“Efecto de Lecanicillium lecanii (Zimm) y Beauveria bassiana (Bals) Vuill sobre Planococcus citri (Risso) en condiciones de laboratorio”

Texto completo

(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. AS. DE. IN FO. “Efecto de Lecanicillium lecanii (Zimm) y Beauveria bassiana (Bals) Vuill. sobre Planococcus citri (Risso) en condiciones de laboratorio”. SI ST. EM. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE. Br. KAREN LISBETH AVALOS VELA. DI. RE. CC. IO. N. DE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. TRUJILLO-PERÚ 2014. i Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Dr. Orlando Velásquez Benites. Y. CO. M. UN IC. RECTOR. IC. A. Dra. Vilma Julia Méndez Gil. DE. IN FO. RM. ÁT. VICE-RECTORA ACADÉMICA. Dra. Flor Marlene Luna Victoria Mori. Dr. Santiago Antonio Uceda Duclos SECRETARIO GENERAL. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. VICE-RECTOR ADMINISTRATIVO. ii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dr. José Mostacero León. A. Y. CO. M. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. ÁT. IC. Dr. Willian Zelada Estraver. IN FO. RM. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. DE. Dra. Bertha Soriano Bernilla. AS. DIRECTOR DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. MICROBIOLOGÌA Y PARASITOLOGÍA. iii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis. N. titulada: “Efecto de Lecanicillium lecanii (Zimm) y Beauveria bassiana (Bals) Vuill.. UN IC. AC IÓ. sobre Planococcus citri (Risso) en condiciones de laboratorio”. CO. M. CERTIFICA:. Que ésta ha sido desarrollada, de acuerdo al reglamento establecido por la. A. Y. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en. IC. conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado. RM. ÁT. acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. IN FO. Por lo tanto, autorizo a Karen Lisbeth Avalos Vela, continuar con el trámite del. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Trujillo, mayo del 2014. DE. reglamento correspondiente.. DI. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. ASESOR. iv. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. N. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. AC IÓ. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y. UN IC. criterio, el informe de tesis titulado: “Efecto de Lecanicillium lecanii (Zimm) y Beauveria bassiana (Bals) Vuill. sobre Planococcus citri (Risso) en condiciones de. CO. M. laboratorio”, con el propósito de obtener el Título Profesional de Biólogo –. Trujillo, mayo del 2014. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. Microbiólogo.. DI. RE. Br. Karen Lisbeth Avalos Vela. v. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UN IC. AC IÓ. N. MIEMBROS DEL JURADO. Dra. Manuela Luján Velásquez. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. PRESIDENTE. DE. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. SECRETARIO. Ms. C. Miguel Muñoz Ríos VOCAL. vi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y fundamentales,. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. siendo aprobado por unanimidad.. IC. DE. IN FO. RM. ÁT. PRESIDENTE. A. Y. Dra. Manuela Luján Velásquez. SECRETARIO. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. Ms. C. Miguel Muñoz Ríos VOCAL. vii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. A Dios por guiar mi sendero, permitiendo cumplir un objetivo. AC IÓ. N. más en mi vida y con su bendición todo es posible.. A mis padres, José y Gladys, por ser los mejores y maravillosos. UN IC. amigos incondicionales que me han ayudado a crecer como. persona y como profesional, con mucho amor y buenos valores. CO. M. les dedico todo mi esfuerzo, trabajo y todos mis logros, pues ellos han sido mi apoyo en todo momento velando por mi bienestar,. Y. integridad y educación. Ambos me enseñaron que la vida es. IN FO. RM. A mis hermanos, Fiorella y José David. ÁT. IC. A. hermosa y que todo es posible con trabajo y esfuerzo.. A mi familia en general, gracias por sus consejos y por su apoyo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. en todo momento.. viii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. Mi más profundo agradecimiento a mi amigo y asesor Ms. C. Juan Héctor Wilson. AC IÓ. N. Krugg por brindarme su permanente asesoramiento, apoyo incondicional y sus consejos. M. UN IC. en base a su amplia experiencia para la realización de este proyecto.. CO. A Erika Alayo, Katherine Chacón, Nadiezhda Burgos, Carlos Reyna, Guillermo. A. Y. Cox, Yuseff Rojas, por la información y apoyo brindado en la realización de este. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. trabajo.. ix. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se evaluó el efecto de Lecanicillium lecanii (Zimm) y Beauveria bassiana (Bals) Vuill. AC IÓ. N. sobre Planococcus citri (Risso) en condiciones de laboratorio. Para lo cual se emplearon. hojas de limón, que fueron infestadas con 20 ninfas de P. citri y luego fueron. UN IC. inoculados con Lecanicillium lecanii a las dosis de 106 y 107 conidios/mL con ayuda de. M. un aspersor manual, procediendo de la misma forma con Beauveria bassiana. Los. CO. tratamientos fueron distribuidos aleatoreamente. Produciéndose la muerte de las ninfas. A. Y. de P. citri a las 72 horas después de la aplicación con los siguientes porcentajes de. IC. mortandad 81.5 y 80% con Lecanicillium lecanii, y 78.3 y 85% con Beauveria. RM. ÁT. bassiana, a las concentraciones de 106 y 107 conidios/mL, respectivamente, más no. IN FO. existe diferencia significativa con los demás tratamientos, sin embargo existe diferencia. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. significativa entre los tratamientos y el control donde se obtuvo 10% de mortandad.. x. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ii. Autoridades de la facultad de ciencias biológicas. iii. AC IÓ. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo. N. ÍNDICE. Asesor. iv. v. UN IC. Presentación. vi. M. Miembros del Jurado. CO. Aprobación. A. Y. Dedicatoria. ÁT. IC. Agradecimientos. RM. Resumen. IN FO. Indice INTRODUCCIÓN. ix x xi 1 4. 4. SI ST. EM. 2. Procedimiento. viii. 4. AS. 1. Material de estudio. DE. MATERIAL Y MÉTODOS. vii. Material de estudio. 4. 2.. Procedimiento. 4. DE. 1.. IO. N. 2.1. Recolección, crianza de adultos y obtención de ninfas de 4. CC. Planococcus citri. DI. RE. 2.2. Reactivación de Lecanicillium lecanii y Beauveria Bassiana. 4. 2.3. Propagación y Estandarización del inóculo. 5. 2.4. Inoculación. 5. xi. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.5. Evaluación de la actividad entomopatógena de Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana. 6. AC IÓ. N. 2.6. Recuperación e identificación de Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana. 7. 7. UN IC. 2.7. Análisis de datos. 8. M. RESULTADOS. CO. Tabla 1. Síntomas y/o signos observados en ninfas de Planococcus citri. Y. inoculadas con dos concentraciones de Lecanicillium lecanii y. 9. IC. A. Beauveria bassiana. RM. ÁT. Figura 1. Ninfas de Planococcus citri (a) control (b) muerta con oscurecimiento. IN FO. en la parte ventral (c) momificada (d) completamente cubierto con micelio de Lecanicillium lecanii. 10. DE. Figura 2. Ninfas de Planococcus citri (a) control (b) momificada. AS. (c) completamente cubierto con micelio de Beauveria bassiana. 11. EM. Figura 3. Porcentaje de mortandad de ninfas de Planococcus citri. SI ST. inoculadas con dos concentraciones de Lecanicillium lecanii y. 13. N. DISCUSIÓN. 12. DE. Beauveria bassiana. 18. RECOMENDACIONES. 19. RE. CC. IO. CONCLUSIONES. 20. ANEXOS. 27. DI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. Anexo 1. (a) Núcleo de Planococcus citri. (b) ninfa de Planococcus citri Anexo 2. Esquema del ciclo biológico de Planococcus citri. xii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 3. (a) Procedimiento para la instalación de la cámara de crianza de Planococcus citri. (b) Vista interior de la cámara de crianza. Anexo 4. Observación microscópica del microcultivo de Lecanicillium lecanii. AC IÓ. N. recuperada de ninfas de Planococcus citri Anexo 5. Observación microscópica del microcultivo de Beauveria bassiana. UN IC. recuperada de ninfas de Planococcus citri. M. Anexo 6. (a)Estructuras fúngicas de Lecanicillium lecanii emergiendo de una. CO. ninfa de Planococcus citri. (b) Fiálides verticiladas características de. Y. Lecanicillium lecanii.. IC. A. Anexo 7. Porcentaje de mortandad de ninfas de Planococcus citri producido por. RM. ÁT. 2 dos concentraciones de Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana en. IN FO. condiciones de laboratorio.. Anexo 8. Análisis estadístico de las medias de los porcentajes de mortandad de. DE. ninfas de Planococcus citri producidos por la aplicación de Lecanicillium lecanii. AS. y Beauveria bassiana (a) ANOVA de un factor (Análisis de varianza de un. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. factor), (b) Pruebas de Tukey y Duncan. xiii. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. Los insectos plaga producen graves daños en la agricultura, y dentro de las plagas más. AC IÓ. N. dañinas está Planococcus citri, conocida como cochinilla algodonosa o chanchito. blanco, que es cosmopolita y polífaga1, se le encuentra en una amplia gama de cultivos. UN IC. causando graves daños económicos en todo el mundo2, entre los cultivos que podemos. alimenta de estas sino que. CO. M. mencionar se encuentran la vid3, los cítricos y plantas ornamentales4, mas no solo se también se constituye un importante vector de virus. ÁT. IC. A. Y. fitopatogenos3.. RM. La hembra fecundada oviposita cientos de huevos en una cubierta algodonosa. IN FO. denominada ovisaco y puede presentar hasta 10 generaciones al año, dependiendo de las. DE. condiciones climáticas, las especies se alimentan por succión y pueden desarrollarse en. AS. las raíces, las hojas y los frutos, además cuando se alimentan excretan una mielecilla. EM. que favorece el desarrollo de fumagina lo que resta valor comercial a los productos. Su. SI ST. ciclo de vida comprende las etapas de huevo, ninfa (I,II y III), pupa (en el caso de los machos) y adulto, con una duración aproximada de 4 días como huevo, 11 a 12 días. DE. como ninfa I, 8 a 9 días como ninfa II, 3 a 8 días como ninfa III, 4 a 5 días como pupa,. CC. IO. N. 10 a 11 días como adulto5.. DI. RE. Para el control de P. citri existen numerosas especies de parásitos y depredadores que viven en las parcelas de cítricos regulando de forma eficaz las poblaciones de muchos insectos fitófagos. Los tres procedimientos reconocidos de empleo del control biológico, introducción, incremento y conservación de enemigos naturales, han sido aplicados con éxito. Sin embargo se analiza el empleo de las liberaciones masivas de insectos útiles y 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de las técnicas de conservación, entre las que destaca la selección de los plaguicidas por su impacto en los controladores benéficos.. AC IÓ. N. Dentro de las estrategias de control se utilizan diversos productos químicos, tales como buprofezin, pyriproxyfen , flonicamid , acetamiprid , dinotefuran, clotianidina y. UN IC. kinoprene, los cuales no respetan los controladores naturales, factor importante de la regulación natural de esta plaga6,7. En un intento por resarcir este daño se realizan. CO. M. liberaciones inundativas de Leptomastix dactylopii7, Spalgis epius8, Cryptolaemus. Y. montrouzieri9, Leptomastidea abnormis10 y Sympherobius barberi11; siendo los tres. RM. ÁT. IC. A. últimos los más comunes.. IN FO. Por otro lado las estrategias de control de P. citri no se han circunscrito a las