Efecto de diferentes concentraciones de insecticida Lufenuron sobre la germinación, el crecimiento y la capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. CI. Efecto de diferentes concentraciones de insecticida. CI EN. Lufenuron sobre la germinación, el crecimiento y la capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en. DE. condiciones de laboratorio. BL. IO. TE. CA. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE: BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. :. Br. Olenka Yvette Leytón Móstiga. ASESOR. :. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. BI. AUTOR. TRUJILLO-PERÚ 2017. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. CI EN. CI. AS. BI. O. RECTOR. LO. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGOMICROBIÓLOGO. Dr. Rubén César Vera Véliz. Dr. Steban Alejandro Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL. BI. BL. IO. TE. CA. DE. VICE-RECTOR ACADÉMICO. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. Dr. Freddy Mejía Coico. CI EN. CI. AS. BI. O. DECANO. Dr. William Zelada Estraver. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO. Dra. Bertha Soledad Soriano Bernilla. MICROBIOLOGÌA Y PARASITOLOGÍA. BI. BL. DIRECTORA DE LA ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. El que suscribe: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg asesor de la presente tesis. AS. titulada: “Efecto de diferentes concentraciones de insecticida Lufenuron sobre la germinación, crecimiento y capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en. LO. G. IC. condiciones de laboratorio”.. BI. O. CERTIFICA:. Que, la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su correspondiente. AS. proyecto de tesis y teniendo en cuenta las orientaciones pertinentes. Que, el informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las. CI. observaciones y sugerencias alcanzadas. Por ello, autorizo a la Bachiller Olenka Yvette. IO. TE. CA. DE. Trujillo, Octubre del 2017. CI EN. Leytón Móstiga para continuar con los procedimientos correspondientes según sus fines.. BL. __________________________________ Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. BI. ASESOR. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AS. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el Reglamento de Grados y. IC. Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra consideración y criterio, la. G. Tesis: “Efecto de diferentes concentraciones de insecticida Lufenuron sobre la. LO. germinación, crecimiento y capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en condiciones de laboratorio”, con el propósito de obtener el Título Profesional de Biólogo. BI. O. – Microbiólogo.. Trujillo, octubre del 2017. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. Esperando que el presente trabajo sea de su aprobación.. BL. ________________________________. BI. Br. Olenka Yvette Leytón Móstiga. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. LO. Dra. Manuela Natividad Luján Velásquez. G. ______________________________. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. CI EN. CI. AS. BI. O. PRESIDENTE. ______________________________ Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. BI. BL. IO. TE. CA. DE. SECRETARIO. ______________________________ Ms.C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. Los profesores que suscriben, miembros del Jurado dictaminador, declaran que el presente Informe de Tesis titulado: Efecto de diferentes concentraciones de insecticida. AS. Lufenuron sobre la germinación, crecimiento y capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en condiciones de laboratorio, ha cumplido con los requisitos formales y. BI. O. LO. G. IC. fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. ______________________________. AS. Dra. Manuela Natividad Luján Velásquez. DE. CI EN. CI. PRESIDENTE. ______________________________. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg. ______________________________ Ms.C. Eduardo Muñoz Ganoza VOCAL. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AS. A Dios por su infinito amor y porque le debo todo lo que tengo y lo que. LO. G. IC. soy.. A mis padres, Ena y Manuel, por su. O. apoyo incondicional en cada paso. A mi abuela Domi por ser una. .. CI EN. segunda madre para mí, y a la. CI. AS. BI. de mi vida y por ser un ejemplo.. memoria de mi abuelo Guillermo. porque su sueño de que sea. CA. DE. profesional ahora es realidad.. TE. A mis hermanitas, Claudia y Fernanda, por alegrarme todos los. BI. BL. IO. días y estar conmigo siempre.. A mis mejores amigas del colegio y la universidad, por todos los momentos compartidos.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. AS. A mi asesor Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg, por otorgarme el asesoramiento en. IC. la realización del presente trabajo, por la confianza y los buenos consejos brindados, por. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. ser un buen maestro y por su gran apoyo en el desarrollo de la presente tesis.