“Efecto de las diferentes concentraciones de Extracto de Neem y Caldo Sulfocalcico sobre Beauveria bassiana en condiciones de laboratorio”

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(1)DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT IC. A. Y. CO. M. UN I. CA. CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE. CA. CI. Ó. N. BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. M. UN I. Dr. Orlando Velásquez Benites. RM. ÁT IC. A. Y. CO. Rector de la Universidad Nacional de Trujillo. FO. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. SI S. TE. M. AS. DE. IN. Vice – Rector Académico de la Universidad Nacional de Trujillo. DE. Dra. Flor Marlene Luna Victoria Mori. DI. RE. CC. IO. N. Vice – Rector Administrativo de la Universidad Nacional de Trujillo. Santiago Uceda Duclos Secretario General de la Universidad Nacional de Trujillo. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Ó. N. DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. CA. CI. Dr. Hermes Mario Escalante Añorga.. CO. M. UN I. Decano de la Facultad de Ciencias Biológicas. ÁT IC. A. Y. Dr. César Jara Campos. DE. IN. FO. RM. Secretario de la Facultad de Ciencias Biológicas. AS. MsC. Pedro Alvarado Salinas. Dr. Juan J. Guevara Gonzales. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. Director de la Escuela Académico Profesional de Microbiología y Parasitología. DI. RE. Jefe del Departamento Académico de la Escuela de Microbiología y Parasitología. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. Ó. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. CA. CI. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados. UN I. y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presentó a vuestra consideración y. M. claro discernimiento la tesis titulada: Efecto de las diferentes concentraciones de. CO. Extracto de Neem y Caldo Sulfocalcico sobre Beauveria bassiana en condiciones de. RM. ÁT IC. A. Y. laboratorio.. FO. Esperando que vuestro criterio sea de comprensión por errores u omisiones. TE. M. AS. DE. IN. cometidos en la elaboración del presente trabajo, me someto a vuestro dictamen. ______________________________________ Br. Leydi Karol Zapata Cabañas. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. Trujillo, Abril del 2013. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. ASESOR. CA. CI. El que suscribe, Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg; profesor asesor de la. UN I. presente tesis titulada “Efecto de las diferentes concentraciones de Extracto de Neem y. Y. CO. M. Caldo Sulfocalcico sobre Beauveria bassiana en condiciones de laboratorio”. ÁT IC. A. CERTIFICA. RM. Que ésta investigación ha sido ejecutada de conformidad con su correspondiente. FO. proyecto y con las debidas orientaciones brindadas al tesista. En cuanto al informe, ha. IN. sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las observaciones y sugerencias. DE. alcanzadas por lo que autorizo a la Bachiller Leydi Karol Zapata Cabañas, continúe con. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. los procedimientos según los fines.. RE. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg. DI. Asesor. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. MIEMBROS DEL JURADO. CA. CI. ______________________________. M. UN I. Ms.C. Gerardo Alayo Espinoza. RM. ÁT IC. A. Y. CO. PRESIDENTE. FO. _______________________________. DE. IN. MsC. Juan Héctor Wilson Krugg. __________________________________ Ms. C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. SECRETARIO. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACION. Ó. N. Los profesores que suscriben, Miembros del Jurado Examinador, declaran que la. CA. CI. presente tesis ha cumplido con los requerimientos formales y fundamentales, siendo. A. Y. CO. M. UN I. APROBADO POR UNANIMIDAD. ÁT IC. ______________________________. FO. RM. Ms.C. Gerardo Alayo Espinoza. TE. M. AS. DE. IN. PRESIDENTE. Ms C. Juan Héctor Wilson Krugg SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. _______________________________. __________________________________ Ms. C. Eduardo MuñozGanoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. Ó. N. Mi profundo agradecimiento a mi asesor y amigo. CA. CI. Mblgo. Juan Héctor Wilson Krugg por brindarme su. UN I. confianza, apoyo desinteresado y asesoramiento para la. RM. ÁT IC. A. Y. CO. M. realización de este proyecto.. FO. A mis queridos amigos porque siempre han estado. IN. cuando más los necesité. Son la familia que yo elegí y. DE. SI S. TE. M. AS. DE. estoy feliz de tenerlos siempre conmigo.. DI. RE. CC. IO. N. Finalmente a las personas que creyeron en mi para poder realizar este trabajo, que con su apoyo moral y buenos deseos han sido mi aliento para terminar este proyecto.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Ó. N. DEDICATORIA. CA. CI. A Dios que con su infinito amor ha sabido. UN I. guiarme y darme la fuerza necesaria para. ÁT IC. A. Y. CO. M. vencer cualquier adversidad.. A mi familia en Cristo por su apoyo, amor y. RM. comprensión. A mi familia terrenal por criarme con. M. AS. DE. IN. FO. tanto amor y con el mejor ejemplo a seguir.. SI S. TE. A mis padres porque siempre han dado más de lo necesario para mí y mis hermanas, porque han sabido sacarme. debilidades.. RE. CC. IO. N. DE. adelante dándome ánimo y fortaleciéndome en mis. DI. A todos ellos gracias, por que ahora están orgullosos de mí.