Stevia rebaudiana, fueron recolectadas el día 13 de agosto del 2013, de la localidad de Timaruca, distrito de San Ignacio (1050 m.s.n.m.), provincia de San Ignacio, región de Cajamarca.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Un ejemplar completo de la planta fue llevado al Herbarium Truxillensis de la Universidad Nacional de. FO R. MA TI. CA. Trujillo para su identificación y verificación taxonómica.. 2.5.2 Preparación de la muestra. la muestra: El material. Selección y lavado de fue. transportado. E. recolectado. IN. -. de. la. Facultad. laboratorio de. Farmacia. de y. MA S. Farmacognosia. al. Bioquímica de la Universidad Nacional de Trujillo, en. TE. donde se seleccionó las hojas en buenas condiciones.. SI S. Luego se procedió a lavar el material vegetal con agua. destilada,. seguido. de. una. desinfección,. DE. utilizando hipoclorito de sodio al 0.5 %. Posteriormente se realizó. A. agua destilada estéril, esto es para retirar los residuos. IN IC OF. un enjuague de la planta con suficiente. de hipoclorito28. -. Secado: Las hojas de Stevia rebaudiana Bertoni (Stevia). fueron. colocadas. sobre. papel. Kraft. y. sometidas a secado primero a temperatura ambiente por 24 horas, y luego en la estufa a una temperatura. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. de 40°C, por cinco días . Se realizó la determinación de peso cada 24 horas hasta valores constantes. Pulverización: Una vez secadas las hojas, estas se. CA. -. -. MA TI. pulverizaron con ayuda de un mortero.. Tamizaje: El material obtenido de la pulverización, se pasó a través de los tamices Nº 2, 1.2, 0.7, 0.3. La. -. FO R. muestra de trabajo correspondió al tamiz 0.7. Almacenamiento: El polvo de las hojas de Stevia. IN. rebaudiana Bertoni (stevia) obtenidas, se guardaron. MA S. E. en frascos de vidrio de color ámbar de boca ancha 29.. Se pesó con exactitud 20g de la muestra previamente. SI S. -. TE. 2.5.3 Preparación del extracto etanólico. pulverizada y tamizada. Luego se humectaron. por. DE. separado con 20 mL de etanol de 70º G.L., se. OF. IC. IN. A. colocaron en una cápsula de porcelana y se mezclaron. con cantidad suficiente de arena lavada. -. Luego se vertió en un cartucho de papel de filtro y se colocó en el extractor del equipo de soxhlet y se extrajo con 150 mL de etanol de 70° Gay Lussac a una temperatura de 60oC a 80oC durante 4 horas.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. El producto se filtró 3 veces, primero con papel filtro. -. Whatman N° 41, un segundo filtrado se realizó con. CA. papel filtro Whatman N°4 y por último un tercer filtrado. MA TI. fue en papel Whatman N°2. Así se obtuvo un extracto purificado libre de gérmenes.. La solución resultante fue llevada a sequedad en una. -. FO R. cámara de secado al vacío a una presión reducida y a una temperatura de 40 °C; luego se pesó el residuo. IN. seco y se guardó en refrigeración a 2°C en frasco de. E. vidrio de color ámbar estéril. Del residuo seco, se. MA S. prepararán las concentraciones de 1,07%, 5%, 10%, 25%, 50% y 75% disueltas en etanol de 70ºGay. TE. Lussac respectivamente; y las concentraciones de. SI S. 2,14%, 4,28%, 10,7%, 21,4%, 32,1% y 42,8% en. DE. etanol de 30º Gay Lussac 29.. OF. IC. IN. A. 2.5.4 Método microbiológico A.. Obtención de la cepa: Este estudio utilizó un cultivo liofilizado de la cepa de Streptococcus mutans ATCC 25175, el cual se obtuvo del laboratorio Genlab, de Lima.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. B.. Preparación del inóculo: Las cepas de Streptococcus mutansATCC 25175 se en. tubos. de. ensayo. cerrados. CA. cultivaron. MA TI. herméticamente conteniendo el medio agar Soya tripticasa.. FO R. Se incubaron bajo condiciones de microanaerobiosis a 37oC con el fin de obtener colonias jóvenes. Luego 24. horas. cada. cepa. de. Streptococcus. IN. de. E. mutansATCC 25175 se diluyó en caldo de tioglicolato. MA S. hasta que se obtuvo una turbidez semejante al tubo número 05 de la escala de Mac Farland. Los tubos. TE. con la bacteria fueron girados entre las manos. SI S. durante 30 segundos antes de proceder al sembrado para distribuir los microorganismos adecuadamente Prueba del efecto antibacteriano o determinación. DE. C.. OF. IC. IN. A. de la concentración mínima bactericida (CMB): Determinación de la sensibilidad o resistencia antibacteriana (Efecto antibacteriano) Un hisopo estéril fue embebido con la cepa preparada a una distancia de 10 cm de la llama del mechero se procedió al sembrado en camada en. