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Dr. CARLOS ALBERTO VÁSQUEZ BOYER

Rector

DR. JUAN AMARO VILLACORTA VÁSQUEZ

Vicerrector Académico

Dr. GUILLERMO ARTURO GARCÍA PÉREZ

Vicerrector de Investigación

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DR. HEBER MAX ROBLES CASTILLO

Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas

Dra. ANGELITA TERESA CABRERA DE CIPRIANO

Director de la Escuela Profesional de Ciencias Biología

Dr. FREDDY PELAEZ PELAEZ

Director del Departamento Académico de Ciencias Biológicas

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iv

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vi vi

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vii

DEDICATORIA

A Dios por mi vida, salud y fortaleza para afrontar todas las dificultades que se presentan en

el camino. A mi querido padre Juan Reyna,

reconociendo su esfuerzo y sacrificio para poder culminar mi carrera universitaria. Gracias por tu amor, apoyo incondicional y siempre estar a mi lado.

A mi madre Silvia Haydee Cabanillas por todo su esfuerzo, amor y apoyo en toda mi carrera universitaria.

A mis abuelitos Walter y Filomena, por todo su amor, sus consejos y apoyo incondicional para afrontar las verdades de esta vida.

A mis bisabuelos, José y María, mis ángeles en el cielo, infinitas gracias por todo su amor brindado.

A mi hermano, por su apoyo y consejos para concluir esta etapa de mi formación profesional.

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viii

Los resultados de este trabajo, merecen un agradecimiento a todas las personas que de alguna manera formaron parte de su culminación con su apoyo y comprensión me alentaron a lograr este gran objetivo. Mi agradecimiento especial a mis padres y abuelos, por todo lo que me apoyaron arduamente día a día con todo su amor, apoyo y comprensión.

Mi agradecimiento al Dr. Julio Roger Chico Ruiz por su asesoramiento en el desarrollo del presente trabajo. Por su orientación, supervisión continua y compartir sus conocimientos durante todo este tiempo.

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ix

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ... ii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ... iii

PRESENTACIÓN………vi

MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR………...v

APROBACIÓN………vi

DEDICATORIA ... vii

AGRADECIMIENTO ... viii

INDICE ... ixx

RESUMEN ... x

ABSTRACT ... xi

I. INTRODUCCIÓN ... 1

II. MATERIAL Y MÉTODO ... 4

III. RESULTADOS ... 7

IV. ANALISIS Y DISCUSION ... 15

V. CONCLUSIONES ... 19

VI. RECOMENDACIONES ... 20

VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ... 21

VIII. ANEXOS ... 26

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x

Debido a que en el Perú hay pocos estudios sobre Stevia rebaudiana y la importancia que va adquiriendo a nivel mundial se hace necesario su estudio. Además de las características mencionadas justifica buscar alternativas para mejorar su cultivo y elevar sus niveles de esteviósido en planta. Una alternativa es los cultivos in vitro. El objetivo de este trabajo fue conocer las técnicas de cultivo in vitro que se aplican en Stevia rebaudiana cuando se revisan las publicaciones científicas desde el año 2010 a nivel nacional e internacional;

en bibliotecas electrónicas, repositorios, páginas web, revistas científicas, etc. y se recopilo en un cuadro toda la información basándonos en los años de publicación, técnicas, nacionales e internacionales, país, medios de cultivos, hormonas, explantes, nombre de las revistas y autores por artículos científicos, nombre de las universidades de acuerdo a las tesis encontradas. Los resultados nos mostraron que la técnica más utilizada fue la micropropagación, los segmentos nodales y el medio Murashige & Skoog fueron los explantes y medio más utilizados al igual que la hormona Bencilaminopurina, como una de las hormonas más empleadas en cultivo in vitro tanto solo como en combinaciones con ácido indolacético y ácido naftalenacetico. Se concluye que se sigue utilizando técnicas tradicionales in vitro para obtener masivamente plántulas de estevia. Se hace necesario desarrollar otras técnicas que permitan mejorar su trabajo in vitro.

Palabras claves: Stevia rebaudiana, cultivo in vitro, micropropagación, propagación in vitro, regeneración.

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xi ABSTRACT

Due to the fact that in Peru there are few studies on Stevia rebaudiana and the importance that it is acquiring worldwide, its study is necessary. In addition to the characteristics mentioned, it justifies looking for alternatives to improve its cultivation and raise its levels of stevioside in the plant. An alternative is in vitro cultures. The objective of this work was to know the in vitro culture techniques that are applied in Stevia rebaudiana when scientific publications are reviewed since 2010 at a national and international level; in electronic libraries, repositories, web pages, scientific journals, etc. and all the information was compiled in a table based on the years of publication, techniques, national and international, country, culture media, hormones, explants, name of the journals and authors for scientific articles, name of the universities according to the found theses. The results showed us that the most used technique was micropropagation, the nodal segments and the Murashige & Skoog medium were the most used explants and medium, as well as the benzylaminopurine hormone, as one of the most used hormones in in vitro culture, both alone and in combinations with indoleacetic acid and naphthaleneacetic acid. It is concluded that traditional in vitro techniques are still used to massively obtain stevia seedlings. It is necessary to develop other techniques to improve their work in vitro.