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se determinó el Efecto de las diferentes concentraciones de Extracto de Neem y Caldo. N. Sulfocalcico sobre Beauveria bassiana en condiciones de laboratorio. Se trabajó con. CI. Ó. concentraciones de 5 ppm, 10 ppm, 15 ppm y 12.5 ppm y 37.5 ppm. respectivamente;. CA. además del control (0 ppm.). Para evaluar el efecto de las diferentes concentraciones de. UN I. Extracto de Neem y Caldo Sulfocalcicosobre la germinación de B. bassiana, se inoculó. CO. M. 90 uL de una suspensión de 1 x 103 con. /mL por puntura en el centro de la placa con. Y. las diferentes concentraciones de los insecticidas; además, del grupo control,. ÁT IC. A. incubándose a 25º C y realizándose el recuento de conidios germinadas y no germinadas a las 24 horas para determinar el porcentaje de germinación correspondiente a cada. RM. concentración de Extracto de Neem y Calcio Sulfocalcico; además del control. Para. FO. evaluar el efecto delos insecticidas sobre el crecimiento, se sembró por puntura de un. DE. IN. cultivo monospóricos de B. bassiana; en el centro de las placas que contenían agar papa,. AS. incubándose a 25ºC durante 7 días para el Caldo Sulfocalcico y 11 días para el Extracto. M. de Neem, realizándose 4 ensayos por cada concentración incluyendo el control. Los. SI S. TE. resultados indican que en las concentraciones trabajadas para el insecticida Caldo Sulfocalcico existe un efecto fungistático en la germinación, y presenta inhibición en el. DE. crecimiento; al igual que el insecticida Extracto de Neem que presenta inhibición. IO. N. significativa en la germinación y el crecimiento de Beauveria bassiana a las diferentes. CC. concentraciones., por lo que se concluye que ambos insecticidas inhiben la germinación. DI. RE. y el crecimiento de B. bassiana; por lo que no podrían ser utilizados. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE pag. ii. Autoridades de la Facultad de Ciencias Biológicas. iii. CI. Ó. N. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo. iv. CA. Presentación. UN I. Asesor. CO. M. Miembros del Jurado. Y. Aprobación. ÁT IC. A. Agradecimiento Dedicatoria. RM. Resumen. FO. Índice. IN. INTRODUCCIÓN. x xi 1. M. 25. DE. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 31. N. ANEXOS. ix. 24. SI S. CONCLUSIONES. viii. 19. TE. DISCUSIÓN. vii. 14. AS. RESULTADOS. vi. 9. DE. MATERIAL Y MÉTODOS. v. CC. IO. Anexo 1. Porcentajes de germinación de Beauveria bassiana en diferentes concentraciones de Caldo Sulfocalcico a las 24 horas de evaluación. 32. DI. RE. Anexo 2.Crecimiento radial (mm) de Beauveria bassiana en el grupo control de Caldo Sulfocalcico durante 7 días de evaluación 33 Anexo 3.Porcentajes de germinación de Beauveria bassiana en diferentes concentraciones de Extracto e Neem a las 24 horas de evaluación. 34. Anexo 4.Crecimiento radial (mm) de Beauveria bassiana en el grupo control de Extracto de Neem durante 11 días de evaluación 35. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 5.Análisis de varianza y de Tukey (post varianza) de los porcentajes de germinación de Beauveria bassiana a diferentes concentraciones de Caldo 36. CA. CI. Anexo 6.Análisis de varianza y de Tukey (post varianza) de los porcentajes de crecimiento de Beauveria bassiana a diferentes concentraciones de Caldo. Ó. N. Sulfocalcico. UN I. Sulfocalcico. 37. CO. M. Anexo 7.Análisis de varianza y de Tukey (post varianza) de los porcentajes de germinación de Beauveria bassiana a diferentes concentraciones de Extracto de 38. A. Y. Neem. ÁT IC. Anexo 8. Análisis de varianza y de Tukey (post varianza) de los porcentajes de. RM. crecimiento de Beauveria bassiana a diferentes concentraciones de Extracto de 39. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. DE. IN. FO. Neem. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN Desde el inicio de la agricultura, las plagas han sido importantes competidores. N. del hombre, logrando reducir la cosecha de sus cultivos hasta un cien por ciento en. CI. Ó. ciertas ocasiones. Con el transcurso del tiempo, el hombre evolucionó hacia sistema de. CA. cultivo, los cuales incluían muchas prácticas de control físico y cultural que se derivan. UN I. de métodos empíricos tales como: destrucción de rastrojos, fechas de siembra,. CO. M. alternancia de cultivos, manejo de agua, uso de fertilizantes y pesticidas.1. Y. En zonas en las que existe una alta incidencia de enfermedades, el agricultor se. A. ve forzado a utilizar productos químicos como principal estrategia de combate, debido a. ÁT IC. las agresividades de los patógenos2,3, lo cual incrementa la contaminación ambiental, el. RM. daño a la salud humana y eleva los costos de producción. 4, 5. . El uso indiscriminado de. FO. los pesticidas se debe al desconocimiento generalizado que existe entre los agricultores,. DE. IN. sobre las técnicas apropiadas de manejo del cultivo, especialmente en lo que se refiere a. AS. plagas y enfermedades6, 7.. M. Conocido es que el uso de control químico como única alternativa y en forma. SI S. TE. excesiva, dirigido hacia plagas claves ha provocado, a nivel mundial, una serie de consecuencias ecológicas y económicas negativas tales como: selección de plagas. DE. resistentes, destrucción de enemigos naturales, resurgimiento de plagas secundarias a. IO. N. nivel de plagas primarias, contaminación de alimentos.1, 8Padrón et al. menciona que los. CC. insecticidas en el campo solo deben usarse como última medida, cuando las otras. DI. RE. alternativas hayan sido agotadas.9 En el campo agrícola a nivel mundial, los plaguicidas se han utilizado. generalmente en forma unilateral, indiscriminada y desmedida. Su uso es unilateral, porque pocas veces los agricultores consideran otras opciones de combate; indiscriminada, porque la mayoría son productos inespecíficos, poco o nada selectivos; 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. desmedido, puesto que se aplican en dosis más altas y con mayor frecuencia de lo necesario y cuando el nivel de daño de las plagas no justifica su uso.10 Si bien los insecticidas químicos han permitido un control eficaz de las plagas,. Ó. N. se ha establecido que estos compuestos son altamente perjudiciales para la salud. CI. humana y los ecosistemas; además, por su persistencia en el medio ambiente favorecen. UN I. CA. la selección de insectos plaga resistentes a ellos, lo que ha motivado el uso de dosis cada. M. vez mayores o de productos cada vez más tóxicos. Esto ha generado mucha. CO. preocupación en el ámbito mundial y en la actualidad se ha empezado a trabajar para. Y. limitar la aplicación de los insecticidas químicos y promover el manejo integrado de. ÁT IC. A. plagas que incluye otras formas de control, efectivas y menos contaminantes, tales como. RM. trampas, plásticos y el control biológico 11.. FO. El Caldo Sulfocalcico (Azufre-calcio), es un acaricida y fungistático de amplio. IN. espectro, además de nutriente foliar, ya que aporta azufre y calcio a las plantas. DE. fortaleciendo su estructura foliar. 