liberaciones de insectos, también se utiliza nematodos como Steinernema spp. y. DE. Heterorhabditis bacteriophora12, feromonas sexuales13,14 y hongos entomopatógenos. EM. AS. como por ejemplo Isaria farinosa15,16 y Metarhizium anisopliae17 entre otros.. SI ST. Tomando en cuenta lo antes mencionado es esencial el establecimiento del manejo. DE. integrado de esta plaga mediante el control etológico, cultural, mecanico, físico, legal,. N. químico y biológico, esto implica la protección del control natural existente del campo y. CC. IO. la creación de condiciones ambientales más favorables para los enemigos naturales18,. RE. destacando dentro de estos el uso de hongos entomopatógenos por su capacidad de. DI. regular poblaciones de insectos19. Cabe destacar que la utilización de los hongos entomopatógenos en la agricultura ha ido en aumento en los últimos años debido al gran potencial que tienen en el manejo de plagas, representando una alternativa eficiente al uso de insecticidas químicos, considerados altamente nocivos para la salud del hombre. 2. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. y los ecosistemas20, por lo tanto también se convierten en una alternativa para disminuir poblaciones de cochinillas.. AC IÓ. N. Hongos entomopatógenos como Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana son potenciales alternativas para el control de Planococcus citri. Dentro de las especies que. UN IC. controla L. lecanii, veinte especies pertenecen a la familia Coccidae21,22,23, diez especies a la familia Diaspididae24, diez especies a la familia Pseudococcidae25,26, una especie a. CO. M. la familia Margarodidae27 y una especie a la familia Phoenicococcidae28. Por otro lado. Y. también tenemos a Beauveria bassiana, del cual se han obtenido más de treinta y ocho. IC. A. cepas entomopatógenas, aisladas de diversas especies de las ordenes Lepidoptera. RM. ÁT. (Pyralidae) y Coleoptera (Curculionidae, Chrysomelidae y Scolytidae) de diferentes. IN FO. sitios geográficos29 y es uno de los hongos entomopatógenos más ubicuos y estudiados. DE. en el mundo30.. AS. Debido a las características de físicas y biológicas de P. citri que le confieren la. EM. capacidad de evasión al control químico siendo a su vez los estadios ninfales los más. SI ST. susceptibles, a las características de B. bassiana de ser cosmopolita y afectar a una. DE. amplia gama de insectos y a la capacidad de L. lecanii de parasitar insectos de la misma. N. familia a la que pertenece P. citri, el objetivo de este estudio fue investigar el efecto de. CC. IO. Lecanicillium lecanii (Zimm) y Beauveria bassiana (Bals) Vuill. sobre Planococcus. DI. RE. citri (Risso) en condiciones de laboratorio.. 3. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO 1. Material de estudio. N. Cultivo puro de Lecanicillium lecanii, proporcionado por el laboratorio. AC IÓ. de Fitopatología del Departamento de Microbiología y Parasitología de la. UN IC. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Nacional de Trujillo.. Cultivo puro de Beauveria bassiana, proporcionado por el laboratorio de. CO. M. Fitopatología del Departamento de Microbiología y Parasitología de la. Y. Facultad de Ciencias Biológicas. Universidad Nacional de Trujillo.. IC. A. Un núcleo de Planococcus citri (conformado por 1g de las colonias del. ÁT. insecto) proporcionado por el Servicios Nacional de Sanidad Agraria del. RM. Perú (SENASA).. IN FO. 2. Procedimiento. DE. 2.1. Crianza de adultos y obtención de ninfas de Planococcus citri: SENASA- Lima. AS. Se obtuvieron las ninfas del núcleo otorgado por. EM. (Anexo1, 2 y 3). Luego se colocaron en calabacines de zapallito italiano pepo. var.. Zucchini. grey). previamente. lavados. y. SI ST. (Cucurbita. DE. desinfectados. Los calabacines infestados se colocaron en una caja de y fueron mantenidos en el laboratorio, monitoreando la. N. cartón. DI. RE. CC. IO. temperatura y la humedad relativa. Los especímenes de P. citri fueron puestos en cuarentena realizando cambios periódicos de alimento (calabacines) para evitar la contaminación de la colonia por agentes no deseados como parasitoides y hongos.. 2.2. Reactivación de Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana: Con el fin de recuperar la actividad metabólica de ambos hongos y se obtener cultivo puro en mayor cantidad se utilizó Agar Sabouraud (ASb),. 4. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. se extrajo micelio del cultivo inicial, se sembró por puntura y se incubó a 25 ± 0.1 ºC. 2.3. Propagación y Estandarización del inóculo. AC IÓ. N. Se preparó una suspensión de Lecanicillium lecanii en solución estéril de Tween 80 al 0.1%, la cual se utilizó para propagar el hongo ASb 0.1 ml de la. UN IC. inclinado (contenido en frascos planos), se utilizó. M. suspensión del hongo, se incubó a 25 ± 0.1 ºC hasta la formación de. CO. esporas.. Y. Posteriormente se les agregó una solución acuosa de Tween 80 al 0.1%,. IC. A. para obtener las esporas. La suspensión de esporas fueron colocadas en. RM. ÁT. un matraz estéril. Luego se estandarizó en cámara de Neubauer® a las. IN FO. concentraciones de 106 y 107 las que sirvieron de inóculo. Los mismos pasos se siguieron para preparar el inóculo de Beauveria bassiana.. DE. 2.4. Inoculación. AS. La muestra estuvo constituida por 300 de ninfas de P.citri, de las cuales 4. EM. grupos de 20 ninfas fueron ejemplares problema y otro de grupo de 20. SI ST. ninfas fueron ejemplares testigos, realizando un total de 3 repeticiones. A. DE. los ejemplares problema se les inoculó por aspersión una suspensión de. DI. RE. CC. IO. N. esporas en Tween 80 al 0,1%, siendo la concentraciones utilizadas 106 y. 107 esporas/ml de L. lecanii. Se siguieron los mismos pasos para el caso de Beauveria bassiana. Mientras que, los ejemplares testigo se les inoculó una solución acuosa de Tween 80 al 0,1%. Para este procedimiento se realizó la infestación de hojas de limón con P. citri que fue criado en calabacines, estas hojas fueron colocadas en. 5. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. recipientes de plástico adaptado para permitir el intercambio gaseoso y evitar la fuga de los especímenes. 2.5. Evaluación de la actividad entomopatógena de Lecanicillium lecanii. AC IÓ. N. y Beauveria bassiana Después de la inoculación se evaluó cada 24 horas la aparición de. UN IC. síntomas y/o signos de la infección micótica que presentaron las ninfas. M. problema en comparación a los testigos. La observación de cada una de. CO. las ninfas y el posible progreso de la infección micótica se realizó. Y. diariamente anotando la aparición de síntomas como pérdida de apetito,. IC. A. parálisis, pigmentaciones, u otros, que se produjeron durante el ensayo,. RM. ÁT. siendo el tiempo máximo de observación 14 días (tanto problema como. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. testigo).. 6. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.6. Recuperación e identificación de Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana Este procedimiento se realizó con la finalidad de corroborar la causa de. AC IÓ. N. la muerte de las ninfas de P. citri y consistió en colocar los especímenes muertos en cámara húmeda e incubados a temperatura ambiental, una vez. UN IC. emergido el hongo se extrajo con ayuda de un asa microbiológica y se. M. sembró en un tubo de ensayo con ASb para posteriormente realizar un. CO. microcultivo e identificar las estructuras características de L. lecanii y B.. Y. bassiana (Anexo 4, 5). IC. A. 2.7. Análisis de datos. RM. ÁT. Los datos obtenidos se procesaron utilizando el paquete estadístico SPSS. IN FO. v.20, aplicando un análisis de varianza simple para comparar las medias de mortandad producida por el hongo evaluado; aplicándose, un análisis. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. postanava mediante la prueba de Tukey.. 7. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. Síntomas y signos presentados en las ninfas de Planococcus citri que fueron inoculadas. UN IC. Proceso de micoparasitosis producida por Lecanicillium lecanii en ninfas de. AC IÓ. N. con Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana (Tabla 1).. CO. M. Planococcus citri (Figura 1).. A. Y. Proceso de micoparasitosis producida por Beauveria bassiana en ninfas de Planococcus. RM. ÁT. IC. citri (Figura2).. IN FO. Se observa que, según los porcentajes de mortandad de ninfas de Planococcus citri , existe diferencia significativa entre control (10%) y los tratamientos, mas no entre los. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. tratamientos (Figura 3).. 8. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tabla 1. Síntomas y/o signos observados en ninfas de Planococcus citri inoculadas con. control. AC IÓ UN IC. Conidios /Ml Síntomas y/o signos. N. dos concentraciones de Lecanicillium lecanii y Beauderia bassiana. Lecanicillium lecanii. Beauveria bassiana. Pérdida del apetito. -. +. +. Escasa movilidad. -. +. Oscurecimiento (melanización). -. +. Muerte. +. Aparición de micelio. -. Momificación. -. CO. 107. 106. 107. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. +. Y. 106. IC RM. ÁT. +. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. (*) Representa al control. (-) Sin presencia (+) Presencia. EM. AS. DE. A. 0*. IN FO. M. observados. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Figura 1. Ninfas de Planococcus (a) control (b) muerta con. completamente cubierto con micelio de Lecanicillium lecanii.. DI. RE. CC. IO. N. oscurecimiento en la parte ventral (c) momificada (d). 10. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Figura 2. Ninfas de Planococcus citri (a) control (b) momificada. bassiana.. DI. RE. CC. IO. N. (c) completamente cubierto con micelio de Beauveria. 11. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Figura 3. Porcentaje de mortandad de ninfas de Planococcus citri inoculadas con dos concentraciones. O. N. de Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana a las 72 horas post-inoculación.. RE. CC I. B.b.: Beauveria bassiana; L.l.: Lecanicillium lecanii. DI. a: p< 0.05, existe diferencia significativa. b: p> 0.05, no existe diferencia significativa. 12. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. Los síntomas observados en las ninfas de Planococcus citri (tabla 1) son debido a que. AC IÓ. N. los hongos entomopatógenos, a diferencia de otros agentes de control, no necesitan ser ingeridos por el insecto, pudiendo ocurrir la infección por contacto y adhesión de las través de los. UN IC. esporas a las partes bucales, membranas intersegmentales o a. Y. CO. M. espiráculos31.. IC. A. Es así que, la adhesión de los conidios de los hongos entomopatógenos a la cutícula del. ÁT. hospedero es la etapa inicial del proceso patogénico e incluye eventos tanto pasivos. RM. como activos32, lo cual ha sugerido que iones divalentes como el Ca+2 y el Mg+2 reducen. IN FO. las fuerzas de repulsión de la electrostática de la superficie del insecto, por lo que. DE. pueden afectar su hidrofobicidad y promover la adhesión del complejo pared celular. AS. fúngica – cutícula , creando condiciones favorables para el establecimiento de la espora. SI ST. EM. y la subsecuente invasión del hospedero31.. DE. Luego de la adhesión viene la germinación de la espora que se inicia con el. N. hinchamiento de la misma, siendo favorecido por una humedad alta; asi mismo la. CC. IO. hidratación de la espora es favorecida por la acción anti-desecante de su cubierta. RE. mucilaginosa que presenta un alto contenido de aminopeptidasas e hidrofobinas, las. DI. cuales favorecen la acción de la enzimas extracelulares sobre la cuticula del insecto., que además funciona como protector ante la presencia de polifenoles tóxicos y enzimas secretadas por el sistema inmune del insecto; luego es estimulada por mensajeros que generalmente son carbohidratos presentes en las proteínas cuticulares del insecto31.