Efecto antibacteriano in vitro del extracto de plantago major (llantén) y del perioaid® 0 12% sobre fusobacterium nucleatum atcc 25586

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(1)Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE ESTOMATOLOGIA. T N U “EFECTO ANTIBACTERIANO IN VITRO DEL EXTRACTO DE-Plantago major (LLANTÉN) Y DEL PerioAid® 0.12% SOBRE IA Fusobacterium G nucleatum ATCC 25586”. O L O TESIS T A M O PARA OPTAR EL GRADO DE BACHILLER EN ESTOMATOLOGÍA T S E AUTOR(A) DE D VANESSA IVON PACHAMANGO LEIVA A T L ASESOR U C FA DR. AUGUSTO ALBERTO AGUIRRE AGUILAR -. - DRA. ELVA MEJÍA DELGADO. TRUJILLO – PERÚ 2016. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(2) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DEDICATORIA. A Dios por estar presente cada día de mi vida, por todas las bendiciones y lecciones que me da a cada instante, por poner en mi camino a las personas correctas y sobre todo por haberme dado la mejor de las bendiciones, una hermosa familia.. A mi padre: Jose Pachamango por ser la persona que nunca. A I G. -. T N U. dejo de confiar en mí y me ha brindado su amor, a mi madre. O L O. Maria Leiva por todo su trabajo y esfuerzo, por ese apoyo son los pilares T A fundamentales de mi vida y sonM mi inspiración para la O T realización de mis sueños, sin su ayuda nada de esto sería S E posible. DE D A A mis Hnos: Deysi, Hugo, Max y Lizeth por su cariño, T L comprensión U por ser parte importante de mi vida siendo mis C FAcómplices y los mejores amigos. incondicional. y. desprendido;. porque. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(3) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. AGRADECIMIENTO. Al Dr. Alberto Aguirre Aguilar, por su paciencia, orientación, por dedicar su tiempo en la realización de este trabajo de investigación.. T N U investigación, brindándome su apoyo en cada momento, por su amabilidad y compromiso. A I G O L O T A M O T S E DE D A T L U C A A la Dra. Elva Mejía Delgado por haber hecho posible el desarrollo de esta. F. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(4) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. RESUMEN Objetivo: El presente estudio de tipo experimental, tuvo como objetivo establecer el efecto antibacteriano in vitro de las concentraciones del extracto etanólico de Plantago major al 50% y 75% y el PerioAid® 0.12 % sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. Materiales y métodos: El extracto etanólico fue elaborado de Plantago major. T N 50% y 75% y del PerioAid® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum U - ATCC 25586 mediante la prueba de susceptibilidad y la determinación de la A I G concentración mínima inhibitoria. O L O mediante la prueba de Resultados: El análisis de resultados determinó T Adel Plantago major al 75% (10mm) susceptibilidad que el extracto etanólicos M O y del PerioAid® 0.12%(13.6mm) T fueron sensibles y los extractos etanólico de S E tuvieron efectos inhibitorios semejantes. Plantago major al 50% y 75% DE Conclusión: La Dconcentración del extracto etanólico de Plantago major al A Tefecto antibacteriano in vitro similar que el PerioAid® 0.12% sobre 75% tienen L U nucleatum ATCC 25586. Fusobacterium C FA (Llantén). Se determinó el efecto antibacteriano en dos concentraciones al. Palabras claves:. Extracto de Plantago major(llantén), Fusobacterium. nucleatum.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(5) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ABSTRACT Objective: The present experimental study aimed to establish the in vitro antibacterial effect of the concentrations of the Plantago major ethanolic extract at 50% and 75% and the PerioAid® 0.12% on Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. Materials and methods: The ethanol extract was prepared from Plantago. T N U concentrations at 50% and 75% and of PerioAid® 0.12% on Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 by the susceptibility test and determination of the A I G minimum inhibitory concentration. O L O that the ethanol extract of Results: The analysis of the results determined T APerioAid® 0.12% (13.6mm) were Plantago major at 75% (10mm) and M O sensitive and the ethanol extracts T of Plantago major at 50% and 75% had S E effects Inhibitors. DE Conclusion: D The concentration of the ethanol extract of Plantago major at A Tsimilar in vitro antibacterial effect as the PerioAid® 0.12% on 75% has L U Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. C A major (Llantén). The antibacterial effect was determined in two. F. Key words: Plantago major extract (llantén), Fusobacterium nucleatum.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(6) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. ÍNDICE. DEDICATORIA AGRADECIMIENTO RESUMEN ABSTRACT. A I G. -. T N U. O L II. MATERIAL Y METODOS…………………………………….……17 O T A III. RESULTADOS…………………………………………..…...…….34 M O IV. DISCUSIÓN………………………………………………...……….42 T S V. CONCLUSIONES……………………………………….....………46 E VI. RECOMENDACIONES……………………………………...……47 DE D VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS……………………………48 A T VIII. L ANEXOS……………………………………………………………53 U C A I.. INTRODUCCIÓN………………………………………….…….……1. F. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(7) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. I. INTRODUCCIÓN Una de las enfermedades más prevalentes es la enfermedad periodontal considerándose un problema de salud pública, en la actualidad contamos con antisépticos bucodentales , sin embargo no están al alcance de todos los pobladores especialmente aquellos que están en la zonas más alejadas del Perú, con efecto de alcanzar nuevas propuestas para las elaboraciones. T N U. de colutorios a base de Plantago major y no habiendo muchos estudios al respecto se realiza la presente investigación.. A I G. -. Las diversas formas de las enfermedades gingivales y periodontales. O L con los tratados de árabes de cirugía y la época O de Pierre Faurchad, en el T siglo XVIII, se desarrolló un tratamientoAmoderno, con textos ilustrados e M O instrumentación elaborada. La enfermedad periodontal fue la más T S frecuente de todas las E afecciones reconocidas en los cuerpos E embalsamados deDlos antiguos egipcios. Por ello, no sorprende que el D atención en los escritos médicos y quirúrgicos. El papiro problema recibiera A T Ebers L cita varias veces a la enfermedad gingival y ofrece algunas recetas U C para fortalecer los dientes y la encía. Dichos remedios se elaboraban de A F aquejan al ser humano desde comienzos de la historia. En la edad media. varias plantas y minerales y se aplicaban a la encía en forma de una pasta. 1 La periodontitis se define como “una enfermedad inflamatoria de los tejidos de soporte del diente provocado por microorganismos que tiene como resultado la destrucción progresiva del ligamento periodontal y el hueso alveolar con la formación de bolsas, recesión, o ambas.” Los signos clínicos. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(8) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de la inflamación, son el cambio en el color, contorno y consistencia de la encía y la hemorragia gingival.2 Dentro de la estructura de los biofilms orales se puede destacar que entre el 15 – 20% del volumen está ocupado por microorganismos, mientras que el 85% restante corresponde a matriz extracelular: El biofilm supragingival está. compuesto. principalmente. por. bacterias. gram. positivas. T N metabolismo sacarolítico. Algunas de estas especies pertenecen al género U Lactobacillus y otras, principalmente, al grupo de los Streptococcos A parece existir I viridans. Sin embargo, cuando el proceso alcanza la dentina, G O un cambio en la microbiota, puesto que la Lactividad proteolítica se O incrementa sustantivamente, mientras queT la fermentación de azucares se A reduce. M O T S El crecimiento no controlado del biofilm supragingival sienta las bases para E el desarrollo de uno subgingival, el cual se ubica en el surco gingival, donde DE la condicionesD ambientales y el contacto con moléculas del sistema inmune A T el tipo de microbiota que allí se establece. De hecho, se han determinan L U más de 400 especies en ese nicho, principalmente microaerofílicos C descrito FA aerotolerantes. Algunas son productoras de ácido láctico, fruto de su. 3. y anaerobios estrictos con un metabolismo proteolítico, que a su vez presentan factores de virulencia que determinan la patogenia de este tipo de biofilms. 4 La enfermedad periodontal implica la participación de ciertas bacterias facultativas y anaerobias que se localizan junto con otras en el espacio subgingival del diente para conformar la denominada microbiota 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(9) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. subgingival.. En. Actinobacillus. ella,. reconocidos. patógenos. actinomycetemcomitans,. periodontales. Porphyromonas. como. gingivalis,. Tannerella forsythia (Bacteroides forsythus), Campylobacter rectus, Eubacterium nodatum, Fusobacterium nucleatum, Peptostreptococcus micros,. Prevotella. neumosintes. y. intermedia,. Treponema. Prevotella. denticola,. nigrescens,. actúan. en. Dialisterp. conjunto. o. independientemente para iniciar el proceso inflamatorio que produce la periodontitis .5. -. T N U. La etiología infecciosa de la periodontitis está ampliamente demostrada, y. A I G. así desde el punto de vista etiopatogénico no existen dudas que esta. O L O. enfermedad, se debe a la placa subgingival y las bacterias que colonizan. AT periodontales. Aunque hay más de 300 Mespecies que se aíslan en los sacos O T porcentaje de ellas se consideran periodontales, solo un pequeño S E etiológicamente importantes. El grupo de Bacilos anaerobios Gram E D negativos mayormente relacionados en la etiología de la enfermedad D A periodontal comprende los Porphyromonas, Prevotella, Bacteroides y T L U Fusobacterium. C A F esta, son las causantes del proceso destructivo de las estructuras. 6, 7. Agregatibacter antonomycetemcomita es un patógeno muy estudiando en. cuadros clínicos de periodontitis, siendo identificada a principios del siglo XX, este microorganismo presenta mayor relevancia en la periodontitis agresiva localizada, estando presente en un 95 % de los pacientes ; es un cocobacilo, no esporulado, capsulado, no móvil anaerobio facultativo.El daño producido por esta bacteria es rápida, es más si se acompaña de abundante biofilm alrededor del diente llegando a deteriorar el periodonto 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(10) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. con formación de bolsa periodontales , perdida de inserción, amplia movilidad del diente y con el tiempo a la perdida de este. 7 La expresión clínica de los diferentes cuadros de periodontitis dependerá de la interacción entre factores del hospedador, ambientales y del agente microbiológico. Un ambiente favorable y factores genéticos positivos determinan la diferente susceptibilidad del individuo, y no sólo eso, sino. T N la recidiva y la aleatoria respuesta a la terapéutica. Por lo tanto, la U microbiota bacteriana periodontopatógena es necesaria pero no suficiente A de un I para que exista enfermedad, siendo necesaria la presencia G O hospedador susceptible. L O T Se ha postulado que las especies subgingivales se agrupan formando A Mcon una importancia relativa en la complejos microbianos, cada uno O T S formación y desarrollo del biofilm, así como en su papel en la enfermedad E periodontal. En el Esurco gingival de encías sanas se detectan D principalmenteD organismos pertenecientes a los complejos amarillo y verde, A T primarios como: Streptococcus spp, anaerobios facultativos, colonizadores L U Gram negativos. Posteriormente, se agregarían bacterias que C bacillos FA también la distinta severidad de los cuadros clínicos, la tasa de progresión,. 8. pertenecen al complejo naranja (Ejm: Prevotella spp. y Campylobacter spp.). Por último, se establecerían las bacterias del complejo rojo, especies más virulentas y más íntimamente relacionadas con el desarrollo de. periodontitis, Porphyromonas gingivalis, Treponema denticola y Tannerella forsythia. 9, 10. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(11) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. El biofilm puede desarrollarse a partir de células planctónicas o bien a partir de otro biofilm. Cuatro horas después de una limpieza profesional podemos encontrar que entre el 60% y 90% de la superficie del diente está colonizado por especies del genero Streptococcus (S. sanguis, S. mitis, S. oralis, etc). Estas especies constituyen una parte importante del grupo de colonizadores primarios que juegan un rol importante en la constitución inicial del biofilm oral. Estas bacterias poseen una amplia batería de. T N U (ej: unión de estas especies a componentes de la película adquirida proteínas ricas en prolina, albúmina, glucoproteínas, mucinas, A etc. I G O Otras bacterias que componen este grupo son Actinomyces spp, Veillonella L O spp, Capnocitophaga spp, Haemophilus spp, T A Propionibacterium spp., entre otras. In vivo, a los siete días, elM género predominante sigue siendo O Tque se suman otras especies: S. gordonii, Streptococcus, pero se observa S E S. salivarius, S. mutans, S. parasanguis. A las dos semanas se puede E D observar que han aparecido bacterias Gram negativas, capaces de D A interactuar con los colonizadores primarios. El más destacado de ellos es T L nucleatum, al que se le ha atribuido un rol fundamental en U Fusobacterium C A F la incorporación al biofilm, de especies más virulentas, conocidas como adhesinas que median la coagregación intra e interespecífica, así como la. 10, 11. colonizadores tardíos.12, 13 El género Fusobacterium se incluye en la familia Bacteroidaceae y comprende las siguientes especies: F. necrophorum, F. nucleatum, F. mortiferum, F. naviforme, F. pseudonecrophorum, F. russii, F. ulcerans, F. varium, F. gonidiaformans. De ellos, F. necrophorum y F. nucleatum son los más frecuentemente recobrados en infecciones clínicas humanas. 