12 El azufre controla algunas royas, tizones foliares y. AS. pudriciones de los frutos; el calcio da resistencia a enfermedades de la raíz y del tallo;. TE. M. principalmente en el cultivo del café y en cítricos.13. SI S. El Caldo Sulfocálcico esta reportado como un excelente fungicida inorgánico de. DE. mejor efecto preventivo el cual fue evaluado por su eficiencia en cuanto a sanidad. N. observada en los cultivos, generalmente se utiliza para enfermedades causada por. CC. IO. hongos y bacterias, también controla varios insectos, ácaros, trips, cochinillas, brocas,. RE. sarnas, royas, algunos gusanos masticadores, huevos y algunas especies de pulgones;. DI. en todo tipo de cultivo; excepto en las cucurbitáceas, ya que las elimina como si fuera un mala hierba.14, 15 El aceite vegetal de Neem es un controlador natural muy importante, que tiene como componentes a extractos puros de los frutos del Neem. Contiene una gran. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. variedad de ingredientes activos, destacando la Azadirachtina, Nimbina, Salanina, Terpenos y Limonoides. En su conjunto actúan como: insecticida, de contacto e ingestión (estomacal), inhibidor alimenticio, repelente, desorientador de oviposición y. Ó. N. de estados pupales, regulador del crecimiento de muchas larvas de insectos aun en dosis. CI. muy bajas; ósea que las plagas que ingieren estas sustancias no pasan a la fase sucesiva. UN I. CA. en su estado larval y mueren. Tiene excelente efecto sinérgico al mezclarse con hongos. M. entomopatógenos y extractos vegetales. 13, 16. CO. Para obtener mejoras perdurables en el control de las plagas y enfermedades. Y. agrícolas, la utilización del control químico no debe ser exclusivo sino complementario. ÁT IC. A. dentro de una estrategia de Manejo Integrado del Cultivo 17,18 que involucra también el. RM. uso de métodos menos tóxicos tales como el control etológico, cultural, mecánico y. FO. biológico; siendo este último la base para una agricultura orgánica 19, 20. IN. En la actualidad, la aplicación de medios biológicos para el control de plagas en. DE. la agricultura reviste primordial importancia. Este método constituye un factor. AS. importante en los programas de manejo integrado en los cultivos, lo cual reduce la. TE. M. contaminación del medio ambiente y contribuye a lograr formas sostenibles de. SI S. producción. Dentro de este contexto, las diferentes tácticas de control utilizadas deben. N. benéficos.21. DE. armonizar entre sí, por lo que resulta importante evaluar y seleccionar agroquímicos. CC. IO. Frente a esto, el concepto de Manejo Integrado de Plagas (MIP) fue desarrollado. RE. como un enfoque que aplicaba principios ecológicos en el uso de métodos de control. DI. biológicos y químicos contra insectos dañinos. Es así que el MIP se puede definir como la estrategia que utiliza diferentes técnicas de control (biológicas, culturales, físicas y químicas), complementarias entre si y que tiene como prioridad evitar o reducir el daño que ocasiona una o mas plagas sobre un determinado cultivo.1 El MIP consiste en el. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. control racional basado en la biología y la ecología trabajando junto con la naturaleza y no contra ella.18 De lo anterior se puede asumir que el MIP tiene como objetivo proteger al máximo las cosechas, al menor costo y con el mínimo riesgo al hombre, sus animales,. Ó. N. sus agroecosistemas, los ecosistemas, y la biosfera 22, 23.. CI. Los hongos entomopatógenos juegan un papel importante en el control de plagas. UN I. CA. debido a su forma de acción, su fácil aplicación y la capacidad de generar epizootias en. M. condiciones de campo 24. Son microorganismos que viven a expensas de insectos de. CO. diferentes órdenes en forma natural, no causan daño al hombre, animales ni plantas.. Y. Requieren una adecuada humedad, pH y temperatura para su natural dispersión e. ÁT IC. A. infección, conociéndose aproximadamente setecientos cincuenta especies de hongos los. RM. que se agrupan principalmente en los géneros Metarhizium, Beauveria, Aschersonia,. FO. Entomophthora, Zoophthora, Erynia, Eryniopsis, Akanthomyces, Fusarium, Hirsutella,. IN. Hymenostilbe, Paecilomycesy Lecanicillium25,26,27. Estos hongos se encuentran en. DE. rastrojos de los cultivos, estiércol, en el suelo, las plantas; logrando un buen desarrollo. AS. en lugares frescos, húmedos y con poco sol25. TE. M. Contribuyendo a lo dicho anteriormente, el uso de hongos entomopatógenos para. SI S. el control biologico ha cobrado importancia en los ultimos años. En este contexto, los. DE. géneros Paecilomyces, Lecanicillium, Metarhizium y Beauveria se han empleado con. N. bastante éxito de manera experimental o en aplicaciones de campo. 23El hongo. CC. IO. entomopatógeno Beauveria bassiana, es uno de los hongos mas promisorios en control. RE. de ciertos grupos de insectos de importancia en la economia agricola. Uno de los. DI. aspectos importantes de su efectividad en el control de insectos plaga es la posibilidad de su integracion con agentes quimicos o naturaleza maximizando su potencial y disminuyendo el impacto ambiental que el control quimico como tal pueda ocasionar.13. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El hongoBeauveria bassiana esta ampliamente distribuido en todas las regiones del mundo y puede ser aislado de insectos, ácaros y el suelo, donde el hongo es parte normal de la flora microbiana y otros sustratos. Este hongo, presenta un gran potencial. CI. Ó. formulación, como una cepa patogénica especifica a ciertos organismos blanco.28. N. como agente de control microbiano debido a su facilidad de producción masiva, mejor. UN I. CA. El género se caracteriza por presentar un micelio blanco, conidióforos sencillos,. M. i4rregularmente agrupados o en grupos verticilados, en algunas especies hinchados en la. CO. base y adelgazándose hacia la porción que sostiene la conidia, la cual se presenta en. Y. forma de zig- zag, después de que varias conidias se producen; las conidias son hialinas,. ÁT IC. A. redondeadas a ovoides y unicelulares29. B. bassiana posee conidias de globosas a. RM. subglobosas y las estructuras conidióforas forman densos grupos30.. FO. Los hongos entomopatogenos como agentes de control biologico, al ser. IN. aplicados