Keywords: Stevia rebaudiana, in vitro culture, micropropagation, in vitro propagation, regeneration.

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1 I. INTRODUCCIÓN

Stevia rebaudiana es uno de los 950 géneros de la familia Asteraceae. Su género comprende aproximadamente 200 especies de hierbas anuales, perennes, subarbustos y arbustos (Sánchez, 2019).

Su morfología consta de una raíz fibrosa, filiforme y perenne; tallo anual, sub leñoso, más o menos pubescente; con hojas elípticas oval o lanceoladas, pequeñas, simples; borde o margen dentado; a veces en verticilos; algo velludas y es el órgano con mayor contenido del edulcorante. Finalmente tenemos a la flor que es hermafrodita pequeña y blanquecina, en capítulos pequeños terminales o axilares, agrupados en panículas corimbosas (Taiariol, 2006).

Los principales glucósidos de esteviol se encuentran principalmente en las hojas. Se ha reportado que la acumulación ha llegado hasta en un 30% en base a su peso seco. Sin embargo, actualmente se ha reportado que los glucósidos de esteviol, también se han detectado en tallos, raíces, semillas y flores. Donde los principales son: el esteviósido (4- 13% Est.), que es de 250-300 veces más dulce que la sacarosa, pero con un sabor ligeramente amargo, el rebaudiósido A (2-4% Reb. A) tiene la mayor capacidad edulcorante, que va de 350-450 veces más dulce que la sacarosa y sin residuos amargos;

en menor cantidad también se han encontrado el dulcósido (1-2%) y el rebaudiósido C (0.4-0.7%), también se encontraron junto con esteviolbiósido, rubusósido, rebaudiósido B, D, E y F, pero menos del 0.4% cada uno de ellos (Sánchez, 2019).

En extracto, se utilizan como edulcorante natural o en suplementos dietéticos por su contenido de glucósidos: Esteviósido y rebaudiósido con características químicas y farmacológicas adecuadas para su uso en la alimentación humana. El Esteviósido tiene un ligero sabor amargo y proporciona 250 a 300 veces el dulzor del azúcar (Duran et al., 2012).

Stevia rebaudiana se reporta como anticonceptivo, ayuda en el tratamiento de alteraciones de la piel y en prevención de caries, ya que no puede ser fermentado. Tiene

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2 Por otro lado, la capacidad de germinación se reduce en un 50%, y transcurridos 8 meses sus posibilidades de germinación son prácticamente nulas (Carrascal, 2011). Además, es una planta susceptible al ataque de plagas y enfermedades, lo cual inciden negativamente en el rendimiento y calidad del producto, debiendo realizarse un estricto control de los mismos (Martínez, 2015).

Debido a que en el Perú hay pocos estudios sobre estevia y la importancia que va adquiriendo a nivel mundial se hace necesario su estudio. Además de las características mencionadas justifica buscar alternativas para mejorar su cultivo y elevar sus niveles de esteviósido en planta. Una alternativa es los cultivos in vitro.

La expresión cultivo in vitro de plantas, significa cultivar plantas dentro de un frasco de vidrio en un ambiente artificial. Esta forma de cultivar las plantas tiene dos características fundamentales: la asepsia (ausencia de gérmenes, etc.), y el control de los factores que afectan el crecimiento. El avance alcanzado por las ciencias biológicas ha permitido en los últimos años el estudio detallado de las plantas tanto a nivel celular como molecular, y en condiciones de laboratorio es posible actualmente reproducir todos los factores que puedan incidir en el crecimiento y desarrollo de las plantas (Castillo,2004).

La micropropagación se define como la multiplicación asexual, basada en la totipotencia vegetal, realizadas en condiciones in vitro (Cruz,2012).

Algunas de las ventajas son el incremento acelerado del número de plantas derivadas de un genotipo, reducción del tiempo de multiplicación, mayor control sobre la sanidad del material que se propaga y posibilidad de multiplicar rápidamente una variedad de la cual existan pocos individuos (Roca y Mroginski, 1993).

Es la técnica que ha logrado rápida aceptación en la industria y se está practicando tanto en especies hortícolas como en ornamentales y sub leñosas (Abdelnour y Vincent, 1994).

Se puede inducir en tejidos cultivados “in vitro” la formación adventicia de órganos como tallos, raíces, hojas y flores. Este proceso se denomina morfogénesis u organogénesis. La morfogénesis ocurre directamente desde el explante se define como directa; cuando pasa por el tejido de callo la morfogénesis se define indirecta (Cisne, 2013).