14 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(12) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los miembros de este género son parte de la flora normal de la cavidad oral, tracto gastrointestinal y genital. En la placa dental pueden representar hasta el 4 % de todos los anaerobios aislados. Son componentes menores de la flora del colon y, en ocasiones, son una parte importante de la flora vaginal.15 Fusobacterium son. bacilos. Gram. negativos. pleomórficos,. pueden. T N esporulados; algunas cepas son móviles por la presencia de flagelos U perítricos, aunque la mayoría son inmóviles y no capsulados; producen A cuando en I infecciones polimicrobianas de origen endógeno que aparecen G O el hospedero existen factores predisponentes como: traumas, L O orales, disminución del instrumentación, manipulación, infecciones T A potencial de O y necrosis del tejido.M Tambièn pueden originar amigdalitis O T conjuntamente con Porphyromonas crónica; estos microorganismos, S E asaccharolytica y cocos Gram positivos anaerobios, pueden ocasionar la E D angina de Vincent y faringitis, que se caracteriza por la presencia de D A membranas T grisáceas que producen aliento fétido. L U C Fusobacterium nucleatum está asociado a infecciones pleuropulmonares A F encontrarse formas cocoides y filamentosas. Son anaerobios obligados, no. 2. 16, 17. como la neumonía aspirativa, el absceso del pulmón y el empiema. Este. microorganismo, conjuntamente con Bacteroides ureolyticus, son los agentes anaerobios más frecuentes en mujeres con infección del líquido amniótico y membranas intactas. Las fusobacterias asociadas a espiroquetas anaerobias producen una gingivitis ulcerativa necrosante. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(13) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. aguda (GUNA), un tipo de gingivitis poco común que se observa en adultos jóvenes sometidos al estrés.18 Las especies de Fusobacterium pueden causar sinusitis aguda precedida de una infección dental, así como sinusitis crónica. La infección a nivel de piel y tejidos blandos se desarrolla cuando el tejido está traumatizado o desvitalizado por heridas traumáticas, o por isquemia de las extremidades. T N pueden ocasionar infecciones polimicrobianas intraabdominales talesU como abscesos de hígado y bazo. Estos microorganismos a veces producen Aha reportado un I abscesos cerebrales y meningitis; en estudios recientes se G O incremento de su incidencia en endocarditis. Las fusobacterias son L O droga de elección, y como sensibles a la penicilina G, que se utilizan como T A drogas alternativas secundarias M se emplean la clindamicina y el O T cloranfenicol. S E Fusobacterium nucleatum DE cepa ATCC 25586 es una bacteria bucal que D y el establecimiento de varias especies, incluyendo los facilita la agregación A Tdentales Por Porphyromonas gingivalis y forsythus Bacteroides. L patógenos U C El F. nucleatum cepa ATCC 25586 presenta características en el A F asociadas con arterioesclerosis o diabetes mellitus. Las fusobacterias. 19. metabolismo de su núcleo que son similares a la de gram-positiva Clostridium spp., Enterococcus spp., Y Lactococcus spp. El análisis del genoma ha revelado varios aspectos clave de las vías de ácidos orgánicos, aminoácidos, hidratos de carbono, lípidos y el metabolismo. Existen rutas biosintéticas para sólo tres aminoácidos: glutamato, aspartato, y. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(14) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. asparagina. Los aminoácidos restantes se importan como tales o como dioligopéptidos que se degradan posteriormente en el citoplasma. 20 Una fuente principal de energía que parece ser la fermentación de glutamato a butirato. Además, la desulfuración de la cisteína y la metionina, rendimientos de amoníaco, H2 S, Metil mercaptano, y butirato, que son capaces de detener el crecimiento de fibroblastos, impidiendo así la. T N capacidades metabólicas de F. nucleatum revelado por su genoma son, por U tanto, coherente con su nicho especializado en la boca. A I G químicos se Considerando la naturaleza microbiana de la placa, agentes O L caracterizan por ser efectivos en el control de la placa bacteriana debido a O T su capacidad de reducir o retarda su formación, A al respecto Ocampo y col M señalan que algunos interfieren en la adsorción de la película adquirida y la O T S adherencia de las bacterias a la superficie dentaria. E E D El principio de la limpieza mecánica consiste en eliminar regularmente los D A microorganismos, no en esterilizar la superficie dentaria, sino en limitar la T L masa U microbiana y por ende, su complejidad. La limpieza habitual deja C FApresente así una “placa sana” que no produce una inflamación gingival por curación de heridas y ayudar a la penetración del epitelio gingival. Las. 21. 22. tanto que las sustancias químicas influyen sobre la placa cuantitativa y cualitativa por medio de varias vías como: Evitar la adherencia bacteriana,. con agentes antiadhesivos, detener o retrasar la proliferación bacteriana con antimicrobianos, extraer la placa establecida con lo que a veces es llamado cepillo dental químico, alterar la patogenia de la placa.22. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(15) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Los agentes inhibitorios más eficaces son aquellos cuya acción persistente en la boca durante el mayor tiempo posible, la persistencia de la acción o sustantividad depende de varios factores: retención prolongada por adsorción en las superficies bucales, incluidos los dientes cubiertos por película; conservación de la actividad antimicrobiana una vez absorbidos; neutralización mínima o lenta de la actividad antimicrobiana en el medio bucal o lenta desaparición de las superficies. 23 Los. agentes. químicos. presentan. ciertas. características. -. T N Ucomo:. especificidad, eficacia, sustantividad, seguridad, y eficacia intrínseca.. A I G. Existen múltiples grupos en el control de placa: antibióticos, enzimas, antisépticos. bisguanidicos. O alexidina, L O. (clorhexidina,. octanidina),. AT M (timol, hexilresorcinol,triclosan), benzalconio), fenoles y aceites esenciales O T sales metálicas(estaño zinc cobre), fluoruros(sódico, monofluorofosfato), S E agentes oxidantes(peróxido de hidrógeno,peróxiborato sódico),detergentes E D (laurilsulfato sódico). Alcoholes aminados (actapinol, delmopinol). D A T es sin duda el antiséptico de elección, su utilización es L La clorhexidina U C Aamplia y es el agente más efectivo. La reducción de placa y de gingivitis compuestos de amonio cuaternario (cloruro de cetitpiridino, cloruro de. 23. F. alcanza el 60 %. Su mecanismo de acción se realiza mediante una. reducción de la formación de la película adquirida y alteración del desarrollo bacteriano y de la inserción al diente. Se presenta de tres formas: digluconato, acetato e hidrocloruro, la mayoría de productos usan el digluconato en concentraciones del 20% o 12%.. 23. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(16) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. La clorhexidina fue desarrollada en la década de los 40 por imperial Chemical Industries en Inglaterra por científicos en un estudio contra la malaria. En ese momento los investigadores fueron capaces de desarrollar un grupo de compuestos denominados polibisguanidas, que demostraron tener amplio espectro antibacteriano. El estudio definitivo que introdujo la clorhexidina en el mundo de la periodoncia fue realizado por Löe y schiott en 1970 donde se demostró que un enjuague de 60 segundos dos veces al. T N U el cepillado normal, inhibía la formación de placa y consecuentemente desarrollo de gingivitis. La clorhexidina suele presentarse A en dos I G concentraciones, al 0,12% y al 0,2. O L Oa conseguir una formulación Las últimas investigaciones van encaminadas T A Migual de efectiva que la formulación de clorhexidina en medio no alcohólico O T Se ha comprobado que la chorhexidina de la misma en solución alcohólica. S E carece de toxicidad sistémica en su uso oral y no genera resistencia E D microbiana ni sobre infecciones. Sin embargo, su uso prolongado produce D A efectos T secundarios locales, reversibles, tales como manchas en los L U lengua y restauraciones con resina, así como alteraciones dientes, C FApasajeras de la percepción gustativa. día con una solución de gluconato de clorhexidina al 0,2% en ausencia de. 24, 25. 