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Tanto Lecanicillium lecanii como Beauveria bassiana logran penetrar la cutícula de las ninfas de Planococcus citri debido a que producen enzimas tales como lipasas,. AC IÓ. N. proteasas y quitinasas, utilizando una combinación de estas para penetrar en la. cutícula33,34 y acceder al hemocele del hospedero que es rico en nutrientes32, lo cual. CO. M. UN IC. produce disturbios en el organismo del insecto (Tabla1).. Y. Durante la penetración del hongo desde la cutícula del insecto hasta el hemocele, la hifa. IC. A. queda inmersa en proteínas, quitina, lípidos, melanina, difenoles y carbohidratos;. ÁT. algunos de ellos son nutrimientos pero otros pueden inhibir su crecimiento, sin. RM. embargo, los hongos desarrollan una serie de actividades que les permiten evitar este. IN FO. tipo de defensas, tales como cambios en la pared celular y producción de sustancias. DE. inmunomodulatorias o toxinas fúngicas35,36. Después de la penetración de las hifas,. AS. éstas se diseminan vía hemolinfa, producen blastosporas y cuerpos filamentosos de hifas. EM. que invaden el sistema inmune del hospedero multiplicándose rápidamente en los. DE. SI ST. tejidos.. IO. N. Cabe resaltar la producción de micotoxinas dentro de las actividades que realizan los. CC. hongos entomopatógenos, L. lecanii y B. bassiana, las cuales son metabolitos fúngicos. RE. secundarios que hacen parte de los mecanismos de infección y pueden dar lugar a una. DI. respuesta toxica en diferentes organismos. Ellos son producidos por una seria de reacciones consecutivas, las cuales son catalizadas por enzimas intermediarias del metabolismo primario37.. 14. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Además se conoce que B. bassiana produce beauvericinas, beauverolidos y destruxinas, la actividad insecticida de la beauvericina fue descubierto por primera vez por Hamill et al.38 quienes afirman que es el compuesto activo de B. bassiana enfrentándolo a Artimia. N. salina; posteriormente, fue investigado en Calliphora erythrocephala, Aedes aegypti,. AC IÓ. Lygus spp., Spodoptera frugiperda y Schizaphis graminum39,40,41,42. A pesar de que la. UN IC. beauvericina por si sola tiene una fuerte actividad insecticida contra un amplio espectro. M. de plagas, no se ha aplicado como tal debido a, el movimiento de los insectos y a que al. CO. aplicar el hongo entomopatógeno este puede propagarse en el cuerpo del insectos y se. Y. extenderse ampliamente42. A pesar de las similitudes entre las estructuras químicas de. IC. A. beauvericina y otras micotoxinas hexadepsipeptide cíclicos39 esta puede tener un. IN FO. RM. ÁT. mecanismo de acción único.. B. bassiana también secreta otros compuestos conocidos como beauverolidos L que. AS. DE. poseen una fuerte acción inmunomoduladora pero no un efecto insecticida43, por otro. EM. lado también están las destruxinas que inducen parálisis flácida y la contracción. SI ST. muscular visceral en los insectos; estos efectos citotóxicos en las células epiteliales. N. DE. probablemente sea porque envuelven los canales Ca2+ - ATPasa tipo vacuolar44,45.. CC. IO. En cambio L. lecanii secreta una serie de metabolitos secundarios los cuales se. RE. constituyen toxinas que producen una reducción del potencial de progenie y disuaden la. DI. actividad alimenticia en Bemisia tabaci46, insecto que posee un hábito alimenticio similar al de P. citri, lo cual sugiere un reacción similar.. 15. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las toxinas que estos organismos producen cumplen una función muy importante dentro de los mecanismos de infección de los hongos entomopatógenos37 en la lucha por evadir los mecanismos de defensa del insecto. El sistema inmune del insecto se activa a. AC IÓ. N. través de los procesos de melanización, fagocitosis, nodulación y encapsulamiento; la melanina sustancia responsable del oscurecimiento del tejido, debido a ello las ninfas. UN IC. tratadas con L. lecanii y B. bassiana se tornan oscuras en comparación a las del control. CO. M. (Table1; Fig 1b-c, 2b).. A. Y. Luego de sobrepasados los mecanismos de defensa del insecto este perece y el hongo. ÁT. IC. entomopatógeno entra en la fase de colonización y al agotar los nutrientes y el agua. RM. presentes en el interior de la ninfa esta se momifica (Fig 1c, 2b), posteriormente el. IN FO. hongo emerge desarrollando sus hifas en la superficie de ésta (fig 1d, 2c). Finalmente el. AS. DE. hongo deja de crecer y comienza a esporular31,47 (Anexo 6).. EM. Mientras ocurren todos los procesos antes mencionado se pueden observar efectos en el. SI ST. comportamiento de las ninfas de P. citri, como no poder adherirse y caerse de las hojas. DE. que le sirven de alimento, posiblemente por la acción de las toxinas en el sistema. N. nervioso; la pérdida de apetito que se manifiesta por la reducción de nivel de daño en las. IO. hojas sobre las que se encontraban, esto ocurre por pérdida de la integridad estructural. RE. CC. de las membranas celulares y la consecuente deshidratación de las células causado por. DI. pérdidas de fluidos, todo esto ocurre por la acción mecánica de las hifas y la acción química de las toxinas de L. lecanii o B. bassiana, llevándolas a la muerte35,48.. 16. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En la fig. 3 se observa que la aplicación de L. lecanii produjo una mortandad de 81.7% y 80% a las concentraciones de 106 y 107, respectivamente, y B. bassiana produjo una mortandad de 78.3% y 85% a las concentraciones de 106 y 107, respectivamente (Anexo. AC IÓ. N. 7); existiendo diferencia significativa con el control sin embargo no existe diferencia significativa entre los cuatro tratamientos (Anexo 8). Debemos tener en cuenta que los. UN IC. resultados pueden verse influenciados por muchos factores como la temperatura (que. M. puede afectar la estabilidad del entomopatógeno y perder la patogenicidad), la humedad. CO. relativa (puede intervenir en las diferentes fases del ciclo de infección del hongo sobre. Y. el huésped), lo relacionado con el hongo (concentración y tiempo de vida media), suelo. IC. A. (textura, pH, cantidad y tipo de microorganismos), agroquímicos (algunos tienen acción. RM. ÁT. fungicida o fungistático) así como la radiación solar, los vegetales y las. IN FO. precipitaciones49,50.. DE. En cuanto al porcentaje de mortandad, se observó un 85% al aplicar B. bassiana a la. AS. concentración de 107 conidios/mL el cual podemos comparar los resultados de. SI ST. EM. Mendoza-Lucas et al.51 (2006) quienes reportan 80% de mortandad en ninfas de P. citri a una dosis de 108 conidios/mL, donde utilizaron un producto comercial y una dosis. DE. superior a la utilizada en el presente trabajo, el 5% de diferencia que se obtuvo puede. IO. N. deberse a la virulencia del aislamiento de B. bassiana utilizado, también se observa un. CC. menor aumento de la mortandad al utilizar Metarhizium anisopliae (78%)17, e Isaria. DI. RE. farinosa (50-60%) a la misma concentración (107conidios/mL)15.. 17. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSION. Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana tienen un efecto significativo en el aumento. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. de la mortandad de las ninfas de Planococcus citri.. 18. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. Los resultados indican que ambos hongos, Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana. AC IÓ. N. se constituyen en herramientas de control para esta plaga, por cual se sugiere realizar pruebas en condiciones de campo.. UN IC. Realizar evaluaciones con dosis inferiores a las utilizadas.. M. Es necesario realizar pruebas de compatibilidad con productos químicos utilizados en el. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. cultivo afectado por la plaga.. 19. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Franco JC, Suma P, Borges da Silva E, Blumberg D, Mendel Z. Management. AC IÓ. N. strategies of mealybug pest of citrus in mediterranean countries. Phytoparasitica. 2004; 32(5): 507-522.. UN IC. 2. Kol-Maimon H, Ghanim M, Franco JC, Mendel Z. Evidence for gene flow. M. between two sympatric mealybug species (Insecta; Coccoidea; Pseudococcidae).. CO. PLoS ONE. 2014; 9(2): e88433. doi:10.1371/journal.pone.0088433.. A. Y. 3. Cabaleiro C, Segura A. Field transmission of grapevine leafroll associated virus. ÁT. IC. 3 (GLRaV-3) by the mealybug Planococcus citri. Plant dis.1997; 81: 283-287.. RM. 4. Mani M. Recovery of the indigenous Coccidoxenoides peregrinus and the exotic. IN FO. Leptomastic dactylopii on Planococcus citri in lemon and acid lime orchards. Biocontrol Sci Techn. 1994; 4(1):49-52.. DE. 5. Morandi Filho WJ, Grützmacher AD, Botton M, Bertin A. Biologia e tabela de. AS. vida de fertilidade de Planococcus citri em diferentes estruturas vegetativas de. SI ST. EM. cultivares de videira. Pesq agropec bras. 2008; 43(8): 941-947. 6. Cloyd RA, Dickinson A. Effect of insecticides on mealybug destroyer. DE. (Coleoptera: Coccinellidae) and parasitoid Leptomastix dactylopii. IO. N. (Hymenoptera: Encyrtidae), natural enemies of citrus mealybug (Homoptera:. CC. Pseudococcidae). J Econ Entomol. 2006; 99(5):1596-604.. DI. RE. 7. Rothwangl KB, Cloyd RA, Wiedenmann RN. Effects of insect growth regulators on citrus mealybug parasitoid Leptomastix dactylopii (Hymenoptera: Encyrtidae). J Econ Entomol. 2004; 97(4):1239-44.. 20. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 8. Afifi Ali, El Arnaouty SA, Attia AR, Abd Alla Ael-M. Biological control of citrus mealybug, Planococcus citri (Risso) using coccinellid predator, Cryptolaemus montrouzieri Muls. Pak J Biol Sci. 2010; 13(5):216-22.. AC IÓ. N. 9. Dinesh AS, Venkatesha MG. Inter- and intraspecific interactions in two mealybug predators Spalgis epius and Cryptolaemus montrouzieri in the. UN IC. presence and absence of prey. Bull Entomol Res. 2014; 104(1):48-55. doi:. M. 10.1017/S0007485313000485. CO. 10. Cadée N, van Alphen JJM. Host selection and sex allocation in Leptomastidea. Y. abnormis, a parasitoid of the citrus mealybug Planococcus citri. Entomologia. IC. A. Experimentalis et Applicata. 1997, 83: 277–284. doi: 10.1046/j.1570-. RM. ÁT. 7458.1997.00182.x. IN FO. 11. Reeve RJ; French JV. Laboratory toxicity of pesticides to the brown lacewing Sympherobius barberi. South western Entomol. 1978; 3(2): 121-123.. DE. 12. Barbosa Negrisoli CR, Negrisoli Júnior AS, Botton M, Garcia MS, Bernardi D.. AS. Evaluation of efficacy of 18 strains of entomopathogenic nematodes. EM. (Rhabditida) against Planococcus citri (Risso, 1813) (Hemiptera:. SI ST. Pseudococcidae) under laboratory conditions. Exp Parasitol. 2013; 134(3):295-8.. DE. doi: 10.1016/j.exppara.2013.02.002.. N. 13. Passaro LC, Webster FX. Synthesis of the female sex pheromone of the citrus. CC. IO. mealybug, Planococcus citri. J Agric Food Chem. 2004; 52(10):2896-9.. DI. RE. 14. Zada A, Dunkelblum E, Harel M, Assael F, Gross S, Mendel Z. Sex pheromone of the citrus mealybug Planococcus citri: synthesis and optimization of trap parameters. J Econ Entomol. 2004; 97(2):361-8.. 21. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 15. Demirci F, Muştu M, Bora Kaydan M, Ülgentürk S. Laboratory evaluation of the effectiveness of the entomopathogen; Isaria farinosa, on citrus mealybug, Planococcus citri. Journal of Pest Science. 