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3 organogénesis y a la embriogénesis somática, por lo cual se planteó el objetivo de conocer las técnicas de cultivo in vitro que se aplican en Stevia rebaudiana en las publicaciones científicas desde el año 2010 a nivel nacional e internacional. Y como objetivos específicos se planteó identificar y procesar las técnicas de cultivo referenciadas en los artículos científicos y tesis que estén relacionados a la propagación in vitro masiva (yemas, segmento nodal, meristemo) y las vías regenerativas de Stevia rebaudiana a nivel nacional e internacional.

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4 II. MATERIAL Y MÉTODO

2.1. Material de estudio:

Se revisaron tesis (pregrado y postgrado) reportadas en las universidades a nivel nacional e internacional y colgadas en los repositorios. También se revisaron artículos científicos publicados a nivel nacional e internacional.

2.2. Tipo de investigación:

La siguiente investigación fue de tipo descriptivo transversal donde se recolecta datos sobre cada una de las categorías, conceptos, variables, contextos y se reporta los datos que se obtienen.

Por esta razón, se analizaron los artículos científicos basados en las técnicas de cultivo in vitro. Los artículos seleccionados de revistas internacionales fueron de la base de datos de las editoriales SPRINGER, ELSEVIER, TAYLOR & FRANCIS. Así como la base de datos nacional ALICIA y se filtraron los resultados desde el año 2010 hasta la actualidad.

2.3. Población, muestra

Realizado el proceso de selección de información, se tomó una muestra de la misma aplicando la siguiente fórmula:

𝑛 = 𝑁𝑍

²

𝑝𝑞 𝑑

²

(𝑁 − 1) + 𝑍

²

𝑝𝑞

Donde:

p = proporción aproximada del fenómeno en estudio en la población de referencia q = proporción de la población de referencia que no presenta el fenómeno en estudio (1 – p).

La suma de la p y la q siempre debe dar 1. Por ejemplo, si p= 0.8 q= 0.2

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5 𝑛 = 𝑁𝑍

²

𝑝𝑞 𝑑

²

(𝑁 − 1) + 𝑍

²

𝑝𝑞

𝑛 = 138(1.96)

²

(0.5)(0.5)

(0.05)

²

(138 − 1) + (1.96)

²

(0.5)(05) 𝑛 = 101

2.3.1 Criterios de inclusión

Artículos en inglés de la base de datos Springer, Elsevier, Taylor & Francis Artículos en castellano de la base de datos ALICIA

Artículos a partir del año 2010 hasta la actualidad 2.3.2 Criterios de exclusión

Artículos que no estén relacionados al tema Artículos que no se puedan obtener en extenso 2.3.3 Muestreo

El tipo de muestreo se realizó al azar y dependió del criterio del investigador, para lo cual se tuvo en cuenta el objetivo de estudio y las palabras claves siguientes:

Stevia rebaudiana, cultivo in vitro, micropropagación, propagación in vitro, regeneración.

Considerando la fórmula antes mencionada, tanto para Propagación in vitro y regeneración, se consideró los temas de los siguientes artículos:

 Propagación in vitro: 101 publicaciones

 Regeneración: 63 Publicaciones

2.3.3 Unidad de análisis:

Tesis y artículos científicos

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6 Se utilizaron fichas de observación en la cual se fue recopilando la información obtenida de las páginas web.

2.5. Procedimiento

Se revisaron tesis y artículos científicos en bibliotecas electrónicas, repositorios nacionales e internacionales, páginas web y revistas científicas; toda la información fue recopilado en un cuadro.

En el cuadro, se colocaron las tesis y artículos científicos con toda la información necesaria y en base a ello desarrollamos las tablas.

Desarrollamos las tablas y nos enfocamos en los años de publicación, técnicas, cuantos fueron nacionales e internacionales, país, medios de cultivo, reguladores de crecimiento, explantes, nombre de revistas y autores para artículos científicos, universidades de acuerdo a las tesis revisadas y fue contabilizado tanto de manera general como para tesis y artículos científicos.

Realizamos las gráficas basándonos en la frecuencia estadística en donde se contabilizo de acuerdo a las veces que se repitió durante la realización del muestreo.

2.6. Procesamiento de los datos

Se hicieron graficas de barras e histogramas 2.7. Consideraciones éticas y de rigor

Se respetaron las consideraciones éticas al revisar la información y cumpliendo lo establecido en el proyecto de investigación. El rigor científico se da con la veracidad de la información que se está alcanzando en esta tesis.

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7 III. RESULTADOS

Figura 01. Porcentajes por año de publicación para tesis y artículos científicos

En la figura 01, se observa que, en el año 2017 y 2014 existe un mayor porcentaje de tesis y artículos científicos de acuerdo a la información encontrada. Sin embargo, observamos un menor porcentaje para tesis y artículos científicos en el año 2010, 2014, 2015, 2018 y 2020.