26. El N-hexadecilpirididinio de cloruro es un derivado de amonio cuaternario incluido en el grupo de los tensioactivos, posee naturaleza catiónica, es soluble en alcohol y en soluciones acuosas; puede actuar como un detergente y antiséptico, no es oxidante ni corrosivo y tiene un pH neutro. Su estructura molecular está formada por una región polar y otra no polar.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(17) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Esta molécula posee actividad bactericida y bacteriostática, contra bacterias Gram positivas y Gram negativas, aunque la evidencia sugiere que es más efectivo en las primeras. Se piensa que su modo de acción sobre la bacteria es a nivel de la membrana plasmática, donde la carga positiva genera una atracción entre la molécula y la carga negativa de los fosfolípidos que constituyen la membrana plasmática bacteriana. 27. T N CPC penetra y altera la membrana celular. Esta alteración desequilibra U la regulación osmótica y ocasiona la pérdida del material citoplasmático y A el esmalte, lo I posteriormente la muerte celular. Si bien también puede teñir G O hace en un grado mucho menor que la CHX. Diferentes trabajos, in vitro e L O in vivo, han demostrado que el CPC a T diferentes concentraciones es A M dental supra y subgingival, lo que efectivo para reducir la placa bacteriana O T inflamatoria. a su vez reduce también la S respuesta E El PerioAid® 0.12% DEes un antiséptico oral utilizado para el control de la D Resulta un antiséptico muy eficaz por su combinación placa supragingival. A Tentre la clorhexidina y el cloruro de cetilpiridino, se ha demostrado L sinérgica U C que la mezcla de ambas actúa eficientemente como elementos antiplaca A F Una vez que la molécula se une a la membrana, el extremo no polar del. 27. contra la halitosis y la gingivitis.28. Plantago major es una herbácea perenne de tallos subterráneos no ramificados, popularmente conocida como "llantén”, este posee un potencial de comercialización enorme, gracias a sus propiedades antiinflamatorias,. antibacterianas,. astringentes. y. antihemorrágicas;. también como cicatrizante de heridas, tanto internas como externas. su 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(18) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. compuesto activo es la aucubigemina, derivado de aucubina, y es el responsable de la actividad antibacteriana de la planta. 29 El Plantago major cuenta, con sustancias como: ácido salicílico, sales minerales de potasio y zinc. Además, rutina, alcaloides (noscapida), asescias, resinas, esteroides, bases aminadas y compuestos azufrados. Igualmente, posee ácidos- fenoles y una lactona (lolialida o digiprolactana,. T N antiinflamatorias, la cadena larga de alcoholes primarios presentesU en la cera de las hojas ayuda a curar las heridas superficiales. El Plantago major A y amebiasis. I como astringente ayuda a detener la diarrea, disentería G O Además, una infusión de hojas de Plantago major inhibe en un 82 a 95% L O T de la acides de la secreción gástrica. A M O Sus propiedades hemostáticas se deben a que incrementa la coagulación T S de la sangre en las heridas, E evitando hemorragias. Las Hojas frescas contienen las propiedades DE apropiadas para la desinfectar las heridas y D favorecer laA cicatrización. T L U major se ha utilizado ampliamente para tratar diversas Plantago C FAcondiciones médicas que incluyen enfermedades de la piel, la digestión y entre. otras.. Las. hojas. contienen. sustancias. con. propiedades. 30, 31. 32. la reproducción, la circulación, el cáncer, el dolor, y las enfermedades infecciosas.30 Las investigaciones realizadas de Plantago major han revelado la presencia de. mucílagos,. pectinas,. flavonoides,. taninos,. un. glucósido. cromogénicoiridoide denominado aucubósido (aucubina) y otro glucósido. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(19) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. llamado catapol. Tanto las hojas como las flores y el tallo poseen el glucósido aucubina. En el proceso de catabolismo de la aucubigemina, por hidrolisis, se forma un dialdhehído que actúa como bactericida, ya que desnaturaliza las proteínas de ciertos microorganismos, no obstante, si la planta se calienta, la aucubigenina pierde su efecto terapéutico.32, 33 García H .34 en el 2006 en el Perú evaluó la actividad antiinflamatoria de. T N gingivitis inducida, los resultados establecieron que hubo un alto porcentaje U de respuesta celular, reparación de fibras de colágeno y disminución de la A que no hay I vasodilatación y la respuesta vascular .Así mismo concluye G O necrosis o exacerbación de la inflamación de la L mucosa gingival expuesta Oaceptación de los tejidos a la pasta tópica, lo que indica una buena T A M usarla en lesiones bucales mucogingivales, por lo que se recomienda O T S Alvarado V y Hilda Morom EH en cuba analizaron el efecto antibacteriano in vitro de Plantago DEmajor .Erythroxylum novogranatens, Plowmanvar D sinesis sobre bacterias de importancia estomatológica truxillense yA camellia T que los extractos obtenidos mediante maceración alcohólica L demostrando U C de las hojas de Plantago major L. (llantén), Erythroxylum novogranatense A F las especies de Plantago major. ”llantén” y citrus paradisi “toronga” en. 35. (Rusby) Plowmanvar truxillense (coca Trujillo) y Camellia sinensis (té verde) en concentraciones de 25 y 50 µg/mL, demostraron tener propiedades antibacterianas in vitro sobre cepas de bacterias patógenas orales. como:. Streptococcus. mutans,. Lactobacillus. acidophilus,. Actinomyces viscosus, Prevotella melaninogenica y Fusobacterium nucleatum que conforman parte de la microbiota bucal y están implicadas. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(20) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. en patologías orales como caries dental y enfermedad periodontal. El comportamiento de los extractos, en términos de tamaño de halo de inhibición, siempre fueron menores a la presentada por el control positivo (PerioAid® 0.12%) y mayores a la del control negativo (alcohol 70 %). En un estudio realizado en chile en el año 2009 la prevalencia de periodontitis fue 97.6% en adultos y según el INEI en Perú en el año 1990. T N en vías de desarrollo los de mayor frecuencia, En el Perú la periodontitis U es un grave problema de la salud pública, esto puede deberse a que la A y no cuenta I mayoría de los pobladores peruanos tienes acceso limitado G O con recursos económicos necesarios para una L atención odontológica, por O de promoción, prevención ello es preciso instaurar programas integrales T A así como ofrecerle tratamientos queM estén a su alcance y ayuden a mitigar O T de gobierno orientadas a mejorar la salud este problema mediante políticas S E oral. DE D de este trabajo es determinar las propiedades La importancia A T que tiene el Plantago major sobre Fusobacterium L antibacterianas U C nucleatum para lo cual se cuenta con los recursos necesarios, lo que se A F la prevalencia fue de 85% de periodontitis, 36,37 considerándose los países. pretende es solucionar la enfermedad periodontal y a la contribución del. conocimiento que contribuya a la posible elaboración de un colutorio que actué contra la gingivitis y la periodontitis que presente mayor efectividad y menos efectos secundarios así mismo que sea más económico. Los antecedentes muestran que ante concentraciones adecuadas el Plantago major presentan efecto antibacteriano sobre determinadas bacterias en la. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(21) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. placa dental y aunque existen diversos colutorios como el PerioAid®, este no ha demostrado ser totalmente eficaz para el control de la placa bacteriana. El propósito es establecer el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de Plantago major al 50% y 75% y del PerioAid® 0.12 % sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586”.. 1.1. A I G. PROBLEMA. -. T N U. O L Plantago major a 50% y 75% y del O PerioAid® 0.12% sobre T A Fusobacterium nucleatum ATCC 25586? M O T S E 1.2 HIPÓTESIS E D D A Las dos concentraciones del extracto etanólico de Plantago major T L tienen similar efecto antibacteriano in vitro con el PerioAid® 0.12% U AC sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. ¿Cuál es el efecto antibacteriano in vitro del extracto etanólico de. F. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(22) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 1.3. OBJETIVOS. 1.3.1. Objetivo General:. Establecer el efecto antibacteriano in vitro de las concentraciones del extracto etanólico de Plantago major al 50% y 75% y del PerioAid® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. 1.3.2. Objetivos Específicos:. O L O. A I G. -. T N U. 1.3.2.1 Establecer la susceptibilidad antibacteriana in vitro del. T A PerioAid® 0.12% sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC M O 25586. T ES E D 1.3.2.2 Establecer la concentración minina inhibitoria(CMI) in vitro del D A extracto etanólico de Plantago major al 50%,75% y del T L PerioAid® 0.12% sobre el Fusobacterium nucleatum ATCC U C extracto etanólico de Plantago major al 50%,75% y del. FA. 25586.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(23) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. II.. 2.1. MATERIAL Y MÉTODOS. TIPO DE ESTUDIO: La presente investigación se ajusta a un tipo de estudio. comparativo, experimental e “in vitro”, se llevará a cabo en los laboratorios de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo.. 2.2. A I G. -. T N U. DEFINICIÓN DE LA POBLACIÓN MUESTRAL:. O L O. La población a estudiar estará conformada por el conjunto de cultivos. AT M major y PerioAid® con siembra Extracto Etanólico del Plantago O Tnucleatum ATCC 25586 S adecuada de Fusobacterium ), en el E laboratorio de Microbiología de la Universidad Nacional de Trujillo en el DE año 2016.D A T L U C de placas petri con las diferentes concentraciones (50% y 75%) del. (3x108 UFC. FA2.2.1. Criterios de Inclusión  Placas con siembra adecuada de Fusobacterium nucleatum previo enfrentamiento con el extracto de Etanólico Plantago major  Placas con Agar Muller Hinton-Sangre con el contenido del extracto de Etanólico Plantago major que muestren inhibición o no del. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(24) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. crecimiento bacteriano (ausencia o presencia de halos de inhibición de un diámetro mayor de 8mm).  Placas que se utilicen para la determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), que no presenten crecimiento bacteriano ni contaminación por otros microbios.. 2.2.2 Criterios de Exclusión. -. T N U. Placas que después del proceso de incubación, muestran contaminación por otros microbios (hongos).. O L O. A I G. T A 2.3 CONSIDERACIONES ÉTICAS: M O T médica, hay que prestar atención Al realizar una investigación S E adecuada a los E factores que puedan dañar el medio ambiente. D D en cuenta la manipulación y desecho de las muestras Se obtuvo A T todo de las muestras de Fusobacterium Nucleatum ATCC L sobre U C 25586 de acuerdo al manual de Bioseguridad en Laboratorios de A F Microbiología y Biomedicina durante la ejecución del trabajo, previas autorizaciones. Esta investigación contará a su vez con la autorización del Comité Permanente de Investigación de la Facultad de Estomatología de la Universidad Nacional de Trujillo y se seguirá los principios de la Declaración de Helsinki De La Asociación Médica Mundial.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(25) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4. DISEÑO ESTADÍSTICO DE MUESTREO:. 2.4.1 Tamaño de muestra Para determinar el tamaño de la muestra se hace uso de la fórmula que nos brinda el muestreo cuando el interés es comparar el efecto de dos grupos de estudio, para variable. T N colonias de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. Dividida U en dos grupos: para determinación del halo de inhibición y A conformados I para el conteo de UFC estos subgrupos están G O por las concentraciones de extracto etanólico al 50% y 75%, L O PerioAid® 12% y un grupo control. T A M O T S E + Z ) 2S / d donde: n = (Z DE D n : Tamaño de cada grupo de estudio. A T L U cualitativa, siendo reprentada por el total de las placas de las. α/2. AC. F. β. 2. 2. 2. Zα/ 2 : 1.96 coeficiente de confiabilidad para α=0.05. Zβ : 0.84 coeficiente de confiabilidad para β=0.20 S. d. : 0.8d valor asumido por no haber estudios previos. : Diferencia mínima entre los promedios de cualquier. pareja de grupos para rechazar la igualdad.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(26) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Reemplazando:. n = (1.96+0.84)2 2(0.64) (d)2 / (d)2 = 10 Luego la muestra estuvó conformada por 10 Placas Petri para cada grupo.. 2.4.2. Marco de muestreo. -. T N U. El marco muestral lo conformaron el conjunto de placas con cultivo de. A I G. las colonias de Fusobacterium nucleatum A ATCC 25586. Tratadas. O L O. con el extracto etanólico de Plantago major. 2.4.3. FA. AT OM. T S E. Unidad de muestreo:. E D La unidad de muestreo estuvo constituida por los cultivos de cepas de D A nucleatum ATCC 25586, que cumplan con los criterios T Fusobacterium L U C de exclusión e inclusión.. 2.4.4. Unidad de análisis La unidad de análisis fue cada cepa de los cultivos de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(27) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.4.5. Diseño de Contrastación:. El presente estudio corresponde a un diseño experimental, comparativo.. En. relación. al En. función. de. periodo de captación interferencia. Tipo de estudio. investigador. de la información. la del. en. -. T el N U. fenómeno que se analiza.. O L O. AT OM. Experimental. D A T L U. Prospectivo. DE. A I G. Experimental. T S E. C A F. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(28) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. DISEÑO ESPECÍFICO PARA LA OBTENCIÓN DEL EXTRACTO ETANÓLICO DE Plantago major:. SELECCION. LAVADO. SECADO. O L O. A I G. -. T N U. AT OM. MOLIENDA Y TAMIZAJE. D A T L U. DE. T S E. PREPARACIÓN DEL EXTRACTO ETANOLICO. C A F. EXTRACTO ETANOLICO AL 50 %. EXTRACTO ETANOLICO AL 75 %. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(29) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. EFECTO DEL Plantago major y PerioAid ® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 para determinar la susceptibilidad bacteriana. 1. CULTIVO DE CEPA EN MEDIO DE MULLERHINTON. 2. SIEMBRA DE CEPAS DE MEDIO DE TIOGLICOLATO. 24 HORAS. CEPAS DE Fusobacterium Nucleatum ATCC 25586. D A T L U. AC. F. 3.-DISCO DE PAPEL FILTRO EMBEBIDOS EN EXTRACTO ETANOLICO X 1H. Tubo 0.5 de Mc Farland de escala (1.5 x 108 UFC/ml). O L O. AT OM. DE. T S E. 5.- COLOCACIÓN DE LOS DISCOS EN LAS LOS CULTIVOS DE Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. A I G. -. T N U EXTRACTO ETANOLICO 50%. EXTRACTO ETANOLICO 75%. PerioAid® 0.12%. Control negativo. 4. Siembra de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 en placas petri con agar Muller Hinton. 6. MEDICIÓN DE LOS HALOS DE INHIBICIÓN DESPUES DE 48 HORAS. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(30) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. EFECTO DEL Plantago major y PerioAid ® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 para determinar la concentración mínima inhibitoria. 2. SIEMBRA DE CEPAS DE MEDIO DE TIOGLICOLATO. 1. CULTIVO DE CEPA EN MEDIO MULLERHINTON. 48 HORAS Tubo 0.5 de Mc Farland de escala (1.5 x 108 UFC/ml). CEPAS DE Fusobacterium Nucleatum ATCC 25586. O L O. A I G. -. T N U. AT OM. 4. COLOCACIÓN DE LA SUSPENSIÓN EN PLACAS CON AGAR MULLER CON EL ASA DE DIRIGLASKY. D A T L U. DE. T S E. 3. COLOCACIÓN DEL EXTRACTO ETANOLICO EN LOS TUBOS DEL CULTIVO PREPARADOS DE F. nucleatum ATCC 25586. EXTRACTO ETANOLICO 50%. EXTRACTO ETANOLICO 75%. C A F. 5. SE CONTARON LAS UFC DESPUES DE 48 HORAS. PerioAid® 0.12%. Control negativo. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(31) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5. METODO DE SELECCIÒN DE LA MUESTRA. 2.5.1 Obtención de la Cepa El Fusobacterium nucleatum se obtuvo del cepario del Banco Bacteriológico del Laboratorio de la Sección de Microbiología de la Facultad de Medicina de la Universidad Nacional de Trujillo. 2.5.2 Preparación de la Cepa. A I G. -. T N U. Una vez obtenida la cepa, esta fue cultivada en tubos de. O L O. ensayo con tapa rosca conteniendo en el medio Soya Muller. T A bajo condiciones de anaerobiosis a 37° C con el fin de obtener M O de 48 horas de cultivadas se sembró colonias jóvenes. Luego T S E en medio de tioglicolato, para obtener una turbidez semejante E D al tubo número 0.5 de la Escala de Mc Farland. D A T Los tubos que contuvieron la bacteria estudiada, fueron L U Hinton y en un medio de tioglicolato, los tubos se incubaron. AC. F. girados entre las manos durante 30 segundos, antes de proceder al sembrado, para distribuir los microorganismos adecuadamente.. 2.5.3 Prueba de Susceptibilidad Las soluciones fueron divididas en grupos:  Grupo I: extracto de Plantago major 50%  Grupo II: extracto de Plantago major 75% 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(32) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Grupo III: PerioAid® 0.12%  Grupo IV: Cultivo de cepa sin tratamiento (Grupo control). - Para la prueba de susceptibilidad, se preparó las soluciones de extracto etanólico de Plantago major al 50 % y 75% y del PerioAid® 0.12% estas concentraciones serán utilizadas para embeber discos de papel filtro utilizando micropipetas durante 1 hora.. T N U nucleatum ATCC 25586 en placas petri con agar Muller - Hinton sangre dispersando la muestra con Hisopos de madera A estériles de I G manera homogénea. O L - Los discos de papel filtro previamente embebidos en el extracto O T A con la ayuda de una aguja etanólico de Plantago major, se colocaron M O estéril de manera equidistante en los cultivos de Fusobacterium T S nucleatum ATCC E 25586, se realizaron 10 repeticiones para cada grupo, dentro DdeE un diámetro de 10 cm de llama de un mechero. D - Estas placas se incubaron a 37 °C en anaerobiosis utilizando la jarra A T L GAS-Pack. CU - Luego se realizó el sembrado de las cepas de Fusobacterium. FA. - Transcurrido el tiempo de incubación se midió los halos de inhibición de las concentraciones de extracto etanólico de Plantago major y del de PerioAid® 0.12% con una regla milimetrada.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(33) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.5.4 Determinación de la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI) Las soluciones serán divididas en grupos: . Grupo I: extracto de Plantago major 50%. . Grupo II: extracto de Plantago major 75%.  . Grupo III: cultivo de cepa con PerioAid 0.12%. T N U. Grupo IV: Cultivo de cepa sin tratamiento (grupo control). A I G. -. Para determinar la concentración mínima inhibitoria del extracto. O L se colocó 0.8 ml del extracto de Plantago O major al 50 % y 75% y T A cada concentración en un PerioAid® al 0.12% respectivamente, M O tubo de ensayo, previamente rotulado. T S E Se colocó un inóculo de 0.2 ml del cultivo preparado de E D Fusobacterium nucleatum en los tubos con las diversas D A LTconcentraciones del extracto etanólico y del PerioAid® al 0.12%,. de Plantago major y el PerioAid® 0.12% se realizó lo siguiente:. U C A. F. donde se obtuvo en cada tuvo 1.0 ml de volumen final, para el control negativo se utilizó 1.0 ml del inoculo de de Fusobacterium. nucleatum sin ningún tratamiento; luego se llevó a incubación por 48 horas en condiciones de anaerobiosis 37 ºC. Después de las 48 horas en las placas con Agar Muller Hinton – Sangre se procedió al sembrado, colocando 0.1 ml de las diluciones contenidas den los tubos de ensayo con una jeringa. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(34) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. de tuberculina estéril, así mismo se dispersó de forma homogénea con el asa de Driglasky. Pasadas las 48 horas de incubación de las placas Petri en medio de anaerobiosis y a 37ºC se procedió a determinar las Unidades Formadoras de Colonia (UFC). Todo el procedimiento fue realizado bajo condiciones asépticas. T N horas se realizará el conteo de las colonias de cada una U - de las placas. La concentración inhibitoria bactericida es aquella en la A I Gdesarrollo de las que se llegó a inhibir completamente el O L bacterias. O T A M O T S 2.5.5 Controles E Para determinar DE la susceptibilidad: Se utilizará como control D discos de papel filtro embebidos con PerioAid® 0.12% positivo, A T L U y como control negativo, discos de papel filtro embebidos en y se efectuaron10 repeticiones por concentración. Luego de 48. C A F. suero fisiológico. Para la concentración inhibitoria mínima: Se utilizará como control positivo, PerioAid® 0.12% y como control negativo, la suspensión estándar de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(35) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.6 PROCEDIMIENTOS E INSTRUMENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS:. 