TIEMPO DE DEDICACION 20 horas por semana

NOMVRE

MATRICULA. 90339567

/Elizabeth Montes de Oca Ortiz

J LICENCIATURA.

J

Bioiogia

(Unidad Iztapalapa, División de

CUS)

TELEFONO.

6 34 06 28

TRIMESTRE ELECTIVO. 96-P

TIEMPO DE DEDICACION 20 horas por semana

/TITULO DEL TRABAJO.

Efecto del coumestrol sobre la orgrnkación histológica del 01 ano fetal

,/

NOMBRE DE LOS ASESORES

M

en C Mano Garcia Lorenzana (Profesor titular B, Depto t ‘ienrias De la Salud) M en C Maria Del

Rosario

Tarragó Castellanos (Profesor Titiilar A. Depto. Biología de

la

Reproducción)

LUGAR DE REALIZACION

Departamento De Biología De La iteproducción Area Psiconeuroendocnnologia

Lab.Fisiología y Endrocnnología De La Adaptación y la Repri)ducción

FECHA DE INICIO. 1 de octubre 1996

FECHA DE TERMINO.

/

9 de marzo lw

CLAVE DE

REGISTRO

DE SERVICIO SOCIAL.

B 024 96

UNIVERSIDAD AUTONOMA METROPOLITANA

DIVISION DE CIENCIAS BIOLOGICAS Y DE LA SALUD

SECRETARIA ACADÉMICA

A QUIEN CORRESPONDA:

Por medio de la presente se hace constar que la:

M. en C. MARIA DEL ROSARIO TARRAGÓ CASTELLANOS del Departamento de

de la División de Ciencias Biológicas y de la Salud, asesoró el siguiente Servicio Socia I :

TITULO "EFECTO DEL COUMESTROL SOBRE LA ORGANIZACIÓN HICTOLÓGICA DEL OVARIO FETAL"

ALUMNO MONTES DE OCA ORTIZ ELIZABETH

MATR~CULA 90339567

LICENCIATURA BIOLOG/A

PERIODO

BIOLOGIA DE LA REPRODUCCIÓN

OCTUBRE lo. 1996 a MARZO 9. 1999

Se extiende la presente para los fines que a la interesada convengan, en la Ciudad de México, Distrito Federal a seis de octubre de mil novecientos noventa y nueve.

A T E N T A M E N T E

"CASA ABIERTA AL TIEMPO"

UNIDAD IZTAPALAPA

UW ahieh ai kmpo

UNIVERSIDAD AUTONOMA

p-,...~

-_

. . , , . . , _I-_u

_-....

",*,. -..A.

METROPOLITANA

México, D.F., a 9 de matzo de 1999,

DR. JOSC LUIS ARREDONDO FIGUE9OA. DIRECTOR

DE

LA DIVISIÓN DE C.B.S.

PRESENTE. UAM-I

Estimado Dr. Arredondo:

Aprovechamos la presente para saludarlo y al mismo tiempo justificar que el informe 'final del servicio social (denominado "Efecto del i.:our: (estro1 sobre la organización histológica del ovario fetal" con clave

B.024.96),

realizado por la C.

Elizabeth Montes de Oca Ortiz con matrlcula

90339567,

estudiante de la licenciatura

de Biologia, es entregado con fecha posterior a la establecida inicialmente. Ya que si bien el trabajo de laboratorio se concluyó en año y medio (datlas

la

dificultades en el montaje de las técnicas), la elaboración del reporte se vi6 retrasada por la inclusión de la discusión de los resultados en diferentes reuniories científicas (de las cuales se anexan comprobantes).

Finalmente, a traves de

la

presente, damos por aceptado el reporte final del servicio social mencionado, entregado por

la

alumna Elizabeth Montes de Oca Ortiz.

Sin más por el momento y agradeciendo de antemano la llneza de su atención a la presente, quedamos de Usted

A T E N T A M

E

N

T E .

/urn

M. en

C.

Ma. del Itosario Tarraab C.

-

Profesor Titular

B

Depto. Ciencias de la Salud Depto. Biologia do la Reproducción Profesor Titular

A

UNIDAD IZTAPALAPA

FORhlA’l‘O PARA SER LLENADO F O R

EL.

(LOS) ASESOR(ES) INI ERN0 O EX1 ERN0

I ’ A W El, INFOIIhlE FINAL DE SER\‘ICIO SOCIAL.

I . Nuiiibre y ndscripción del asesor.

Mario García Lorenzana Profesor Titular B

Departamento de Ciencias de la Salud

.

