INTERFERÊNCIA DO VOLUME DE SANGUE EM TUBOS DE EDTA SOBRE INDICADORES HEMATOLÓGICOS

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(1)INTERFERÊNCIA DO VOLUME DE SANGUE EM TUBOS DE EDTA SOBRE INDICADORES HEMATOLÓGICOS. Yulia Torres 1 Elise dos Santos Guerra 2 Mirela Noro 3 Diogo Ferreira Bicca 4. Resumo: O estudo teve como objetivo identificar a interferência do volume de sangue em tubos com o anticoagulante EDTA sobre parâmetros hematológicos em cães. Foram utilizados quatro cães adultos, saudáveis e de raças variadas, dos quais foram coletados 7 mL de sangue. O sangue coletado foi imediatamente depositado e homogeneizado em 3 tubos de EDTA industriais para 4 mL, nos seguintes volumes: 4 mL, 2 mL e 1 mL para cada animal, sendo realizado um hemograma completo em cada tubo (eritrograma, leucograma, plaquetas, e proteínas plasmáticas totais [PPT]. De cada amostra foi realizado o esfregaço sanguíneo, no intuito de avaliar a morfologia celular e a contagem diferencial de leucócitos, por meio de microscopia ótica em objetiva de imersão. Observou-se que amostras com menor volume de sangue que o recomendado afeta os valores hematológicos, sendo a interferência mais marcada nos tubos com 1 mL de sangue, onde observou-se uma diminuição do hematócrito e do volume corpuscular médio (VCM), aumento da concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) e diminuição da proteinemia, indicando uma desidratação eritrocitária. Morfologicamente também observou-se maior ocorrência de alterações eritrocitárias manifestadas por crenação, microcitose e presença de vacuolização nas amostras com menor volume de sangue, ressaltando a importância de respeitar o volume recomendado pelo fabricante do tubo com a finalidade de obter resultados confiáveis.. Palavras-chave: Anticoagulante, EDTA, Hemograma, Canino.. Modalidade de Participação: Iniciação Científica. INTERFERÊNCIA DO VOLUME DE SANGUE EM TUBOS DE EDTA SOBRE INDICADORES HEMATOLÓGICOS 1 Aluno de graduação. [email protected]. Autor principal 2 Acadêmica do curso de medicina veterinária. [email protected]. Co-autor 3 Docente. [email protected]. Orientador 4 Biólogo mestrando no programa de pós graduação em bioquímica. [email protected]. Co-orientador. Anais do 10º SALÃO INTERNACIONAL DE ENSINO, PESQUISA E EXTENSÃO - SIEPE Universidade Federal do Pampa | Santana do Livramento, 6 a 8 de novembro de 2018.

