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OFICINA DE CENTROS DE DIAGNÓSTICO Y PRODUCCIÓN

Unidad del Centro de Control de Insumos y Residuos Tóxicos MET-UCCIRT/Res-83 MÉTODO DE ENSAYO: DETERMINACIÓN DE

PLAGUICIDAS CLORADOS, FOSFORADOS Y PIRETROIDES EN MUSCULO DE POLLO POR CROMATOGRAFÍA DE GAS ACOPLADA A

ESPECTROMETRÍA DE MASA (GC/MS)

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Cristina Toro Vilchez Especialista UCCIRT

Orlando Lucas Aguirre Director UCCIRT

César de la Cruz Lezcano.

Director OCDP

Firma

Fecha 20-10-2021 25-10-2021 26-10-2021

TABLA DE CONTENIDO:

1. Objetivo.

2. Campo de Aplicación.

3. Referencias.

4. Definiciones.

5. Metodología.

6. Antecedentes.

7. Anexos.

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INTRODUCCIÓN

Es un método de ensayo que describe los pasos para la determinación de plaguicidas clorados, fosforados y piretroides en musculo de pollo, teniendo como referencias Evaluation of Two Fast and Easy Methods for Pesticide Residue Analysis in Fatty Food Matrixes, Steven j. Lehotay and Kateìina Maòtovská y el método AOAC Official Method 2007.01. "Pesticide Residues in Foods by Acetonitrile Extraction and Partioning with Magnesium Sulfate", conocida comúnmente como método QuEChERs cuyo procedimiento consiste en la extracción de los plaguicidas con acetonitrilo en medio tamponado con ácido acético-acetato de sodio seguido de una etapa de limpieza o clean-up combinada con amina primaria secundaria y sulfato de magnesio. Para el caso de matrices con alto contenido de grasa se adiciona C18 para finalmente ser analizados ccromatografía de gases acoplada a espectrómetro de masas (GC-MS o por GC-Ms-Ms).

1. OBJETIVO

El objetivo de este método es identificar y cuantificar simultáneamente varias clases de plaguicidas clorados, fosforados y piretroides por cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masa (GC-MS) presentes como residuos en muestras de tejido animal.

2. CAMPO DE APLICACIÓN

El método se aplica sobre matrices de tejido animal, para la determinación de plaguicidas clorados, fosforados y piretroides, listados en el Anexo 1.

Este método es aplicado por las personas autorizadas según registro REG-UCCIRT/Cal-11.

3. REFERENCIAS

Referencia de los documentos relacionados al procedimiento:

 PRO-UCCIRT/Lab-16 Procedimiento preparación y procesamiento de muestras agropecuarias.

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 ITR-UCCIRT/Res-07 Manejo del cromatógrafo de gases acoplado a espectrómetro de masas. SHIMADZU GCMS-QP2010.

 ITR-UCCIRT/Lab-07 Lavado de material de vidrio UCCIRT.

 ITR-UCCIRT/Lab-06 Manejo del Sistema de Gases y de la Unidad de Vacío de la UCCIRT.

 ITR-UCCIRT/Res-22 Instructivo manejo del procesador de muestras robot coupe.

 REG-UCCIRT/Lab-30 Registro de verificación de la balanza.

 REG-UCCIRT/Lab-61 Hoja de trabajo.

 REG-UCCIRT/Res-10 Registro de toma de muestra.

 REG-UCCIRT/Lab-29 Registro de materiales de referencia.

 REG-UCCIRT/Lab-28 Registro listado de estándares de laboratorio de la UCCIRT

 REG-UCCIRT/Lab-46 Registro de preparación de estándares

 REG-UCCIRT/Cal-11 registro Listado de Personal Autorizado para Realizar Ensayos

 Evaluation of Two Fast and Easy Methods for Pesticide Residue Analysis in Fatty Food Matrixes Steven J. Lehotay and Kateìina Maòtovská.

4. DEFINICIONES / ABREVIATURAS.

 Plaguicidas: También llamados agroquímicos, son sustancias químicas destinadas a matar, repeler, atraer, regular o interrumpir el crecimiento de seres vivos considerados plagas.

 Quechers: Terminología en inglés (quick, easy, cheap, effective, rugged and safe) que significa rápido, fácil, económico, efectivo, robusto y seguro.

 GC- MS: Cromatógrafo de gases acoplada a espectrometría de masas.

 MeCN: Acetonitrilo.

 MgSO4: Sulfato de magnésio anhidro.

 NaAc : Acetato de sodio.

 HOAc : Ácido acético glacial

 GCB: Carbón grafitizado.

 Fortificado; Matriz blanco previamente caracterizada a la que se le ha contaminado intencionalmente con una concentración conocida de antibiótico.

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5. METODOLOGÍA.