3. Niiiiiiiir tic1 riUJC<lu &I ~ I I C & i i \ a CI S t . i ~ i t i u S0ii;iI c i i i h t i i i i t i G t a U ~ i i ; : i i i i ~ i ~ i i t I I I I C tu

n \ n l a .

alfalfas con alto contenido de coumestrol.

Ili.rgIiis:ir Ins :rcíiriil:iclcs qiie dcs:irrullCi cl :rwsur ~ i ; r I : r f:i\ oi rica rl r iiiiipliiiiic ilia ilc Ius

ut!jcii\os p1:iiii~:icins CII rl t’rujrrio 1iiiti:il de Scrviciu So&l.

Análisis de las alteraciones reproducti,las producidas por

J.

Capacitación en las técnicas histolóqicas, iiiterpretación y aná- lisis histolóqico, análisis histológico y de resultados.

Discusión y manejo de la información.

5. L(:l;tiici c \ nliia e1 tlrsc.iii~~cñu c i d :!Iuiiiiin p i c.st;tJor tlr Scr\iciu Simc¡:il’.’ ~ C ~ i i i ~ i i I c i :Iiliir In i t i i iii:icii>ii <Itle et :iliiiiiiiu i rtiiic _CII In ilhAll ES :itJccIi:id:i ) s i ~ ~ c i c t ~ i ~ ID:II:I ><I I I C > V I I I I ~ C ~ ~ U 111 cifcsic~ii:il? ,‘,l’(lr w e ? Considero que los cursos teíiricus aportan las bases necesarias, fortaleciéndose los conocimicatos con los se- minarios de investigación que

ticos importantes.

; t l i ~ ~ i c I:is lul-inlrzns y _{ilr1iili~i:iel~s} i I ~ l ~ r 1 : ~ i J : t s ptir i i r i i 4 roil i.csiwcln n In foi i i i r i t i i i i i del

t ~ c i 3 a d i ~ 8 t B 1 r _{La alumna demostró tener habilidad y destreza para el}

desarrollo de técnicas manuales así como parii aplicar los con- ceptos teóricos en los aspectos prácticos. Lit Única dificultad detectada fue en relación a la búsqueda y mailejo de biblioqra-

F & i ~ i r e y firiiia c ~ r ~ :iresor.

aportan además conocimyentos prác

6 .

7.

Mario García Lorenzana

FORhIATO PARA SER LLENADO POR EL (LOS) ASESOR(ES) IN1 ERN0 O EXTERNO

P A M EL INFORME FINAL DE SERVICIO SOCIAL. 1. h'onibrey adscripción del asesor.

Ma. del Rosario TarragÓ CAsteiianos Profesor titular A

Departamento de Biología de la Reproducción

2. _{L a iiaturaleza} del Proyecto _del que _procede el Servicio Social es:

a ) rruyeclo d e Servicio Socinl asociado a la itivtstig;lciGit qti,. se t c a l i ~ a FII liis ;¡itas dclxwtniiiciitaier.

w

Interno.

0 Externo.

(1 Pur ruiircnio.

b) Pi oyccto de Sctvicio Social asociado a nclivida~lcs disciplinarias rcalizndas por el

1'

:isrsor.

3. Noiitbit del Piuycctu del que t l w i v a el SCI viciu Soci;il c itiaiiiuti&a U utg:ni&itti ~ ( I I C lo

Análisis de las alceraciones reproducti,ias producidas por alfalfas con alto contenido de coumestrol.

J. _{ücs:ios:ir Ins :iclivid~liies que dcsarroiib} ct :Iscsur 1i:iIa f:i\orccrr rl (iiiiipIiittitiilo (le ius

ubjetivus ~)l;i~iie:idos CII e1 i'ru)rrto Iiiicinl d e Serviciu Social.

Apoyo en la preparación de soluciones, y en la técnica histolÓ2 gica. Análisis de resultado

,

discusión y manejo de la informa ción.

~C6aiio ct aliin <.I ilcsciiipefio &I :!liiiiiiio picct;tdor tlc Sctvicio St,, ¡:it'! ~ C ~ ~ i i ~ i ~ l c r : t 11i1c la

5 .

loi-iii:icioii <I"' el a1iiiiiiio ircitie 1'11 l a UA3tl cs :ldccll;l~ia ) 5 l t G L i l rile 11.1,:' .',IJC2i.iil,'Fí'"

pwksioii:il? LPor que? Los cursos teóricos aportan las bases necesa-=

rias fortaleciendose posteriormente con los c,onocimientos tanto teóricos como prácticos que se imparten en IC's seminarios de investigación.