Figura 02. Porcentajes a nivel Nacional e Internacional para tesis y artículos científicos En la figura 02, se observa un mayor porcentaje a nivel internacional de tesis y artículos científicos encontrados. Sin embargo, existe un menor porcentaje a nivel nacional de tesis y artículos científicos encontrados.

7.00 5.00 8.00 9.00 16.00 8.00 11.00 17.00 4.00 13.00 2.00

0.00 18.18 9.09 18.18 0.00 0.00 9.09 27.27 0.00 18.18 0.00

7.87 3.37 7.87 7.87 17.98 8.99 11.24 15.73 4.49 12.36 2.25

0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00

2010 2011 2012 2013 2014 2015 2016 2017 2018 2019 2020

PORCENTAJE

AÑO

TESIS/ARTICULO S

TESIS

4.00 96.00

27.27 72.73

1.12 98.88

0.00 20.00 40.00 60.00 80.00 100.00 120.00

Nacional Internacional

PORCENTAJE

TESIS/ARTICULOS TESIS

ARTICULOS

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8 Figura 03. Tesis y artículos científicos según su procedencia (países)

En la figura 03, se observa un mayor porcentaje en México con respecto a las tesis encontradas; también existe un mayor porcentaje en Perú de acuerdo con los artículos científicos encontrados. Se observa que existe un menor porcentaje en Paraguay, India, Irán, cuba, Turquía, Pakistán, Bangladés, Egipto, Tailandia, Lituania, Nepal, Malasia, Arabia Saudita, Estados Unidos, Reino de Bahrein, Sri Lanka, Bulgaria y Vietnam de acuerdo a las tesis encontradas; además, en Tailandia, El Salvador, Malasia, Arabia Saudita, Reino de Bahrein, Túnez, Bulgaria y Vietnam existe un menor porcentaje de acuerdo a los artículos científicos encontrados.

Figura 04. Artículos científicos revisados según su idioma (castellano e inglés)

En la figura 04, se observa que las revistas más encontradas son en inglés y el menor es en castellano.

33.33 6.90 13.79 12.07 2.30 4.02 1.72 3.45 4.60 2.87 3.45 0.57 1.15 1.72 1.15 1.15 0.57 0.57 1.15 0.57 1.15 0.57 0.57 0.57

27.27 0.00 0.00 9.09 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 9.09 9.09 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00 0.00

1.12 11.24 1.12 23.60 3.37 7.87 3.37 6.74 8.99 5.62 6.74 1.12 1.12 2.25 2.25 2.25 1.12 1.12 2.25 1.12 2.25 1.12 1.12 1.12

0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00 35.00 40.00

Perú México Paraguay India Colombia Irán Cuba Turquía Pakistán Banglades Egipto Tailandia El Salvador Costa Rica Lituania Nepal Malasia Arabia Saudita Estados Unidos Reino de Bahrein Sri Lanka Túnez Bulgaria Vietnam

PORCENTAJE

PAISES

ARTICULOS

19.44

80.56

0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00

Castellano Inglés

PORCENTAJE

IDIOMA

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9 Figura 05. Tesis revisadas según procedencia de Universidad

En la figura 05, podemos observar una mayor cantidad de tesis encontradas en la Universidad Nacional “Santiago Antúnez de Mayolo” y en la Institución de Enseñanza e Investigación de Ciencias Agrícolas.

Figura 06. Número de autores (%) por artículos científicos

En la figura 06, se observa que el mayor número por artículos científicos es de 4 autores y el menor número es de 8 autores, de acuerdo a la información obtenida.

4.49 19.10 21.35 24.72 16.85 8.99 3.37 1.12

0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00 30.00

1 2 3 4 5 6 7 8

PORCENTAJE

AUTORES

9.09 9.09 9.09 9.09 9.09 9.09 9.09

0.002.00 4.006.00 10.008.00 12.00

Universidad Nacional de Huancavelica(nacional) Universidad Nacional "Santiago Antúnez de… Universidad de El Salvador inter Institución de Enseñanza e Investigación en Ciencias… Universidad de Sonora Instituto Tecnologico de Costa Rica Unipanamericana Instituto Politecnico Nacional Universidad del Papaloapan

PORCEN

UNIVERSIDADES

TESIS

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10 Figura 07. Técnica de cultivo in vitro utilizada en el estudio de S. rebaudiana sea para tesis y artículos científicos

En la figura 07, se observa que la técnica de cultivo in vitro más empleada fue de micropropagación. A parte de eso, observamos que los menos empleados son embriogénesis somática y callogénesis.