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. placas petri conteniendo Agar Mueller Hinton, se estrió el hisopo uniformemente sobre toda la. aproximadamente.. Las. placas. recién. MA TI. veces. CA. superficie del agar, girando cada placa 30 grados 10. sembradas fueron incubadas en condiciones de microanaerobiosis a 37º C durante 24 horas. Para el. FO R. efecto antibacteriano se empleó la técnica de difusión de discos de Kirby y Bauer, el cual consiste en. IN. preparar discos de papel de filtro estériles, los que. E. fueron sumergidos dentro de cada concentración del. MA S. extracto etanólico de Stevia Rebaudiana, por el periodo no menor de una hora, luego con una aguja. TE. estéril, estos se colocaron sobre los cultivos de. SI S. Streptococcus mutans ATCC25175 en las placas petri. previamente. preparadas;. las. placas. se. OF. IC. IN. A. DE. mantuvieron en la misma posición por un periodo de 5 minutos. Luego de este tiempo las placas se voltearon. de. posición. y. se. incubaron. en. microanaerobiosis utilizando la jarra de GasPack, con el método de vela, mediante el cual se obtuvo un ambiente aproximadamente de 5 a 10% de CO2, a 37º C durante 24 horas.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Todo el procedimiento se llevó a cabo dentro del diámetro de 10 cm de la llama de un mechero. La. CA. lectura de los resultados se llevó a cabo después de. MA TI. las 24 horas, mediante la inspección visual de cada placa. Se efectuó tomando el registro en milímetros de los halos de inhibición del crecimiento de. FO R. Streptococcus mutans ATCC 25175. Los extractos se consideraron activos si el diámetro de la zona de. IN. inhibición era de 8 mm o más como se recomienda. D.. MA S. E. (Baker y Silverton, 1985). Determinación. de. la. concentración. mínima. TE. inhibitoria (CMI):. SI S. Para determinar la concentración inhibitoria. mínima. del. extracto. etanólico. de. la. Stevia. DE. rebaudiana se realizó lo siguiente: Se colocó 0.8 ml. OF. IC. IN. A. del extracto etanólico de la Stevia rebaudiana al. 1,07%, 5%, 10%,. 25%, 50% y 75% disueltas en. etanol de 70ºGay Lussac respectivamente; y. las. concentraciones de 2,14%, 4,28%, 10,7%, 21,4%, 32,1% y 42,8% en etanol de 30º Gay Lussac, cada concentración en un tubo de ensayo, previamente etiquetado. Después del proceso de dilución se. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. colocó un inoculo de 0.2 ml del cultivo preparado de Streptococcus mutans ATCC 25175, en los tubos. CA. que contenían las diversas concentraciones del. MA TI. extracto; así como al control positivo (tubo que contuvo penicilina procaínica), y al control negativo (tubo que no contenía extracto) obteniéndose un. FO R. volumen final de 10mL para cada tubo y se llevó a incubación a 37º C por un periodo de 24 horas en. E. IN. condiciones de microanaerobiosis.. MA S. Luego de 24 horas se realizó la determinación de la CIM con Agar Sangre, tomando 0,1 ml de las. TE. suspensiones de los tubos y se dispersó en toda la. SI S. placa para determinar las unidades formadoras de colonias (UFC).Después del sembrado, se llevó a. DE. incubación a 37oC por 24 horas en jarra Gaspak en. OF. IC. IN. A. condiciones de microanaerobiosis 5 a 10% de CO2. Todo el procedimiento fue realizado bajo condiciones asépticas y se efectuaron 3 repeticiones por concentración. Luego de 24 horas se realizó el conteo de las colonias en cada una de las placas. La concentración inhibitoria fue aquella en la que se. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. llegó a inhibir completamente el desarrollo de los gérmenes. Controles:. CA. E.. MA TI. Para determinar el efecto antibacteriano: Se utilizó como control positivo, discos de penicilina, y. FO R. como control negativo, discos de suero fisiológico. Para la concentración inhibitoria mínima: Se. IN. utilizó como control positivo, penicilina procaínica, y. E. como control negativo, la suspensión estándar de. Instrumento. TE. F.. MA S. Streptococcus mutans (3x108 UFC/mL ). El instrumento de recolección de los datos fue. SI S. estructurado para el registro de la. CMI y CMB. A. DE. (Anexo 01, 02, 03 y 04).. VARIABLE. INDICADOR. TIPO. ESCALA. OF. IC. IN. 2.6 Variables de estudio:. Dependiente. Ufc/ml. Cuantitativa De razón. Streptococcus. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. mutans ATCC. mm. CA. 25175. Independiente. MA TI. Efecto antibacteriano:. Cuantitativa De razón. FO R. mg/ml. Extracto. IN. etanólico de. E. Stevia. MA S. Rebaudiana. SI S. TE. Definición de las variables: Efecto antibacteriano del extracto etanólico de. DE. Stevia rebaudiana. OF. IC. IN. A. Fue evaluado mediante la determinación de la Concentración. Mínima. Inhibitoria. (CMI). y. Concentración Mínima Bactericida (CMB).. Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) Conceptual: Fue interpretada como la mínima concentración del extracto etanólico de Stevia 38. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. rebaudiana donde se apreció crecimiento del Streptococcus mutans menor a 200 Ufc20.. CA. Operacional: Para efectos de la investigación la. MA TI. definición coincidió con la conceptual al ser valorada. FO R. mediante el valor numérico obtenido en mg/mL.. Concentración Mínima Bactericida (CMB):. IN. Conceptual:. E. Fue interpretada como la Mínima Concentración del. MA S. extracto etanólico de Stevia rebaudiana donde el diámetro del halo de inhibición fue mayor a 8 mm20.. TE. Operacional: Para efectos de la investigación la. SI S. definición coincidió con la conceptual al ser valorada mediante el valor numérico obtenido midiendo el. DE. halo de inhibición y escoger la concentración en. OF. IC. IN. A. mg/mL. Streptococcus mutans ATCC 25175: Conceptual:. Cepa estándar de. Streptococcus. mutans con nomenclatura 25175 asignada por la American Type Culture Collection5.. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Operacional: Operacional: Para efectos de la investigación. la. definición. coincidió. con. la. CA. conceptual siendo valorado mediante conteo en. FO R. MA TI. UFC/ml.. IN. 2.7 Análisis estadístico e interpretación de datos:. Aleatorizado,. con. 3. repeticiones. por. cada. MA S. Completamente. E. Para analizar la información se aplicó el ANVA de un Diseño. concentración. Para determinar cuál es la Concentración Mínima. TE. Inhibitoria (CMI) y la Concentración Mínima Bactericida (CMB), se. SI S. hizo uso de la prueba de comparaciones múltiples de Tukey usando el software SPSS 18.0, con un nivel de significancia del 5% (p <. OF. IC. IN. A. DE. 0.05).. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. III. RESULTADOS El presente estudio de tipo experimental in vitro, tuvo como. CA. propósito determinar la capacidad antibacteriana Stevia rebaudiana,. MA TI. sobre una muestra de 48 placas con el inóculo de Streptococcus mutans ATCC25175, al análisis de los datos se encontraron los. FO R. siguientes resultados:. La acción inhibitoria del extracto etanólico de Stevia rebaudiana. IN. sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, se presentó a partir de la. E. concentración de 1,07mg/mL en el extracto trabajado en etanol de 70°. MA S. y a partir de la concentración de 4,28mg/ml, en el extracto trabajado. TE. en etanol de 30°. Tablas 1 y 2.. La acción bactericida del extracto de etanólico de Stevia. SI S. rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, se presentó a. DE. partir de la concentración de 10mg/mL en el extracto trabajado en etanol de 70° y a partir de la concentración de 42,8mg/mL en el. OF. IC. IN. A. extracto trabajado en etanol de 30°.Tablas 2 y 4.. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla 1. Capacidad inhibitoria del extracto etanólico de Stevia. Parámetro. CMI en OH 70°. MA TI. Tratamiento. CA. rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC 25175 en etanol de 70°. 47,6 ± 0. FO R. T1: Control negativo, el etanol a 70°. 15,8 ± 0. IN. T2: Control positivo, penicilina procaínica 1/1000000. E. T3:Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. 47,6 ± 0. MA S. 1,07mg/mL. T4: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana 5mg/mL. TE. 0. SI S. T5: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana 10mg/mL. 0. 0. A. 25mg/mL. DE. T6: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. IN. T7: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. 0. IC. 50mg/mL. OF. T8: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. 0. 75mg/mL. Fuente: Anexo 01. p= 0.00. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla 2. Capacidad inhibitoria del extracto etanólico de Stevia. Parámetro. CMI en OH 30°. MA TI. Tratamiento. CA. rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC 25175 en etanol de 30°. 3920,7 ± 95. FO R. T1: Control negativo, el etanol a 70°. 15,8 ± 0. IN. T2: Control positivo, penicilina procaínica 1/1000000. E. T3:Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. MA S. 1,07mg/mL. 180 ± 9. TE. T4: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana 5mg/mL. 1711 ± 37. SI S. T5: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana 10mg/mL. 153,6 ± 9. 0. A. 25mg/mL. DE. T6: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. IN. T7: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. 0. IC. 50mg/mL. OF. T8: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. 0. 75mg/mL. Fuente: Anexos 03. p= 0.00. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla 3. Capacidad bactericida del extracto etanólico de Stevia. Parámetro. CA. rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC 25175 en etanol de 70°. CMB en OH 70°. MA TI. Tratamiento T1: Control negativo, el etanol a 30°. 7 ±0. 28 ± 0.5. FO R. T2: Control positivo, penicilina procaínica 1/1000000 T3: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. IN. 1,07mg/mL. 7±0. T4: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana 5mg/mL. E. 8±0. MA S. T5: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana 10mg/mL. TE. T6: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. SI S. 25mg/mL. T7: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. DE. 50mg/mL. IN. 75mg/mL. A. T8: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. 13.16 ± 0.28. 13.83 ±0.28. 18.66 ± 2 p= 0.00. OF. IC. Fuente: Anexo 02. 12.16 ± 0.28. 44 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Tabla 4. Capacidad bactericida del extracto etanólico de Stevia. Parámetro. CA. rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC 25175 en etanol de 30°. CMB en OH30°. MA TI. Tratamiento T1: Control negativo, etanol a 30°. 6.5 ± 0. FO R. T2: Control positivo, penicilina procaínica 1/1000000 T3: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. IN. 2,14mg/mL. E. T4: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. MA S. 4,28mg/mL. T5: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. TE. 10,7mg/mL. SI S. T6: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana 21,4mg/mL. 32,1mg/mL. DE. T7: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. IN. A. T8: Extracto etanólico de Stevia rebaudiana. IC. 42,8mg/mL. OF. Fuente: anexo 04. 28 ± 0.5 7±0. 7±0. 7±0. 7±0. 8±0. 8.83 ± 0.28 p= 0.00. 