Aiioic Ins furtalcrar y iIcl~i¡id:itlcs <letcrí:~dar por iicícii coil rcsp~.cio a I n foi iii:icii)ii dcl

P t l lllli:,llle.

manejo para el desrrollo de técnicas manuale:; así

car conce toslteÓricos en los prácticos. La iinica dificultad -

h'uiiibi-e y firiiia de1 asesor.

6.

La alumna demostró tener habilidad y destreza para el como ?ara apli

fue en re

E

acion a husqueda y manejo de bibliografía,

7.

María del Rosario TarragÓ CAstellanoa

Eizabeth Montes

de

Oca

Ortiz.

Lic.Biología.

EFECTO DEL COUMESTROL SOBRE W ORCANIZAC

I6N

HISTOLOGICA DEL OVAMG FETAL.

Matricula: 90339567

Clave de registro: B.024.96

M en C. Mario García Lorenzana Depto. Ciencias de la Salud.

Fecha: 9 de marzo de 1999.

M

en

C.

Ma del Rosario Tarrash C

Depto. Biología de la Reproducción

Algunos compuestos vegetales tienen efectos estrogéniws, entre estos se encuentra el coumestrol (Cou)

pueden

actuar tanto como agonistas como antagonistas del Estradiol (E2). El Cou tiene

una

potencia de 30 a 100 veces mayor que otras isoflavonas. Su potencia biológica

con

respecto al

E2

para aumentar el peso uterino es ₁₆₀ voces mayor y SLI afinidad

de'unión relativa al receptor uterino es

70

veces menor.

El

consiirno de cste compuesto tanto

en hembras wrno en niwlios produce alieracioiies ieproductivas. Siii en~bugo, los efwlos il nivel teratógenico

no

han

sido estudiados.

El

presente trabajo

analira

efecto del Cou en

la

diferenciación ovárica en fetos de rata. Se utilizaron 25 rat& preñadas de la cepa Wistar, divididas en 5 grupos, al día diez de gestación se

les

administró una dosis Única de lor sigtientes tratamientos: X p c contrd

( X )

!O0 pl Oe oceik. Cciu 1 14.2 pdlW pi de aceite, Cou 2 28.4pg/100 pl de aceite,

E2

1 2&00 pl de aceite,

E2

2

4pgíiOO pl de aceite. En el

dia i 8

de

gestación se sacrificaron

los

animales, se extrajeron las gónridas de

cada

embrion, se

fijaron

en

Bouin. se deshidrataron e incluyeron en parafina para obtener cortes de 8 pm los ciiales fueron teñidos por las técnicas

H-E

y Azul de alc.iano psi a sil posterior interpretación. En la descripción histoiógica del

GC

se distinguen ccrdones de i,elulas germinales delimitadas por cklulas de aspecto aplaudo

cercairas

a vaso$ saiiguíiioos, riAir;ulos wr;liws dispuestos e11

¡a periferia de la gónada; en Cou

_I

se observan escasas asociaciones celulares que corresponden a folículos, los cordones de las celulas germinales están menos definidos que

GC;

Cou 2 no se llegan apreciar folículos, los cordones de células germinales se encuentran

definidas por delgadas fibrillas.

E2

1 se distingen cliramente cordones

de

células germinales, los folículos son abundantes en toda la ghada, deim de las cuales se aprecian ovogonias con ntícieo heterocromáuco, ovociios primarios en paquireno cun epiieiio aplwado simple definido. E2 2 se definen

más

los cordones de celulas germinales cn comparacion con el grupo

anterior apreciándose así mismo

los

folículos con mayor claridad. El tratamiento

con

E2 produce un avance en el desamllo y dtfinicián de Ins fnliciiln!~. sin embargo VI tratamiento

con _Cou produce un r e m o en el desarrollo del ovario ai obsmwse escasos foliculos, así iiusiiio 10s cordones de las

c61ulas

gci-iiuiialcs se eiicücriiiaii iiwiiüs defiilldos que e11

el

GC

y

con la dosis alta de Cou se observan de aspecto fibrilar.

Es

muy probable que el tratamiento agudo de Cou en las dosis utilizadas tenga un efecto antiestrogériico, dosis dependiente, sobre

INTRODUCCION

DlFERENClAClON SEXUAL EN HEMBllAS

El desarrollo de la gónadas se lleva a cabo a nivel embriológico, la gónada indiferenciada tiene

2

opciones normales para desarrollarse dependiendo de la información genética, a un ovario o a un testículo. En mamiferos

los

primeros esbosos de la gónada terminan en un estado indiferenciado durante el Cual

no

tienen ni características femeninas, ni masculinas, es ha!ita la séptima y Octava semana que ocurre la diferenciación sexual. En hembras especificamente (XX)

durante la organogenesis, el mesodermo da lugar a una gCinada indiferenciada, las células mesenquimáticas del ovario se diferencian en las células de la teca y células de la granulosa del folículo, estas envuelven a la célula germinal, formando los foliculos como resultado de la asociación de estos tipos celiilares. La diferenciación del ovario es un proceso largo que se efectúa en una serie de fases sucasivas, en las primeras etapas de la diferenciación se manifiesta tina actividad endocrina transitoria (Jost, 1991), cada folículo contendrá un núniero básico de células germinales y

los

conductos de Muller permanecen intactos diferenciándose hacia, Útero, oviductos y cervix (Gilbert, 1991).

