"Aislamiento de Microorganismos Productores de Biosurfactantes"

Texto completo

(1)DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO AUTORIDADES. AC IÓ. N. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. UN IC. Dr. Orlando Velásquez Benites. CO. M. VICERRECTOR ACADEMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. A. Y. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. ÁT. IC. VICERRECTOR ADMINISTRATIVO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IN FO. RM. Dra. Flor Luna Victoria Mori. DE. JEDE DE LA OFICINA DE REGISTRO TÉCNICO. AS. M.Sc. Roberto Rodríguez Rodríguez. SI ST. EM. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIA BIOLÓGICAS. DE. Dr. Hermes Mario Escalante Añorga. DI. RE. CC. IO. N. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dr. Cesar Augusto Jara Campos. DIRECTOR DE LA ESCUELA DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR El que suscribe, asesor de la tesis Aislamiento de Microorganismos. UN IC. AC IÓ. N. Productores de Biosurfactantes.. CO. M. CERTIFICA. Y. Que, la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su. ÁT. IC. A. respectivo proyecto y con las orientaciones pertinentes a la tesista.. RM. El informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo mis. IN FO. observaciones y sugerencias, por lo que autorizo al bachiller Lady Diana. SI ST. EM. AS. DE. Aguilar Sagástegui para continuar con los trámites correspondientes .. DE. Ms.C. Julio Cesar Arellano Barragán. DI. RE. CC. IO. N. Profesor Principal Del Departamento De Química Biológica –CC.BB-Universidad Nacional De Trujillo. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO. AC IÓ. N. En cumplimiento con lo dispuesto con el Reglamento General para el otorgamiento del Título Profesional de la UNIVERSIDAD NACIONAL. UN IC. DE TRUJILLO, me permito someter a vuestra consideración la TESIS. CO. M. TITULADA:. ÁT. IC. A. Y. Aislamiento de Microorganismos Productores de Biosurfactantes.. RM. Propongo el presente trabajo a vuestro criterio y consideración para que. IN FO. con serenidad y justicia que ustedes poseen, sea evaluado y se emita el. DE. dictamen correspondiente.. Lady Diana Aguilar Sagástegui Bachiller en Ciencias Biológicas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Trujillo, mayo del 2013. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LOS ILUSTRÍSIMOS MIEMBROS DEL JURADO DAN POR APROBADO. EL. PRESENTE. TRABAJO. PARA. LO. CUAL. A. IN FO. RM. ÁT. IC. PRESIDENTE. Y. CO. Dr. Carlos Nomberto Rodríguez. M. UN IC. AC IÓ. N. ESTAMPAN SU FIRMA. SECRETARIO. Dr. Marco Salazar Castillo VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. Ms.C. Julio Arellano Barragán. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC I. Ó. N. DEDICATORIA. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. Esta tesis se la dedico a mi Dios quién supo guiarme por el buen camino, darme fuerzas para seguir adelante y no desmayar en los problemas que se presentaban, enseñándome a encarar las adversidades sin perder nunca la dignidad ni desfallecer en el intento.. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. A mis amados padres por su apoyo, consejos, comprensión, amor, ayuda en los momentos difíciles, y por ayudarme con los recursos necesarios para estudiar. Me han dado todo lo que soy como persona, mis valores, mis principios, mi empeño, mi perseverancia, mi coraje para conseguir mis objetivos.. estar. siempre. DI. RE. A mis hermanas por presentes, y apoyándome.. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) CO Y A. A mis amigas(os) por su apoyo y compañerismo durante mi estancia en la universidad a quienes recordare y estarán presente en mi corazón. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A mis queridas amigas Jheny, Gaby, Roxana, Sandra, Rebeca, Geovanny, maría del Carmen por su amistad y ayuda brindada durante la ejecución de esta redacción.. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. AGRADECIMIENTO. AC I. Ó. Al Ms.C. Julio Cesar Arellano Barragán , profesor principal del Departamento de Química. el asesoramiento en la realización de la presente tesis y. M UN. paciencia, por otorgarme. IC. biológica y fisiología animal de la Universidad Nacional de Trujillo ,por los consejos, la. CO. permitirme crecer y desarrollarme como profesional durante mi trabajo de investigación. A. Y. .. ÁT. IC. A las personas encargadas del Departamento técnico de Química Biológica y fisiología. RM. animal de la Universidad Nacional de Trujillo, por su apoyo tanto moral así como en lo. FO. materiales y instrumentos brindados durante el trabajo de investigación.. IN. Al señor Carlos del departamento técnico por su apoyo y su paciencia en el desarrollo de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. esta investigación.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. Pag. ii. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DEL ASESOR. AC I. Ó. iii. MIENBROS DEL JURADO. M UN. IC. iv. CO. APROBACION. vi. Y. DEDICATORIA. v. viii. ÁT. IC. A. AGRADECIMIENTO. RM. INDICE. IN. FO. RESUMEN. x xi. DE. ABSTRACT. ix. 1. EM AS. INTRODUCCION. 17. 38. IO. N. DISCUSIÓN. 23. DE. RESULTADOS. SI. ST. MATERIAL Y METODO. 42. RE. CC. CONCLUSIONES. 43. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 44. ANEXOS. 52. DI. RECOMENDACIONES. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. N. Los microorganismos producen una gran variedad de compuestos anfipáticos,. AC I. Ó. bipolares, con actividad superficial molecular extraordinaria; los biosurfactantes son. IC. producidos extracelularmente o son partes de la membrana celular de las bacterias, hongos. M UN. y levaduras.. CO. En el presente trabajo se aisló microorganismos, tanto de suelo sin hidrocarburo así. Y. como suelo añadido con petróleo y kerosene a 50 000 y 75000 ppm respectivamente,. A. selección de los microorganismos productores de. IC. obteniendo 34 cepas. Para la. RM. ÁT. biosurfactantes se sembraron las cepas en Agar Sangre, Agar Tween; de este proceso se. FO. seleccionaron 20 cepas para la producción de biosurfactante el mismo que fue separado. IN. de la masa microbiana, mediante la centrifugación, la capacidad del biosurfactante se. DE. determinó midiendo la capacidad emulsificante sobre muestra de petróleo , manifestado a. EM AS. través de la formación de un anillo emulsificante , el cual dio positivo a 20 cepas . Los biosurfactantes de las 20 cepas fueron evaluadas por su actividad contra. SI. ST. Escherichia coli y Staphylococcus sp, 4 biosurfactantes presentan actividad antibacteriana. DI. RE. CC. IO. N. DE. contra Escherichia coli y Staphylococcus sp, y dos solo Staphylococcus sp.