(2) INTERFERÊNCIA DO VOLUME DE SANGUE EM TUBOS DE EDTA SOBRE INDICADORES HEMATOLÓGICOS 1 INTRODUÇÃO O hemograma (do grego: haemo, sangue e grama, escrito) é um exame fácil, prático e econômico para obter informações sobre a saúde do paciente. Fornece dados que direcionam o diagnóstico e conduta clínica, mais precisos (GARCIA-NAVARRO, 2005). No hemograma são avaliadas três populações celulares: os leucócitos (série branca ou leucograma), as hemácias (série vermelha ou eritrograma) e as plaquetas (série plaquetária). O leucograma compreende a contagem global e diferencial de leucócitos. As células normais do sangue periférico que constituem o leucograma são: neutrófilos segmentados, linfócitos, monócitos, eosinófilos e basófilos. O eritrograma inclui a contagem de hemácias, a dosagem de hemoglobina corpuscular média (HCM), da concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) e do índice de aniscitose eritrocitária (RDW), que indica variação de tamanho e a avaliação morfológica das hemácias. A série plaquetária inclui a contagem e a avaliação morfológicas das plaquetas (FAILACE, 2003). Devido a sua importância, o hemograma é o exame mais comum na rotina dos laboratórios de análises clínicas, razão pela qual o controle de qualidade das amostras na rotina laboratorial e na pesquisa deve ser rigoroso e contínuo de forma a entregar resultados confiáveis do estado de saúde do paciente. Entre as várias e mais frequentes inadequações apresentadas pelas amostras na rotina hematológica, está a diferença na proporção do volume de sangue coletado em relação ao recomendado nos tubos com ácido etilenodiaminotetracético (EDTA) industrializados, considerado o anticoagulante de eleição para análises hematológicas (WITTWER, 2012). Tendo em vista que esta condição pode conduzir à distorção da relação sangue e anticoagulante e, consequentemente a resultados possivelmente alterados, o trabalho teve como objetivo avaliar o impacto que diferentes proporções de sangue em tubos de EDTA sobre os valores hematológicos em caninos. 2 METODOLOGIA Para o estudo foram utilizados quatro cães adultos, saudáveis, sendo todas fêmeas, de peso corporal, idade e raças variadas. Após antissepsia, as amostras foram coletadas por venopunção jugular com seringas de 10 mL e agulha 30x8. O sangue coletado foi imediatamente depositado e homogeneizado em 3 tubos de EDTA industriais (4 mL) nos seguintes volumes: 4 mL, 2 mL e 1 mL para cada animal, usou-se o tubo com 4 mL considerado o controle de cada animal. Realizou-se em um lapso de 1 a 2 horas após a obtenção da amostra um hemograma completo (de contagem de eritrócitos, concentração de hemoglobina, determinação do VCM e CHCM, contagem de plaquetas e leucócitos totais) mediante o analisador Hematológico Veterinário da SYSMEX, modelo pocH-100iV Diff. O hematócrito e proteína plasmática total (PPT) foram mensurados pela técnica de micro hematócrito e refratometria, respectivamente. De cada amostra foi realizado o esfregaço sanguíneo, no intuito de avaliar a morfologia celular eritrocitária e a contagem diferencial de leucócitos, por meio de microscopia ótica em objetiva de imersão (1.000x, Olympus CX)..

(3) Para a análise da morfologia celular, fora adotado como critério as alterações das membranas celulares e presença ou não de inclusões citoplasmáticas, cujas frequências foram classificadas como normal, alteração leve, moderada ou intensa. Os resultados foram analisados mediante uma ANOVA de amostras repetidas ou por Friedman sendo os volumes contrastados pelo teste de Tukey ou Dunns, usando o software Graphpad Prism, sendo considerado significativo P<0,05. 3 RESULTADOS E DISCUSSÃO Observou-se uma redução do hematócrito nas amostras de 2 mL e de forma mais marcada nas amostras de 1 mL (Tabela 1, Figura 1, P<0,05). Os valores de CHCM também foram afetados pelo volume de sangue, encontrando-se valores superiores no tubo com 1 mL de sangue (P<0,05, Tab. 1). A este respeito se descreve que o uso do EDTA em excesso pode ocasionar diminuição do hematócrito e do volume corpuscular médio (VCM), além de aumentar a concentração de hemoglobina corpuscular média (CHCM) sem interferir no resultado da concentração de hemoglobina (DOYLE et al., 1967; PENNY et al., 1970). Isso deve-se provavelmente pelo fato de o EDTA ser um sal, o que faz com que altere a osmolaridade no plasma sanguíneo provocando uma desidratação das células por efeito osmótico. Tabela 1. Valores médios dos indicadores hematológicos em diferentes volumes de amostra depositadas em tubos de EDTA para 4 mL. Parâmetro Eritrócitos (x 106 / Hemoglobina (g/dL) Hematócrito (%) VCM (fL) CHCM (g/dL) Plaquetas (x 103 / PPT (g/dL) Leucócitos (x 103 / Neutrófilos (x 103 / Linfócitos (x 103 / Monócitos (x 103 / Eosinófilos (x 103 /. 4 mL 7,75 ± 0,21 18,3 ± 0,50 54,0 ± 1,41 a 69,6 ± 1,09 a 33,9 ± 0,51b 293 ± 64,5 6,95 ± 0,44 a 8,25 ± 3,27 5,19 ± 2,79 2,00 ± 0,81 433 ± 130 622 ± 222 a. 2 mL 7,78 ± 0,27 18,4 ± 0,62 51,3 ± 1,26 b 68,9 ± 0,61 b 34,3 ± 0,43 ab 289 ± 61,1 6,95 ± 0,44 a 8,32 ± 3,23 5,33 ± 2,55 2,25 ± 0,89 330 ± 134 407 ± 201 b. 1 mL 7,83 ± 0,33 18,4 ± 0,73 48,8 ± 2,06 c 67,7 ± 1,10 c 34,8 ± 0,51 a 284 ± 68,9 6,80 ± 0,49 b 8,70 ± 3,26 5,29 ± 2,03 2,47 ± 1,09 435 ± 383 508 ± 178 ab. P >0,05 >0,05 0,0030 0,0007 0,0489 >0,05 0,0156 >0,05 >0,05 >0,05 >0,05 0,0417.