Las gónadas tienen una función doble; la producción de células germinales y una función endocrina al secretar hormonas sexuales, en el caso específico de las hembras,

los

estrogénos son las principales hormonas sintetizadas (Ganorig, 1996).

Los estrogénos actúan sobre el tracto reproductor, la hipófisis y el área preóptica hipotalámica, participando en el desarrollo final y maduración para

SUSTANCIAS ESTROGENICAS ( FITOESTROGENOS)

Las sustancias estrogénicas no

sólo

son producidas por

los

órganos

reproductores de

los

animales, sino también se encuentriin en la naturaleza, en

algunas plantas (Jurado, 1989).

Estas sustancias de origen vegetal que tienen aclividad estrogénica se

denominan fitoestrogénos, ya que tienen la capacidad do unirse al receptor de estradiol e inducir efectos estrogénicos, tanto a nivel ovarico y útero (Shemesh et al.,

1972). Estas sustancias son químicamente similares a los esteroides gonadales

(Fowler, 1983).

Las sustancias estrogénicas de origen animal son todas esteroides e intervienen en el ciclo estral femenino. Se han realizado estudios para relacionar la

estructura química con la actividad de los fitoestrogénos. De manera general podemos dividir a estos compuestos en tres grupos en base

a

su estructura química:

los

esteroides,

los

isoflavonoides

y

las coumarinas. Dentro de

los

esteroides

se

encuentran la estrona y el estriol, entre las isoflavonoides se encuentran la

genesteina, daidzeína etc,

y

dentro de las coumarinas principalmente se ha aislado

el coumestrol. El efecto que produce la ingesta de plantasi con alto contenido de fitoestrogénos es similar al que se obtiene cuando se administran estrogénos de origen animal o sintéticos (Jurado, 1989).

Doran en 1926, demostró que existían sustancias estri lgénicas en las plantas, las cuales se encuentran en una amplia variedad, dentro de gama de estas se encuentran los géneros; Trifolium ( tréboles ), Glycine ( soja ), Meúicago ( alfalfa ),

Beta

(remolacha),

Prunus

( almendras ) etc.

Zearalenol y a la genisteina,

los

cuales tienen actividad estrogénica, similer a la del

estardiol cuando se administra en altss concentraciones.

El segundo grupo tiene actividad estrogénica mínima 13 nula comparados son

el estradiol, esta clase incluye

al

phloretin, kaempferide y a 1;i narigenin.

El tercer grupo esta representado por la biochanina A, chrysin y las flavonas,

estas presentan actividad antiestrogénica pero

sólo

dependitindo de la dosis, pero si

tienen actividad estrogénica (Bridgette et al., 1977).

El coumestrol se encuentra en pequeñas cantidades i?n plantas sanas (1 a 2 mgikg) como en

el

trébol y en leguminosas (alfalfa) sin ninguna influencia aparente sobre'los animales que las consumen, pero puede verse elt?vada su concentración

en presencia de ataques foliares de hongos y áfidos (Livingston et al., _1961), pudiendo superar en este caso

los

100 mgikg,

lo

que resultii bastante superior a la

concentración mínima de 20- 50 mg Ikg considerada como biológicamente ectiva

(Wong et al., 1971) Este aumento parece asociado a mecani3mos de defensa de los

vegetales expuestos a patógenos foliares (Bickof,

1968),

los niveles de

coumestranos en alfalfa pueden mantenerse bajos si se tiene un control de agentes patógenos cuando este control se altera los niveles de couinestrol se elevan como

mecanismo de defensa (Hanson et al., 1965).

Los problemas causados por

los

estrogenos de origeii vegetal se deben a

la

elevada concentración que alcanzan en el plasma sanguíni:o de

los

animales que

ingieren las plantas, a elevadas concentraciones pueden cljercer en el animal un efecto importante y producir un desequilibrio hormonal (Mat1 iieson and Kitts, 1980).