en campo, son sensibles a la temperatura, humedad atmosferica y radiacion. DE. solar. Por ello, deben ser formulados con aceites y surfactantes para proteger la conidia. M. AS. del hongo y prolongar su persistencia despues de ser aplicados en campo. El desarrollo. TE. de una formulacion adecuada es esencial para poder contar con un micoinsecticida. SI S. efectivo, ya que los elementos constituyentes de dicha formulacion impactan. DE. directamente sobre la viabilidad de las conidias del hongo y por lo tanto la vida de. IO. N. anaquel del producto y su potencial insecticida.28. CC. En general, los hongos representan una excelente alternativa por que pueden. RE. infectar diferentes estados de desarrollo de su hospedero y son de baja o nula. DI. patogenicidad para organismos benéficos y para el humano.27Debido a que en la. agricultura se emplean diversos agentes químicos para el control de diferentes plagas; así como también son controlados mediante la aplicación de biopesticidas como B. bassiana entre otros, se hace necesario conocer si existe algún efecto de los productos 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. químicos sobre los controladores biológicos a fin de q los dos pueden interactuar sobre los insectos a controlar. Este tipo de estudio se hace necesario principalmente cuando tanto el producto químico como el controlador biológico se encuentran en un mismo. N. ambiente; ya que, si bien el producto químico siendo un insecticida no está diseñado. CI. Ó. para afectar al hongo. Existen antecedentes31, 32 ,33que reportan que ciertos insecticidas. UN I. CA. pueden tener una acción fungicida sobre los hongos entomopatógenos y además afectar. M. su actividad entomopatógeno, lo cual implicaría un uso y aplicación innecesaria y. CO. costoso del controlador biológico.. Y. Para que este programa triunfe en su propósito, los métodos de control . Es por ello que si entre los métodos de. A. 13. ÁT IC. utilizados deben ser compatibles entre sí. RM. control a utilizar no existe compatibilidad, se produciría el fracaso de la protección de. FO. una cosecha. De ello, las interacciones entre los hongos y los plaguicidas pueden ser. IN. positivos, cuando una acción es aditiva o sinérgica entre el patógeno y el producto, o. DE. negativo, cuando ocurre la inhibición de uno de los componentes, por lo general del. AS. agente patógeno. Estos productos, principalmente los fungicidas, inhiben en su gran. TE. M. mayoría la germinación de las conidias de los hongos, disminuyendo el potencial del. SI S. inóculo34.. DE. Para que el control de una plaga sea efectivo se necesita el uso combinado de. N. métodos de control que incluyan además un incremento de la resistencia de vegetal,. CC. IO. debiendo tenerse en cuenta la ecología y el comportamiento de los organismos nocivos;. RE. siendo necesario que los métodos de control a emplear no interfieran entre ellos y se. DI. integren de manera eficaz, para lo cual estos deberán mostrar compatibilidad27, 34 El estudio de la compatibilidad entre agentes biológicos y químicos de control es una de las principales áreas de investigación dentro de los programas de manejo integrado de plagas, MIP35. La principal causa de la incompatibilidad entre estos. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. agentes es que el producto químico afecta de alguna forma el desarrollo del patógeno, inhibiendo la germinación de las conidias de forma temporal o permanente36. La compatibilidad entre los controladores biológicos con los quimicos. N. empleados en agricultura, se ha venido estudiando desde hace muchos años, es asi que. CI. Ó. los estudios relizados por Martínez y cols37 demuestran que las cepas del hongo. UN I. CA. entomopatógeno B. bassiana presentaron compatibilidad con Triflumuron (insecticida. M. regulador de crecimiento de insectos) a dosis bajas, lo cual podría considerarse como un. CO. elemento más, en la alternativa que ofrece el control integrado en el manejo de vectores. Y. transmisores de enfermedades.38. con. el. Fenoxicarb. cuando. las. concentraciones. del. hongo. RM. compatibilidad. ÁT IC. A. Estudios hechos por Martínez demuestran que B. bassiana presenta alta. FO. entomopatógeno son altas y las del insecticida bajas. La compatibilidad o interacción. IN. positiva de los hongos con los agroquímicos empleados en la agricultura, se ha venido. DE. estudiando desde inicios del siglo XXI39 así tenemos que se han realizado. AS. combinaciones de B. bassiana con diversos insecticidas, como Carbaril40, Fenvalerate13,. estudiaron. la. compatibilidad. in. vitro. de. Beauveria. bassiana. y. SI S. col.. TE. M. Triflumurón28 encontrando compatibilidad entre estos y el hongo. Además Castiglioni, y. DE. Metarhiziumanisopliaecon Nimkol-L® contra Heterotermestenuis, detallando que el. N. efecto de este insecticida a diferentes concentraciones varia en el crecimiento. CC. IO. vegetativo, la conidiogénesis y la germinación de los conidios de estos hongos. RE. entomopatógenos41. DI. Asimismo, estudios de evaluación de la acción tóxica de los plaguicidas:. mancozeb, tebuconazole, clorotalonil, oxicloruro de cobre, abamectina, óxido de fenibutatina, glifosato, trifluralina, ametrinareduziram y triclorfon, sobre M. anisopliae, realizados por Mochi et al, confirmaron que existía compatibilidad, lo que sugirió que. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. este bioagente control de plagas se puede utilizar en combinación con estos plaguicidas sin poner en peligro su actividad. Vásquez y col. evaluaron la compatibilidad de Beauveria bassiana con el insecticida Fenoxicarb encontrando que a diferentes. Ó. N. concentraciones de este insecticida, no se inhibía la germinación conidial ni el. CI. crecimiento micelial del hongo, mostrando la acción sinérgica del químico con el agente. UN I. CA. biológico.13Goswami, et al. Estudiaron la acción de un controlador químico (aceite. M. natural de mostaza) junto con los dos controladores, Paecilomyces lilacinus y. CO. Trichoderma viride, y encontraron que juntos disminuían eficientemente a Meloidogyne. Y. incognita, comprobando así la existencia de compatibilidad entre ellos. 