5.1 Principio del método

El método consiste en 4 procesos principales: proceso de preparación de la muestra, proceso de extracción que es realizada por partición líquido-liquido, proceso de limpieza realizado por extracción en fase dispersiva (Dispersive-SPE) y proceso de medición en equipos cromatógrafos acondicionados y calibrados.

El procedimiento consiste en tomar la muestra de tejido animal (musculo de pollo) molida y homogenizada, al cual se le adiciona acetonitrilo con ácido acético al 1% y una mezcla de sulfato de magnesio y acetato de sodio; el extracto obtenido es sometido a una limpieza o clean up en fase dispersiva (Dispersive-SPE) con sulfato de magnesio, amina primaria secundaria (PSA) y absorbente C18. Los residuos extraídos de plaguicidas (Compuestos organoclorados, organofosforados y piretroides) son determinados por cromatografía Gaseosa acoplada a espectrómetro de masas (GC-MS).

El método es ejecutado por especialista o técnico autorizado en el registro Listado de Personal Autorizado para Realizar Ensayos REG-UCCIRT/Cal-11.

5.2 Precauciones de seguridad en el laboratorio

Para la ejecución de este método de ensayo se deben usar los siguientes equipos de protección: guantes de nitrilo, mandil, lentes de protección y mascarillas respiradoras para la manipulación de solventes y reactivos evitando así posibles accidentes.

5.3 Precauciones analíticas

Los materiales lavados de acuerdo al instructivo ITR-UCCIRT/Lab-07 deben estar acordes para la realización del análisis.

Reactivos (ACS, ISO) y Estándares de referencia de pesticidas, típicamente por encima del 99% de pureza (por ejemplo, Chemservice, Accustandard, Dr. Ehrenstorfer), con certificado de análisis que incluya la estimación de incertidumbre.

Debe considerarse para todo el análisis las buenas prácticas de Laboratorio.

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5.4 Materiales y equipos.

5.4.1 Materiales:

 Tubos de polipropileno descartables de 15 y 50 ml con tapa rosca.

 Tabla de picar. Tazones de acero inoxidable

 Envases de vidrio para la conservación de la muestra o bolsas de polipropileno con cierre hermético.

 Cuchillos de acero inoxidables, espátulas.

 Micropipeta con volumen variable de 10-100 L

 Puntas para micropipetas de 1000-5000 l, de 10-100 L y de 100-1000 L

 Pipetas Pasteur.

 Gradillas para tubos.

 Viales de 2,0 ml para autosampler GC

 Frascos de vidrio ó Viales con tapa rosca de 10 y 20 mL.

 Jeringas descartables de 1 y 5 ml.

 Espátulas de acero inoxidable para el pesado de estándares de referencia.

 Fiolas o matraces volumétricos de 5 o 10 ml clase A.

 Frasco de vidrio de 1 Litro con tapa, para guardar soluciones de extracción.

 Columna capilar para GC: Rxt-5Ms 30m x 0,25um x 0,25 mm o equivalente.

 Kit de insumos para mantenimiento preventivo del GC-MS (septas, o-ring, ferrules, insertos, microjeringas del muestreador, filamentos, entre otros.

5.4.2 Equipos:

 Moledor de carne o Robot Coupe Blixer 3 u otra equivalente disponible

 Balanza analítica Digital (marca A & D, modelo GR 200) u otra equivalente disponible

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 Vortex Mixer (Marca : Barnstead Thermolyn , modelo: Maxi Mix II 8294c50 ). u otra equivalente disponible

 Centrífuga (puede ser Marca : Thermoelectron, modelo : Multi RF u otra similar disponible)

 Software GCMS Solution para equipo Shimadzu ú otro disponible.

 Cromatógrafo de gases acoplada a espectrómetro de masas Marca SHIMADZU Modelo: GCMS QP-2010 ú otro equipo disponible.

 Columna capilar para GC: Rxt-5Ms 30m x 0,25um x 0,25 mm o equivalente.

 Dispensadores volumétricos digitales de 2.5ml a 25 ml.

5.5 Reactivos :

5.5.1 Sustancias químicas

 Acetonitrilo - grado LC-MS o GC

 Acetona grado GC.

 Metanol grado GC.

 Ácido acético (HOAC) - Glacial

 1% HOAc en MeCN – preparar la solución con 10 ml glacial HOAC en 1 L MeCN.

 Cloruro de sodio grado reactivo.

 Sulfato de magnesio anhidro – pureza >98%: previo secado a 500º C mínimo por 5 horas para remover los ftalatos y agua residual.

 Amina primaria-secundaria (PSA)

 Carbón negro grafitizado (GCB)- para muestras con carotenoides y pigmentos.



Acetato de sodio anhidro.P.A.



Adsorbente C18

para muestras con contenido de grasas mayor al 1%

 Gas Helio UHP 5.0.