Las concentraciones altas de fitoestrogénos pueden Ilegiir a competir con los

estrógenos endógenos y así unirse a

los

receptores proteico s en la hipofisis y en el

.I

-.

prikeros trabajos que se realizaron en relación a

los

efectos adversos de los

fitoestrbgenos, fueron hechos en ovejas australianas alimentadas principalmente con

trébol subterráneo el cual contiene altas concentraciones de isoflavanas

(Cox,

1977); estos animales presentaron fallas en la concepción acompañada de una hiperplasia glandular cística del tracto reproductor (Adams, 1990). El desarrollo de

las mamas en ovejas no preñadas sugirió la presencia de etrtrógeno vegetal el Cual

también provoca la esterilidad de las ovejas reproductoras (Cox and Braden, 1974). A partir de este momento se dispuso de una evidencia que 3isocieba

el

consumo de ciertos forrajes con alteraciones reproductivas del ganada, y de manera general encontraron que

el

consumo de fitoestragénos induce alter; iciones morfológicas en

el aparato reproductor del ganado. En el caso de las hembras se observó que afectan al ovario, al oviducto, el Útero, el cervix, la vagina, la glándula tiroides, las adrenales y las glándulas Inamarias (Gardiner and Nair, 196!

I).

En general los efectos observados en ovejas que consumen fitoestrógenos

'* son metritis, hiperplasia mamaria, calores no fértiles, distocías y mortalidad pos natal

de corderos así como formación de quistes ováricos; eri bovinos se observan cuad:us de ninfomanía, hiperemia de vulva, quistes ováricos, hiperplasia mamaria e hiperplasia en útero; en porcinos se presenta hiperernia dt3 vulva, flujo vaginal e infertildad por el consumo

de

forrajes con alta concentración de fitoestrogénos

(Jurado, 1989), también se han observado fracasos parciale!; de fecundación en las ovejas (Engle et al., 1957). Los efectos antes mencionados piieden ser causados por diversos tipos de fitoestrógenos, específicamente en el ganiido bovino, el principal fitoestrógeno es el coumestrol el cual tiene una gran actividad estrogénica en el

ganado que

lo

consume. Su potencia

es

de 5 a 20 veces mayor que las isoflavanas para inducir una respuesta estrógenica (Wong et al., 1971 ).

fertilidad y la mortalidad embrionaria en ovejas alimentadas

con

alfalfa, no se ve

alterada significativamente.

LOS

resultados observados sugieren que ovejas

alimentadas con alfalfa por tiempo prolongado presentan efttctos adversos sobre la

tasa de ovulación en la Cual podría afectar negativamente a la producción del

rebaño (Valderrabano and Folch,

1993).

Existen reportes que indican que se requiere una concentración de

100

a

1000

veces más alta de coumestrol y genisteina que el estrí3diol para provocar una

respuesta equivalente a este (Bridgette et al.,

1997).

Las concentraciones de coumestrol y genisteina requeridas para la activación del gen sensitivo a estrógeno y para alcanzar una actividad : iimilar a la del estradiol

es de

1500

y

9000

veces más que el estradiol (Milksicel$.,

1994)

así mismo se

propone que los fitoestrogenoc tienen una afinidad similar a la del estradiol para unirse a proteínas (Garreau et al.,

1991).

Por otro lado el coumestrol compite por los

receptores a estrogenos cuando estos últimos son de baje afinidad como el

17p

estradiol y el diethylstibestrol (Martin et al.,

1978).

El posible efecto del consumo de dietas con estroip5nos en roedores de laboratorio durante el desarrollo del periodo crítico reproductivo es un tema de

considerable interés (Bickoff et al.,

1957).

Se a observado ile manera general que

algunos de

los

efectos del coumestrol son: estimular el alargíimiemto uterino (Bickoff

et al.,

1962)

decrecimiento de el porcentaje ovulatorio (Leavitt,

1965)

y aumento de

malformaciones embrionarias en ratas preiladas (Fredericks tit al.,

1981).

Newsome y Kitts

(1980)

al administrar a ovejas estradicil en diferentes dosis y

a un grupo de animales coumestrol observaron que independientemente de las dosis

doce días) de manera similar a

los

animales tratados con estradiol en una dosis equimolar a la del coumestrol.

Se ha observado en ratas inmaduras expuestas a coumestrol en la dieta,

alteraciones en la función reproductiva manifestada por ciclos vaginales irregulares

Ojeda et al.,

1986).

EFECTO DE LOS ESTROGENOS EN LA DlFERENClAClON SEXUAL.

Los estrogenos tienen influencia en la regulación de la función ovárica

(Young,' 1961). Bradbury en 1961 demostró que hay unit acción directa de los

estrogenos en la actividad del ovario ya que tienen un papel importante en la maduración folicular (Goldenberrg et al.,

1972;

Hartman et al, 1975; Richard,

1980).