42. ÁT IC. A. Por otro lado en cuanto a incompatibilidad Cazorla y Morales estudiaron que los. RM. insecticidas organofosforados Malatión y Fenitotrión no son compatibles con todos los. FO. aislamientos de B. bassiana s, por lo que su posible aplicación en un eventual programa. IN. de MIP con estos dependerá de muchos parámetros.25Padron et al. encontraron que una. DE. mezcla de Endosulfan a la dosis de aspersión en el campo en contacto con un cultivo de. AS. B. bassiana desarrollado provoca un halo de incompatibilidad. Además que la. TE. M. aplicaciones de mezcla de Endosulfan con B. bassiana y M. anisopliae no son. SI S. recomendables, pues los resultados in vitro muestran que la germinación es afectada por. DE. este.9. N. Por la importancia que reviste conocer el efecto de los insecticidas cuando son. CC. IO. mezclados con los entomopatógeno, el presente trabajo tiene como objetivo evaluar “in. RE. vitro” el efecto de los insecticidas Extracto de Neem y Caldo Sulfocalcico sobre la. DI. germinación y el crecimiento de Beauveria bassiana en condiciones de laboratorio.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIALES Y MÉTODO 1. Material de estudio. N. Cultivo puro de Beauveria bassiana proporcionado por la cátedra de fitopatología. CI. Ó. del Departamento de Microbiología y Parasitología. Universidad Nacional de. UN I. CA. Trujillo.. CO. M. Extracto de Neem y Caldo Sulfocalcico.. Y. 2. Procedimiento:. ÁT IC. A. 2.1. Evaluación del efecto de los insecticidas Extracto de Neem y el Caldo. RM. Sulfocalcico sobre la germinación y el crecimiento de Beauveria bassiana en. IN. FO. condiciones de laboratorio.. DE. 2.1.1. Evaluación del efecto de los insecticidas Extracto de Neem y el. AS. Caldo Sulfocalcico sobre la germinación de conidias de B. bassiana.. TE. M. 2.1.1.1. Preparación de las soluciones Extracto de Neem y Caldo. SI S. Sulfocalcico. DE. Se llevaron a cabo diluciones de 5, 10 y 15 ppm de Extracto de Neem y. originales.. DI. RE. CC. IO. N. 12.5 y 37.5 ppm de Caldo Sulfocalcico a partir de los productos. 2.1.1.2 Preparación del medio de cultivo para germinación. Se preparó Agar Papa Dextrosa en seis matraces conteniendo 100 mL de medio cada uno. El medio de cultivo fue esterilizado en autoclave y se dejó enfriar hasta una temperatura aproximada de 45 °C.. Al. medio. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. contenido en uno de los matraces no se le agregó los fungicidas, a fin de utilizarlo como control. Consiguientemente, el medio de cultivo de cada uno de los matraces fue servido en frascos de 100 ml (cuatro frascos por. Ó. N. cada concentración de Aceite de Neem, y tres por cada concentración de. CA. CI. Caldo Sulfocalcico, incluyendo los controles).. UN I. 2.1.1.3 Reactivación del cultivo de Beauveria bassiana y obtención de. Y. CO. M. cultivos monospóricos.. ÁT IC. A. Para la reactivación de B. basssiana, a partir del cultivo puro, se procedió a resembrar en frascos de penicilina con Agar Papa Dextrosa inclinado, los. FO. RM. cuales fueron incubados a 25°C durante 7 días.. IN. Posteriormente se cosecharon las conidias con 10 mL de Tween 80 al 1% y se siembra por superficie en 4 chatas de ron, las que se dejaron. DE. realizó la. M. AS. incubando a temperatura de 25°C por espacio de 5 a 7 días. Posteriormente se. TE. procedió a cosechar las conidias agregando 10 ml de Agua destilada que se. SI S. obtuvo una suspensión de conidias, estandarizándose luego a una concentración. 2.1.1.4 Preparación del inóculo de conidias. DI. RE. CC. IO. N. DE. de 5 x 102con/mL mediante recuento en cámara de Neubauer.. A partir de uno de los cultivos monospóricos se sembró en frascos planos de vidrio conteniendo Agar Papa Dextrosa inclinado y se incubó a 25°C por 7 días. El inóculo de conidias se obtuvo agregando 10 mL de Tween 80 al 1% a cada frasco plano de vidrio agitándolo moderadamente a fin de liberar las conidias del hongo. La suspensión resultante fue colocada en un matraz 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. estéril determinándose la concentración de conidias mediante recuento en cámara de Neubauer, diluyéndose en agua estéril donde se obtuvo una. N. concentración final de 1 x 103con/mL. (1x 102). CA. CI. Ó. 2.1.1.5 Inoculación e incubación. UN I. Se colocó 1mL de cada dilución de Aceite de Neemy Caldo Sulfocalcico. CO. M. doble concentrado en tubos de ensayo estériles, a los cuales se les agregó 1mL de la suspensión de conidias obtenida previamente, con lo cual se. ÁT IC. A. Y. obtuvo una dilución de 5x102 con/mL y concentraciones finales de Aceite de Neem de 5, 10 y 15 ppm y Caldo Sulfocalcico de 12.5 y 37.5 ppm. Se. RM. preparó también una suspensión de conidias control para cada uno de los. FO. químicos, agregándole 1mLde la suspensión de conidias en 1 mL de Caldo. DE. IN. Papa estéril.. M. AS. Todas las suspensiones de conidias en las diferentes concentraciones de. TE. Aceite de Neem, Caldo Sulfocalcico y sus respectivos controles se. DE. SI S. incubaron a 25°C por 24 horas.. DI. RE. CC. IO. N. 2.1.1.6 Lectura de los resultados. Luego del período de incubación se procedió a leer cada una de las suspensiones, así como también los controles, con la ayuda de la Cámara de Neubauer y se contó el número de conidias germinadas. Los resultados fueron expresados como porcentaje promedio de germinación el cual será obtenido comparando el número de conidias germinadas en los frascos con. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. las diferentes concentraciones de Aceite de Neem y Caldo Sulfocalcico en relación a las del grupo control. 2.2.2. Evaluación del efecto de Extracto de Neem y Caldo Sulfocalcico sobre el. CI. Ó. N. crecimiento de B. bassiana.. UN I. CA. 2.2.2.1. Preparación del medio de cultivo. CO. M. Se procedió a preparar Agar Papa Dextrosa para cuatro placas por cada dilución. Y. de Aceite de Neem y tres placas por cada dilución de Caldo Sulfocalcico. ÁT IC. A. incluyendo el control en ambas evaluaciones. Se incubó a 25°C por 24 horas.. FO. RM. 2.2.2.2. Siembra e incubación.. DE. IN. A partir de uno de los cultivos monospóricos de B. bassiana se sembró por. AS. puntura en la parte central de las placas previamente preparadas, las cuales se. SI S. TE. M. incubaron a 25°C por siete días.. DE. 2.2.2.3. Lectura de resultados. IO. N. A partir del primer día de siembra, y hasta el séptimo día, se midió el radio de. DI. RE. CC. crecimiento (mm.) de la colonia en diferentes direcciones, obteniéndose un radio promedio de crecimiento por día por cada concentración de Aceite de Neem y Caldo Sulfocalcico y los grupos control.