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. Ó. N. Microorganisms produce a variety of amphipathic compounds, bipolar, with extraordinary. AC I. molecular surface activity; the biosurfactants are produced extracellular or are parts of the. M UN. IC. cell membrane of bacteria, fungi and yeast.. In the present work was isolated microorganisms, both non-hydrocarbon soil as well as soil. CO. added with oil and kerosene to 50,000 and 75000 ppm respectively, obtaining 34 strains.. Y. For the selection of biosurfactants producing microorganisms were the strains in blood. IC. A. Agar, Agar Tween; of this process were selected 20 strains for the production of. RM. ÁT. biosurfactante which was separated from the microbial mass, by centrifugation, the. FO. capacity of the biosurfactante was determined by measuring the capacity emulsifier on. IN. sample of oil, expressed through the formation of a ring emulsifier, which gave positive 20. DE. strains.. EM AS. Biosurfactants of the 20 strains were evaluated for their activity against Escherichia coli and Staphylococcus sp, 4 biosurfactants have antibacterial activity against Escherichia coli. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. and Staphylococcus sp., and two single Staphylococcus sp.. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCION. N. La liberación de contaminantes en el medio ambiente, incluyendo el petróleo y. AC I. Ó. productos derivados del petróleo, es una de las principales causas de contaminación global. IC. ya que aproximadamente el 60% de la producción mundial de petróleo se transporta por vía. M UN. marítima y se calcula que el 0.1% de ésta se derrama en el mar (más o menos 2,2 millones. CO. de toneladas al año).1 Lo cual es un riesgo para la salud humana y animal, ya que muchos. Y. de estos contaminantes han demostrado ser tóxicos y carcinogénicos.. IC. A. Las moléculas de hidrocarburos que se liberan en el medio ambiente son difíciles de. ÁT. eliminar, ya que se adsorben a las superficies y son atrapados por capilaridad en una fase. FO. RM. inmiscible en agua. 1. IN. Este tipo de contaminación genera cambios en las poblaciones microbianas. DE. presentes, provocando un stress que produce una selección y una disminución de la. EM AS. diversidad.2Esta diversidad se ve directamente influenciada por la complejidad de mezclas. SI. contaminantes1, 2, 3,4. ST. químicas presentes y por el periodo de tiempo que se encuentran expuestas a los. DE. Los dispersantes químicos utilizados para favorecer la remediación de los ambientes. IO. N. contaminados pueden causar un mayor impacto ecológico que el mismo derrame, por su. CC. toxicidad y recalcitrancia a la biodegradación. 3Ante esta problemática generalizada nace la. RE. biorremediación, que es una herramienta para sanear áreas afectadas. Esta, explota el uso de. DI. diferentes microorganismos, para transformar los contaminantes en sustancias menos peligrosas como dióxido de carbono y agua .4. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Básicamente la biorremediación permite acelerar los procesos biodegradativos que de forma natural ocurren en los ecosistemas contaminados. Las comunidades microbianas. Ó. N. en ecosistemas contaminados tienden a ser dominadas por aquellos organismos capaces de. AC I. utilizar o de sobrevivir a compuestos tóxicos , Así en la biodegradación de hidrocarburos,. Xanthomonas,. Alcaligenes,. Arthrobacter,. Nocardia. M UN. IC. se utilizan bacterias con alta capacidad degradativa, entre estas: Brevibacterium, Spirillum, ,. Flavobacterium,. Vibrio,. CO. Achromobacter, Acinetobacter, Micrococcus, Pseudomonas aeruginosa ,Bacillus sp,,. Y. Pseudomonas mendocina, Pseudomonas aureofasciens, etc., las cuales disminuyen la. IC. A. concentración de hidrocarburos presentes en el ambiente y al mismo tiempo son inocuas. RM. ÁT. para la salud y el medio ambiente 3,5. FO. Estas bacterias producen biosurfactantes que disminuyen la tensión superficial. DE. EM AS. insoluble para su degradación. 5. IN. entre el petróleo y el medio acuoso facilitando el acceso microbiano a la fuente de carbono. Los. biosurfactantes. son. moléculas. biológicas. anfifílicos. producidas. ST. extracelularmente o como parte de la membrana celular por una variedad de levaduras,. SI. bacterias y hongos filamentosos a partir de sustancias diversos como azúcar, aceites y. N. DE. residuo; tienen una parte tanto hidrófilas como hidrófobas.3, 4,5, 6,7, 8,9. CC. IO. Estas biomoléculas también puede disminuir la tensión superficial interfacial.. RE. Aunque la función de biosurfactantes en los microorganismos no se entiende. DI. completamente, se sabe que estos metabolitos secundarios puede mejorar el transporte de nutrientes a través de membranas, actuar en diversos microbios interacción huésped, y proporcionar protección biocida y fungicida para el organismo productor.7, 10,11. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los. biosurfactantes. microbianas. son. producidos. principalmente. por. los. microorganismos aerobios, utilizando como fuentes de hidratos de carbono, hidrocarburos,. AC I. Ó. N. animales o aceites vegetales o una mezcla de ellos.. IC. Estos puede ser intracelular (permanecer unidos a la pared celular) y / o puede ser. M UN. excretado al medio, cuando los biosurfactantes son intracelulares, su estructura incluye lípidos de membrana, y promueven el transporte de sustratos insolubles a través de la. CO. membrana; cuando son extracelulares, los biosurfactantes ayudan en la solubilización de. A. Y. sustrato, y son generalmente una estructura compleja de lípidos, proteínas y carbohidratos.1,. ÁT. IC. 4. RM. La composición y emulsión de los biosurfactantes no sólo depende de la cepa de. FO. productor sino también en las condiciones de cultivo, la naturaleza de la fuente de. DE. IN. carbono12, la fuente de nitrógeno, así como la proporción de la C: N 13, parámetros físicos y. EM AS. químicos, pH, temperatura, aireación y cationes divalentes no sólo influyen en la cantidad de biosurfactantes producidos, sino también el tipo de polímero producido 14, 15,16. SI. ST. La principal diferencia en la naturaleza química de las moléculas de biosurfactantes. DE. diferentes está en la cabeza hidrófila; lo que permite una amplia gama de variación en sus. IO. N. propiedades físicas y biológicas.4. CC. Con excepción del poder bactericida de ciertos surfactantes, fenómeno del cual no propiedades y. RE. hay una explicación absolutamente segura, se puede decir que todas las. DI. usos de los surfactantes provienen de dos propiedades fundamentales de estas sustancias: su capacidad de adsorberse a las interfases y de otra parte su tendencia a asociarse para formar estructuras organizadas.17 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. •. Adsorción: La molécula de biosurfactante se orienta de manera que el grupo polar esté en el. AC I. Ó. N. agua, mientras que el grupo apolar se ubica "fuera" del agua, en el aire o en el aceite, se. IC. puede decir que la energía libre de una molécula de surfactante a la interfase es inferior a la. M UN. de una molécula solubilizada en el seno de una fase acuosa. La transferencia desde el seno. •. CO. de una fase acuosa a la interfase, llamada adsorción es por lo tanto espontánea.. A. Y. Asociación. ÁT. IC. Cuando a una solución se le añade surfactante, éste comienza por adsorberse a las. RM. interfases disponibles, luego su concentración en forma mono molecular aumenta hasta que. FO. se forman las primeras micelas. La micela es un polímero de asociación en el cual el. IN. surfactante alcanza una posición favorable. En solución acuosa la fuerza motriz principal. DE. que favorece la formación de micelas es el efecto hidrófobo, es decir, la sustracción de la. EM AS. parte apolar del surfactante del contacto con las moléculas del agua y la formación de un. ST. contacto más favorable con las partes apolares de otras moléculas de surfactante. 