La

administración de hormonas sexuales a roedores durante el periodo crítico de diferenciación sexual lleva a cambios persistentes en' el sistema hipotálamo-

hipófisis-gonada y en órganos reproductores induciendo además desarrollo de ciertos tipos de cáncer (Takasugi,

1976).

En la etapa temprana del desarrollo en

roedores expuestos a altas dosis de estrogénos se ha obriervado la inducción de hiperplasias, displacias y neoplasias, en el adulto

en

la glandula mamaria se presenta un incremento en la sensibilidad a las horrnona,i sexuales para inducir carcinogénesis (Bern et al.,

1985).

.

Cuando se administra dietiletilbestrol en etapas neúnatales a ratones, se observan como consecuencia del tratamiento lesiones en vagina así como

metaplasia en el útero, en el folículo se observa ausencitt de la capa lutea, en glándula mamaria se induce hiperplasia en nódulos alveolai'es así

como

secreción (Bern et ai.,

1987).

Este

tip:, de tratamientos también inducen proliferación y

La administración exógena de dietilestilbestrol en los días 9 -10 de gestación induce anormalidades en

los

órganos genitales, incluyendo adenosis vaginal, adenocarcinomas, cáncer en el útero, malformación del oviducto y una tendencia a presentarse ovarios poliquisticos. En hembras de ratón la adininistración exógena de estardiol o de dietilestilbestrol durante periodos prolongados

do

tiempo dan como resultado la aceleración de la diferenciación del tracto genital así como hiperplasia

glandular en endometrio (Davies and Letkowitz, 1987).

Baggs y colaboradores (1991) demostraron que la exposición a altas dosis de

dietilestibestrol en ratas gestantes durante la gestación induce en el Útero la

OBJETIVO

Anallzar

el

efecto del coumestrol sobre la diferenciación ován'ca

en

ratas

Wistar.

Se utilizaron 25 ratas de la cepa Wistar divididas en

5

grupos, con igual

número de ratas cada uno. Grupo control

Grupo experimental 1 Grupo experimental 2

1 OOp1 de aceite (GC)

14.2~9 de coumestrol /lo0 pI de iiceite (Cou 1)

28.4pg de coumestrol1100 pl de iiceite (Cou 2)

Grupo experimental 3 2.0pg de estradiol 1100 pl de aceite (E2 1)

-

Grupo experimental 4 4.0pg de estradiol 1100 pI de aceiie (E2 2)

A

todas las ratas se les hizo un seguimiento del cicici estral por frotis vaginal, se llevaron a

cruza

en etapa de proestro, al día siguiente se corroboró que se

encontraron preñadas por medio de

la

presencia de espeimatozoides en el frotis, considerando este como día cero de gestación.

AI día diez de gestación se les administró por vía subcutánea cada uno de los tratamientos arriba indicados. las ratas se sacrificaron en _€11 día 18 de gestación, y

por medio de una laparatomia abdominal se obtuvieron

lo:i

embriones, se tomó el

peso de cada embrión con placenta y posteriormente sin placenta.

En el caso de las hembras se obtuvieron los ovariiis de los embriones se fijaron en Bouin durante 24 hrs, posteriorment6 se lavaron o m alcohol del

70%,

y se

procesaron para la inclusión definitiva en paiafina, realizándose cortes de 8 p ,

técnica de

azul

de alciano. Se realizó el análisis histológico cualitativo. Con relación

al peso de

los

embriones se realizó un análisis

de

variariza y posteriormente se

aplicó la prueba de Tuckey para determinar diferencias significativas entre los

grupos.

ACTIVIDADES REALIZADAS

L

ETAPAS:

I

.-

BÚSQUEDA DE BIBLIOGRAFh 2.- OBTENCIÓN DEL MATERIAL

3.- PROCESAMIENTO

4.-

ANALISIS

DE RESULTADOS

OBJETIVOS

Y

METAS ALCANZADAS.

Presentaciones en eventos especializados:

XXI Congreso Nacional de Histología

en

la

fecha 16 de octubre de 1997.

El

cual llevó como titulo

El

efecto que tiene el coumestrol sobre la organización

histolegica del ovario fetal. Anexo I

XVll Congreso Nacional de Anatomia con fecha del 2: I al

26

de noviembre de

1998. El cual llevó como titulo Efecto comparado del coumestrol y estradiol

sobre la organización histologica de la góneda femenina fetal. Anexo 1

V simposio del Departamento de Ciencias dB

la

SalucI

con

fecha 27 al 29 de

enero de 1999.