2011; 84(3): 337-342.. AC IÓ. N. 16. Demirci F, Muştu M, Bora Kaydan M, Ülgentürk S. Effects of some fungicides on Isaria farinosa, and in vitro growth and infection rate on Planococcus citri.. UN IC. Phytoparasitica. 2011; 39(4):353-360. M. 17. Mascarin GM, Pauli G, Lopes RB. Susceptibility of the citrus mealybug,. CO. Planococcus citri, to Metarhizium anisopliae. Citrus Res Techn. 2011;. Y. 32(3):155-160. doi:10.5935/2236-3122.20110018. IC. A. 18. Guaharay F, Chaput P. Control Biológico Ayer Hoy y Siempre. En: Cano E,. RM. ÁT. López JA, Carballo M, Fernández O, Gonzáles L, Gruber AK, y otros. Guaharay. IN FO. F, Carballo M [Editores]. Control Biológico de plagas agrícolas. Managua, Costa Rica: Catie, 2004. p. 1-13.. DE. 19. Butt TM, Jackson C, Magan N. Introduction- Fungal Biological Control. AS. Agentes: Progress, Problems and Potential. En: Butt TM, Jackson C, Magan N.. EM. Fungal as Biocontrol Agentes: Progress, Problems and Potential. London, UK:. SI ST. Cabi Publishing, 2001. p. 1-8.. DE. 20. Téllez–Jurado A, Cruz Ramírez MG, Mercado Flores Y, Asaff Torres A, Arana-. N. Cuenca A. Mecanismos de acción y respuesta en la relación de hongos. CC. IO. entomopatógenos e insectos. Rev Mex Mic. 2009; 30: 73-80.. DI. RE. 21. Evans HC, Hywel-Jones NL. Entomopathogenic fungi. In: Ben-Dov Y, Hodgson CJ [Editores]. Soft Scale Insects: Their Biology, Natural Enemies and Control, vol. 7B1. Amsterdam y New York: Elsevier, 1997. p. 15–16.. 22. Cavallazzi G, Prieto A, Ariza R. Evaluation of the entomopathogenic Verticillium lecanii (Zimm.) Viegas in the control of the soft scale Philephedra. 22. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tuberculosa Nakahara & Gill in the Guanabana (Annona muricata). Agronomy Colombiana. 1998; 15 (2-3), 106–111. 23. Lo PL, Chapman RB. The role of parasitoids and entomopathogenic fungi in. AC IÓ. N. mortality of third-instar and adult Ceroplastes destructor and C. sinensis (Hemiptera: Coccidae: Ceroplastinae) on citrus in New Zealand. Biocontrol Sci. UN IC. and Techn.1998; 8 (4): 573–582.. M. 24. Evans HC, Prior C. Entomopathogenic fungi. En: Rosen, D. [Ed.]. Armored. CO. Scale Insects: Their Biology, Natural Enemies and Control, vol. B1. Amsterdam. Y. y New York: Elsevier, 1990. p. 8–15.. IC. A. 25. Yin FM, Chen QC, Ye Y. Technology study on the control of Oracella acuta by. RM. ÁT. Verticillium lecanii. Forest Sci Techn. 1996; 5: 15–18.. IN FO. 26. Yin FM, Qin CS, Chen QC. Study on the control of Oracella acuta by Verticillium lecanii. Forest Sci Techn. 2000; 16 (1): 41–44.. DE. 27. Asensio L, Lopez-Llorca LV, Lopez-Jimenez JA. Use of light, scanning electron. AS. microscopy and bioassays to evaluate parasitism by entomopathogenic fungi of. EM. the red scale insect of palms (Phoenicococcus marlatti Ckll., 1899). Micron.. SI ST. 2005; 36 (2): 169–175.. DE. 28. Yuan SY, Kong Q, Zhang H, Li ZY, Chen B, Zhu CY. Laboratory assessment of. N. the virulence of Verticillium lecanii Viegas to Trialeurodes vaporariorum and. CC. IO. Icerya purchasi maskeli. China J. 2007; 32 (1), 111–114.. DI. RE. 29. Maurer P, Couteaudier Y, Girard PA, Bridge PD, Riba G. Genetic diversity of Beauveria bassiana and relatedness to host insect range. Mycol Res. 1997; 101(2):159-164.. 30. Wraight SP, Carruthers RI, Jaronski ST, Bradley CA, Garza CJ, GaliainiWraigth S. Evaluation of the entomopathogenic fungi Beauveria bassiana and. 23. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Paecilomyces fumosoroseus for microbial control of the silver leaf whitefly, Bemisia argentifolii. Biol control. 2000; 17:203-217. 31. Pucheta M, Flores A, Rodríguez S, de la Torre M. Mecanismo de acción de los. AC IÓ. N. hongos entomopatógenos. Interciencia. 2006; 31(12):856- 860. 32. Ment D, Gindin G, Rot A, Soroker V, Glazer I, Barel Sh et al. Novel technique. UN IC. for quantifying adhesion of Metarhizium anisopliae conidia to the tick cuticle.. M. Appl Environ Microbiol. 2012; 76(11):3521-3528.. CO. 33. Pedrini N, Ortiz-Urquiza, Huerte-Bonnet C, Zhang S, Keyhani NO. Targeting of. Y. insect epicuticular lipids by the entomopathogenic fungus Beauveria bassiana:. IC. A. hydrocarbon oxidation within the context of a host-pathogen interaction. Front. RM. ÁT. Microbiol. 2013; 4(24). doi:10.3389/fmicb.2013.00024.. IN FO. 34. Rocha-Pino Z, Vigueras G, Shirai K. Production and activities of chitinases and hydrophobins. Bioprocess Biosyst Eng. 2011; 34:681-686.. DE. 35. Mnyone L, Kirby M, Lwetoijera D, Mpingwa M, Knols B, Takken W et al.. AS. Infection of de Malaria mosquito, Anopheles gambiae, with two species of. EM. entomopathogenic fungi: effect of concentration, co-formulation, exposure time. SI ST. and persistence. Malar J. 2009; 8:309-320.. DE. 36. Wang Ch, St Leger RJ, Acollagenus protective coat enable Metarhizium. N. anisopliae to evade insect immune responses. Proc Natl Acad Sci. 2006;. CC. IO. 103(17): 6647-6652.. DI. RE. 37. Arboleda JW, Delgado F, Valencia A. efecto de la toxina beauvericina sobre Hypothenemus hampei. Manejo integrado de plagas y agroecología. 2003; 68: 71-76.. 24. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 38. Hamill, R.L.; Higgens, G.E.; Boaz, H.E.; Gorman, M. The structure of beauvericin, a new desipeptide antibiotic toxic to Artemia salina. Tetrahedron Lett. 1969, 49, 4255–4258.. AC IÓ. N. 39. Grove, J.F.; Pople, M. The insecticidal activity of beauvericin and the enniatin complex. Mycopathologia. 1980; 70: 103–105.. UN IC. 40. Jestoi M. Emerging Fusarium - Mycotoxins Fusaproliferin, Beauvericin,. M. Enniatins, And Moniliformin - A Review. Crit Rev Food Sci. 2008; 48: 21- 49.. CO. 41. Fornelli F, Minervini F, Logrieco A. Cytotoxicity of fungal metabolites to. Y. lepidopteran (Spodoptera frugiperda) cell line (SF-9). J Invertebr Pathol. 