2.6.1 Recolección de la muestra Se recolectaron 1,5 Kg de las hojas de Plantago major (Llantén) del distrito de. Huamachuco,. provincia de. Sánchez. Carrión,. departamento de Libertad. A I G. -. T N U. 2.6.2 Identificación y determinación taxonómica de la especie vegetal. Un. ejemplar. completo. de. O L la planta O. se. llevó. al. AT My determinación taxonómica. Trujillo para su identificación O T S E 2.6.3 Preparación DE del extracto etanólico D A TSe colocó 120 g de hojas secas, pulverizadas y tamizadas, en un L CU recipiente de vidrio de boca ancha. Luego, se añadirá etanol de Herbarium Truxillense (HUT) de la Universidad Nacional de. FA. 70º G.L. cantidad suficiente hasta cubrir la muestra por sobre 2 cm de altura. Se mezcló bien, teniendo en cuenta que la mezcla debe ocupar como máximo las ¾ partes del recipiente. Se tapó el recipiente y se maceró por 7 días, agitándose 15 minutos, dos veces al día.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(36) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Transcurrido el tiempo de maceración, se filtró el líquido al vacío, con papel de filtro Whatman N° 1. Al líquido filtrado se le denominará extracto etanólico. A continuación, el extracto etanólico se concentró en un rotavapor hasta obtener una masa siruposa. Esta se llevó a secar a la estufa a 30 ºC. Al producto resultante se le denomino extracto etanólico seco (2). A partir de este extracto, se prepararán las. T N Uy en etanólicos se guardarán en frascos de vidrio de color ámbar refrigeración hasta su utilización. A I G O L 2.6.4 Instrumento: O T A M O T halos de inhibición en la prueba de Para determinar los S E susceptibilidad se empleó una regla milimetrada y para el conteo E D de las UFC en la concentración mínima inhitoría se hizo de forma D A visual. (Anexo 01) T L U C concentraciones de 50% y 75%. Finalmente, los extractos. FA. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(37) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.7 VARIABLES DE ESTUDIO Y ESCALAS DE MEDICION. VARIABLES El extracto etanólico de Plantago major. Independiente. PerioAid® 0.12%. INDICE % Concentración Del extracto etanólico de Plantago major 50% y 75% % Concentraciones de 0.12% de CHX+ CPC 0.05%. INDICADOR. TIPO. -Tiene efecto -No tiene efecto. -Tiene efecto. O L O. Cualitativa Nominal. -. T N U. Cualitativa Nominal. A I G. -No tiene efecto. ESCALA. -NULA (-) diámetro inferior a 8mm.. AT OM. AC. F. DE. Inhibición de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. D A T L U. Dependiente. Escala de Duraffourd: Halo de inhibición según el diámetro (mm). T S E. -SENSIBLE (+) diámetro entre 8mm a 14mm. Cualitativa Ordinal. -MUY SENSIBLE (++) diámetro entre 14 a 20mm -SUMAMENTE SENSIBLE (+++) diámetro superior a 20 mm. Concentración Inhibitoria (UFC/ml). BACTERICIDA: 0 UFC. Cualitativa Nominal. EFECTO INHIBITORIO: < 108 UFC/ml. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(38) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. 2.8 DEFINICION OPERACIONAL DE LAS VARIABLES. 2.8.1 EXTRACTO DE PLANTAGO MAJOR  Definición conceptual: o Sustancia obtenida a partir de la concentración de los principios activos totales de las hojas mediante la maceración alcohólica,. T N U. para una posterior evaporación del componente alcohólico y cristalización de los componentes activos.39.  Definición operacional:. O L O. A I G. -. o Sustancia obtenida a partir de la concentración de los principios. AT M del componente alcohólico y para una posterior evaporación O cristalización de los T componentes activos, que se trabajar a la S E concentración de 50% y 75%. DE D A T 2.8.2LPERIOAID U C A activos totales de las hojas mediante la maceración alcohólica,. F.  Definición conceptual:. o El PerioAid® 0.12% es un antiséptico oral utilizado para el control de la placa supragingival. Resulta un antiséptico muy eficaz por su combinación sinérgica entre la clorhexidina al 0.12% y el cloruro de cetilpiridino al 0.05%, se ha demostrado que la mezcla de ambas actúa eficientemente como elementos antiplaca contra la halitosis y la gingivitis40. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(39) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Definición operacional: o El PerioAid® es un antiséptico oral utilizado para el control de la placa supragingival. Resulta un antiséptico muy eficaz por su combinación sinérgica entre la clorhexidina al 0.12% y el cloruro de cetilpiridino al 0.05%, se ha demostrado que la mezcla de ambas actúa eficientemente como elementos antiplaca contra la halitosis y la gingivitis. Se utilizará la concentración 0.12 %. A I G. -. T N U. 2.8.3 Efecto antibacteriano de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. FA. O L  Definición Conceptual: Cepa estándar de Fusobacterium O AT nucleatum con nomenclatura 25586. M O T S  Definición Operacional: Para efectos de la investigación la E definición coincidió con la conceptual siendo valorado mediante el DE Halo de D inhibición y el conteo UFC/ml. A T L CU 2.8.3.1 Halo de Inhibición:.  Definición conceptual: Zona alrededor del disco donde una sustancia antibacteriana es capaz de impedir el crecimiento de la bacteria al cabo de 18 a 24 horas de incubación.41. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(40) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación.  Definición operacional: Se utilizó como medida los diámetros de estas zonas en mm con una regla milimetrada, según la escala de Duraffourd y manejar los siguientes indicadores:. Escala de Duraffourd. Escala utilizada para determinar cualitativamente el efecto inhibitorio in vitro, según diámetro de inhibición:.  Nula (-) para un diámetro inferior a 8 mm.. A I G. -. T N U.  Sensibilidad límite (sensible = +) para un diámetro comprendido. O L O. entre 8 a 14 mm.. AT M  Sumamente sensible (+++) para un diámetro superior a 20 mm. O T S E 2.8.3.2 Concentración DE Inhibitoria D A  Definición Conceptual: Fue interpretada como la mínima T L CU concentración de la preparación que inhibe el crecimiento del  Medio (muy sensible = ++) para un diámetro entre 14 y 20 mm.. FA. microorganismo después de su incubación41..  Definición Operacional: La definición coincidió con la conceptual al ser valorada mediante el número obtenido en mg/ml del extracto etanólico de Plantago major donde se pretende apreciar la inhibición total del crecimiento del Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 mediante el conteo UFC/ml. Considerándose solución 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(41) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. bactericida cuando la inspección visual no se registre formación de colonias, y efecto inhibitorio. cuando se observe formación de. colonias menor a 108 UFC/ml del crecimiento del Fusobacterium nucleatum ACTCC 25586.. 2.9. T N U. ANALISIS ESTADISTICO E INTERPRETACION DE DATOS.. A I G. -. O L de frecuencias de doble entrada con sus valores O absolutos y relativos, se T A de las variables cuantitativas y calculó el promedio y desviación estándar M O gráfico. T S E DE D cuál es la Concentración Mínima Inhibitoria (CMI), Para determinar A Tla prueba de Análisis de Varianza (ANOVA) y para determinar la se empleó L U C Asusceptibilidad, se empleó la prueba no paramétrica de independencia de Para analizar la información se construyeron cuadros de distribución. F. criterios, utilizando la Distribución Chi cuadrado. Y para determinar que. concentración es más efectiva contra el Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 se aplicó la prueba de comparaciones múltiples utilizando la prueba de Duncan. Ambas con un nivel de significancia del 5% (P <0.05).. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(42) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. III.. RESULTADOS. En el presente estudio de tipo experimental in vitro tuvo como objetivo establecer el efecto antibacteriano in vitro de las concentraciones del extracto etanólico de Plantago major al 50% y 75 % y el PerioAid® 0.12 % sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 al análisis de datos se encontraron los siguientes resultados.. T N U La concentración del extracto etanólico de Plantago major al 75% y - el PerioAid® 0.12 % tienen efecto antibacteriano in vitro similares A sobre I Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. TABLA 03 G O L O T A La sensibilidad antibacteriana de la concentración del extracto etanólico de M O que la concentración del extracto Plantago major al 50% fue nula mientras T etanólico al 75% y del PerioAid® ES 0.12% fue sensible sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.TABLA 01A y TABLA 01B DE D A T L La concentración mínima inhibitoria(CMI) de las concentraciones del U C etanólico de Plantago major al 50% y 75% y del PerioAid® 0.12% extracto A F tuvieron efecto inhibitorio sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. TABLA 02A y TABLA 02B. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(43) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 01A: susceptibilidad bacteriana in vitro del extracto de Plantago major AL 50% Y 75% y del PerioAid® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. Grupo de tratamientos. n. Promedio. 10. 6. 10. 7.3. T N U 0.6749 IA. Control negativo. Extracto etanólico de Plantago major al 50% 10. PerioAid 0.12%. D A T L U. Total. DE. T S E. 40. 0. G O 10 L O. 0.6667. 13.6. 0.5164. AT OM10. Extracto etanólico de Plantago major al al 75%. Desv. Estándar. 9.225. C Fuente: Datos recogidos por el investigador, año 2016 A F. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(44) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Tabla 01B: Susceptibilidad bacteriana in vitro del extracto de Plantago major AL 50% Y 75% y del PerioAid® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. Análisis de varianza. F de V. SC. gl. CM. F. Tratamientos. 338.475. 3. 112.825. 386.829. Error. Total. 10.5. O L 36 0.2917 O T A OM. A I G. T N U 0.000 p. -. T S 348.975 E 39 DE. D A T Datos obtenidos por el grupo investigador, año 2016 Fuente: L U. C A F. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(45) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 02A: Concentración mínima inhibitoria in vitro del extracto de Plantago major al 50% Y 75% y del PerioAid® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. T N U. Grupos de tratamientos. n. Promedio. desv estan. Extracto etanólico de Plantago. 10. 1849.1. 293.8883. 10. 1246.4. major al 50% Extracto etanólico de Plantago. O L O. major al 75%. AT OM. 10. PerioAid® 0.12%. CONTROL NEGATIVO. TOTAL. D A T L U. A I G. DE. T S E. 664. 10. 100000000. 40. 25000939.88. -. 126.1588. 70.22189. 0. C A F. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(46) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA 02B: Concentración mínima inhibitoria in vitro del extracto de Plantago major al 50% Y 75% y del PerioAid® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586.. Análisis de Varianza. Fuente de. SC. Gl. CM. Variaciòn. 7022996.867. Error. 964957.3. DE. A I 2 3511498.433 98.254 G O L O T 27 A35739.15926 OM. T S E. 7987954.167. T N U P. -. tratamientos. Total. F. 0.000. 29. D A T L Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016. U C A F. 40 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(47) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. TABLA Nª 03: Concentración mínima inhibitoria in vitro del extracto de Plantago major al 50% Y 75% y del PerioAid® 0.12% sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586. Prueba de Duncan. Subconjunto para alfa = 0.05 Grupos de Tratamiento n. 1. PerioAid 0.12%. 10. 13.6. Extracto etanólico de Plantago major al 50%. 10. Extracto etanólico de Plantago major al 75 %. D A T L U. DE. 2. A I G. -. T N U. 7.3. O L O. AT OM 10. 3. 10. T S E. Fuente: Datos obtenidos por el investigador, año 2016.. C A F. 41 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(48) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. IV.. DISCUSION. Considerando la naturaleza microbiana de la placa bacteriana, numerosos estudios se han enfocado en buscar diversos agentes químicos capaces de reducir o retardar su formación, al respecto Ocampo y col señalan que algunos interfieren en la adsorción de la película adquirida y la adherencia de las bacterias a la superficie dentaria.. A I G. -. T N U. Las últimas investigaciones están orientadas a buscar principios. O L antibacteriana tal es el caso del Plantago O major (Llantén) donde T A que presenta cierta actividad diferentes estudios han demostrado M O antimicrobiana frente a algunos patógenos orales como: T S Streptococcus mutans, E Lactobacillus acidophillus y Fusobacterium E nucleatum. D D A T L En el presente estudio experimental in vitro se ha evidenciado que el CU activos de diversas especies vegetales que presenten alguna actividad. FA. Extracto etanólico de Plantago major presenta efecto antibacteriano sobre Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 siendo el extracto etanólico al 75% el que presenta similar efecto antibacteriano al PerioAid® 0.12%.. 42 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.

(49) Biblioteca Digital – Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación. Al medir la susceptibilidad bacteriana de Fusobacterium nucleatum ATCC 25586 obteniendo como resultado que si existen diferencias significativas entre los grupos de tratamiento siendo el valor de P=0.000 (P<0.05) según la prueba de Análisis de varianza(ANOVA).. Estos resultados son diferentes a los reportados por realizado por Alvarado V, Moromi H en Perù el 2010 donde evaluaron el efecto. FA. T N Usobre novogranatens, Plowmanvar truxillense y camellia sinesis Streptococcus mutans, Lactobacillus acidophilus, A Actinomyces I G nucleatum viscosus, Prevotella melaninogenica y Fusobacterium O L mostraron como resultados que el O Plantago major donde a T A concentraciones de 25ug/mL y 50 ug/ mL, presento tener sensibilidad M O al igual que el control positivo (PerioAid® 0.12%). El comportamiento T S de los extractos, en términos E de tamaño de halo de inhibición, siempre fueron menores DEa la presentada por el (PerioAid® 0.12%) y mayores D negativo (alcohol 70º). Estos resultados demuestran a la del control A Tel Plantago major tienen el efecto antibacteriano sobre L que CU antibacteriano. in. vitro. Fusobacterium. nucleatum. del. tal. Plantago. como. se. major,. .Erythroxylum. demuestra. en. esta. investigación.. Finalmente, La concentración inhibitoria mínima, en el análisis de varianza (ANOVA) el resultado se obtuvo que p= 0.000 (p< 0.05) demostrando que existen diferencias significativas entre los grupos de tratamiento.. 43 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento No Comercial. Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia visite: http://creativecommons.org/licenses/by.nc.sa/2.5/pe/.