17. SI. La formación de micelas se produce como un compromiso entre dos tipos de. DE. efectos: el hidrófobo, que aumenta con el tamaño de la cadena hidrocarbonada del. IO. N. surfactante y el de repulsión entre los grupos hidrofílicos. Los efectos que favorecen la. CC. micelización producen un descenso de la Concentración Micelar Crítica (CMC), que es la. DI. RE. concentración mínima de un agente surfactante capaz de formar micelas.7, 17 Ellos también están involucrados en los procesos de formación de biopelículas. Los. surfactantes pueden interactuar con las proteínas microbianas y pueden ser manipulados para modificar la conformación de la enzima en una forma que altera la actividad 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. enzimática, la estabilidad y / o especificidad. Los Surfactantes químicos pueden imitar los efectos posteriores de biosurfactantes y han sido explotadas, por ejemplo, como agentes. AC I. Ó. N. antimicrobianos contra plantas, animales y microbios patógenos.5, 17. IC. Originalmente, los biosurfactantes han atraído la atención como agentes de. M UN. disolución de hidrocarburos a finales de 1960, y sus aplicaciones se han extendido mucho en las últimas cinco décadas como una alternativa mejorada a los surfactantes químicos. CO. especialmente en alimentos, productos farmacéuticos y la industria petrolera 18 .La razón de. A. Y. su popularidad como productos microbianos de alto valor, es principalmente debido a su. ÁT. IC. acción específica, baja toxicidad, biodegradabilidad superior, la eficacia en los extremos de. RM. temperatura, pH, salinidad y aplicabilidad generalizada, y sus estructuras únicas que. IN. FO. proporcionan nuevas propiedades que los tensioactivos clásicos podrían faltar.18,19. DE. Las propiedades únicas de biosurfactantes permiten su uso y posible sustitución de. EM AS. tensioactivos químicamente sintetizadas, en un gran número de operaciones industriales; hay muchas ventajas. de los biosurfactantes. en comparación. con. sus homólogos. SI. ST. sintetizado químicamente Algunos de ellos son:. DE. Biodegradabilidad, baja toxicidad, biocompatibilidad, lo que permite su aplicación en. N. cosmética, productos farmacéuticos y aditivos alimentarios funcionales, disponibilidad de. CC. IO. materias primas, los biosurfactantes puede ser producido a partir de materias primas 21. La fuente de carbono puede. RE. baratas, que están disponibles en grandes cantidades.20,. DI. provenir de hidrocarburos, carbohidratos y / o lípidos, que se puede usar por separado o en combinación unos con otros.10, 14. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El uso en el control ambiental. Los Biosurfactantes pueden ser utilizados de manera eficiente en el manejo de emulsiones industriales, control de derrames de hidrocarburos,. Ó. N. biodegradación y desintoxicación de efluentes industriales y en la biorremediación de. AC I. suelos contaminados.10,14. M UN. IC. Especificidad, los biosurfactantes, siendo las moléculas orgánicas complejas con grupos funcionales específicos, a menudo son específicos en su acción. Esto sería de. CO. particular interés en la desintoxicación de contaminantes específicos, aplicaciones. Y. cosméticas, farmacéutica 10,14. IC. A. Alta selectividad y actividad específica a temperaturas extremas, pH y salinidad, y la. RM. ÁT. capacidad de ser sintetizados a partir de materias primas renovables14,22. FO. Los biosurfactantes se pueden clasificar atendiendo a tres criterios: naturaleza. Naturaleza química:. EM AS. 1.. DE. IN. química, peso molecular y carga iónica. 18, 23,24, 25,26. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. Lípidos, hidratos de carbono, aminoácidos, glucolípidos, lipopéptidos. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. TABLA. 1:. PRINCIPALES. BIOSURFACTANTES. Y. MICROORGANISMOS. Microorganismos. Ó. Tipo de biosurfactante. N. PRODUCTORES. Pseudomonas aeroginosa. soforolipídios. Torulopsis bombicola ,T.apícola. Lípidos de trehalosa. Rhodococccu serythropolis Mycobacterium sp.. CO. Lipopeptídicos e lipoproteínas. M UN. ramnolipídios. IC. AC I. Glicolipídios. Viscosina. Pseudomonas fluorescens. Subtilisina. Serratia marcescens Bacillus subtilis. IC. Surfactina. A. Y. Serravetina. Baciluus subtilis. ÁT. Polimixina. Bacillluspolymyxa. RM. Fosfolípidos. Acinetobacter spp.. Emulsificante de alimentos. FO. Thiobacillusthiooxidans. Lípidos de polioles. IN. Candida utilis Rhodotorula glutinis. DE. Antibióticos tensoactivos Gramicidina. EM AS. Polimixinas Antibiotico TA. ST. surfactantes poliméricos. Rhodotorula graminis Brevibacterium brevis Bacillus polymyxa Myxococccus xanthus. Emulsan. SI. Alasan. DE. Liposan. N. Lipoproteínas de manano. IO. Surfactantes particulados. Células. Acinetobacter radioresistens Candida lipolytica Candida tropicalis. Acinetobacter calcoaceticus Várias bactérias. DI. RE. CC. Vesículas. Acinetobacter calcoaceticus. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.. Peso Molecular Bajo peso molecular: Suelen ser Glicolipídios. El más estudiado es el rhamnolípido,. peso. molecular:. Suelen. ser. polisacáridos,. proteínas,. lipoproteínas,. IC. Alto. AC I. Ó. N. producido por diversas especies como Pseudomonas. 9. M UN. lipopolisacáridos o mezclas de estos polímeros. Estos biosurfactantes no son tan eficaces en cuanto a la reducción de la tensión superficial entre fases, pero si son. Y A. Carga iónica. ÁT. IC. 3.. CO. bueno emulsionantes. 18,24. RM. Agentes aniónicos: Contiene generalmente uno de cuatro grupos polares solubles. FO. carboxilato, sulfonato, sulfato o fosfato- combinado con una cadena hidrocarbonada. IN. hidrófoba.24 Si esa cadena es corta son muy hidrosolubles y en el caso contrario tendrán. DE. baja hidrosolubilidad y actuaran en sistemas no acuosos como aceites lubricantes.9,4. EM AS. Agentes catiónicos: Están compuestos por una molécula lipofílica y otra hidrofílica,. ST. consistente de uno o varios grupos amonios terciarios o cuaternarios. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. Agentes no iónicos: No se disocian en iones hidratados en medio acuoso.18, 24,27. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APLICACIONES DE LOS BIOSURFACTANTES. N.  