45 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. IV. DISCUSIÓN Streptococcus mutans ha sido implicado como el principal agente. CA. etiológico de la caries dental y es por esto que numerosas investigaciones se. MA TI. han destinado al estudio de sustancias que impidan que el agente patógeno prolifere en el medio bucal o controlen su crecimiento.. FO R. Un renovado interés se ha producido en la última década en busca de actividad antibacteriana y fitoquímicos de plantas nativas, con el fin de. IN. encontrar nuevos principios activos desde el punto de vista farmacológico, a. E. partir de una materia prima más económica y natural. Los fitoquímicos. MA S. naturales podrían ofrecer una alternativa a los antibióticos y representan un prometedor enfoque en la prevención y estrategias terapéuticas para la. TE. caries dental y otras enfermedades5. En tal sentido el presente estudio fue. extracto etanólico. SI S. realizado con la finalidad de determinar in Vitro, el efecto antibacteriano del de Stevia rebaudiana. sobre una cepa estándar de. DE. Streptococcus mutans ATCC 25175.. A. Stevia rebaudiana perteneciente a la familia Asteriaceae, contiene más. IN. de 100 fitoquímicos y ha demostrado actividad antibacteriana20. Al sintetizar aglicona de la Stevia rebaudiana,. OF. IC. derivados de esteviol 1, diterpenoides y. se encontró que estos compuestos poseen actividad antituberculosa para. inhibir el crecimiento in vitro de Mycobacterium tuberculosis (cepa H37RV) 29. Se ha reportado también la actividad antibacteriana de la Stevia rebaudiana,. 46 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. frente a Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus aureus, Salmonella typhi y Vibrio cholerae20.. CA. En un estudio se valoró el efecto de varios edulcorantes en la. MA TI. desmineralización del esmalte y de las propiedades cariogénicas del biofilm de Streptococcus mutans en un modelo de caries artificial. Biopelículas de. FO R. S. mutans - UA159 se cultivaron en placas de esmalte bovino y se expusieron a uno de los siguientes edulcorantes comerciales en forma de. IN. tableta o en polvo: estevia, la sucralosa, sacarina, aspartamo o fructosa. La. E. mayoría de los edulcorantes comerciales parecen ser menos cariogénico que. MA S. la sacarosa, pero todavía conserva algo de potencial de la desmineralización del esmalte. Los productos que contienen stevia, sucralosa y sacarina. TE. mostraron propiedades antibacterianas que parecen interferir con el. SI S. metabolismo bacteriano30.. El análisis estadístico, tanto para la acción inhibitoria como bactericida,. DE. de las concentraciones del extracto etanólico de Stevia rebaudiana como. A. indicadores de la susceptibilidad de Streptococcus mutans ATCC 25175. IN. muestra que existen diferencias significativas (p< 0.05); es decir, que en. IC. ambos casos, por lo menos, una de las concentraciones del extracto, tiene. OF. mayor acción inhibitoria o bactericida sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. 47 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. La acción inhibitoria del extracto etanólico de Stevia rebaudiana sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, tiene efecto a partir de la concentración. CA. de 1,07mg/mL en el extracto trabajado en etanol de 70° y a partir de la. MA TI. concentración de 4,28mg/ml, en el extracto trabajado en etanol de 30°. Tablas 1 y 2.. FO R. Estos datos evidencian que a mayor concentración del extracto etanólico de Stevia rebaudiana, mayor es el efecto inhibitorio sobre desde la. IN. Streptococcus mutans ATCC 25175, también se observa que. E. concentración de 5mg/mL hasta 75mg/mL en etanol de 70° y desde 21,4. MA S. mg/mL hasta 42,8 mg/mL en etanol de 30° los resultados estadísticamente, son iguales; es decir, tienen igual acción inhibitoria sobre el crecimiento de. TE. Streptococcus mutans ATCC 25175; asimismo, las concentraciones en. SI S. etanol de 30°, desde 4,28mg/mL hasta 10,7mg/mL estadísticamente son iguales entre ellas, pero diferentes a las demás concentraciones, con. A. ATCC 25175.. DE. respecto al efecto inhibitorio sobre el crecimiento de Streptococcus mutans. IN. La acción bactericida del extracto de etanólico de Stevia rebaudiana. IC. tiene efecto sobre Streptococcus mutans ATCC 25175, a partir de la. OF. concentración de 10mg/mL en el extracto trabajado en etanol de 70° y a. partir de la concentración de 42,8mg/mL en el extracto trabajado en etanol de 30°. Tablas 3 y 4.. 