53.45 6.03 22.41 18.10

90.91 0.00 9.09 0.00

49.52 6.67 23.81 20.00

0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00 90.00 100.00

PORCENTAJE

TECNICAS

ARTICULOS

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11 Figura 08. Medios de cultivo utilizados aplicando las técnicas de cultivo in vitro en S.

rebaudiana

En la figura 08 se observa que, el mayor porcentaje de medios de cultivo utilizados fue el Murashige y Skoog y el menos utilizado fue el medio de cultivo White tanto en artículos científicos como en tesis.

2.86 0.00 0.00 0.95 3.81 1.90

76.92 0.00 0.00 0.00 15.38 0.00 7.69

3.16 0.00 1.05 2.11 1.05 1.05

0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00

PORCENTAJE

MEDIO DE CULTIVO

ARTICULOS

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12 Figura 09. Tipo de explante utilizados para aplicar las técnicas de cultivo in vitro

En la figura 09 se observa que, de acuerdo al explante más utilizado con respecto a micropropagación es el segmento nodal y el menos utilizado fue yemas y semillas tanto para tesis como artículos científicos.

6.78 5.08 1.69

81.82 0.00 18.18 0.00

8.33 2.08 2.08

0.00 10.00 20.00 30.00 40.00 50.00 60.00 70.00 80.00

Segmento Nodal Yemas Meristemos Semillas

PORCENTAJE

TIPO DE EXPLANTE

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13 Gráfico 10. Reguladores del crecimiento utilizados en el desarrollo in vitro de S.

rebaudiana

En la figura 10 se observa que, la hormona más utilizada es la Bencilaminopurina (BAP) y la menor hormona utilizada es la Zeatina y Acido salicílico en los artículos científicos y tesis encontradas.

4.68 11.04 12.71 16.39 11.71 3.01 12.37 0.67 0.67 0.33

8.33 8.33 8.33 16.67 16.67 4.17 4.17 0.00 4.17 0.00

4.35 11.23 26.09 13.04 16.30 11.23 2.90 13.04 0.72 0.72 0.36

0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00

acido giberelico AIA BAP Kinetina ANA AIB Tidiazuron 2,4-D zeatina Metil jasmonato Acido salicilico

PORCENTAJE

REGULADORES DE CRECIMIENTO

ARTICULOS

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14 Figura 11. Combinaciones de reguladores del crecimiento más utilizados en los cultivos in vitro de S. rebaudiana

En la figura 11 podemos observar que las combinaciones de hormonas más empleadas son Bencilaminopurina más ácido naftalenacetico y acido indolacético

1.45 10.87 0.72 20.29 3.62 7.25 0.72 13.77 2.17 0.72 1.45 1.45 1.45 0.72 10.14 3.62 2.90 3.62 0.72 0.72 0.72 1.45 0.72 0.72 0.72 0.72 2.90 2.90 0.72

0 0 0 0 0 12.5 12.5 0 0 0 0 0 0 0 12.5 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 12.5 01.54 11.54 0.77 20.00 3.85 7.69 0.00 13.85 2.31 0.77 1.54 1.54 1.54 0.77 9.23 3.85 2.31 3.85 0.77 0.77 0.77 1.54 0.77 0.77 0.77 0.77 3.08 2.31 0.77

0.00 5.00 10.00 15.00 20.00 25.00

BAP+AIA+Kinetina BAP+Kinetina BAP+Kinetina+ANA BAP+ANA BAP+2,4-D+ANA 2,4-D+ANA 2,4-D+AIA 2,4-D+BAP BAP+TDZ Kinetina+TDZ BAP+Acido Giberelico IBA+IAA IBA+ANA BAP+ANA+IBA+Ac. Giberelico BAP+IAA 2,4-D+IBA BAP+IBA 2,4-D+Kinetina 2,4-D+BAP+Acido Giberelico 2,4-D+BAP+TDZ BAP+Kinetina+ANA+2,4-D BAP+IAA+2,4-D Kinetina+IAA+2,4-D IAA+ANA 2,4-D+ANA+Zeatina Kinetina+ANA+IAA Kinetina+ANA Kinetina+AIA IBA+Kinetina

PORCENTAJE

COMBINACIONES DE REGULADORES DE CRECIMIENTO

TESIS/ARTIC ULOS TESIS

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15 En principio tenemos un total de cien investigaciones entre artículos científicos y tesis.

En este caso encontramos la cantidad de once tesis entre pregrado y posgrado, en base a lo antes mencionado tenemos en la figura 01 que en el año 2017 existe un mayor número de tesis a diferencia de los otros años que se encontró poco o nada con respecto a la Stevia rebaudiana. Asimismo, tenemos ochenta y nueve artículos científicos y en el año 2014 existe más investigaciones en comparación con los otros años que si hay, pero en menores cantidades. Desde mi punto de vista, esto puede deberse a que se desarrolla más artículos científicos por ser un medio de comunicar resultados de manera clara, concisa y fidedigna y que además se desarrolla más de manera internacional debido a que es un poco más accesible el lugar, insumos o laboratorios donde se desarrollan dichas investigaciones como se demuestra en la figura 02. A diferencia de las tesis que existe poca información a nivel internacional pero tiene una mayor ventaja a nivel nacional en comparación con los artículos científicos encontrados a nivel nacional. Con lo expuesto anteriormente, podemos observar de manera más detalla en la figura 03 los diferentes países de procedencia de dichos artículos científicos y tesis.