APLICACIONES INDUSTRIALES. AC I. Ó. - Biorremediación: La biorremediación se ve muy favorecida con la aplicación de los. IC. biosurfactantes, además son útiles también en la biorremediación de sitios contaminados. M UN. con metales pesados tóxicos como el uranio, cadmio y plomo. Tensioactivos producidos. CO. por Arthrobacter, Pseudomonas, y Corynebacterim y B. subtilis mostraron resultados. A. Y. prometedores en la eliminación de alquitranes en la arena contaminada.18, 19, 28,29. ÁT. IC. - En la recuperación de depósito de aceite: muchos residuos se depositan en la parte. RM. inferior del depósito de aceite, y esto requiere un tratamiento de lavado manual que utiliza. FO. muchos disolventes peligrosos. Un procedimiento de limpieza alternativo es el uso de. IN. biosurfactantantes que promueven una disminución en la viscosidad, lo que facilita el. DE. bombeo de desechos y la recuperación de petróleo crudo después de la rotura de la. EM AS. emulsión, los residuos sólidos resultantes llevan una cantidad limitada de aceite residual. ST. por la acción detergente de biosurfactante, haciendo disposición menos problemática.29,30. SI.  APLICACIONES-TERAPÉUTICA. DE. Muchos biosurfactantes otros han mostrado actividad antimicrobiana31, de las cuales. IO. N. las más notables son ramnolípidos y lipopéptidos, pero los esfuerzos no están muy. RE. CC. avanzados en términos de su desarrollo para su utilización comercial.32. DI. La surfactina, uno de los mejores conocidos biosurfactantes, tiene diversas. aplicaciones farmacéuticas, tales como la inhibición de la formación del coágulo, la. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. formación de canales iónicos en la membrana, la actividad antibacteriana y antifúngica, la actividad antiviral y antitumoral.32,33. AC I. Ó. N.  BIOSURFACTANTES EN LA AGRICULTURA: Los biosurfactantes se utilizan. IC. sobre todo en las formulaciones de la agricultura de herbicidas y pesticidas. Los. M UN. compuestos activos son generalmente estas formulaciones hodrofóbico, siendo necesario para dispersar emulsionantes - en solución acuosa.28. CO.  BIOSURFACTANTES EN LA MINERÍA: Compuestos de tensión - cultivos. IC. El Biosurfactante de. C. bombicola. ha. ÁT. separación y flotación de calcita.. A. Y. activos producidos por Pseudomonas sp y Alcaligenes sp fueron utilizados para la. RM. demostrado eficacia en la solubilización del carbón.29. FO.  COSMÉTICOS Y PRODUCTOS DE LIMPIEZA: Debido a su compatibilidad con. IN. la piel, los biosurfactantes se puede utilizar en artículos de tocador y cosméticos. La. DE. preparación de biosurfactantes por acción enzimática (principalmente lipasas) en. EM AS. moléculas hodrofóbicos ha promovido una nueva dirección en la producción de. INDUSTRIA ALIMENTARIA: Los biosurfactantes se utilizan como emulsionantes. SI. . ST. estos compuestos, especialmente para uso en artículos de tocador y cosméticos.18. DE. en la transformación de materias primas. Los tensioactivos activos encuentran. IO. N. aplicación en productos de panadería y de la carne. Los biosurfactantes también se industria textil, y la cerámica,. CC. puede utilizar en la Industria del papel de la. DI. RE. pinturas, etc.18, 28,29. Un estudio realizado en Brasil, aisló el género Pseudomonas aeruginosa de. muestras de aguas residuales recolectadas en pozos de petróleo, el estudio demostró que la Pseudomonas aeruginosa es capaz de usar diferentes sustratos, tales como glicerol, 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. manitol, fructosa, glucosa, n-parafinas y aceites vegetales, para producir compuestos biosurfactante Tipo ramnolípidos .Sin embargo, el uso de glicerol como fuente de carbono. AC I. Ó. N. mostró mejores resultados.34. IC. Por otro lado , se estudió el biosurfactante producido por Torulopsis magnoliae que. M UN. es capaz de disminuir la tensión superficial del agua hasta en 40 dinas, lisar glóbulos rojos y forma rápidamente emulsiones acuosas de petróleo pesado , además se observó una. CO. actividad antibacteriana y antifúngica, dicho surfactante deja de producirse inmediatamente. IC. A. Y. en ausencia del sustrato (azúcares de melaza).35. ÁT. En México se ha demostrado que el biosurfactante que sintetiza Penicillium sp. ,. RM. tiene la propiedad de emulsificar los hidrocarburos que contiene el diesel y además podría. IN. FO. utilizarse como emulsificante de hidrocarburos aromáticos y alifáticos, ya que el diesel está. DE. constituido en su mayoría por éstos, se debe tener en cuenta además, que la limitación de. EM AS. las fuentes de nitrógeno en el medio de cultivo favorece la producción de dicho biosurfactante.36Además se demostró que el hongo filamentoso Penicillium sp. Posee la. ST. habilidad de sintetizar un agente emulsificante extracelular, cuando se desarrolla en. DE. SI. presencia de glucosa y fenantreno como fuentes de carbono.37. N. En otro lado se estudiaron tres géneros de hongos filamentosos: Aspergillus,. CC. IO. Geotrichum y Penicillium, aislados de muestras de suelo, evaluando su capacidad reductora. RE. de Hidrocarburos Totales de Petróleo (TPHs), a nivel de laboratorio, mediante la prueba de. DI. Índice de Emulsión demostrando ser productoras de surfactantes38. En. España. se estudio estudia la producción biosurfactantes que permite la. biodegradación diesel mediante el uso de consorcios microbianos mixtos de los sitios 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. contaminados con diesel. Se obtuvieron tres consorcios microbianos (nombrado como XA, XB y XC) obtenido a partir de suelos contaminados, y enriquecido en diesel como única. Ó. N. fuente de carbono. Los consorcios tres se encontraron para ser productores eficientes de. en el cual se. M UN. Se ha estudiado a un Actinomicetos marinos, Streptomyces spp. IC. AC I. biosurfactantes.39. evaluó su producción de biosurfactante y resistencia a metales pesados; los cuales. CO. muestran muestran que Streptomyces spp.es un productor potencial de las moléculas de. IC. A. Y. superficie activa y resistente a cadmio y plomo.40. ÁT. En New Jersey, se estudió del efecto de los parámetros ambientales en la. RM. biodegradación del crudo de petróleo y analizaron la humedad, el pH, los nutrientes. IN. FO. minerales, los micronutrientes, suplementos orgánicos, tasa de tratamiento, frecuencia de. DE. tratamiento y la temperatura de incubación. La degradación de crudo de petróleo fue óptima. EM AS. a una humedad del 30-90%, un pH de 7.5 a 7.8, una concentración de C: N y C: P de 60:1 y 800:1, respectivamente, y a una temperatura de 20 ºC. El porcentaje de degradación. SI. ST. después de cientochenta días fue 57 %.41. DE. Se ha aislado de suelos contaminados con petróleo, Bacillus subtilis y Pseudomonas. N. aeruginosa estás se seleccionaron para la producción de biosurfactantes utilizando aceite. CC. IO. vegetal, queroseno, gasolina y el diesel como fuente de carbono. Dando como resultado. RE. que el diesel es la mejor fuente para la producción de biosurfactante en B.subtilis y. DI. P.aeruginosa.42 Se llevó a cabo un estudio respecto a la degradación bacteriana