2004,. IC. A. 85: 74–79.. RM. ÁT. 42. Leland JE, McGuire MR, Grace JA, Jaronski ST, Ulloa M, Park Y, Plattner RD.. IN FO. Strain selection of a fungal entomopathogen, Beauveria bassiana, for control of plant bugs (Lygus spp.)(Heteroptera: Miridae). Biol Control. 2005; 35: 104–114.. DE. 43. Jegorov A, Sedmera P, Matha V, Simek P, Zahradnickova L, Eyal J.. AS. Beauverolides L and La from Beauveria tenella and Paecilomyces. EM. fumosoroseus. Phytochemistry. 1994; 37:1301-1303.. SI ST. 44. Wang B, Kang Q, Lu Y, Bai L, Wang Ch. Unveiling the biosynthetic puzzle of. N. 1292.. DE. destruxins in Metarhizium species. Proc Natl Acad Sci. 2012; 109(4): 1287-. CC. IO. 45. Roberts DW, St Leger RJ. Toxins. En: Roberts DW, St Leger R. Metarhizium. Microbiol. 2004; 54: 13- 17.. DI. RE. spp., Cosmopolitan insect- pathogenic fungi: Mycological aspects. Adv Appl. 46. Wang L, Huang J, You M, Guan X, Liu B. Toxicity and feeding deterrence of crude toxin extracts of Lecanicillium (Veticillium) lecanii (Hyphomycetes). 25. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. against sweet potato whitefly, Bemisia tabaci (Homoptera:Aleyrodidae). Pest Manag Sci. 2007; 63:381-387. 47. Ojeda-Chi M, Rodríguez-Vivas R, Galindo-Velasco E, Lezama-Gutiérrez R,. mediante el uso del hongo entomopatógeno Metarhizium anisopliae. AC IÓ. N. Cruz-Vázquez C. Control de Rhipicephalus microplus (Acari: Ixodidae). UN IC. (Hypocreales: Clavicipitaceae). Rev Mex Cienc Pecu. 2011; 2(2): 177-192.. M. 48. Carballo M, Hidalgo E, Rodríguez A. Control Biológico de Insectos mediante. CO. hongos entomopatógenos. En: Carballo M, Guaharay F [Editores]. Control. Y. Biológico de plagas agrícolas 1aed. Costa rica: Catie, 2004. p. 34-58.. IC. A. 49. Alves S. Controle microbiano de insectos. 2da Edición. Edit. Fundación de. RM. ÁT. Estudios Agrarios Luiz de Queiroz. Piracicaba- Brazil. 1998.. IN FO. 50. Lecuona R. Microorganismos patógenos empleados en el Control microbiano de Insectos Plaga. Roberto E. Lecuona [Editor]. Buenos Aires, Argentina. 1996.. DE. 51. Mendoza-Lucas M, Alatorre R, Hérnandez F, González H, Nava C.. AS. Susceptibilidad del piojo harinoso, Planococcus citri (Risso, 1913) (Hemiptera:. EM. Pseudococcidae) a productos micoinsecticidas. Entomotropica. 2006. 21(3):171-. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. 179.. 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. ANEXOS. 27. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. a. CC. IO. N. DE. b. DI. RE. Anexo 1. (a) Núcleo de Planococcus citri. (b) ninfa de Planococcus citri. 28. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) DE. SI. ST. EM. AS. DE. IN FO. RM ÁT. IC. A. Y. CO. M UN IC AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DI. RE. CC I. O. N. Anexo 2. Esquema del ciclo biológico de Planococcus citri. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. b. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. aa. DI. RE. CC. Anexo 3. (a) Procedimiento para la instalación de la cámara de crianza de Planococcus citri. (b) Vista interior de la cámara de crianza.. 30 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. SI ST. Anexo 4. Observación microscópica del microcultivo de Lecanicillium lecanii. DI. RE. CC. IO. N. DE. recuperada de ninfas de Planococcus citri. 31. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. EM. Anexo 5. Observación microscópica del microcultivo de Beauveria bassiana recuperada. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. de ninfas de Planococcus citri. 32. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(46) IN FO. RM. ÁT. IC. A. Y. CO. M. UN IC. AC IÓ. N. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. Anexo 6. (a)Estructuras fúngicas de Lecanicillium lecanii emergiendo de una ninfa de. AS. Planococcus citri. (b) Fiálides verticiladas características de Lecanicillium. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. lecanii.. 33. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(47) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 7. Porcentaje de mortandad de ninfas de Planococcus citri producido por 2 dos concentraciones de Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana en condiciones. NUMERO DE LARVAS MUERTAS R3 4 18 14 16 15. % 20 90 70 80 75. 2 17 15.7 16 16.3. UN IC. % 5 70 70 65 75. 10 85 78.3 80 81.7. M. R2 1 14 14 13 15. DI. RE. CC. IO. N. DE. SI ST. EM. AS. DE. IN FO. RM. ÁT. IC. A. CONTROL B.b. 10+7 B.b. 10+6 L.l. 10+7 L.l. 10+6. % 5 95 95 95 95. PORCENTAJE DE MORTANDAD. CO. R1 1 19 19 19 19. Y. TTO.. PROMEDIO. AC IÓ. N. de laboratorio.. 34. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(48) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 8. Análisis estadístico de las medias de los porcentajes de mortandad de ninfas de Planococcus citri producidos por la aplicación de Lecanicillium lecanii y Beauveria bassiana (a) ANOVA de un factor (Análisis de varianza de un factor), (b) Pruebas de Tukey y Duncan a.. ANOVA de un factor. gl. Media cuadrática. Inter-grupos. 12256,667. 4. 3064,167. Intra-grupos. 1633,333. 10. 163,333. 13890,000. 14. 18,760. ,000. Pruebas de Tukey y Duncan. IC. b.. A. Y. CO. M. Total. Sig.. UN IC. cuadrados. F. AC IÓ. Suma de. N. PORCENTAJE DE MORTANDAD DE NINFAS DE Planococcus citri. 3. B.b. 10^6 L.l. 10^7. DE. a. L.l. 10^6. a. N IO. 2 10,00. 3. 78,33. 3. 80,00. 3. 81,67. 3. 85,00. EM. 3. ,965. 10,00. B.b. 10^6. 3. 78,33. L.l. 10^7. 3. 80,00. L.l. 10^6. 3. 81,67. B.b. 10^7. 3. 85,00. DE. Duncan. 1. 1,000. SI ST. Control. AS. B.b. 10^7 Sig.. Subconjunto para alfa = 0.05. IN FO. Control. HSD de Tukey. N. RM. Contración de esporas. ÁT. PORCENTAJE DE MORTANDAD DE NINFAS DE Planococcus citri. Sig.. 1,000. ,564. CC. Se muestran las medias para los grupos en los subconjuntos homogéneos.. DI. RE. a. Usa el tamaño muestral de la media armónica = 3.000.. 35. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(49)