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Los resultados de crecimiento de B. bassiana se expresaron en milímetros (mm) y en porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en cuenta el. CO. M. UN I. CA. CI. % C = Radio promedio de la colonia problema X 100 Radio promedio de la colonia testigo. Ó. N. crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de la siguiente manera:. ÁT IC. A. Y. 2.2.2.4. Análisis de datos. La determinación de la compatibilidad entre B. bassiana y Aceite de Neem. RM. y Caldo Sulfocalcico, se realizó analizando el porcentaje de germinación y. FO. el porcentaje de crecimiento a las diferentes concentraciones de los químicos.. DE. IN. Los datos fueron procesados mediante la prueba de Análisis de Varianza. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. Unidireccional (ANOVA).. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS En la figura 1. Observamos el porcentaje promedio de germinación de B. bassiana. N. a las diferentes concentraciones de Caldo Sulfocalcico y el control, a las 24 horas. CI. Ó. de evaluación.. UN I. CA. En la figura 2.Observamos el porcentaje promedio de germinación de B. bassiana a las diferentes concentraciones de Extracto de Neem y el control a las 24 horas de. CO. M. evaluación.. A. Y. En la Figura 3. Se observa el porcentaje promedio de Crecimiento radial de B.. ÁT IC. bassiana, frente a las diferentes concentraciones de Caldo Sulfocalcico, y el. RM. control a los 7 días de evaluación.. IN. FO. En la Figura 4. Se observa que al incrementar las concentraciones del Extracto. DE. de Neem disminuye el crecimiento radial de B. bassiana a los 11 días de. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. evaluación.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) CO Y. 120%. A. 100 %. 86.84%. ÁT IC. 100%. RM. 80%. 57.89 %. FO. 60%. DE. IN. 40%. AS. 20%. Control 0. M. 0%. 12.5 ppm. 37.5 ppm. TE. Porcentaje de Germinación de Beaveria bassiana. M. UN I. CA. CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. SI S. Concentración de Caldo Sulfocalcico. Figura 1. Porcentaje promedio de germinación de B. bassiana, frente a las. DI. RE. CC. IO. N. diferentes concentraciones de Caldo Sulfocalcico, a los 7días de evaluación.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) UN I. CA. CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CO. M. 100 %. Y. 100%. A. 80%. ÁT IC. 55.9%. RM. 60%. 47.5% 32.2%. IN. FO. 40%. 20%. DE. Porcentaje de germinación de Beauveria bassiana. 120%. AS. 0%. 5 ppm. 10 ppm. 15 ppm. Concentración de Aceite de Neem. TE. M. 0Control ppm. SI S. Figura 2. Porcentaje promedio de germinación de B. bassiana, frente a las. DI. RE. CC. IO. N. DE. diferentes concentraciones de Extracto de Neem, a las 24 horas de evaluación.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) UN I. CA. CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. M CO. 100 %. A. Y. 100. ÁT IC. 80. 61.3 %. 58.1 %. FO. RM. 60. DE. IN. 40. 0 0. M. AS. 20. 12.5. 37.5. Concentración de Caldo Sulfocalcico (ppm). DE. SI S. TE. Porcentaje de Crecimiento radial de Beauveria bassiana. 120. N. Figura 3. Porcentaje promedio de Crecimiento radial de B. bassiana, frente a las. evaluación.. DI. RE. CC. IO. diferentes concentraciones de Caldo Sulfocalcico, y el control a los 7días de. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) CA. CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN I. 100 %. CO. M. 100%. A. Y. 80%. ÁT IC. 55.9 %. 60%. 47.5 % 32.20 %. FO. RM. 40%. IN. 20%. DE. Porcentaje de Crecimiento radial de Beauveria bassiana. 120%. 0%. 5. 10. 15. AS. 0. TE. M. Concentración de Aceite de Neem (ppm). SI S. Figura 4. Porcentaje promedio de Crecimiento radial de B. bassiana frente. DI. RE. CC. IO. N. DE. al insecticida Extracto de Neem a los 11 días de evaluación.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSION Al evaluar el efecto de Caldo Sulfocalcico sobre la germinación de B. bassiana. N. se observa en la Fig.1 que el hongo germina en ambas concentraciones del insecticida, a. CI. Ó. 12.5 ppm y a 37.5 ppm, con un porcentaje de57.89% y 86.84% respectivamente;. CA. aunque con niveles inferiores que los observados en el ensayo control (0 ppm).. UN I. Indicando que a mayores concentraciones del insecticida; no disminuye la germinación. CO. M. del hongo; y al realizar el Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA), se encontró. Y. que no existe diferencia significativa entre la germinación de las conidias de Beauveria. ÁT IC. A. bassiana con las diferentes concentraciones del Caldo Sulfocalcico, es decir, estadísticamente la germinación es igual en las dos concentraciones utilizadas en el ensayo,. RM. comparadas con el control y por lo tanto decimos que su efecto no es negativo.. FO. B. bassiana disminuye su capacidad de germinar en presencia de éste insecticida;. DE. IN. esta probabilidad es debido al mecanismo de acción que este presenta, produciendo el. AS. cese de la división celular, la desorganización de la estructura fina de las células fúngicas. M. y la pérdida de la integridad celular, la interrupción de la síntesis del ergosterol e. SI S. TE. interferencia con el metabolismo de la glucosa25, razón por la cual éste insecticida tendría una acción sobre dichas conidias. Es probable considerar una variabilidad genética entre. DE. las conidias de una misma especie que pueden o no germinar, y asumiendo que no son. IO. N. genéticamente idénticos a pesar de ser la misma especie, es decir no todas toleran con. CC. facilidad frente a las condiciones adversas del medio ambiente en el que se encuentren24;. DI. RE. como ocurre en el ensayo realizado; en una concentración control (0ppm )el hongo germina al 100%, gracias a la presencia de carbohidratos en el medio de cultivo y a la ausencia de algún inhibidor. Rivera et all. Plantea que el efecto inhibido de la germinación conidial se produce tempranamente en la mezcla debido al tipo de solvente utilizado que tiene 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. propiedades