sobre naftaleno, antraceno, fenantreno y dibenzotiofeno; mediante las bacterias degradadoras aisladas de 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. suelo contaminado con hidrocarburo: Pseudomonas, Bacillus, Staphylococcus y Micrococcus, determinándose que el 100% de cepas, son degradadadoras de naftaleno y. AC I. Ó. N. antraceno, el 78.5% fenantreno, el 71.42% dibenzotiofeno .43. IC. En otro estudio fueron aisladas baterías marinas; MW1 (Acinetobacter sp.), JN1. M UN. (Bacillus sp.), JN2 (Pseudomonas sp.), MS3 (Gluconobacter sp.), MS1 (Arthrobacter sp.), MW2 (Pseudomonas sp.) este estudio revela que las seis cepas demuestran una elevada. CO. actividad biosurfactante, pero la MW2 (Pseudomonas sp.) mostró la mayor actividad de. A. Y. emulsificación en comparación que las otras.44tambien se ha estudiado la producción de por Acinetobacter calcoaceticus, en caldo nutritivo con condiciones. ÁT. IC. biosurfactante. RM. diferentes a fin de obtener la máxima producción de biosurfactante. El mejor medio de. FO. cultivo se encontró para la producción de biosurfactante fue el medio de caldo nutritivo. DE. IN. suplementado con NaCl y aceite de almendras.45. EM AS. Algunas cepas bacterianas fueron evaluadas por su capacidad de producir compuestos biosurfactante a partir de substratos como: melazas, suero de leche y las aguas cepas que crecieron en medio manipueira. ST. residuales de harina de yuca (manipueira) .las. SI. disminuyeron la tensión superficial alrededor de 42%, la mayor reducción entre todos los. DE. sustratos probados. De los substratos utilizados el. Manipueira comprende un medio. IO. N. potencial de cultivo alternativo para la producción de biosurfactante por los aislamientos. RE. CC. seleccionados.46. DI. Otro trabajo realizado, estudió la producción de biosurfactantes bacterianos y su. efectividad biológica sobre zoosporas de Phytophtora infestans; las cepas identificadas de Pseudomonas fluorescens (021V y 039T). mostraron la mejor actividad lítica sobre. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. zoosporas de P.infestans produciendo la inmovilidad de éstas a los 2 minutos después de entrar en contacto con los sobrenadantes del caldo de cultivo y la lisis antes de los 5. AC I. Ó. N. minutos.47. IC. En México se ha aislado 12 cultivos de suelos contaminados con petróleo crudo, los. M UN. cultivos aislados fueron probados por su capacidad de crecer en queroseno como fuente de carbono y además en condiciones de fijación de nitrógeno, Solo 4 cultivos CB, CC, CS,. CO. CA mostraron capacidades como: utilizar queroseno como fuente de carbono y producir. IC. ÁT. biosurfactante: 0.35 g/L, y 0.5 g/L respectivamente.48. A. Y. biosurfactantes, pero solo, la CA, y la CB, mostraron la más alta productividad de. RM. Se ha obtenido biosurfactantes producidos por microorganismos aislados de suelo. IN. FO. contaminados de aceite de los talleres de automóviles, cinco cultivos fueron seleccionados solo un. el cultivo identificado como. DE. para la producción de biosurfactante pero. EM AS. Pseudomonas sp fue capaz de mostrar de producir biosurfactante.49 Se aislo 12 microorganismos procedentes de suelo contaminado con diesel, siete. SI. ST. de los aislamientos resultaron ser bacilos Gram-positivos que forman esporas, los otros. DE. cinco son bacilos Gram-negativos. Las siete cepas Gram positivas, incluyendo una Gram-. N. negativa cepa se ensayaron para n-parafina y la degradación de diesel. Los resultados de. CC. IO. estos ensayos mostraron que todos los cultivos seleccionados tienen un alto potencial de. DI. RE. degradación de n-parafina.50 En argentina se llevaron a cabo ensayos de biodegradación empleando diferentes. sustratos orgánicos (crudo de petróleo, kerosene, aceite lubricante y benceno), Con tres inóculos diferentes desarrollados a partir de una muestra de agua superficial con alto grado 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de contaminación, estos microorganismos aislados poseen la capacidad de degradar estos. AC I. Ó. semanas después de iniciado el ensayo, y en el kerosene una semana después.51. N. compuestos, pero el proceso de degradación comenzó en el caso del aceite dos o tres. IC. Otro estudio aisló Bacillus cereus y Bacillus subtilis con capacidad de producir. M UN. biosurfactante. El aislamiento se dio a partir de muestras ambientales (suelo y agua contaminados y no contaminados con hidrocarburo); utilizando diesel y aceite de motor. CO. como fuente de hidrocarburos. Los biosurfactantes producidas por B. subtilis tenía una. A. Y. mayor capacidad de emulsificación que B. cereus fue 30% y 20% para aceite diesel y el. ÁT. IC. motor, respectivamente. 52. RM. Se aisló la levadura Trichosporon asahii, de tierra contaminada con petróleo en la. IN. FO. India encontrando que era productor potente de biosurfactante en medios que contienen. EM AS. eficiente de aceite diesel (95%).53. DE. sales minerales, aceite diesel como fuente de carbono, además de ser un degradador. Por otro lado se ha estudiado la actividad antibacteriana del biosurfactante obtenido actividad antibacteriana. SI. ST. de la bacteria Pseudomonas aeruginosa, esta muestra una. DE. profundamente distinta hacia los organismos de prueba. Por ejemplo la Pseudomonas. IO. DI. RE. CC. coli.54. N. aeruginosa mostró baja actividad contra S. aureus, y una elevada actividad frente a E.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. OBETIVO GENERAL. N. Aislamiento de microorganismos con capacidad biosurfactógena, de suelo. AC I. Ó. contaminado con hidrocarburos y de suelos no contaminados con hidrocarburo.. IC. Determinar si los biosurfactantes producidos por microorganismos de suelos tienen. CO. M UN. Capacidad Antibacteriana contra de Staphylococcus aureus y Escherichia coli.. IC. A. Y. OBJETIVOS ESPECÍFICO. ÁT. Producir biosurfactantes.. RM. Obtener cultivos puros. IN. FO. Obtener microorganismos productoras de biosurfactante de suelos contaminados. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. con hidrocarburos. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. MATERIAL Y METODO. Ó. N. MATERIAL. IC. M UN. •Suelo de jardinería tomado al azar de la Universidad Nacional de Trujillo.. AC I. Material biológico. CO. •Microorganismos productores de biosurfactantes aislados se suelo de jardinería de la. Y. Universidad Nacional de Trujillo.. IC. A. •Cultivos de Escherichia coli y Staphylococcus sp, proporcionados por el Laboratorio. RM. ÁT. Referencial del Ministerio de Salud de la Ciudad de Trujillo.. DE. IN. 1) RECOLECCIÓN DE LA MUESTRA:. FO. MÉTODO. EM AS. El cepcam es un ambiente agrícola de la ciudad universitaria y se eligió como lugar para toma de muestras .La muestra de suelo se recolectó a una profundidad de 20 cm, se. ST. tomó 10 muestras de aproximadamente 1 kg de suelo de cultivo, las mismas que fueron. DE. SI. transportadas al laboratorio en bolsas de polietileno de primer uso debidamente etiquetadas. N. en el menor tiempo posible para su procesamiento inmediato, se midió el pH y la. CC. IO. temperatura del suelo.. RE. 2) AISLAMIENTO DE LAS BACTERIAS PRODUCTORAS DE BIOSURFACTANTE. DI. DE SUELOS de JARDINERÍA NO CONTAMINADOS CON HIDROCARBURO Se tamizó el suelo y se colocó en un recipiente se dejó en reposo por quince días, removiendo con frecuencia el suelo para permitir la oxigenación, además la humedad se 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. reguló de manera cualitativa es decir no se permitió la sequedad del suelo, se agregó agua hasta humedad constante (50%). Se realizó el aislamiento de microorganismos de suelos. Ó. N. por triplicado, 5 gramos de la muestra de suelo sin hidrocarburos se inocularon en 50. AC I. mL de caldo R2B49 y se incubó a 250C durante 72 horas. Después de la incubación se tomó. IC. 1 mL de este medio y se hizo una dilución en serie de 10-1 a 10-9 en agua destilada estéril. M UN. realizándose la siembra por incorporación en 20 mL de agar R2A49 y Agar papa-dextrosa. CO. de las última dilución, se incubó por 48 horas a 25°C y 30°C respectivamente, después de. Y. la incubación se seleccionó las colonias morfológicamente diferentes y se realizó una. IC. A. observación microscópica mediante tinción Gram de las colonias, para obtener cultivos. RM. ÁT. puros.. FO. 3) AISLAMIENTO DE LAS BACTERIAS PRODUCTORAS DE BIOSURFACTANTE. IN. EN SUELOS AGRÍCOLAS CONTAMINADAS EXPERIMENTALMENTE. EM AS. DE. HIDROCARBUROS.. CON. Se tamizó el suelo y éste se extendió en un plástico sobre una superficie sólida y se. ST. realizó el derrame experimental con 50.000 ppm de petróleo y50.000 ppm kerosene, 75,000. SI. ppm de petróleo y 75,000ppm de kerosene 55,56, posteriormente se depositó 1 Kg. de suelo. DE. en cada una de las bandejas de experimentación. Los recipientes con las muestras, se dejó. IO. N. en reposo por quince días, removiendo con frecuencia el suelo para permitir la oxigenación,. CC. además la humedad se reguló de manera cualitativa es decir es decir no se permitió la. DI. RE. sequedad del suelo, se agregó agua hasta humedecimiento permanente .57 Se realizó el aislamiento de microorganismos de suelos por triplicado, se tomó 5. gramos de la muestra de suelo con petróleo y kerosene, éstos se inocularon en 50 mL de. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. caldo R2B y se incubó a 250C durante 72 horas. Después de la incubación se tomaron 1 mL de este medio y se hizo una dilución en serie de 10-1 a 10-9 en agua destilada estéril. Ó. N. realizándose la siembra por incorporación en 20 ml de agar R2A y Agar papa-dextrosa de. AC I. la última dilución, se incubó por 48 horas a 25°C y 30°C respectivamente, después de la. M UN. IC. incubación se seleccionó las colonias morfológicamente diferentes y se realizó una observación microscópica mediante tinción Gram de las colonias, para obtener cultivos. CO. puros.49. IC. A. Y. 4) ALMACENAMIENTO DE LAS CEPAS BACTERIANAS. ÁT. Las colonias aisladas y seleccionadas se almacenaron en tubos inclinados de agar R2A. RM. y fueron almacenadas bajo condiciones de refrigeración (4ºC) para experimentación. IN. FO. posterior.49. DE. 5) EVALUACIÓN DE MICROORGANISMOS CON POTENCIAL BIOSURFACTANTE. EM AS. Para realizar la selección inicial de bacterias productoras de biosurfactantes, las. ST. colonias aisladas se sembraron en medios de cultivo diferentes para su identificación. SI. presuntiva como productoras de biosurfactantes.. DE. El primero medio utilizado fue en agar sangre para determinar si el microorganismo agar Tween. 80® para observar la. IO. N. realiza hemolisis. El segundo medio usado fue. RE. CC. producción de enzimas lipasas. PRUEBA DE HEMOLISIS DE SANGRE. DI. •. Este método fue desarrollo como un método de diagnóstico rápido para la producción de biosurfactante basado en la capacidad del agente biosurfactante para lisar glóbulos rojos. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las placas se incubaron durante 48-72 horas a 370C en agar sangre. Las colonias productoras de biosurfactante presentaron halos de hemólisis provocada por la disminución. Ó. N. de la tensión superficial y el rompimiento de la membrana de los Hematíes del medio a. IC. •. AC I. causa de los biosurfactantes49.. M UN. PRODUCCIÓN DE LIPASA. CO. Otro medio usado fue agar Tween 80® para observar la producción de lipasas. Y. mediante la formación de un halo blanco de precipitación de cristales de calcio que indica. IN. DE. Preparación de los cultivos. FO. 6) PRODUCCIÓN DE BIOSURFACTANTE •. ÁT. RM. Las placas se incubaron durante 48-72 horas a 370C. IC. A. la liberación de ácidos grasos que conforman lo triglicéridos de la membrana celular 38, 30,. salina fisiológica. EM AS. Inóculos de cada uno de los diferentes microorganismos fueron suspendidos en solución estéril. hasta alcanzar. la turbidez equivalente. al. tubo nº 1 del. SI. DE. biosurfactantes.. ST. Nefelómetro de Mac Farland, que fueron inoculados en un medio para la producción de. •. IO. N. Producción y Extracción del biosurfactante. CC. Estos inóculos se colocaron en 50 mL del medio de producción (en g/L): MgSO4.7H2O. RE. 0,5; KCl 0,1; KH2PO4 0,5; CaCl2 0,01; K2HPO4 1,0; NaNO3 7,0:FeSO4.7H2O 0,01;. DI. Extracto de levadura 0,1; Óleo diesel 1,0% (v/v). El pH inicial fue de 5,0 para las levaduras y hongos y de 7,0 para las bacterias. Este medio fue esterilizado, luego se inoculó los cultivos y se incubaron a 37°C, por 72 horas, luego 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. este caldo se centrifugó a 5000 a 4ºC durante 20 min,59 obteniéndose el biosurfactante libre células.. AC I. Ó. N. 7) CAPACIDAD DE EMULSIFICACIÓN. IC. La prueba de emulsificación se llevó a cabo utilizando petróleo (4 mL) de hidrocarburo. M UN. (petróleo o kerosene) en un tubo de ensayo y se añadió 8 mL del sobrenadante libre de. CO. células obtenido después de la centrifugación, este se agitó durante 2 minutos para asegurar. A. Y. una mezcla homogénea de ambos líquidos.. IC. Estas medidas se compararon con la altura del anillo formado por el control positivo. RM. ÁT. (tensoactivo químico comercial Tween 20®, 200 mg•mL-1), para obtener los resultados. FO. como porcentaje de emulsificación. Adicionalmente se estimó la calidad de la. La actividad de emulsificación se observó después de 24 a 48 horas y se calculó. EM AS. mediante la fórmula: 50, 52, 59,60. DE. tubos.. IN. emulsificación al observar si se desestabiliza el anillo formado al agitar fuertemente los. ST. También se evaluó la capacidad hemolítica del biosurfactante, colocando discos de 5 mm. SI. de diámetro embebidos con dicho biosurfactante en Agar sangre e incubando por 48 horas. DE. a 37 °C.. CC. IO. N. 8) DETERMINACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIMICROBIANA. RE. • Preparación de los cultivos. DI. Los inóculos de cada uno de los diferentes microorganismos fueron suspendidos en. solución salina fisiológica estéril hasta alcanzar la turbidez equivalente al tubo nº 0.5 del Nefelómetro de Mac Farland. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. •. Actividad antibacteriana La actividad antibacteriana de los biosurfactantes se determinó utilizando los cultivos. AC I. Ó. N. bacterianos (Escherichia coli y Staphylococcus sp) siguiendo la técnica de difusión en agar. IC. en placas que contenían de 22 a 25 mL de agar nutritivo.. M UN. Se sumergió un hisopo estéril en la suspensión bacteriana preparada a partir del. CO. cultivo joven y se sembró por estría en tres direcciones para asegurar una distribución. Y. uniforme del inóculo con la bacteria Gram positivas (Staphylococcus sp) y Gram-. ÁT. IC. A. negativa (Escherichia coli) en las placas.. RM. Se tomó 20 uL de los sobrenadantes para la impregnación en discos de 5mm de papel ya estriadas con los inóculos Las. FO. filtro estériles, que se colocaron en placas de Petri. IN. placas se incubaron a 37 ° C durante 48 horas.58. DE. Después de la incubación, las placas fueron observadas por la presencia de una zona de. EM AS. inhibición (zona clara alrededor), la presencia de una zona clara marcará la actividad. ST. antibacteriana de biosurfactante.58. DE. SI. 9) ANÁLISIS DE DATOS. DI. RE. CC. IO. N. Los resultados han sido ordenados en gráficas y tablas para su evaluación correspondiente.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III. sin. tratamiento con. hidrocarburo se aisló. 6 microorganismos,. N. Del suelo. RESULTADOS. AC I. Ó. codificando a cada uno, para facilitar su identificación, se realizó una coloración Gram. IC. para observar sus características morfológicas y verificar su pureza posteriormente se. M UN. realizaron pruebas de selección en búsqueda de microorganismos productores de. CO. biosurfactantes. Según las características morfológicas halladas el 50% corresponde a. Y. cocos Gram negativos y el otro 50% a bacilos Gram negativos. Cuyas características se. RM. ÁT. IC. A. presentan en el tabla 1,2.. DE. IN. no contaminados con hidrocarburo. FO. TABLA 1: características micro y macro morfológicas de las colonias aislados de suelos. CÓDIGO. 2. SCB. 3. SCC. irregular, transparente, lisa. SCD. Blanca ,circular , irregular. Bacilos Gram Negativo agrupados. 5. SCE. blanca, circular , lisa. Bacilos Gram Negativo en pares. 6. SCF. blanca, circular. Bacilos Gram Negativo aislados. DI. RE. N IO. CC. 4. DE. SI. ST. SCA. MACROMORFOLOGIA. EM AS. CEPA NUMERO 1. MICROMORFOLOGIA. blanca, circular. Cocos Gram Negativos en racimos.. lobulada, amarilla, Circular.. Cocos Gram Negativos aislados. Cocos Gram Negativos en pares. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) DE. IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM AS. FIGURA 1 y 2: Observación microscópica y macroscópica de las cepas seleccionadas para la producción de biosurfactante, en agar R2A (1), tinción Gram con aumento de 100x (2). 28 microorganismos a los cuales se les. SI. ST. De suelos con hidrocarburo se aisló. DE. codificó, para facilitar su identificación, se realizó una coloración Gram para observar sus. N. características morfológicas y verificar su pureza, posteriormente se realizaron pruebas. CC. IO. para la selección de microorganismos productores de biosurfactantes. Según las. DI. RE. características morfológicas halladas el 100% corresponde a Gram negativos.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MACROMORFOLOGIA. MICROMORFOLOGIA. CEPA NUMERO. CÓDIGO. P51. Blanca, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos en cadena.. 15. P75. 2. P52. Blanca, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos en grupos.. 16. P76. 3. P53. Blanca, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos cocos en cadenas.. 17. 4. P54. Blanca, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos aislados y en pares.. 18. 5. P55. Beige, circular, lisa y puntiforme.. Cocos Gram Negativos aislados.. 6. P56. Blanca, circular y lisa.. Bacilos Gram Negativo aislados.. 7. P57. beige, circular y lisa.. 8. P58. 9. MICROMORFOLOGIA. Blanca, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos en grupos. Crema, circular y lisa.. Bacilos Gram Negativo aislados.. Crema, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos aislados.. K52. Beige, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos aislados.. 19. K53. Crema, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos en cadenas.. 20. K54. Beige, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos aislados.. Cocos Gram Negativos aislados.. 21. K71. Lobulado, blanca, circular y lisa.. Bacilos Gram Negativo aislados.. Beige, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos aislados.. 22. K72. Blanca, circular y lisa.. P59. Beige, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos aislados.. 23. K73. irregular ,cremosa, beige. Cocos Gram Negativos en racimos. 10. P510. Blanca, circular y lisa.. Bacilos Gram Negativo en pares.. 24. K74. Circular ,lisa crema. Cocos Gram Negativos agrupados. 11. P71. Lobulado, blanca, circular y lisa.. Bacilos Gram Negativo aislados.. 25. K75. Circular ,lisa ,blanca. Cocos Gram Negativos en grupos. 12. P72. Blanca, circular y lisa.. Bacilos Gram Negativo solos.. 26. K76. Circular ,transparente. Bacilos Gram Negativo en cadenas. 13. P73. Lobulado, blanca, circular y lisa.. Cocos Gram Negativos aislados y en pares.. 27. K77. Circular , crema ,lisa. Cocos Gram Negativos en cadenas. 14. P74. Beige, circular y lisa. Cocos Gram Negativos aislados y en pares. 28. K78. Circular ,lisa ,beige. Bacilos Gram Negativo en grupos. CO Y. ÁT IC A. FO. IN. DE. AS. SI ST. DE. N. O. K51. DI RE. CC I. M. 1. MACROMORFOLOGIA. RM. CÓDIGO. EM. CEPA NUMERO. UN IC AC I. Ó. N. TABLA 2: Características micro y macro morfológicas de las colonias aisladas de suelo con hidrocarburo. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. Cocos Gram Negativos agrupados..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Todos los microorganismos aislados en suelo sin hidrocarburo así como en suelos con hidrocarburo se sembraron en agar. sangre, se obtuvo 6 cepas de suelos sin. Ó. N. hidrocarburo, de los cuales 4 presenta actividad hemolítica (67%), como se observa en la. AC I. tabla 3. Además 28 cepas fueron aisladas de suelos con hidrocarburo, de los cuales 18. M UN. IC. presentan actividad hemolítica (64%), formación de una zona clara alrededor de la colonia. CO. (figura 3,4.5.6.7).. Y. Los resultado obtenidos sirvieron para ir descartando Las cepas que no tienen hemolítica y solo seleccionar a los que tienen esta capacidad, para continuar ensayos de evaluación de actividad de biosurfactante; también se. ÁT. con los siguientes. IC. A. capacidad. la actividad lipolitica de los aislamientos, sembrando en agar Tween 80. RM. determinó. FO. observándose la presencia de una zona blanca de cristales de calcio precipitados, alrededor. DE. IN. de la colonia (Figura 9).los mismos que muestran relación con los datos obtenidos en la. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. actividad hemolítica como muestra en la tabla 5 y 6.