 Adsorbente Z-sep

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5.5.2 Estándares de referencia de pesticidas:



Estándares químicos de plaguicidas de alta pureza, de preferencia mayor a 99.0% de pureza

.(verificar en el registro listado de estándares de laboratorio de la UCCIRT, código REG-UCCIRT/Lab-28)



Mezclas de estándares en solución de concentraciones entre 100 a 2000 mg/L (verificar en el registro de preparación de estándares código REG-UCCIRT/Lab-46 )

 Estándar surrogado bromofos metilo a 2000 mg/L y prometrina 2000 mg/L.

 Estándar interno Trifenilfosfato 200 mg/L

5.5.3 Preparación de los estándares de la curva matriz de los plaguicidas analizados por GC-MS

a) Solución stock primaria, aprox. 2000 ng/uL.

Pesar 20 mg de los estándar químico de plaguicidas en una fiola de 10 mL (balón aforado), disolver en acetonitrilo con 0.1% de ácido acético. Disolver con ayuda del baño ultrasónico si es necesario y enrasar. Almacenar en frascos ámbar con tapa y superficie interna de teflón, a temperatura -20°C o menor y en lugar oscuro, estable un año u dos de acuerdo al pesticida

b)

Soluciones Mix Intermedia,

aprox. 40 ng/ul, 80 ng/ul, y 160 ng/ul.

Transferir una alícuota de 500 µL para 40 ng/ul; 1000 µL para 80 ng/ul ó 2000 µL para 160 ng/ul de las Soluciones stock primario de plaguicidas a una fiola de 25 mL, diluir y enrasar con acetonitrilo en ácido acético 0,1%.

Para el análisis por GC-MS se han considerado 3 grupos de mezclas. Verificar el registro de preparación de estándares código REG-UCCIRT/Lab 46

Mix 1 plaguicidas clorados Mix 2 plaguicidas fosforados Mix 7 piretroides

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c) Solución de fortificación (QC Spike 1), 40 ng/ul, 80 ng/ul, 160 ng/ul.

Transferir una alícuota de 1000 µL para 40 ng/ul, 2000 µL para 80 ng/ul ó 4000 µL para 160 ng/ul de las Soluciones stock primario de plaguicidas a una fiola de 50 mL, diluir y enrasar con acetonitrilo grado GC. Almacenar a temperatura (-10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable un año ver concentración final de cada estándar anexo 2.

Nota 1: para fiolas preparadas de menor volumen calcular el volumen adecuado.

5.5.4 Preparación del estándar interno

a) Solución stock de trifenilfosfato, 200 ng/uL.

Pesar 20 mg de los estándar químicos de plaguicidas en una fiola de 100 mL (balón aforado), disolver en acetonitrilo con 1% HOAC. Disolver con ayuda del baño ultrasónico si es necesario y enrasar con acetonitrilo en ácido acético 1%. Almacenar en frasco vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (-10° a - 25°C) y en lugar oscuro, estable 12 meses

b) Solución de trabajo de trifenilfosfato, 2 ng/ul.

Transferir una alícuota de 1000 µL de la solución stock 200 ng/ul a una fiola de 100ml, diluir y enrasar con ácido acético al 1 % en acetonitrilo. Almacenar en frasco vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (-10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable 6 meses

5.5.5 Preparación de estándar surrogado

a) Solución stock de bromofos metilo 2000 ng/uL.

Pesar 20 mg de los estándar bromofos metilo en una fiola de 10 mL (balón aforado), disolver en acetonitrilo con 0.1% HOAC. Disolver con ayuda del baño ultrasónico si es necesario y enrasar con acetonitrilo en ácido acético 0.1%. Almacenar en frasco

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vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (-10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable 12 meses.

b) Solución stock de Prometrina 2000 ng/uL.

Pesar 20 mg de los estándar prometrina en una fiola de 10 mL (balón aforado), disolver en acetonitrilo con 0.1% HOAC. Disolver con ayuda del baño ultrasónico si es necesario y enrasar con acetonitrilo en acido acético 0.1%. Almacenar en frasco vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (-10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable 12 meses.

c) Solución de trabajo de prometrina y bromofos metilo 20 ng/ul .

Transferir una alícuota de 250 µL de la solución stock 2000 ng/ul de bromofos metilo y 250 µL de la solución stock 2000 ng/ul de prometrina a una fiola de 25ml, diluir y enrasar con acetonitrilo. Almacenar en frasco vial ámbar con tapa y superficie interna de teflón a temperatura (-10° a -25°C) y en lugar oscuro, estable 3 meses.

5.5.6 Preparación de los estándares para la curva de calibración por GC-MS.

Se preparan de acuerdo a la siguiente tabla:

Tabla 1: Curva de calibración de plaguicidas

Nivel

Solución QC spike 40, 80 y 160 ng/uL.