El

cual llevo corno titulo Efecto del coumestrol y estradiol

sobre

la

histologla de la gónada fetal. Anexo 1

RESULTADOS.

~

-

7

7 PESO DE LOS EMBRIONES.

Los valores de

los

pesos de

los

embriones se expresiin como la media f la desviaci6n estándar

n

-

GC

1.455

i

0.300

cou

1

1.81

f0.596

cou

2

1

455

_{_.} f

0.327333

E2

1

17540 to496

-

E2 2

'1.8521

t

0.375

CG

O

3.7627"

o

O005

3.31

28*

5.1

121"

CG

cou I

cou 2

E2 I

E2 2

TABLA

DE

ANALISIS

DE

VARIANZA.

-

-

cou

1 cou

2

E t

I

E2 2

3.7627-

0.0005

3.3128'

-

5.1121-

O

3.9637"

O 0265

-

0.0362

3

9637-

O

3

K13In 5 396"

0.0362

5.3966"

O

1347

O

O.

0265

3.5031-

O

-

O.

1347

-pco.oi *pc0.05

Los resultados de la tabla muestran un aumento en

el

peso de los embriones de

0.31,

0.35 (pc0.01) y de 0.30 (~'0.05) em

los

grupos Cou 1,

Cou

2 y E2

1

.

Cuando se compararon los valores entre los grupos de Cou 1 y Cou

2

se

observó un aumento de 0.36 (pe0.01) en los embriones de

Cou

_I.

Con respecto al peso de los embriones de E2 1 fue mayor (pc0.01) cuando se

comparó con

el

grupo Cou 2. Mientras que el peso de los embriones de

E2

2 fue mas

alto (p<O.Ol) con respecto a Cou 2.

ANALISIS

HlSTOLdGlCO CUALITATRíO.

En el grupo

GC,

se distinguen claramente los cordonw de células germinales

delimitados por células de aspecto aplanado, lac dales si3 localizan, en algunos casos cerca de vasos sanguíneos; los folículos son escasos y se encuentran dispuestos en la periferia de la g6nada (Fig.1 y 2). En el gn ipo experimental Cou 1

se observan escasas asociaciones celulares que correspotiden a la formación de folículos, los cordones de células germinales están menos iiefinidos que en

el

GC

(Fig. 3). En Cou 2 no se llegan a apreciar folículos y los cordones de células

germinales se encuentran poco definidos y constituidos por delgadas fibrillas (Fig 4 y 5). En Ezl se distinguen claramente los cordones de i*lulas germinales, los folículos son abundantes en toda la gónada dentro de

IBS

cuales se aprecian

ovogonias con núcleo heterocromático y ovocitos en paqcriteno; los foliculos se

encuentran delimitados por un epitelio aplanado simple bien definido (Fig. 6 y 7). En

Ez 2 se definen mejor los cordones de células germinales en relación con los grupos

anteriores, así mismo

los

folículos se aprecian con mayor claridad que en

el

grupo

E2 1; de igual forma son abundantes en toda la periferia de la gónada dentro de

los

lbre\ iaturas

C

(ordone6

b

P

boliculos

primordiales

c

P

Cápsula

FICklRA

2 GRUPO

CONTROL

H-E

SOOS

.

FIGURA

4

DOSIS

ALTA

COL

\.IESTR<>L H-E

250s

.

U

FIGURA

6

DOSIS BAJA ESTRADIOL H-E

250s

FIGl

RA

8

DOSIS

ALTA

ESTRADIOL AZt'L ALCIANO

250s

. .

.. :

. .-.

.

. ~.

.

DiSCUSidN Y CONCLUSdN.

Los

resultados del presente trabajo muestran que tanto la administración de

coumestrol

y

estradiol en dosis bajas y altas afecta el peso de

los

embriones.

Los

pesos de los embriones de los grupos Cou 1, E2 1 y

E..!

2 contrastan con

los

resultados obtenidos por Bellido y colaboradores (1 985) en animales neonatos

estrogenizados.

El análisis histológico muestra que tanto en el GC y Cou 1, las imágenes que

se observan son muy similares, ya que en ambos casos podemos distinguir escasas

asociaciones celulares que corresponden a folículos primordiales los cuales se

encuentran localizados principalmente en la periferia de la gi'inada, sin embargo, los

cordones de células germinales en

01

GC, en el caso del grupo Cou 1 no están

definidos; en Cou 2 no se llegan a apreciar foliculos primcrdiales y los cordones

germinales se encuentran definidos por elementos fibrosos.