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. HEMOLISIS. 1. SCA. (+). 2. SCB. (+). 3. SCC. (-). 4. SCD. (+). 5. SCE. 6. SCF. CO Y A IC. 1.00 (-) 0.8 (-) 1.1. EM AS. DE. IN. (+). HALO DE HEMOLISIS(cm) 1.05. ÁT. FO. (-). IC. CODIGO. M UN. CEPA NUMERO. RM. AC I. Ó. N. TABLA 3: Capacidad hemolítica de microorganismos aislados de suelo sin hidrocarburo. SI. ST. LEYENDA: + = PRESENCIA DE HEMOLISIS. DI. RE. CC. IO. N. DE. -=AUSENCIA DE HEMOLISIS. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. NUMERO. HALO DE. CEPA. HEMOLISIS. NUMERO. 1. P51. (-). (-). 15. 2. P52. (+). 1.0. 16. 3. P53. (+). 1.9. 17. 4. P54. (+). 1.8. 5. P55. (-). (-). 6. P56. (+). 1.9. 7. P57. (+). 1.7. 8. P58. (+). 1.6. 9. P59. (+). 1.6. 10. P510. (-). 11. P71. (+). 12. P72. (-). 13. P73. (+). 14. P74. (+). P76. (+). 0.85. K51. (+). 0.9. 18. K52. (+). 0.7. 19. K53. (-). (-). 20. K54. (+). 1.1. 21. K71. (-). (-). 22. K72. (+). 1.5. 23. K73. (+). 1.9. (-). 24. K74. (-). (-). 0.35. 25. K75. (-). (-). (-). 26. K76. (+). 1.8. 0.75. 27. K77. (+). 2.0. 1.1. 28. K78. (-). (-). ÁT IC A RM FO IN. DE. AS EM SI ST. HEMOLISIS (-). N. DE. HALO DE. (-). O. DE HEMOLISIS. = AUSENCIA DE HEMOLISIS. DI RE. ( -). HEMOLISIS. P75. CC I. Leyenda: (+) = PRESENCIA. CÓDIGO. M. HEMOLISIS. CO. CÓDIGO. Y. CEPA. UN IC AC I. Ó. TABLA 4: Capacidad hemolítica para microorganismos aislados de suelo con hidrocarburo. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. FIGURA 3,4: Placas con agar sangre mostrando la actividad hemolítica de algunas cepas, formación de una zona clara alrededor de la colonia, delas cepas obtenidas de suelo sin hidrocarburo.. FIGURA 5, 6, 7,8: Placas con agar sangre mostrando una actividad hemolítica, formación de una zona clara alrededor de la colonia, de las cepas obtenidas de suelo con hidrocarburo 29. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGAR TWEEN 80. Ó. CEPA. AC I. NUMERO. N. TABLA 5: Capacidad lipolitica de los microorganismos aislados de suelo sin hidrocarburo. SCE. 6. SCF. M UN. 5. CO. SCD. Y. 4. A. SCC. IC. 3. +. ÁT. SCB. RM. 2. ++. FO. SCA. -. ++ +. DE. IN. 1. IC. (precipitación de ácidos grasos). EM AS. Leyenda: +++=precipitación franca. ST. ++= Precipitación moderada. SI. += Precipitación leve. DI. RE. CC. IO. N. DE. - =ausencia de precipitado. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CÓDIGO. AGAR TWEEN 80. NUMERO. CÓDIGO. UN IC AC I. NUMERO. Ó. N. TABLA 6: Capacidad lipolitica de los microorganismos aislado de suelo con hidrocarburo.. -. 15. -. 2. P52. +. 16. P76. -. 3. P53. ++. 17. K51. +++. 4. P54. +++. 18. K52. +++. 5. P55. -. 19. K53. -. 6. P56. +++. 20. K54. +++. 7. P57. ++. 21. K71. -. 8. P58. ++. 22. K72. +. 9. P59. +++. 23. K73. ++. 10. P510. -. 24. K74. -. 11. P71. -. 25. K75. -. 12. P72. -. 26. K76. +++. 13. P73. ++. 27. K77. ++. 14. P74. +++. 28. K78. -. FO IN DE AS. EM. DE. SI ST. M. P51. Y. 1. RM. P75. CO. (precipitación de ácidos grasos). ÁT IC A. (precipitación de ácidos grasos). AGAR TWEEN 80. N. Leyenda: +++=precipitación franca. CC I. O. ++= Precipitación moderada. DI RE. += Precipitación leve. - =ausencia de precipitado. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) IN. FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. FIGURA 9: Placas con agar Tween mostrando una zona blanca producto de la. EM AS. precipitación de cristales de calcio con ácido grasos.. ST. Se seleccionó solo las cepas con capacidad hemolítica y las que fueron positivas los. SI. en agar Tween, se inocularon en medio líquido R2B para la producción de. DE. biosurfactantes, estos biosurfactantes obtenidos fueron evaluados mediante su capacidad. IO. N. emulsificante, obteniendo 20 cepas con la formación de los anillos emulsificante como lo. CC. indica la tabla 7, 8.excepto la P73 Y P76 Los anillos de emulsificación se mantuvieron. DI. RE. estables y densos por 24 horas.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC AC I. Ó. TABLA 7: microorganismos aislados de suelo sin hidrocarburo que presentan capacidad hemolítica, lipolitica y. CEPA. HEMOLISIS. HALO DE. CAPACIDAD. (Capacidad lipolitica). EMULSIFICANTE. SCA. +. 1.05. ++. +. 2. SCB. +. 1.00. +. +. 3. SCD. +. 0.8. ++. +. 4. SCF. 1.1. +. +. EM. AS. DE. IN. FO. 1. RM. ÁT IC A. Y. HEMOLISIS(cm). AGAR TWEEN 80. CO. NUMERO. M. emulsificación. DE. SI ST. +. DI RE. CC I. O. N. Leyenda: + = Capacidad hemolítica, lipolitica y emulsificante. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. TABLA 8: microorganismos aislados de suelo con hidrocarburo que presentan con capacidad hemolítica,. HEMOLISIS. 1. P52. +. HALO DE HEMOLISIS(cm) 1.0. 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16. P53 P54 P56 P57 P58 P59 P71 P74 K51 K52 K54 K72 K73 K76 K77. + + + + + + + + + + + + + + +. 1.9 1.8 1.9 1.7 1.6 1.6 0.35 1.1 0.9 0.7 1.1 1.5 1.9 1.8 2.0. AGAR TWEEN 80 (Capacidad lipolitica) +. M. CEPA. ++ +++ +++ ++ ++ +++ ++ +++ +++ +++ +++ + +++ +++ ++. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT IC A. Y. CO. NUMERO. UN IC AC I. lipolitica y emulsificación.. DI RE. CC I. O. N. Leyenda: + = Capacidad hemolítica, lipolitica y emulsificante. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis.. CAPACIDAD EMULSIFICANTE + + + + + + + + + + + + + + + +.

(46) FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M UN. IC. AC I. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM AS. DE. IN. FIGURA 10: Capacidad Emulsificante de los Biosurfactantes de las cepas aisladas mostrando la formación de un anillo de emulsificación. (Observándose los diferentes tamaños de anillo de emulsificación). fueron usados para la actividad. ST. Los biosurfactante obtenidos, también. SI. antimicrobiana contra Staphylococcus sp y Escherichia coli, los biosurfactantes obtenidos actividad antimicrobiana contra. DE. de las cepas SCD, SCF, P73, P74 y k54 mostraron. N. Staphylococcus sp y Escherichia coli; mostrando un halo de inhibición alrededor del y las cepas p52 y k51 solo mostraron actividad. CC. IO. biosurfactante usado (tabla 9, 10). DI. RE. antimicrobiana contra de Staphylococcus sp. (Tabla 10). 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. N. TABLA 9: Actividad antibacteriana de los biosurfactantes obtenidos de las cepas aisladas de suelo sin hidrocarburo. Los halos obtenidos, corresponden a discos en 20 uL biosurfactante crudo.. Ó. ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA CODIGO. Escherichia coli. Staphylococcus sp. 1. SCA. -. -. 2. SCB. -. 3. SCD. +. 4. SCF. +. IC M UN. -. +. Y. CO. +. IC. A. LEYENDA: + = actividad antibacteriana. ÁT. ausencia de actividad antibacteriana. CC. IO. N. DE. SI. ST. EM AS. DE. IN. FO. RM. -. AC I. NUMERO. DI. RE. FIGURA 11,12: Actividad Antibacteriana de los biosurfactantes contra de Staphylococcus sp y Escherichia coli, mostrando un halo de inhibición alrededor del papel filtro impregnado con los biosurfactantes obtenidos de las cepas aisladas.. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..