Volumen en (µL)

Solución HAc 0,1%,ml

Volumen final, ml

Concentración ng/ µL

5 1000 1 10 4 / 8 / 16

4 500 1 10 2 / 4 / 8

3 250 1 10 1.0 / 2 / 4

2 100 1 10 0,4 / 0,8 / 1,6

1 50 1 10 0,2 / 0,4/ 0,8

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5.6 Procedimiento

5.6.1 Preparación de la muestra previa al análisis

Las muestras que ingresan con su respectiva hoja de distribución son verificadas, Todas las muestras deben estar previamente molidas y homogenizadas.

El proceso de molienda de la muestra es de acuerdo al procedimiento preparación y procesamiento de muestras agropecuarias código PRO-UCCIRT/Lab-16 y de acuerdo con el manual del procesador de alimentos.

5.6.2 Procedimiento de extracción de residuos de plaguicidas en la muestra

Para un análisis de rutina se elegirá mínimo una matriz blanco caracterizada como tal para la preparación de la curva matriz, controles de calidad blanco matriz y el Fortificado al nivel del LMR. Y duplicados cada 6 muestras.

a) Se pesa 5 g ± 0,1 g de muestra en tubos de centrifuga de polipropileno de 50 mL.

(por duplicado cada 10 muestras), una muestra control negativo o blanco de matriz, 01 o 02 blancos fortificados y un fortificado por lo menos al nivel más bajo de calibración o correspondiente al límite de cuantificación LOQ del plaguicida. Ver anexo 2 niveles de fortificaciones de cada plaguicida.

b) A todos los tubos adicionar 10 ml de agua ultrapura.

c) En las muestras fortificadas, la concentración de fortificación en lo posible debe ser menor o igual al LMR, usar una alícuota de la mezcla de estándares del nivel 3 o 4 de la tabla 1 de la curva de calibración, si se utiliza el nivel 3 usar una alícuota de 150 uL y si se usa el nivel 4 una alícuota de 75 uL, se homogeniza usando vortex y dejar en reposo por 15 minutos.

Nota 2: Normalmente se preparan fortificaciones en muestras blancos entre 5 a 200 ug/Kg de cada plaguicida.

d) A todas las muestras se adiciona el mix de estándares surrogado de bromofos metilo y prometrina a una concentración de 100 ug/Kg, tomando 75 uL de la solución de trabajo sec. 5.6.5 c).

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e) A todos los tubos adicionar 10 ml de solución de Acetonitrilo con 1% de ácido acético, homogenizar con ayuda de vortex por 1 minuto y luego adicionar la mezcla de sales (1,0 g acetato de sodio anhidro + 4 g sulfato de magnesio anhidro). Agitar con ayuda de vortex por 5 minutos para romper los grumos asegurando que se vuelva una mezcla homogénea, ocurre una reacción exotérmica por lo que se recomienda refrigerar por espacio de 15 minutos..

f) Se agita vigorosamente por 1 minuto adicional y luego se centrifuga mínimo 4000 rpm por 3 minutos.

5.6.3 Limpieza o Clean up de los extractos Para la curva de estándar:

Se transfiere 5 mL de extracto, para las muestras en investigación, muestras blanco, blanco de reactivos: Se transfiere 1 mL a un vial conteniendo 150 mg de MgSO4 , 150 mg de PSA y 50 mg C18 por cada mL de extracto.(robustez probar 150 de MgSO4, 50 PSA y 50mg C18 y 50 Z-sep)

Se mezcla vigorosamente con ayuda de vortex o manualmente por espacio de 30 a 60 segundos, luego se centrifuga entre 3000 rpm por 3 minutos.

5.6.4

Preparación de los extractos para análisis por

GC-MS

a) Se transfiere 500 uL del extracto limpio a un vial ámbar de 2ml del autosampler . b) A todos los viales se adiciona

50uL (o

100 uL si se usó 1000 uL de extracto limpio)

de Solución de trabajo de estándar interno de trifenilfosfato (2 ng/uL) y

25 ul (o

50

ul

si se usó 1000 uL de extracto limpio

)

de acetonitrilo para los blancos y muestras y mezclar.

c) Para los viales que servirán para la curva de calibración adicionar 25 (o 50 uL si se usó 1000 uL de extracto limpio) de cada uno de los 5 niveles de estándares preparados en el punto 5.6.6, para obtener concentraciones en el rango de 5 a

40

ng/g hasta 200 a 800 ng/g. de cada plaguicida en la matriz.

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d) Las concentraciones de los niveles cada estándar de calibración figuran en el anexo 2

Curva de calibración de plaguicidas

Nivel Concentración (ug/L o ng/g equivalente)

5 100 / 200 / 400

4 50 / 100 / 200

3 25 / 50 / 100

2 10 / 20 / 40

1 5 /10 /20

Finalmente transferir mínimo 500 uL de solución a viales para su lectura por el equipo cromatógrafo de gases con espectrómetro de masas GC-MS.