Aparte de eso, tenemos que las revistas donde encontramos los artículos científicos son mayormente en ingles que en castellano y así podemos observarlo en la figura 04. De igual forma tenemos el nombre de las universidades donde fueron desarrolladas y podemos observar en la figura 05 que se encontraron más trabajos en la Universidad Nacional Santiago Antúnez de Mayolo y en la Institución de Enseñanza e Investigación en Ciencias Agrícolas. En los artículos científicos existe una cantidad de autores que desarrollan dichas investigaciones, es por ellos que de acuerdo a la información obtenida los agrupamos por el número de autores teniendo así en la figura 06 de que el mayor número por artículos científicos es de 4 autores.

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16 ilimitada. Por lo antes dicho, esta técnica es la que más se utiliza en el cultivo in vitro como es el caso de la Stevia rebaudiana como lo podemos observar en la figura 07 con los artículos científicos y tesis encontradas. Sin embargo, existe otra técnica como la embriogénesis somática donde Roca y Mroginki (1993) nos dice que esta técnica es la más eficiente, obteniendo así cantidades ilimitadas de plantas; pero, esto ocurre en otro tipo de especies como en carica papaya L. donde Gallardo (2006) ha podido desarrollar la embriogénesis somática a partir de embriones cigóticos hipocótilos y también ocurre con laelia anceps subespecie dawsonii cuando Lee et al. (2010) evaluó las condiciones in vitro para desarrollar un protocolo de embriogénesis en esta especie teniendo éxito con un 95% de sobrevivencia en invernadero. En el caso de la Stevia rebaudiana, Kryvenki et al. (2008) menciona que existen pocos trabajos sobre la inducción de embriogénesis somática y que un protocolo eficiente serviría de apoyo a cualquier programa de mejoramiento para esta especie tanto para plantas elite (a través de uso de biorreactores) como a futuros trabajos de mejoramiento genético. Por lo antes expuesto, observamos en la figura 07 que existe pocas investigaciones de embriogénesis somática en Stevia rebaudiana. Ahora bien, Gupta et al. (2010) expone que las plantas también se pueden regenerar a partir de tejidos de callos no organizados derivados de diferentes explantes por desdiferenciación inducida por reguladores de crecimiento exógenos, pero hay muy pocos informes disponibles para la regeneración de la planta de Stevia a través del cultivo de callos; así lo podemos observar en la figura 07.

Por otro lado, de acuerdo a los resultados observados en la figura 08 el medio Murashige y Skoog es el más empleado en cultivo in vitro ya que Rodríguez et al. (2004) se refiere a que el medio Murashige y Skoog es el más utilizado en la propagación masiva de plantas porque contiene los requerimientos nutricionales necesarios para la mayoría de especies vegetales. Otro aspecto que observamos en la figura 08 es que los medios menos empleados en cultivo in vitro de Stevia rebaudiana fue medio White, Woody Plant Medium (medio WPM) y el medio Nitsch y Nitsch (NN) y esto es debido a que UNADM (s.f.); Pelacho et al. (2016) señalan que el medio White tiene una baja concentración de sales y por eso es utilizado como un complemento para el medio Murashige y Skoog (MS) por ser un medio “alto en sales”. Asimismo, el medio WPM fue desarrollado para plantas leñosas.

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17 semillas, pero tiene una baja germinación y una perdida acelerada a la viabilidad. Del mismo modo, Dey et al. (2013) nos dice que la propagación a través de semillas produce poblaciones menos homogéneas, pero Huez (2013) observo que, agregando reguladores de crecimiento, se puede obtener un óptimo crecimiento con semillas de Stevia rebaudiana.

La utilización de técnicas de cultivo in vitro como la micropropagación provee de plantas genéticamente uniformes en gran escala. Se ha encontrado que para la producción en gran escala de Stevia se requiere de la utilización de segmentos nodales debido a que se forman múltiples brotes (Vences, 2016). Además, Vidal (2014) nos dice que los segmentos nodales tienen facilidad de regeneración comparados con explantes más pequeños como los meristemos, que presentan una superficie lesionada relativamente mayor y se requieren estrategias que contribuyen a su recuperación y regeneración; además se obtiene la ventaja de que no existe reversión a estados juveniles de las plántulas producidas. Así pues, tenemos en la figura 09 que el segmento nodal es el más utilizado en la micropropagación.