desecantes de la membrana afectando la viabilidad de la conidia. Como se observa se presenta un proceso inhibitorio que está en relación directa con el insecticida41.. Ó. N. Olmer y Kennet coinciden en afirmar que existe un efecto inhibitorio del Caldo. CA. CI. Sulfocálcico sobre B. bassiana, cuyo efecto es temporal y puesto que la exposición. UN I. prolongada in vitro del hongo a formulaciones de insecticidas es determinante; este. M. mismo proceso puede ocurrir en el campo 46, 47. Por otro parte Gorden utilizo otros. CO. insecticidas que dieron como resultado incompatibilidad con B. bassiana; infiriendo que. A. Y. estuvo motivada por la acción determinante del insecticida ya que tiene propiedades. ÁT IC. desecantes de la membrana citoplasmática debido al tipo de solventes utilizados en la. RM. formulación del químico.48. FO. En cuanto a la germinación de B. bassiana en presencia del insecticida natural. IN. Extracto de Neem; en la Figura 2se observa que hay una disminución de la germinación. DE. del hongo, mostrando una dinámica inversa, es decir a medida que aumenta la. AS. concentración del insecticida, la germinación del hongo disminuye.. Este resultado. TE. M. puede ser porque el insecticida afectó la actividad de la enzima citocromo P450,. SI S. necesaria para la síntesis de Ergosterol, lo que causó un daño determinante, provocando. DE. una alteración en la membrana celular de B. bassiana evitando la germinación de las. IO. N. conidias por completo.30. CC. Estudios adicionales reportaron que alrededor del 60% de compuestos terpénicos. RE. derivados de aceites esenciales son biológicamente activos frente a hongos, mientras 24, 27. DI. que un 30% tienen acción antibacteriana.. La nimbina, gedunina y azadirachtina. principal componente del Extracto de Neem son terpenos aislados de la planta de Neem con acciones antifúngicas12, 13, 14,15., los cuales causan lisis celular por las rupturas de compuestos lipofílicos de la membrana de los organismos celulares. Además estos. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. compuestos atacan la membrana citoplasmática de los hongos destruyendo la capacidad selectiva y permitiendo el escape de componentes intracelulares. 21 Resultados similares son los hallados por Azederach que demuestran, que los. Ó. N. posibles responsables del efecto antifúngico del extracto y sus fracciones puedan. CA. CI. deberse a los metabolitos secundarios presentes en el Extracto de Neem tales como:. UN I. alcaloides, saponina, taninos y antocianinas. Compuestos como los limonoides. M. (azadiractina), pertenecientes al grupo de los tetrano triterpenos. Soza et al han. CO. demostrado una amplia actividad insecticida, antitumorales, bactericidas, antivirales y lo que sugiere su papel en la defensa de la planta contra ciertos. A. Y. antifúngicos,. ÁT IC. microorganismos11. Otros estudios han planteado que el extracto etanólico obtenido de. RM. la planta de Neem, presentaron actividad fungistática y fungicida para los hongos. IN. FO. patógenos Candidaalbicans, Aspergillus flavus y Microsporum canis12.. DE. La acción fungicida de extractos y derivados de neem ha sido indicada para. AS. hongos fitopatógenos (Grainge y Ahmed 1988) así como para hongos entomopatógenos.. TE. M. Sin embargo, la inhibición de la germinación de los conidios por el producto en las. SI S. concentraciones menores indica la posibilidad de uso asociado del Extracto de Neem. DE. con las cepas evaluadas, siempre que no se supere la concentración compatible26.. IO. N. Estadísticamente mediante el Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA), se. CC. encontró que si hay diferencia significativa entre la germinación de B. bassiana y las. RE. diferentes concentraciones del Extracto de Neem, por lo que se sugiere hacer nuevas. DI. evaluaciones para la aplicación del insecticida y el hongo en campo. En la Fig. 3, podemos observar que el crecimiento miceliar de B. bassiana varia. en las concentraciones evaluadas del químico Caldo Sulfocalcico, ya que a la concentración 12.5 ppm (concentración mínima) es de 61.3%. y a la concentración de 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 37.5 ppm (concentración máxima), es de 58%. Podemos evidenciar que la aplicación del insecticida disminuye el porcentaje de crecimiento; haciendo que este sea más lento.11, 12. Ó. N. De acuerdo a lo descrito anteriormente podemos decir que el Caldo Sulfocalcico. CI. tiene un efecto fungicida sobre B. bassiana, ya que éste pudo actuar a nivel de la. UN I. CA. membrana plasmática mediante la unión al ergosterol o bien mediante la inhibición de su síntesis; otro punto de acción pudo haber sido a nivel de la pared celular que posee. CO. M. compuestos exclusivos, estos son compuestos carbohidratados formados por α y β. Y. glucanos, quitina y manano que desempeñan un papel esencial en el mantenimiento. ÁT IC. A. estructural de la célula fúngica. 45. RM. Por otro lado trabajos realizados a nivel de metabolismo del hongo revelan que. FO. ciertas formas de azufre, que es uno de los compuestos base del Caldo Sulfocalcico,. IN. tienen un mecanismo de acción tóxica para los hongos, puesto que por la acumulación. DE. de algunos ácidos metabólicos orgánicos se produce la inactivación de una o más. M. AS. enzimas de ciertos procesos metabólicos.22. TE. Al realizar el Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA), se encontró que no. SI S. hay diferencia significativa entre el crecimiento de B. bassiana frente a las diferentes. DE. concentraciones de Caldo Sulfocalcico, infiriendo así que la unión del insecticida y el hongo. CC. IO. N. no podrían ser utilizados en conjunto para su aplicación en campo.. RE. En la Fig.4 después de 11 días de evaluación observamos el porcentaje de. DI. crecimiento radial de B. bassiana frente a diferentes concentraciones del insecticida Extracto de Neem, así podemos ver que en relación al control (o ppm), a una concentración de 5 ppm del insecticida el crecimiento está en un 55.9 %, a una concentración de 10 ppm el crecimiento es de un 47.5% y que en la concentración de 15 ppm el crecimiento es de 32.2%, es decir que el Extracto de Neem disminuye 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. significativamente el crecimiento de B. bassiana teniendo un efecto negativo para su uso en común. Estudios adicionales reportaron que alrededor del 60% de compuestos terpénicos. Ó. N. derivados del extracto de Neem son biológicamente activos frente a hongos, mientras. CA. CI. que un 30% tienen acción antibacteriana. La nimbina, gedunina y azadirachtina,. UN I. principal componente del insecticida, son terpenos aislados de la planta de Neem con. M. acciones antifúngicas. El mecanismo de acción de los terpenos es que causan lisis. CO. celular por las rupturas de compuestos lipofílicos de la membrana de los hongos.. A. Y. Además estos compuestos atacan la membrana citoplasmática de los hongos. ÁT IC. destruyendo la capacidad selectiva y permitiendo el escape de componentes. RM. intracelulares. 