5.7 Optimización del método 5.7.1 Aptitud del sistema

Verificar la aptitud del sistema al inicio de la secuencia de corridas, después de un cambio considerable (cambio de columna o una reparación) empleando un estándar de concentración intermedia de la curva de calibración en solvente inyectado por triplicado.

Evaluar el %RSD de las respuestas de un analito (como mínimo) correspondientes a un mismo vial, el cual no debe ser mayor del 20% respecto al área o concentración y el %RSD de los tiempos de retención no exceda de 2.5%.

5.7.2 Condiciones Instrumentales:

Sistema Cromatográfico GC-MS:

Columna Capilar

Rtx® - 5MS 0,25mm ID x 0,25 um película x 30 m longitud o equivalente

Temperatura del Inyector: Gradiente desde 80 a 250 °C

volumen de inyección 2 µL

Detector: Espectrómetro de masas

Temperatura del Horno: Gradiente desde 75 a 300 °C *

Gas carrier: Helio UHP 5.0

Modo de inyección: PTV-Spliless

Modelo del instrumento GCMS-QP2010

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Gradiente de Temperatura*

Caudal

(mL/min)

Temperatura final (°C)

Tiempo de permanencia a la temperatura final (min)

- 75 2

10 230 1

10 280 10

*condiciones pueden variar de acuerdo a la columna.

5.7.3 Optimización del MS

Plaguicidas analizados por GC-Ms, modo de ionización EI (ionización electrónica) y modo de adquisición SIM (monitoreo de iones simple), Ver anexo 3 los iones monitoreados de cada plaguicida.

5.7.4 Secuencia de inyección: Se recomienda seguir el siguiente orden el cual puede variar en función a la necesidad del análisis:

Blanco Reactivo.

Blanco de matriz

Estándar de calibración Nivel 1 Estándar de calibración Nivel 2 Estándar de calibración Nivel 3 Estándar de calibración Nivel 4 Estándar de calibración Nivel 5 Blanco de reactivo.

Muestra 1 Muestra 2

Control positivo (a nivel LMR) Blanco de Solvente (Fase móvil).

Se recomienda reinyectar estándares de nivel intermedio o del mayor nivel después de un grupo de 10 muestras, El RSD debe ser menor o igual a 20% para la mayor parte de

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los plaguicidas. En caso contrario recalibrar nuevamente y solamente cuando se obtenga muestras con concentraciones mayores al límite de cuantificación LoQ.

5.8 Cálculo y expresión de resultados

El procesamiento de datos de las muestras, blancos, y estándares se realiza con el software GC-MS Solution en el cromatógrafo de Gases GCMS-QP2010- SHIMADZU.

Las concentraciones obtenidas de las muestras, fortificados y blancos son resultado del ploteo de los ratios en la curva de regresión.

Las fórmulas para calcular plaguicidas individuales determinados por GC-Ms son la siguientes:

Donde:

Cµg/kg CC: concentración de la muestra derivada de la curva de calibración matriz

fd: factor de dilución

fm : concentración final de la muestra, g/ml

fest: concentración final del extracto para la curva matriz, g/ml

5.8.1 Los plaguicidas que son mezclas de isómeros y son determinados por GC-MS se reportarán como promedio de los valores obtenidos en cada isómero.

Cuando exista interferencia de matriz y se decida cuantificar sólo con algunos de los isómeros se podrá reportar el resultado si el especialista lo justifica y coloca las observaciones respectivas en las hojas de trabajo

Para el caso de la Permetrina, cuando en el certificado tenga la información de la concentración de isómero Cis y trans, se calculará como suma de isómeros.

Fd = fest(g/ml) / fm(g/ml)

1000 / ) /

(

/ kg = Cug kg CCx fd mg

C

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La confirmación de los resultados se realizará a las muestras que presenten resultados mayores al límite máximo de residuos (LMR) y teniendo en cuenta las directrices del Codex se procede a evaluar la segunda transición MRM de confirmación para el análisis por LC/MS-MS.

Los pesos de muestras, concentraciones de estándares y resultados se registran en los formatos REG-UCCIRT/Res-10 y REG-UCCIRT/Lab-46 de acuerdo al procedimiento de ensayo PRO-UCCIRT/Lab-02.

La confirmación de los resultados se realizará a las muestras que presenten resultados mayores al límite máximo de residuos (LMR) y teniendo en cuenta las directrices del Codex.