El aprovechamiento de los diferentes reguladores de crecimiento vegetal genera un impacto positivo en el campo de la biotecnología, debido a la gran utilidad que las plantas brindan constantemente en el saber médico, industrial, alimenticio, ambiental y social (Alcántara et al., 2019). Entonces, como uno de los reguladores de crecimiento tenemos a las auxinas los cuales son un grupo de reguladores del desarrollo vegetal relacionada con la elongación celular, dominancia apical, iniciación de raíces, etc. Los más usados en cultivos in vitro son Acido Indol Acético (AIA), Acido Naftalen Acético (ANA), Acido Indol Butírico (IBA) y Acido 2,4 – diclorofenoxiacético (2,4-D) (Aponte, 2009). En el caso de las citoquininas, Lluna (2006) nos expresa que promueven la división de células en tejidos no meristemáticos; esta son la Zeatina, Kinetina y Benciladenina.

Roca y Mroginski (1993) dice que BAP se utiliza actualmente más que la Kinetina y Zeatina por ser un compuesto fácilmente, a un costo más o menos razonable. En este sentido, de acuerdo a la figura 10, tenemos que BAP es la hormona más utilizada en el cultivo in vitro. Otro aspecto, en acido Salicílico Mejía (2018) reporto que se ha utilizado como activador para incrementar la producción de diferentes metabolitos secundarios.

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18 callos vegetales), mientras que una mayor concentración de auxinas podría generar un incremento en la producción de raíces, una concentración mayor de citoquininas puede inducir una mayor producción de brotes vegetales (yemaciones), lo cual puede sugerir que una concentración ideal de ambas fitohormonas en un medio de cultivo estable o en un sustrato adecuado podrían mejorar y acelerar el crecimiento vegetal. Por lo expuesto anteriormente, en la figura 11, las concentraciones de citoquininas y auxinas más utilizados en los trabajos de investigación son BAP+ANA y BAP+AIA.

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19 V. CONCLUSIONES

- Se determinó que la micropropagación es la técnica que más se ha utilizado en el estudio de Stevia rebaudiana según tesis de las universidades del Perú y del extranjero (90.91%) y artículos científicos (49.52%) a nivel nacional e internacional.

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20 VI. RECOMENDACIONES

1. Realizar más estudios de regeneración en especial sobre embriogénesis somática en Stevia rebaudiana ya que existe pocas investigaciones en este tema.

2. La importancia de Stevia está justificada por lo cual se deben realizar más investigaciones a nivel nacional en las diferentes áreas de la ciencia.

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21 VII. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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Información Agrícola.

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Alcántara, J., Godoy, J., Alcántara, J. & Sánchez, R. (2019). Principales

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https://repositorio.inia.gob.pe/bitstream/20.500.12955/322/1/Efecto_de_2 _auxinas.pdf

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Cruz, F. (2012). Cultivo de Tejidos Vegetales (Manual de prácticas).

http://portal.cuautitlan.unam.mx/manuales/cultivosdetejidosvegetales_ma nualprac.pdf

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Gupta, P., Sharma, S. & Saxena, S. (2010). Callusing in Stevia rebaudiana

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Lluna, R, (2008). Hormonas vegetales: crecimiento y desarrollo de la planta.

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24 Mejia_Espejel_L_DC_Fisiologia_Vegetal_2018.pdf?sequence=1&isAllo wed=y

Minaya, Y. (2015). Efecto de diferentes concentraciones de Bencilaminopurina (BAP) en el cultivo de Stevia (Stevia rebaudiana) in vitro en la fase de multiplicación [Tesis de Titulo, Universidad Nacional Santiago Antúnez de Mayolo]. Repositorio de la Universidad Nacional de Santiago Antúnez de Mayolo.

Olmos, S., Luciani, G. & Galdeano, E. (2010). Micropropagación en Levitus, G., Echenique, V., Rubinstein, C., Hopp, E. & Mroginski, L. (Eds.), Biotecnología y Mejoramiento Vegetal II (353-362). Instituto Nacional de Tecnología Agropecuaria.

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Universitat de Lleida. http://cv.udl.cat/cursos/76304/t1/t1.htm

Roca, W. & Mroginski, L. (Eds.). (1993). Cultivo de Tejidos en la Agricultura Fundamentos y Aplicaciones. Centro Internacional de Agricultura Tropical.

https://books.google.com.pe/books?id=EXijYNw55DUC&printsec=front cover&dq=medios+de+cultivo+para+cultivo+in+vitro&hl=es-

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mL_SxJD5AhXnBbkGHW2KApEQ6AF6BAgIEAI#v=onepage&q=med ios%20de%20cultivo%20para%20cultivo%20in%20vitro&f=false

Rodríguez, Ana J., Rodríguez, A., Quintero, S., Torres, M., Fundora, Z. (2004).