36. IN. FO. Los resultados hallados en la Fig. 4 son diferentes a los hallados por Pérez y col.. DE. los cuales evaluaron en condiciones in vitro el efecto de extractos de las hojas de neem. AS. con el hongo Beauveria bassiana, en cuanto a su crecimiento micelial, bajo. TE. M. concentraciones de 0,5; 1 y 1,5%. Los resultados indicaron que extractos de las hojas. SI S. fueron favorables para el crecimiento del entomopatógeno en todas las concentraciones. DE. probadas.30. IO. N. Mediante el Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA), se halló que si hay. CC. diferencia significativa entre el crecimiento de B. bassiana y el ensayo control del Extracto. DI. RE. de Neem, lo que nos lleva a no considerarlo efectivo para su uso en común.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES •. El insecticida Caldo Sulfocalcico inhibió la germinación y el crecimiento de. CA. El Extracto de Neem, al incrementar las concentraciones del insecticida inhibió. UN I. •. CI. Ó. N. B. bassiana.. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. DE. IN. FO. RM. ÁT IC. A. Y. CO. M. significativamente la germinación y el crecimiento radial de B. bassiana.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Ortiz J., Alcáza O. Palacios M. La Enseñanza del Manejo Integrado de Plagas. N. en el Cultivo de la Papa: La Experiencia del CIP en la Zona Andina del Perú.. CI. Ó. Revista Latinoamericana de la Papa 1997; 9(10):1-22.. CA. 2. Agrios G. Fitopatología. . Ed. Uteha México. 1995. 2.. UN I. 3. Hoyos L, Duque G, Orduz S. Antagonismo in vitro de Trichodermaspp. sobre. CO. M. aislamientos de Sclerotiniaspp. y Rhizoctoniaspp. Rev Colombia 2008.. Y. 4. Benavides M, Arévalo M. Manejo integrado: una estrategia para broca de café. ÁT IC. A. en Colombia. Cenicafé. Colombia. 2002.53 (1).39-48.. 5. Velandia J. Viteri S. Rubio N. Efecto del Fosfito de Potasio en Combinación. RM. con el Fungicida Metalaxyl + Mancozeb en el Control de Mildiu Velloso. FO. (Peronospora destructor Berk) en Cebolla de Bulbo (Allium cepa L.). Revista. Phelps .P. andKennedy R. . Development of MILIONCAST, an. AS. 6. Gilles T.. DE. IN. .Facultad Nacional de Agropecuarias Medellín. 2012. 65(1). 6317-6325.. M. improved model for predicting downy mildew sporulation on onions. Plant. SI S. TE. Disease. 2004.88 (7). 695-702. 7. Payeras A. Fosfitos potásicos. En línea. Consultado Martes 25 de Diciembre del 10:22.. DE. 2012,. Disponible. en. http://www.bonsaimenorca.com/index.-. IO. N. php/2008022750/Fosfito-Potasico.html. 2008. enfermedades de los cultivos.1aed..Suiza: DGFP;2002.. DI. RE. CC. 8. Comisión nacional de enseñanza agropecuaria. CNEA. Control de plagas y. 9. García García M, Cappello García S, Lesher Gordillo J, Molina Martínez R. Hongos Entomopatógenos como una alternativa para el control biológico. División académica de ciencias biológicas 2008.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 43. Ruiz Sánchez E, Agatha T, Calderón R, Chan Cupul W, Cristóbal Alejo J, Munguía Rosales R. Patogenicidad de Beauveria bassiana (bals.)vuilleminsobre estados inmaduros de mosquita blanca (Bemisiatabacigenn.) Fitosanidad. Paredes Ch, Alayo M, Mamani N, Bonifacio J,. CI. 44. Iannacone J, Alvariño L,. Ó. N. (Mex)2009 ; 13(2):89-93.. UN I. CA. Mariano M, Miglio M. Evaluación del riesgo ambiental de carbofurano en. M. bioensayos con organismos no blanco. Acta Toxicol (Argent)2011; 19 (1): 19-. CO. 31.. Y. 45. Colmar - Andreas Serra A. Manejo Integrado de Plagas de Cultivos Estado. Centro. para. el. Desarrollo. Agropecuario. y. Forestal,. RM. Dominicana:. ÁT IC. A. Actual y Perspectivas para la República Dominicana. Santo Domingo, República. FO. Inc.(CEDAF);2006.. IN. 46. Rivera R. M. Estudio sobre la compatibilidad del hongo Beauveria bassiana con. DE. formulaciones comerciales de fungicidas e insecticidas. Revista Colombiana de. AS. entomología. 1993. 19 (4). 151 – 156.. TE. M. 47. Calderon H. S. Metodología para la prueba de compatibilidad con el hongo. DI. RE. CC. IO. N. DE. 24 – 25.. SI S. Beauveria bassiana con herbicidas y fertilizantes. Manual metodológico. 1982.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) RM. ÁT IC. A. Y. CO. M. UN I. CA. CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI S. TE. M. AS. DE. IN. FO. ANEXOS. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) CA. CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN I. Anexo 1: Porcentajes de germinación de Beauveria bassiana en diferentes. A. Y. CO. M. concentraciones de Caldo Sulfocalcico a las 24 horas de evaluación.. ÁT IC. RM. FO. IN. DE. AS M. 37.5 ppm 3 3 3 3 3 4 3 3 5 3 33. IO. N. DE. SI S. TE. CONTROL 3 3 3 3 4 4 4 5 5 4 38. PROMEDIO DE LOS ENSAYOS 12.5 ppm 2 2 2 2 3 2 2 2 2 3 22. DI. RE. CC. Datos obtenidos en base a un recuento total de 100 esporas por ensayo. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) CI. Ó. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÁT IC. A. Y. CO. M. Caldo Sulfocalcico durante 7 días de evaluación. UN I. CA. Anexo 2. Crecimiento radial (mm) de Beauveria bassiana en el grupo control de. RM. PROMEDIO CRECIMIENTO Bb Y CALDO SULFICALCICO. MÍNIMA. MÁXIMA. X. X. 0. 0. 0.125. 0.15. 0.225. 0.275. FO. DÍAS. CONTROL. 0.175. 2. 0.375. 3. 0.525. 4. 0.625. 0.35. 0.4. 0.75. 0.475. 0.525. 0.9. 0.65. 0.575. 0.975. 0.825. 0.625. 0.62. 0.38. 0.36. M. AS. DE. 1. TE. IN. X. SI S. 5 6. DE. 7. DI. RE. CC. IO. N. X. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..