5.8.2 Recuperación: En las muestras fortificadas el porcentaje de recuperación se calcula mediante la siguiente fórmula:

% Recuperación = Conc. d x 100 Conc. f

Donde:

Conc. d =Concentración experimental del plaguicida en la muestra fortificada, ng/g Conc. f = Concentración conocida adicionada del plaguicida, ng/g

Se reportará todos los plaguicidas cuya recuperación de muestras fortificadas se encuentren entre 50 a 130 % de recuperación ó según las cartas de control de calidad A criterio del analista se reportara solamente como screening los plaguicidas cuya recuperación se encuentra fuera de los límites aceptables en las recuperaciones (sobre todo cuando se obtiene recuperaciones mayor a 130%) siempre y cuando se evidencie linealidad en la curva matriz, y no se obtenga presencia en la muestra.

No se reportará los plaguicidas que presenten interferencia en la curva matriz y no se evidencie linealidad y además no se obtenga recuperación en la muestra fortificada.

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5.9 Control de Calidad

Parámetro de calidad

Interno Frecuencia Criterio de

aceptación Acción inmediata Acciones en casos reiterativos *

Blanco reactivo En cada lote de

muestras analizadas < LoD

Corroborar la lectura, inyectando

nuevamente, y verificar blanco matriz

Verificar solventes usados.

Repetir lote analizado, tres o más casos consecutivos, generan un SACP.

Blanco matriz En cada lote de

muestras analizadas < LMR

Cuando no se encuentre disponible, utilizar como adición estándar,

No Aplica

Calibración curva matriz mínimo 3 puntos

En cada lote de

muestras analizadas r> 0.95 Calibrar nuevamente

Verificar mantenimiento del equipo. Repetir la curva de calibración y las inyecciones de las muestras

Duplicados

Cada 10 muestras analizadas o en cada lote.

RSD <20% Repetir la muestra analizada

Verificar la homogeneidad de la muestra y repetir el análisis de los duplicados.

Muestra o blancos fortificados

En cada lote de muestras analizadas o después de 30 muestras

Recuperación 50%-130%**

Repetir la muestra analizada

Verificar la homogeneidad de la muestra y repetir análisis de la muestra fortificada.

Estándar de verificación de

calibración Cada 10 muestras

RSD < 20%

respecto a la calibración inicial

Calibrar nuevamente

Verificar estándares y fechas de vencimiento, calibrar nuevamente y repetir las inyecciones del lote analizado

Surrogados*** En todas las

muestras

Recuperación 60-130%

Corroborar

interferencias en la muestras.

Repetir la muestra que se encuentra fuera de especificación

* tres o más casos consecutivos generan una SACP

** Según el plaguicida y de acuerdo a las cartas de control.

*** A excepción de muestras de naranjas y/o mandarina, nueces

donde se registra interferencia de matriz para el plaguicida Prometrina y Bromofos metilo en GC-MS, o en algunas matrices nuevas serán evaluadas

LoD = Límite de detección del método LMR = tolerancias permitid

6. Antecedentes.

N.A.

7. Anexos

 Anexo 1: Plaguicidas analizados por GC-MS

 Anexo 2. Concentración de estándares y fortificaciones

 Anexo 3: Iones monitoreados en cada plaguicida.

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Anexo 1

Tabla 1 Plaguicidas analizados por GC-MS

Plaguicida Lote

% Pureza/

Potencia µg/ml

Código UCCIRT

Aldrín A0119163 504.0 483

Bromophos methyl BCBZ4013 98.7 458

Chlordane, cis A0129321 504.0 484

Chlordane, trans A0129321 502.0 484

Chlorpyrifos G130559 99.8 79

Chlorpyrifós-Methyl BCBS0018 99.6 385

Coumafos

Cyflutrin(sum) BCBV1615 99.3 64

Cyhalotrin, Lambda 6166600 98.5 479

Cypermetrin (sum) BCBW1786 98.4 80

Deltamethrin 100230 99.5 89

Diazinon 6225400 99.5 90

Dichlorvos 6155600 98.2 93

Dieldrin A0119163 504.7 483

Endosulfan alpha A0119163 504.2 483

Endosulfan beta A0119163 503.5 483

Endosulfansulfate A0119163 500.6 483

Endrin A0119163 504.7 483

Endrin aldehyde A0119163 504.7 483

Endrin keto A0119163 500.0 483

Fenvalerate y Esfenvalerate SZBF174XV 99.4 173

Fluvalinate, tau- 147902 95.0 176

HCH, alpha- A0119163 501.5 483

HCH-beta- A0119163 504.7 483

HCH-delta- A0119163 504.7 483

HCH-gamma- (lindane) A0119163 503.0 483

Heptachloro A0119163 504.0 483

Heptachloroepoxid isomero B A0119163 501.5 483

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Metamidofos G130424 99.6 191