Influencia de los medios de cultivo en la micropropagación de plátano (Musa spp.) y malanga (Xanthosoma sagittifolium Schott.). Cultivo

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25 maestría, Universidad del Papaloapan].

https://www.unpa.edu.mx/tesis_Tux/tesis_digitales/maestria_biotecnolog ia/MB56-_SANCHEZ_CORDOVA_ANGEL_DE_JESUS.pdf

Taiariol, D. (2006). Caracterización de la Stevia rebaudiana Bertoni.

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Universidad Abierta y a Distancia de México. (s.f.). Cultivo de Tejidos Vegetales

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https://dmd.unadmexico.mx/contenidos/DCSBA/BLOQUE2/BI/06/BCT V1/unidad_02/descargables/BCTV1_U2_Contenido.pdf

Vences, C. (2016). Micropropagación Vegetal.

http://ri.uaemex.mx/bitstream/handle/20.500.11799/64552/secme- 12254.pdf?sequence=

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https://bdigital.zamorano.edu/server/api/core/bitstreams/9008ae67-f26b- 4c5e-8721-93e3ce33a53c/content

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ANEXOS

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27 ANEXO 01

CUADRO CON LA CANTIDAD Y PORCENTAJE DE ACUERDO A LAS TESIS Y ARTICULOS CIENTIFICOS ENCONTRADOS POR AÑO.

TESIS Y ARTICULOS CIENTIFICOS

AÑO CANTIDAD PORCENTAJE

2010 7 7.00

2011 5 5.00

2012 8 8.00

2013 9 9.00

2014 16 16.00

2015 8 8.00

2016 11 11.00

2017 17 17.00

2018 4 4.00

2019 13 13.00

2020 2 2.00

TOTAL 100

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28 CUADRO CON LA CANTIDAD Y PORCENTAJE DE ACUERDO A LAS TESIS ENCONTRADOS POR AÑO

TESIS

AÑO CANTIDAD PORCENTAJE

2010 0 0.00

2011 2 18.18

2012 1 9.09

2013 2 18.18

2014 0 0.00

2015 0 0.00

2016 1 9.09

2017 3 27.27

2018 0 0.00

2019 2 18.18

2020 0 0.00

TOTAL 11

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29 CUADRO DE LA CANTIDAD Y PORCENTAJE DE ARTICULOS CIENTIFICOS ENCONTRADOS POR AÑO.

ARTICULOS CIENTIFICOS

AÑO CANTIDAD PORCENTAJE

2010 7 7.87

2011 3 3.37

2012 7 7.87

2013 7 7.87

2014 16 17.98

2015 8 8.99

2016 10 11.24

2017 14 15.73

2018 4 4.49

2019 11 12.36

2020 2 2.25

TOTAL 89

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30 CUADRO DE LA CANTIDAD Y PORCENTAJE DE TESIS Y ARTICULOS CIENTIFICOS AGRUPADOS POR TECNICAS DE CULTIVO IN VITRO.

TESIS Y ARTICULOS

TECNICA CANTIDAD PORCENTAJE

Micropropagación 62 53.45

Embriogénesis Somática 7 6.03

Organogénesis 26 22.41

Callogénesis 21 18.10

TOTAL 116

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(42)

31 CUADRO DE LA CANTIDAD Y PORCENTAJE DE TESIS AGRUPADAS POR TECNICAS DE CULTIVO IN VITRO.

TESIS

TECNICA CANTIDAD PORCENTAJE

Micropropagación 10 90.91

Embriogénesis Somática 0 0.00

Organogénesis 1 9.09

Callogenesis 0 0.00

TOTAL 11

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32 CUADRO DE LA CANTIDAD Y PORCENTAJE DE ARTICULOS CIENTIFICOS AGRUPADOS POR TECNICAS DE CULTIVO IN VITRO.

ARTICULOS CIENTIFICOS

TECNICA CANTIDAD PORCENTAJE

Micropropagación 52 49.52

Embriogénesis Somática 7 6.67

Organogénesis 25 23.81

Callogénesis 21 20.00

TOTAL 105

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33 CUADRO DE LA CANTIDAD Y PORCENTAJE DE TESIS Y ARTICULOS CIENTIFICOS AGRUPADOS A NIVEL NACIONAL E INTERNACIONAL.

TESIS/ARTICULOS

NACIONAL/INTERNACIONAL CANTIDAD PORCENTAJE

Nacional 4 4.00

Internacional 96 96.00

TOTAL 100

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34 CUADRO DE LA CANTIDAD Y PORCENTAJE DE TESIS AGRUPADOS A NIVEL NACIONAL E INTERNACIONAL.

TESIS

NACIONAL/INTERNACIONAL CANTIDAD PORCENTAJE

Nacional 3 27.27

Internacional 8 72.73

TOTAL 11

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