En ambos grupos de

E2

1 y 2 se observan foliculos hien definidos dentro de

los cuales se encuentran ovocitos y ovogonias en el caso de E2 1 son más

abundantes las ovogonias con núcleo heterocromático y en número menor los

ovocitos primarios paquiténicos, en comparación con E7 2 ocurre lo contrario se

observan mayor número de ovocitos primarios paquiténico:; y escasas ovogonias

con nucleo bhofilo. También en ambos grupos

E2

1 y 2 se piiede apreciar el epitelio

ovárico bien definido. En todos los grupos mencionando desde GC, Cou 1, Cou 2,

E2 1 y E2 2 se puede observar la presencia de cordones de wilulas germinales.

Es

muy probable que el tratamiento agudo con Cou eri las dosis utilizadas

tenga un efecto antiestrogénico sobre la maduración gonadal del ovario fetal. En

la literatura

como

en el presente trabajo

se

reporta que el tratamiento con

estrogénos

o

análogos de estos compuestos inducen un mayor desarrollo

retraso en el desarrollo folicular as¡ como de la gonada eii general, de manera

dosis dependiente, ya que

con

la dosis más alta el dssarrollo gonadal es

prácticamente nulo.

El

efecto antiestrogénico observado en el desarrollo ovárico,

puede ser debido a la competencia por los receptores a estrógenos, entre el

cournestrol y el estradiol endógeno, lo cual puede dar C(mo iesultado que el

coumestrol ocupe los receptores bloqueando la función de los estrógenos en el desarrollo gonadal del embrión femenino.

En conclusión, el análisis histológico sugiere que el cournestrol presenta

actividad antiestrog8nica dosis dependiente.

L * .

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APENDICE

A

TECNICA PARA INCLUSION DE TEJIDOS

1 .OII-809/0 30min

2.OH-8OYo 30min

3 OH-96% 30min

4.OH-96Yo 30min

5.OH-100% 30min

6.OH- 100% 30min 7.OH-XILOL 4Smin

8.XILOL

I 6Omin

9 X K O L I1 6Omin

10 PARAFmA

I

6Oniin

11 PARAFINA 11 60niin

.

TECNlCAS DE Tlh’CION HEMATOXILINA-EOSINA

1. XlLOL I Smin 2.xrLOL 2 Smin

3.0H-XLOL 3min (1:l)

4.OH-IOOYo I 2niin

5.OH-100Y0 11 Zmin 6.OH-ETER 2min (1 : 1)

7.OH-96% -. 2min

8 .OH-80% 2min

10

H20

(3 lavados) 1 1 HEMATOXILINA 7min 12 LAVADO CON

H2O

(RAPIDO) 13 OH-ACID0 (LAC ADO) 14 H20 DESTILADA (LAVADO) 15 SOL SCOTT lmin

16 H2O DESTILADA (LAVADO)

17 EOSiNA 3min

18 OH-96% I (LAVADO) 19.0H-965

I1

(LAVADO)

20

OH-100%

1 (LAVADO)

2 1 .OH-100% I1 (LAVADO) 22.011-XILOL (LAVADO)

23.XiLOL 1 (LAVADO)

24.XlLOL I1 (LAVADO)

..

25.MONTAJE.

.

AZUL

ALCIANO-PAS

1 .XILOL I Sinin 2.xKLOL I1 5min

3.0H-XiLOL 3min( l:l)

4 OH-1 00% I 2min 5.OH-100% I1 2min 6.0H-96% I 2min 7.0H-96% ₁₁ 2min

8.OH-80Yo 2min

9 OH-60% 2min

1 1 ÁCIDO ACETIC0 3% 2min

12.- DE ALCIANO 30min

13.H20 CORRIENTE 7min

14 H20 DESTI LADA (LAVADO) IS.ACiD0

PERYODICO

5% 1Omin 16 H20 CORRiENTE 5min

17 H 2 0 DESTILADA (LAVADO) 18 REACTIVO DE SCIIFF IOmin 19 TRES BAÑOS DE SlJLFlTO ACID0

' DE SODIO '2min g@&3mO)

II

-

-

. a

20 H 2 0 CORRiENTE 5min

21 HFVATOXILINA ómin

22 H2C CORRIENTE (LAVADO)

23 OH-ACID0 (LAVADO)

24

H20

CORRIENTE (LAVADO)

25 SOL. SCOTT 1 min}

26 H20 DESTILADA (LAVADO) 27 ÁCIDO PICRIC0 SATURADO 1 min 28 OH-96% I (LAVADO)

29.0H-96% I1 (LAVADO) 30 OH-100% I (LAVADO) 3 1 .OH-100% I1 (LAVADO)

32.XILOL-OH (LAVADO)

i

!

I

! !

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I

1

i

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i

I

I

I

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!