Methoxychlor A0119163 503.5 483

p,p´-DDD A0119163 504.4 483

p,p´-DDE A0119163 502.0 483

p,p´-DDT A0119163 502.7 483

Permethrin Cis- A0129321 210.8 484

Permethrin Trans- A0129321 291.2 484

Trifenilfosfato ^G172525 99.4 201

Anexo 2

Tabla2: Concentración de estándares y fortificaiones

N° Plaguicida ^{1er nivel}_µg/kg ^{2er nivel}_µg/kg ^{3er nivel}_µg/kg ^{4er nivel}_µg/kg ^{5to nivel}_µg/kg _µg/kg^MF1 _µg/kg^MF2 _µg/kg^MF3

1 Aldrín 10.06 20.12 50.30 100.60 201.20 20.12 40.24 100.60

2 Bromophos methyl 10.07 20.13 50.34 100.67 201.35 20.13 40.27 100.67 3 Chlordane, cis 10.08 20.16 50.40 100.80 201.60 20.16 40.32 100.80 4 Chlordane, trans 10.04 20.08 50.20 100.40 200.80 20.08 40.16 100.40 5 Chlorpyrifos 10.53 21.06 52.64 105.29 210.58 21.06 42.12 105.29 6

Chlorpyrifós-

Methyl 10.11 20.22 50.55 101.09 202.19 20.22 40.44 101.09

7 Cyflutrin I 20.06 40.12 100.29 200.59 401.17 40.12 80.23 200.59 8 Cyflutrin II 20.06 40.12 100.29 200.59 401.17 40.12 80.23 200.59 9 Cyflutrin III 20.06 40.12 100.29 200.59 401.17 40.12 80.23 200.59 10 Cyflutrin IV 20.06 40.12 100.29 200.59 401.17 40.12 80.23 200.59 11

Cyhalotrin,

Lambda 10.05 20.09 50.24 100.47 200.94 20.09 40.19 100.47

12 Cypermetrin I 20.17 40.34 100.86 201.72 403.44 40.34 80.69 201.72 13 Cypermetrin II 20.17 40.34 100.86 201.72 403.44 40.34 80.69 201.72 14 Cypermetrin III 20.17 40.34 100.86 201.72 403.44 40.34 80.69 201.72 15 Cypermetrin IV 20.17 40.34 100.86 201.72 403.44 40.34 80.69 201.72 16 Coumafos 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 20.00 40.00 100.00 17 Deltamethrin 20.20 40.40 100.99 201.99 403.97 40.40 80.79 201.99 18 Deltamethrin 20.20 40.40 100.99 201.99 403.97 40.40 80.79 201.99

19 Diazinon 5.05 10.10 25.25 50.50 100.99 10.10 20.20 50.50

20 Dichlorvos 10.31 20.62 51.56 103.11 206.22 20.62 41.24 103.11

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21 Dieldrin 10.09 20.19 50.47 100.94 201.88 20.19 40.38 100.94 22 Endosulfan alpha 10.08 20.17 50.42 100.84 201.68 20.17 40.34 100.84 23 Endosulfan beta 10.07 20.14 50.35 100.70 201.40 20.14 40.28 100.70 24 Endosulfansulfate 10.01 20.02 50.06 100.12 200.24 20.02 40.05 100.12

25 Endrin 10.09 20.19 50.47 100.94 201.88 20.19 40.38 100.94

26 Endrin aldehyde 10.09 20.19 50.47 100.94 201.88 20.19 40.38 100.94 27 Endrin keto 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 20.00 40.00 100.00 28 Esfenvalerate 10.29 20.58 51.44 102.88 205.76 20.58 41.15 102.88 29 Fenvalerate 10.29 20.58 51.44 102.88 205.76 20.58 41.15 102.88 30 Fluvalinate, tau-I 10.17 20.33 50.83 101.65 203.30 20.33 40.66 101.65 31 Fluvalinate, tau-II 10.17 20.33 50.83 101.65 203.30 20.33 40.66 101.65 32 HCH, alpha- 10.03 20.06 50.15 100.30 200.60 20.06 40.12 100.30 33 HCH-beta- 10.09 20.19 50.47 100.94 201.88 20.19 40.38 100.94 34 HCH-delta- 10.09 20.19 50.47 100.94 201.88 20.19 40.38 100.94 35

HCH-gamma-

(lindane) 10.06 20.12 50.30 100.60 201.20 20.12 40.24 100.60 36 Heptachloro 10.08 20.16 50.40 100.80 201.60 20.16 40.32 100.80

37

Heptachloroepoxid isomero B

10.03 20.06 50.15 100.30 200.60 20.06 40.12 100.30

38 Metamidofos 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 20.00 40.00 100.00 39 Methoxychlor 10.07 20.14 50.35 100.70 201.40 20.14 40.28 100.70 40 p,p´-DDD 10.09 20.18 50.44 100.88 201.76 20.18 40.35 100.88 41 p,p´-DDE 10.04 20.08 50.20 100.40 200.80 20.08 40.16 100.40 42 p,p´-DDT 10.05 20.11 50.27 100.54 201.08 20.11 40.22 100.54 43 Permethrin Cis- 4.22 8.43 21.08 42.17 84.34 8.43 16.87 42.17 44 Permethrin Trans- 5.82 11.65 29.12 58.23 116.46 11.65 23.29 58.23 45 Prometryn 10.00 20.00 50.00 100.00 200.00 40.00 80.00 200.00