(4) Figura 1. Distribuição (média e desvio padrão) dos valores do eritrograma e da proteína plasmática total (PPT) em amostras com diferentes volumes de sangue em tubos de EDTA em caninos. Em um estudo realizado com trinta cães da raça beagle determinou a influência do excesso de EDTA nos parâmetros hematológicos, utilizando 1,8 mg de EDTA/mL de sangue em tubos de 3 mL, e de 5,4 mg de EDTA/mL de sangue usando 1 mL de sangue, observando uma diminuição do hematócrito e do VCM e aumento no CHCM (NEMEC et al., 2005). Também, observou-se uma diminuição nos valores médios da PPT nos tubos com 1 mL de sangue, entretanto não se observou alterações no tubo de 2 mL. A diminuição da PPT no tubo de 1 mL provavelmente ocorreu devido ao extravasamento de água intracelular para o plasma sanguíneo, provocando um efeito de diluição das proteínas plasmáticas. Por outro lado, não foram observadas diferenças na contagem eritrócitária, concentração de hemoglobina (Figura 1), ou nos parâmetros do leucograma e plaquetas (Figura 2), entre os diferentes volumes das amostras. Resultados similares foram observados em outro estudo que não observou alterações na contagem diferencial de leucócitos (NEMEC et al., 2005)..

(5) Figura 2. Distribuição (média e desvio padrão) dos valores do leucograma e das plaquetas em amostras com diferentes volumes de sangue em tubos de EDTA em caninos. No que diz respeito a morfologia celular, observou-se uma maior apresentação de alterações eritrocitárias nas amostras com menor volume de sangue, sendo as alterações mais intensas observadas em maior proporção nas amostras de 1 mL (Tabela 2). As quais apresentaram crenação, microcitose e presença de vacuolização. Tabela 2. Número de amostras (%) com alterações morfológicas eritrocitárias. 4 mL 2 mL 1 mL. Normal 2 (50%) 2 (50%) 0 (0%). Leve 2 (50%) 0 (0%) 0 (0%). Moderado 0 (0%) 1 (25%) 2 (50%). Intenso 0 (0%) 1 (25%) 2 (50%). CONSIDERAÇÕES FINAIS Conforme os dados obtidos no estudo, foi possível concluir que baixos volumes de sangue em tubos de EDTA interferem nos resultados hematológicos do eritrograma e na proteínas plasmática total gerando resultados inexatos. Desta forma, ressaltamos a importância de respeitar o volume de amostra de acordo a prescrição dos tubos com a finalidade de manter a confiabilidade diagnóstica dos exames laboratoriais..

(6) BIBLIOGRAFIA DOYLE, C.T. et al. The effect of blood volume and choice of anticoagulant on the PCV, MCHC and total white cell count. Irish Journal of Medical Science, v.42, n.9, p.429-435, 1967. FAILACE, R. Hemograma. In:_____. Hemograma, manual de interpretação. 4 ed. Porto Alegre: Artmed, 2003, Cap. 1, p.15-37. GARCIA-NAVARRO, C. E. K. Hemograma. In:_____. Manual de Hematologia Veterinária. 2 ed. São Paulo; Varela, 1995, Cap. 5, p. 79-100. NEMEC, A. et al. The effect of high anticoagulante k3-edta concentration on complete blood count and white blood cell differential counts in healthy beagle dogs. Slovenian Veterinary Research, v. 42, n.3/4, p.65-70, 2005. WITTWER, F. Manual de patologia clínica veterinária. 2 ed. Valdivia, Chile; 2012..

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