48 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Los datos encontrados muestran que en los extractos trabajados en etanol de 70°, a mayor concentración del extracto etanólico de Stevia. CA. rebaudiana, mayor es el efecto bactericida sobre Streptococcus mutans. MA TI. ATCC 25175; además se observa que la concentración 5mg/mL , trabajada en etanol de 70° y la concentración 32,1mg/mL , trabajada en etanol de 30°, estadísticamente, son iguales; es decir, tienen igual acción bactericida sobre. FO R. Streptococcus mutans ATCC 25175; así mismo, las concentraciones en etanol de 70°, desde 10mg/mL hasta 50mg/mL tienen, entre ellas, igual. IN. acción bactericida; pero difieren de las concentraciones anteriores, con. E. respecto al efecto bactericida sobre Streptococcus mutans ATCC 25175.. MA S. Tablas 3 y 4.. TE. La mayor actividad antibacteriana frente a Streptococcus mutans ATCC. SI S. 25175 se obtuvieron con los extractos en etanol de 70°, éstos resultados están de acuerdo con los de Mohammadi-Sichani, (2012). Entre los cuatro. etanol. DE. extractos de Stevia rebaudiana, mostraron. los extractos de acetona (28,7 ± 2,8) y. significativamente. (p. <0,05). mayor. actividad. en. IN. A. comparación con el extracto de metanol y el extracto acuoso frente a. IC. Streptococcus mutans en cada concentración. Por ello, probablemente los. OF. metabolitos activos de Stevia rebaudiana son más solubles y actúan mejor como sustancia antibacteriana cuando están disueltos en etanol. En un estudio en el que se utilizó extractos etanólicos, se identificaron compuestos activos implicados en la actividad anticaries del P. guajavatales. 49 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(50) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. como flavonoides, que actúan como antiadherente en la superficie del esmalte y el cariofileno que inhibe el crecimiento de Streptoccocus mutans17.. CA. Los promedios obtenidos en el control positivo,(Tablas 1, 2, 3 y 4). MA TI. donde se usó penicilina muestra que este antibiótico es efectivo contra Streptoccocus mutans, sin embargo no es factible su uso clínico debido a los. FO R. diversos efectos adversos como las reacciones de hipersensibilidad, las superinfecciones, manchas intrínsecas en los dientes y en especial por resistencia. bacteriana;. éstos. inconvenientes. orientan. la. IN. generar. E. investigación hacia nuevos productos que sean seguros para el huésped y. MA S. específicos para la flora patógena de la boca, agentes antimicrobianos que pueden cumplir un papel importante en la prevención de la caries dental.. TE. Los fitoquímicos naturales podrían ofrecer una alternativa a los antibióticos y. SI S. representan un prometedor enfoque en la prevención y estrategias terapéuticas para la caries dental y otras enfermedades de la boca17.. DE. En tal sentido, este estudio, demuestra que existe potencial en el extracto etanólico de Stevia Rebaudiana, no obstante, las pruebas de. IN. A. susceptibilidad bacteriana son solo el inicio de una línea de investigación. IC. cuyo objetivo final será la obtención de productos que puedan aplicarse. OF. clínicamente con fines preventivos para la caries dental. Por lo tanto, es de crucial importancia identificar y aislar los metabolitos activos que estarían cumpliendo con la función antimicrobiana especifica.. 50 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.

(51) Biblioteca Digital. Oficina de Sistemas e Informatica - UNT. Finalmente, acogemos la hipótesis propuesta, pues de acuerdo a los resultados podemos afirmar que el extracto etanólico de Stevia Rebaudiana. CA. presenta efecto antibacteriano in vitro sobre Streptococcus mutans ATCC. OF. IC. IN. A. DE. SI S. TE. MA S. E. IN. FO R. MA TI. 25175.. 51 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comecial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-nc-sa/2.5/pe/.