46 TPP 1.00 1.00 1.00 1.00 1.00 0.10 0.20 0.50

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Anexo 3

Tabla 3: Iones monitoreados en cada plaguicida

N° Plaguicida Formula Masa

Isotopica Tr aprox. m/z 1 cuantificación

m/z 2 referencia

m/z 3 referencia

2 Aldrin ^C12H8Cl6 361.9 18.16 261 265 263

16 Bromophos methyl C8H8BrCl2O3PS 364 18.51 331 339 333

27 Chlordane, cis ^C10H6Cl8 405.8 19.58 373 375 377

28 Chlordane, trans ^C10H6Cl8 405.8 19.89 373 375 377

33 Chlorpyrifos C9H11Cl3NO3PS 350.6 17.98 314 197 316

34 Chlorpyrifós-Methyl C7H7Cl3NO3PS 320.89 17.01 286 288 79

38 Cyflutrin I C22H18Cl2FNO3 433.1 25.98 163 165 206

39 Cyflutrin II C22H18Cl2FNO3 433.1 26.13 163 165 206

40 Cyflutrin III C22H18Cl2FNO3 433.1 26.24 206 165 163

41 Cyflutrin IV C22H18Cl2FNO3 433.1 26.33 163 165 206

42 Cyhalotrin, Lambda C23H19ClF3NO3 449.1 24.09 181 197 208

43 Cypermetrin I C22H19Cl2NO3 415 26.54 181 163 165

44 Cypermetrin II C22H19Cl2NO3 415 26.72 181 163 165

45 Cypermetrin III C22H19Cl2NO3 415 26.84 181 163 165

46 CypermetrinIV C22H19Cl2NO3 415 26.91 181 163 165

48 Coumafos C14H16ClO5PS 362 362 364 226

49 Deltamethrin I C22H19Br2NO3 503 29.73 181 253 251

50 Deltamethrin II C22H19Br2NO3 503 30.28 181 253 251

51 Diazinon C12H21N2O3PS 304.1 15.98 179 137 304

55 Dichlorvos C4H7Cl2O4P 221 9.18 109 185 145

57 Dieldrin ^C12H8Cl6O 377.9 20.51 263 277 279

60 Endosulfan alpha C9H6Cl6O3S 403.8 19.90 237 239 241

61 Endosulfan beta C9H6Cl6O3S 403.8 21.19 195 241 207

62 Endosulfansulfate C9H6Cl6O4S 419.8 22.01 387 274 420

63 Endrin ^C12H8Cl6O 377.9 20.51 263 261 265

64 Endrin aldehyde C12H10Cl6O 379.9 21.50 345 248 250

65 Endrin keto ^C12H8Cl6O 377.9 23.01 317 315 319

78

Fenvalerate y

Esfenvalerate C28H22ClNO3

419 28.36 167 125 181

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79

Fenvalerate y

Esfenvalerate C28H22ClNO3

419 28.85 167 125 181

88 Fluvalinate, tau- I C26H22ClF3N2O3 502 28.65 250 252 181

89 Fluvalinate, tau- II C26H22ClF3N2O3 502 28.82 250 252 181

91 HCH, alpha- ^C6H6Cl6 287.9 15.10 219 183 217

92 HCH-beta- ^C6H6Cl6 287.9 15.60 181 183 219

93 HCH-delta- ^C6H6Cl6 288 16.37 219 183 217

94 HCH-gamma- (lindane) ^C6H6Cl6 287.9 15.83 183 217 219

95 Heptachloro ^C10H5Cl7 288 17.37 272 100 274

96

Heptachloroepoxid isomero

B ^C10H5Cl70 389.3 19.04 353 355 351

104 Metamidofos ^C2H8NO2PS 141 94 95 141

105 Methoxychlor C16H15Cl3O2 344 23.18 228 227 212

114 p,p-DDD ^C14H10Cl4 318 21.24 235 165 237

115 p,p-DDE ^C14H8Cl4 315.9 20.32 318 316 248

116 p,p-DDT ^C14H9Cl5 351.9 22.06 235 237 236

121 Permethrin Cis- C21H20Cl2O3 390 25.18 183 163 165

122 Permethrin Trans- C21H20Cl2O3 390 25.35 183 163 165

135 Prometryn ^C10H19N5S 241.1 17.33 184 226 105

163 TPP ^C18H15O4P 326 22.39 326 325 215