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se evaluó el efecto de las concentraciones 75 ppm, 175 ppm y 350 ppm del insecticida. AS. Lufenuron sobre la germinación, crecimiento y capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en condiciones de laboratorio. El efecto del insecticida sobre la germinación de. G. IC. T. asperellum se evaluó colocando 2 mL de cada dilución doble concentrada del insecticida. LO. en frascos, y 2 mL de una suspensión de esporas de T. asperellum, con lo cual se obtuvo. O. una concentración de 14 x 105 esp/mL, el conteo de conidias germinadas se realizó a las 24. BI. horas de incubación a 25 ºC. Para determinar el efecto en el crecimiento de T. asperellum. AS. se empleó la técnica del medio envenenado con el insecticida en las diferentes concentraciones, el cual se sirvió en placas Petri, así como también una placa control, se. CI. sembró T. asperellum por puntura en la parte central de las placas de Petri y se incubó a. CI EN. temperatura ambiente durante 7 días, midiendo desde el siguiente día el diámetro de la colonia del hongo. Para determinar la capacidad antagonista de T. asperellum (proveniente. DE. de cultivos con los diferentes tratamientos) se le enfrentó con Fusarium oxysporum mediante la técnica de cultivo dual. Se encontró que Lufenuron disminuye. CA. significativamente la germinación y el crecimiento de T. asperellum. Se observó también. TE. que a mayor concentración del insecticida mayor es el efecto sobre la germinación, y el. IO. porcentaje de crecimiento de T. asperellum. Con respecto a la capacidad antagonista, T.. BL. asperellum tiene un grado 2 en la escala de Bell para la concentración 75 ppm y 175 ppm,. BI. y grado 4 para la concentración 350 ppm.. Palabras clave: Lufenuron, Trichoderma asperellum, germinación de esporas, crecimiento micelial, antagonismo.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE Pág. ii. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ………... iii. ASESOR ……………………………………………………………………………... iv. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO …….... LO. PRESENTACIÓN …………………………………………………………………... vi. O. MIEMBROS DEL JURADO ………………………………………………………. v. AS. BI. APROBACIÓN ……………………………………………………………………... vii viii. AGRADECIMIENTOS …………………………………………………………….. ix. CI EN. CI. DEDICATORIA …………………………………………………………………….. RESUMEN …………………………………………………………………………... x. DE. ÍNDICE …………………………………………………………………………..….. xi INTRODUCCIÓN ………………………………………………………………….. 1. CA. MATERIALES Y MÉTODO ………………………………………………………. 8. TE. 1. Material de estudio ……………………………………………………………... 8. BL. IO. 2. Método …………………………………………………………………………... 8. BI. 2.1. 2.2.. Reactivación del cultivo de Trichoderma asperellum ………………….. 8 Evaluación del efecto de Lufenuron sobre Trichoderma asperellum …. 8. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1. Evaluación del efecto de Lufenuron sobre la germinación de esporas de T. asperellum …………………………………………….. 8. AS. 2.2.2. Evaluación del efecto de Lufenuron sobre el crecimiento de T. asperellum ………………………………………... IC. 10. G. 2.2.3. Evaluación de la capacidad antagonista de T. asperellum ………... 11. LO. Análisis de datos ……………………………………………………….... 2.3.. 12. BI. O. RESULTADOS ……………………………………………………………………... 13. AS. DISCUSIÓN ………………………………………………………………………… 19. CI EN. CI. RECOMENDACIONES ……………………………………………………………. 25. 26. REFERENCIAS BIBLIOGRÀFICAS …………………………………………….. 27. ANEXOS …………………………………………………………………………….. 34. TE. CA. DE. CONCLUSIONES …………………………………………………………………... IO. Anexo 1. Estructura de la molécula de Lufenuron. (Nombre IUPAC: 1- [2,5 -. difluorobenzoil) urea) …………………………………………………… 34. BI. BL. dicloro - 4- (1,1,2,3,3,3 - hexafluoropropoxi) fenil] - 3- (2,6 -. Anexo 2. Ficha técnica de Lufenuron 5% EC (MATCH®) …………………….. 35. Anexo 3. Estructura de la molécula de quitina. ………………………………… 37. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 4. Observaciones microscópicas de Trichoderma asperellum.(40x) …… 37 Anexo 5. Cultivos de Trichoderma asperellum en las diferentes concentraciones 38. AS. de insecticida Lufenuron antes de realizar el cultivo dual. ………………. Anexo 6. Porcentaje de germinación de Trichoderma asperellum frente a las. 38. G. IC. diferentes concentraciones del insecticida Lufenuron. ………………….. LO. Anexo 7. Análisis de varianza (ANOVA) del porcentaje de germinación de T.. O. asperellum frente a las diferentes concentraciones del insecticida. AS. BI. Lufenuron, utilizando el método Duncan. ……………………………….. 39. CI. Anexo 8. Crecimiento radial promedio de T. asperellum a la concentración 0. CI EN. ppm del insecticida Lufenuron durante 7 dìas de evaluación en condiciones de laboratorio. …………………………………………….... 40. DE. Anexo 9. Crecimiento radial promedio de T. asperellum a la concentración 75 ppm del insecticida Lufenuron durante 7 dìas de evaluación en 40. TE. CA. condiciones de laboratorio. …………………………………………….... IO. Anexo 10. Crecimiento radial promedio de T. asperellum a la concentración. condiciones de laboratorio. …………………………………………….... 41. BI. BL. 175 ppm del insecticida Lufenuron durante 7 dìas de evaluación en. Anexo 11. Crecimiento radial promedio de T. asperellum a la concentración 350 ppm del insecticida Lufenuron durante 7 dìas de evaluación en condiciones de laboratorio. …………………………………………….... 41. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 12. Porcentaje de crecimiento de T. asperellum en las diferentes concentraciones del insecticida Lufenuron durante 7 días de evaluación 42. AS. en condiciones de laboratorio. …………………………………………... IC. Anexo 13. Análisis de varianza (ANOVA) del crecimiento radial de T.. G. asperellum frente a las diferentes concentraciones del insecticida. O. LO. Lufenuron, utilizando el método Duncan. ………………………………. 44. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. Anexo 14. Escala de clases de Bell. …………………………………………….. 43. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. El crecimiento de la población mundial y, por consecuencia, el aumento de la. AS. necesidad alimenticia causó el inicio de la revolución verde que tenía como única prioridad. IC. el aumento de la cantidad de alimentos a todo costo. Desde entonces se ha podido ver en. G. el mundo un cambio extraordinario en la tecnología agropecuaria e indudablemente un. LO. aumento en la producción, pero al mismo tiempo también empezaron a aparecer efectos. O. negativos no calculados. La agricultura moderna, con la implementación de cultivos a gran. BI. escala, ha provocado varios problemas en cuanto a enfermedades y plagas resistentes y. CI. AS. especializadas en las plantas cultivadas.1. CI EN. La forma tradicional para el control de las plagas y enfermedades en cultivos se basa en la aplicación de agroquímicos, los que se convirtieron, por varias décadas, en la forma preponderante de control, siendo uno de los elementos clave de un nuevo modelo de. DE. producción agrícola extensiva, que a pesar de todos los beneficios que ofrecen resultan. CA. tóxicos e inespecíficos, porque además de eliminar los organismos fitopatógenos, producen fuertes daños a la productividad de la agricultura, al ser humano y a la naturaleza dañando. IO. TE. la flora del suelo.2. BL. Además de esto, si son mal aplicados o utilizados en altas dosis, pueden causar. BI. problemas de resistencia, fenómeno que consiste en la aparición de biotipos tolerantes de una especie anteriormente controlada por un plaguicida.3 Los plaguicidas son sustancias o mezcla de sustancias que se usan de manera intensiva para controlar plagas agrícolas e insectos vectores de enfermedades en humanos y en animales, así como, para el control de. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. insectos y ácaros que afectan la producción, elaboración, almacenamiento, transporte o comercialización de alimentos y productos agrícolas. 4. AS. Uno de los plaguicidas más utilizados es el Lufenuron, insecticida perteneciente. IC. al grupo de los benzoilureas, es un larvicida que actúa por ingestión interfiriendo en la. G. formación de quitina (sustancia de soporte más importante del exoesqueleto de los insectos. LO. pues constituye del 30% al 60% del peso promedio de la exo y endocutículas) en los estados. BI. O. inmaduros de insectos que afectan cultivos de espárrago, alcachofa, pimiento, entre otros.. AS. Las larvas afectadas por Lufenuron no pueden mudar adecuadamente y aunque. CI. crecen internamente la nueva exuvia no se forma, presentándose así una desintegración de. CI EN. la larva, la cual muere atrapada en la cutícula. 5 También puede tener algo de inhibición sobre los hongos, ya que estos poseen pared celular con quitina y otros complejos polisacáridos.6 Lufenuron es un inhibidor de la quitina sintetasa, recientemente, se ha. DE. presentado como un tratamiento para dermatofitosis en perros y gatos en determinadas. CA. dosis.7. TE. El exceso de la aplicación de los insecticidas y otros plaguicidas trae problemas. IO. tanto para el hombre como para el medio ambiente, estos se pueden acumular a lo largo de. BL. la cadena alimenticia por su uso excesivo, por violar los intervalos de seguridad en la. BI. cosecha o por contaminaciones durante el depósito y transporte. Además, pueden destruir los agentes naturales que ayudan a controlar las plagas y provocar aumento de la resistencia, necesitándose mayores cantidades de ellos para controlarlas, por ello se busca alternativas que disminuyan el impacto.8 Los resultados negativos han causado reacciones. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tanto en los servicios de extensión agrícola, como en los fabricantes de insumos agroquímicos y los organismos internacionales han buscado una solución a los peligros graves que los químicos pueden causar al medio ambiente y la vida humana. Es. AS. fundamental que los agricultores realicen un manejo integrado de plagas, partiendo. LO. G. biológico, control botánico y prácticas de manejo cultural, entre otras.1. IC. del diagnóstico adecuado e incorporando prácticas como el uso de estrategias de control. O. La agricultura sostenible, trabaja sin perjudicar la naturaleza para mantener el. BI. equilibrio entre los cultivos, plagas, enfermedades, hierbas y tierra, en un esquema. AS. conocido como control natural de plagas o manejo integrado de plagas (MIP). El control. CI. natural de plagas evita los problemas con las plagas y enfermedades de las plantas, y. CI EN. mantiene los productos químicos dañinos fuera de nuestros cuerpos y del medio ambiente. También evita los problemas de dependencia en los productos químicos y la resistencia a. DE. los plaguicidas.9. CA. El manejo integrado de plagas se define como la aplicación de dos o más tácticas fitosanitarias para mantener a una plaga por debajo de su umbral económico.10 Se les da. TE. prioridad a los métodos que, siendo más seguros para la salud humana y el medio ambiente,. IO. permiten la producción económica de productos de calidad para el mercado.. BL. Una de las tácticas que se utilizan es el control biológico o biocontrol, que consiste. BI. en el uso de uno o más organismos benéficos (enemigos naturales) contra aquellos que causan daño (plagas). Un organismo indeseable puede eliminarse localmente o, lo que resulta mejor, su población puede reducirse a una escala que no cause daño económico y permite una cantidad poblacional de la plaga que garantiza la supervivencia del agente. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. controlador, el cual mantiene su propia población y previene que la plaga retorne a grados poblacionales que causan daño.11 De todos los microorganismos que actúan como controladores naturales parece ser que los hongos poseen un conjunto de características. IC. AS. que los hacen agentes de biocontrol potencialmente ideales.. G. Entre los hongos utilizados para el biocontrol de patógenos en plantas, varias. LO. especies de Trichoderma han sido merecedoras de una mayor atención debido a que pueden. O. ejercer el control de hongos fitopatógenos indirectamente, compitiendo por el espacio y los. BI. nutrientes, modificando las condiciones ambientales, estimulando el crecimiento de las. AS. plantas y sus mecanismos de defensa o produciendo antibióticos. También pueden realizar. CI EN. CI. ese control directamente, mediante micoparasitismo.12. Trichoderma se caracteriza por ser un hongo saprófito, que sobrevive en suelos con diferentes cantidades de materia orgánica. Posee una alta capacidad enzimática para. DE. degradar sustratos, un metabolismo versátil y resistencia a inhibidores microbianos. La. CA. mayoría de las especies de Trichoderma presentan clamidosporas, gracias a las cuales toleran condiciones ambientales adversas y permiten que el hongo pueda perdurar a través. IO. TE. del tiempo.13. BL. Trichoderma se destaca como antagonista de gran efectividad contra. BI. microorganismos fitopatógenos habitantes del suelo, que afectan los cultivos de tabaco, tomate, pimiento, trigo, entre otros. Trichoderma se recomienda como controlador de agentes patógenos foliares en tomate; así como para controlar a Pseudoperonospora cubensis y Erisiphe cichoracearum en el cultivo de pepino. Además, se ha recomendado. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. para el control de fitopatógenos en semilla de frijol, lechuga y arroz; y para tratamientos foliares y al suelo en frijol.14 Trichoderma también limita el desarrollo de otros hongos. AS. fitopatógenos como Rhizoctonia solani, Fusarium oxysporum y Verticillium dahliae.2,15. IC. Como todo plan de manejo integrado de plagas, el control biológico no es el único. G. tipo de control que se aplica en los campos de cultivo, por lo tanto, para incorporar. LO. productos biológicos en el manejo de un cultivo, es imprescindible conocer la sensibilidad. O. de los agentes biológicos a los agroquímicos que se emplearán en dicho manejo, con el fin. BI. de conservar su capacidad controladora y establecer medidas para su uso eficiente. En este. AS. aspecto la respuesta de Trichoderma varía en dependencia de las combinaciones especie. CI EN. CI. de microorganismos y productos fitosanitarios evaluados.16. Se ha informado la compatibilidad de algunos plaguicidas y fertilizantes sobre Trichoderma spp. La acción de los insecticidas sobre este agente de control biológico es. DE. variable. Así tenemos que dimethoato es compatible in vitro con Trichoderma spp mientras. CA. que lamdacialotrina provoca valores de mortalidad algo considerables incluso a concentraciones más bajas.17, al igual que metamidofos. Sin embargo, cipermetrin y. TE. cihalotrin inhibieron significativamente el crecimiento de T. asperellum. No obstante,. IO. ninguno afectó la esporulación por mm2, ni la germinación de conidios. Algunos. BL. insecticidas como deltametrin, monocrotofos e imidacloprid son compatibles con. BI. T.harzianum mientras que quinalfos, carbosulfán y profenofos inhiben su crecimiento.18. Los fungicidas folpet (ftalimida), mancozeb (ditiocarbamato) y zineb (ditiocarbamato) tienen efecto inhibitorio sobre el crecimiento del micelio del hongo. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. T.harzianum al igual que el insecticida abamectina, pero sólo los fungicidas afectan su germinación.14 En una investigación se obtuvo también que los fungicidas sistémicos derivados de los benzimidazoles resultaron más tóxicos que los de contacto para el. AS. crecimiento radial de T. harzianum, mientras que los insecticidas probados, quinalfos y. G. IC. dicofol mostraron toxicidad, incluso con baja concentración.19. LO. El fungicida Carboxin+Thiram es compatible con los aislados nativos de. O. Trichoderma spp. y el Carbendazim+Thiram es el menos compatible. El fungicida. BI. Carboxin+Thiram no produce efectos negativos en la esporulación de Trichoderma spp.,. AS. mientras que el Tebuconazole presenta efecto genestático.20 El fungicida Carbendazim. CI EN. CI. inhibe el crecimiento de T. atroviride.21. Los herbicidas fenoxaprop-p-etilo y 2,4D sal de amina afectan el crecimiento micelial de cepas de T. asperellum y la esporulación para la cepa T.17. La germinación se. DE. inhibe en más de un 50% con 2,4D sal de amina.22 Asimismo, el herbicida metribuzina. CA. ejerce un efecto inhibitorio sobre el crecimiento de T. harzianum.3. TE. Con respecto a Lufenuron se han encontrado estudios que muestran su. IO. incompatibilidad con Isaria fumosorosea23, y que frente a Lecanicilium lecanii afecta. BL. negativamente la viabilidad de los conidios y por lo tanto la eficacia del hongo.24 Asimismo. BI. demostró ser ligeramente tóxico frente al crecimiento y germinación de Metarhizium anisopliae y Paecilomyces fumosoroseus.25. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En muchos cultivos se realizan tratamientos químicos con fungicidas, insecticidas y acaricidas, sin que se conozcan las interferencias de los plaguicidas sobre las especies de Trichoderma, por lo que surge la hipótesis de que los plaguicidas empleados pueden estar. AS. afectando el antagonista por su acción tóxica sobre el crecimiento y desarrollo del hongo,. IC. y la germinación de los conidios, si ese fuera el caso es crucial que el agricultor conozca. G. de los impactos adversos que los agroquímicos puedan tener sobre la eficacia de los. LO. controladores, permitiéndoles así encontrar la dosis apropiada entre los controladores. O. biológicos y los químicos al igual que el tiempo de aplicación entre ellos, para así planificar. BI. mejor la aplicación de los tratamientos fúngicos y/o químicos adecuados a efecto de. CI. AS. minimizar cualquier efecto nocivo a la actividad de los hongos habitantes del suelo.. CI EN. En este contexto el presente trabajo tiene por finalidad determinar el efecto de Lufenuron sobre la germinación, crecimiento y capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en condiciones de laboratorio, debido a que hay escasa información sobre el. DE. comportamiento de este importante controlador biológico cuando es confrontado in vitro. CA. con este insecticida; los resultados que se obtengan permitirán conocer, la susceptibilidad,. BI. BL. IO. TE. por parte del hongo, frente a concentraciones de Lufenuron aplicables en campo.. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIALES Y MÉTODO. 1. Material de estudio Cultivo puro de Trichoderma asperellum proporcionado por el Laboratorio de y. Parasitología. de. la. IC. Fitopatología del Departamento de Microbiología. AS. 1.1.. G. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo Cultivo puro de Fusarium oxysporum proporcionado por el Laboratorio de y. Parasitología. de. la. O. Fitopatología del Departamento de Microbiología. LO. 1.2.. BI. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo Insecticida Lufenuron 5% EC (MATCH®). CI. AS. 1.3.. 2.1.. CI EN. 2. Método. Reactivación del cultivo de Trichoderma asperellum Los cultivos puros de T. asperellum proporcionados por el Laboratorio de. DE. Fitopatología, fueron sembrados en tubos de ensayo de 16 x 180 mm. CA. conteniendo Agar Papa Sacarosa e incubados a temperatura ambiental (aprox. 25 ± 2 ºC), durante 5 días, con la finalidad de obtener cultivos jóvenes. Evaluación del efecto de Lufenuron sobre Trichoderma asperellum. TE. 2.2.. BL. IO. 2.2.1. Evaluación del efecto de Lufenuron sobre la germinación de esporas de T. asperellum. BI. 2.2.1.1. Reactivación del cultivo de T. asperellum Para la reactivación de T. asperellum a partir del cultivo puro guardado se sembró por puntura en frascos planos con agar Sabouraud inclinado y luego se incubó durante 7 días a temperatura ambiental.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.2. Preparación del inóculo de esporas El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de agua destilada estéril a cada frasco plano con Agar Sabouraud que contenía T.. AS. asperellum. Luego se agitó moderadamente con el fin de liberar las. IC. esporas del hongo. La suspensión resultante de cada frasco plano se. G. colocó en un matraz estéril y se determinó la concentración de esporas. LO. mediante el recuento en Cámara de Neubauer. Luego, esta suspensión se. O. diluyó con agua destilada estéril hasta obtener una concentración final de. BI. 14 x 106 esporas/mL.. AS. 2.2.1.3. Preparación de las soluciones doble concentradas de Lufenuron. CI. En tres matraces con 100 mL de caldo papa estéril cada uno, se colocó el. CI EN. insecticida en cantidades para obtener soluciones dobles concentradas de 150 ppm, 350 ppm y 700 ppm. Se dejó un matraz con solo caldo papa para utilizarlo como control.. DE. 2.2.1.4. Inoculación e incubación para la evaluación de la germinación. CA. Se colocó 2 mL de cada solución del insecticida doble concentrado en frasquitos estériles, a los cuales se les agregó 2mL de la suspensión de. BI. BL. IO. TE. esporas obtenido previamente, con lo cual se obtuvo una dilución de 14 x 105 esp/mL y concentraciones finales de 75, 175 y 350 ppm para el insecticida Lufenuron 5% EC. Se preparó también una suspensión de esporas control (0 ppm), agregándole 2 mL de la suspensión de esporas en 2mL de caldo papa estéril y se dejó en incubación por 24 horas a temperatura ambiental.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.1.5. Lectura Transcurrido el tiempo de incubación se agregó 4 gotas de azul de lactofenol a cada frasco, y se hizo la lectura de esporas germinadas en el. AS. microscopio a 40x de 5 campos de la lámina, tomándose como 100% las. IC. esporas que germinaron en el control.26. G. 2.2.2. Evaluación del efecto de Lufenuron sobre el crecimiento de T.. LO. asperellum. O. 2.2.2.1. Preparación del medio de cultivo. BI. En 4 matraces se preparó 100 mL de agar papa sacarosa cada uno. Luego. AS. de autoclavarlos, se agregó antibiótico a cada matraz y la cantidad de. CI. químico requerida para obtener concentraciones de 75 ppm, 175 ppm y. control.. CI EN. 350 ppm, dejando un matraz solo con agar papa sacarosa para las placas. 2.2.2.2. Siembra e incubación. DE. A partir del cultivo puro de T. asperellum se sembró por puntura en la. CA. parte central de las placas Petri conteniendo agar papa previamente preparadas en el paso anterior (5 placas por concentración incluidas las. IO. TE. placas del control); las cuales se incubaron a temperatura ambiental por 7 días que tardó el hongo en cubrir toda la placa control.26. BI. BL. 2.2.2.3. Lectura A partir del primer día de siembra, y hasta el sétimo día, se midió el diámetro de crecimiento micelial en centímetros (cm.) del hongo en diferentes direcciones, para obtener un promedio de crecimiento por día por cada concentración de los insecticidas y el grupo control. Los. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. resultados de crecimiento de T. asperellum se expresaron en centímetros y en porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de la siguiente manera:. AS. 𝑅𝑎𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑏𝑙𝑒𝑚𝑎 𝑥 100 𝑅𝑎𝑑𝑖𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑚𝑒𝑑𝑖𝑜 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑐𝑜𝑙𝑜𝑛𝑖𝑎 𝑡𝑒𝑠𝑡𝑖𝑔𝑜. IC. %𝐶 =. LO. G. 2.2.3. Evaluación de la capacidad antagonista de T. asperellum. 2.2.3.1. Resiembra de cultivo de Fusarium oxysporum y T. asperellum. BI. O. De las placas con Lufenuron donde se obtuvo crecimiento de T.. AS. asperellum se sacó una asada de cada concentración y se sembró en tubos con agar papa sacarosa más las diferentes concentraciones del insecticida. CI. y un control. Se incubó a temperatura ambiente. Asimismo, se sembró F.. CI EN. oxysporum en tubos con agar papa sacarosa y se incubó a temperatura ambiente. Luego del período de incubación se utilizaron tanto los. DE. cultivos de T. asperellum como los de F. oxysporum en la prueba de cultivo dual.. CA. 2.2.3.2. Cultivo dual de T. asperellum y F. oxysporum. TE. Para evaluar la capacidad antagonista de T. asperellum se realizó la. BI. BL. IO. técnica de cultivo dual de T. asperellum y F. oxysporum, sembrando ambos hongos en 4 placas Petri con agar papa sacarosa, de manera equidistante. Debido a que estos hongos presentan diferencias en sus tasas de crecimiento, se sembró primero a F. oxysporum y luego de 3 días se sembró a T. asperellum, incubándose durante 7 días más a 25 ºC.26. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.3.3. Lectura Luego del período de incubación se determinó la invasión de T. asperellum sobre la superficie del de F. oxysporum ubicándolo en la. Análisis de datos. IC. 2.3.. AS. escala de clases de antagonismo propuesta por Bell.27 (Anexo 14.). G. La determinación del efecto del insecticida Lufenuron 5% EC sobre T.. LO. asperellum, se realizó analizando el porcentaje de germinación y el porcentaje. O. de crecimiento de T. asperellum, en las diferentes concentraciones de dichos. BI. insecticidas, procesando los datos en base a la prueba de Análisis de Varianza. AS. Unidireccional (ANOVA)., según el paquete estadístico SPSS v.22. El cual nos. CI. sirve para comparar varios grupos en una variable cuantitativa. Esta prueba es. CI EN. una generalización del contraste de igualdad de medias para dos muestras independientes. Se aplica para contrastar la igualdad de medias de tres o más poblaciones independientes y con distribución normal. Utilizamos los. DE. contrastes llamados comparaciones múltiples post-hoc o a posteriori para saber. CA. qué media difiere de qué otra. Esas comparaciones permiten controlar la tasa de error al efectuar varios contrastes utilizando las mismas medias.28 En relación. BI. BL. IO. TE. al antagonismo se empleó la escala de Bell.27 (Anexo 14.). 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. En la Fig. 1, se observa que el insecticida Lufenuron, en las tres concentraciones. IC. AS. aplicadas, disminuye la germinación de T. asperellum hasta valores del 0.00 %.. O. LO. después de 24 horas de incubación en los 4 tratamientos.. G. La Fig. 2 muestra a las esporas germinadas y no germinadas de T. asperellum. BI. En la Fig. 3 se observa que el insecticida Lufenuron, en las tres concentraciones. AS. aplicadas, disminuye el crecimiento de T. asperellum hasta valores del 38.59% en. CI EN. CI. la mayor concentración.. En la Fig. 4 se observa el crecimiento radial en placa de T. asperellum frente a los. DE. 4 tratamientos aplicados.. CA. En la Fig. 5 se observa que en el cultivo dual de T. asperellum frente a F. oxysporum, para cada concentración de insecticida, presenta actividad antagonista. TE. de tipo 2 para las concentraciones de 75 y 175 ppm y de tipo 4 para la concentración. BI. BL. IO. de 350 ppm según la escala de Bell et al.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) b. b. b. CI EN. CI. a. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DE. a: p<0.05 Si existe diferencia significativa. CA. b: p>0.05 No existe diferencia significativa. Fig.1.. Porcentaje de germinación de Trichoderma asperellum frente a diferentes. TE. concentraciones (ppm) del insecticida Lufenuron a las 24 horas de. BI. BL. IO. incubación a temperatura ambiente.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. O. LO. G. IC. AS. A. 75 ppm. BI. 0 ppm. B. DE. CI EN. CI. AS. A. 350 ppm. TE. CA. 175 ppm. IO. A: espora germinada. BL. B: espora no germinada. BI. Fig.2. Observación microscópica (40x) de conidias germinadas y no germinadas de Trichoderma asperellum frente a diferentes concentraciones del insecticida Lufenuron (ppm).. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) b. b. a. CI EN. CI. a. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. b. b. a. DE. a. a: p<0.05 Si existe diferencia significativa. Porcentaje de crecimiento de Trichoderma asperellum frente a diferentes. IO. Fig.3.. TE. CA. b: p>0.05 No existe diferencia significativa. condiciones de laboratorio e incubados a temperatura ambiente.. BI. BL. concentraciones (ppm) del insecticida Lufenuron, evaluado durante 7 días en. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 75 ppm. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. 0 ppm. 350 ppm. TE. 175 ppm. IO. Fig.4. Crecimiento radial de Trichoderma asperellum frente a diferentes. BI. BL. concentraciones del insecticida Lufenuron, evaluado durante 7 días en condiciones de laboratorio e incubado a temperatura ambiente. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. T. F. F. T. F. T. F. a. a. BI. O. a. a F. F. T. CI AS. T. F. T. F. DE. CI. EN. T. LO. G. IC AS. T. b. 0 ppm. b. b. 350 ppm. a: vista anterior. b: vista posterior. BL I. O. T: colonia de Trichoderma asperellum F: colonia de Fusarium oxysporum. 175 ppm. TE CA. 75 ppm. b. oxysporum.. BI. Fig.5. Cultivo dual de Trichoderma asperellum (previamente enfrentado a las diferentes concentraciones de Lufenuron) frente a Fusarium. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. En la presente tesis se determinó el efecto del insecticida Lufenuron sobre la. AS. germinación, crecimiento y capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en. G. IC. condiciones de laboratorio.. LO. En la evaluación de la germinación se encontró en el análisis estadístico que existe. O. diferencia significativa (p<0.05) entre el número de esporas germinadas de T. asperellum. BI. del control con las esporas germinadas en las diferentes concentraciones de Lufenuron,. AS. pero que no existe diferencia significativa entre cada una de las concentraciones del. CI EN. CI. insecticida.. Debido a la escasa información acerca del efecto de Lufenuron frente a cepas de Trichoderma, los resultados obtenidos se explicarán en base a la composición química del. DE. insecticida, a las características fisiológicas de Trichoderma y a investigaciones. CA. relacionadas.3. TE. Lufenuron es un insecticida perteneciente al grupo de las benzoilfenilureas, que. IO. interfiere en la síntesis de quitina y se absorbe rápidamente. La síntesis de quitina es el sitio. BL. primario de ataque de las benzoilfenilureas (lufenuron), es decir el Lufenuron interfiere con. BI. la formación de la pared de la célula micótica.29. La germinación de las esporas se inicia en el retículo endoplasmático en el que se fabrica quitina y glucanos necesarios para la formación de la pared celular. 23 Este proceso. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. fisiológico implica una fase inicial de hinchamiento provocada por hidratación (no dependiente del metabolismo) seguida de otra fase de hinchamiento que si depende de la actividad metabólica. Este proceso depende en gran parte de la humedad y de la 30,31,32. Durante esta fase el hongo. AS. temperatura, además la síntesis de quitina es esencial.. G. IC. incorpora nuevo material a la pared y luego una hifa joven emerge.33. LO. En tal contexto se puede decir que la disminución de la germinación frente a. O. Lufenuron se debe a que cuando la espora entra en contacto con el medio, tiende a absorber. BI. nutrientes para su desarrollo, por lo tanto, habría absorbido el insecticida diluido en el. AS. medio, bloqueando alguna de sus funciones fisiológicas como lo es la síntesis de quitina.. CI. Los resultados muestran también que al someter a Trichoderma a mayor concentración de. CI EN. insecticida, hay una mayor disminución de la germinación, esto se debe a que las esporas han estado en contacto con mayor cantidad de plaguicida diluido. Esto concuerda con los estudios realizados con los insecticidas Imidacloprid y. CA. Trichoderma viride.34. DE. Acetamiprid que, aunque en porcentaje relativamente bajo, disminuye la germinación de. TE. Con respecto a la determinación del efecto de Lufenuron sobre el crecimiento de. IO. T. asperellum, después del análisis estadístico se encontró que existe diferencia. BL. significativa entre el porcentaje de crecimiento del control y el porcentaje de crecimiento. BI. de las concentraciones, asimismo, no existe diferencia significativa entre la concentración 75 ppm y 175 ppm, pero si hay diferencia significativa entre estas dos concentraciones con la concentración mayor de 350 ppm.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La pared celular es una estructura esencial para los hongos y su eliminación o los defectos en su formación tienen efectos profundos en el crecimiento y la morfología de la célula fúngica, pudiendo causar la muerte celular por lisis. Dado el papel vital que la pared. AS. celular juega en la fisiología de la célula fúngica, puede considerarse una diana muy. IC. importante para la acción de los fármacos antifúngicos. La pared fúngica está compuesta. G. básicamente de polisacáridos y proteínas. Entre los polisacáridos destacan la quitina, el. LO. glucano y el manano o el galactomanano. Mientras que las proteínas generalmente están. O. asociadas a polisacáridos formando glicoproteínas. La quitina se sintetiza a partir de N-. BI. acetilglucosamina por la enzima quitina sintasa, que deposita los polímeros de quitina en. AS. el espacio extracelular próximo a la membrana citoplásmica. El contenido en quitina de la. CI EN. CI. pared fúngica varía según la fase morfológica del hongo.33. La pared celular de Trichoderma no es ni muy rígida ni muy delgada, y para que su crecimiento apical tenga lugar, Trichoderma posee enzimas líticas y sintetasas que. DE. rompen las uniones de la pared para que la hifa se alargue como resultado de la presión de. CA. turgencia. Asimismo, hay enzimas que intervienen en la síntesis de la pared, la cual es de. IO. crece.. TE. tipo quitina ß-glucano.35 Por lo tanto, al no ser capaz de sintetizar quitina, la hifa ya no. BL. Podemos decir que a mayor concentración de insecticida Lufenuron menor es el. BI. crecimiento, esto se debe a que las altas concentraciones de algunos productos pueden inhibir la acción enzimática clave de las rutas metabólicas centrales o de los procesos de transporte del hongo, y en consecuencia disminuir el crecimiento de la población. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. microbiana. Además, puede utilizar vías metabólicas alternas para reducir la adsorción del compuesto químico.36. AS. Esto es lo que ocurre al someter a Trichoderma asperellum en medio envenenado. IC. con Lufenuron, el cual inhibe la síntesis de quitina haciendo la pared celular no se forme y. G. de esta manera que las hifas del hongo ya no crezcan disminuyendo el diámetro de la. LO. colonia. Esto concuerda con la investigación de Mendez cuyos resultados muestran que a. O. mayor concentración del insecticida clorpirifos menor es el crecimiento de T. viride.37. BI. Las diferencias observadas entre la inhibición de la germinación y del crecimiento. AS. son probablemente debido a una cierta reducción del efecto del insecticida en el medio. CI. PDA en el tiempo, ya que la germinación se evaluó 1 día después del tratamiento mientras. CI EN. que el crecimiento radial se midió 7 días después del tratamiento.23,25. También se realizó el cultivo dual de T. asperellum frente a F. oxysporum. DE. obteniéndose que las cepas, sometidas previamente a un medio envenenado con el. CA. insecticida Lufenuron, pierden su capacidad antagonista.. TE. Trichoderma es conocido por degradar paredes celulares fúngicas gracias a que es. IO. hiperproductora de enzimas como quitinasas, glucanas y proteasas, implicadas en la lisis. BL. de micelios fúngicos.31 Hay estudios que demuestran que una endoquitinasa de T.. BI. atroviride muestra mayor resistencia hacia la infección por Fusarium.12 Estas quitinasas degradan la pared celular del hospedero y posibilitan la penetración de las hifas del antagonista, inhibiendo también el alargamiento de las hifas.38,39,40 Es decir, las especies de Trichoderma durante el proceso de micoparasitismo crecen quimiotrópicamente hacia el. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hospedante, se adhieren a las hifas del mismo, se enrollan en ellas frecuentemente y las penetran en ocasiones. La degradación de las paredes celulares del hospedante se observa en los estados tardíos del proceso parasítico, que conlleva al debilitamiento casi total del. IC. AS. fitopatógeno.41. G. De esa manera, Trichoderma ataca directamente al patógeno de la planta mediante. LO. la excreción de enzimas líticas tales como quitinasas, β-1, 3-glucanasas y proteasas.42. O. Bautista y Acevedo realizaron pruebas en cultivos duales entre 16 aislamientos de. BI. Trichoderma, de las cuales cinco presentaron gran potencial de antagonismo por su alta. 43. También se encontró que al enfrentar a. CI. spp. creció sobre Mycosphaerella fijiensis.. AS. velocidad de crecimiento. De igual manera una investigación muestra que Trichoderma. CI EN. Trichoderma con F. oxysporum, esta no afectó su velocidad de crecimiento, pero sí limitó su desarrollo una vez que entraron en contacto.44 Cook y Baker afirman que la velocidad de crecimiento presentada por las especies de Trichoderma es una característica de. DE. agresividad y competitividad que este microorganismo posee como antagonista para el. CA. control de fitopatógenos.45. TE. Lo obtenido en los resultados demuestran que las placas sembradas con. IO. Trichoderma asperellum previamente expuesto a concentraciones 75 ppm, 175 ppm y 350. BL. ppm del insecticida Lufenuron disminuyen su efecto antagonista en comparación con el. BI. control. En las concentraciones 75 ppm y 175 ppm se observa antagonismo tipo 2 ya que el T. asperellum llega a cubrir las dos terceras partes del medio, mientras que en la concentración 350 ppm se observa un antagonismo tipo 4 ya que el patógeno F. oxysporum abarca las dos terceras partes del medio y parece resistir la invasión de T. asperellum.27. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Esto está dado porque el hongo durante su crecimiento y germinación presenta características antibióticas y enzimáticas que determinan su capacidad biótica y antagónica26, al ser expuesto al insecticida se pudo provocar daño a nivel de pared celular. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. y debilitar al hongo impidiéndole parasitar a Fusarium.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. AS. Una alternativa para neutralizar el efecto negativo que tienen los agroquímicos. IC. sobre el principio activo del bioplaguicida, puede ser la implementación de frecuencias de. G. aplicación distanciadas en el tiempo con el fin de disminuir el tiempo de contacto entre el. LO. agroquímico y el hongo, en este caso se debería aplicar Trichoderma y el insecticida. O. Lufenuron en periodos de tiempo diferentes, para que cada uno pueda realizar su función. BI. adecuadamente.. AS. Los resultados de compatibilidad in vitro de los diferentes agroquímicos con los. CI. bioplaguicidas son la base para la selección de moléculas que pueden aplicarse de manera. CI EN. simultánea con este agente de control biológico o de forma alternada en programas de manejo integrado de plagas. Sin embargo, es necesario validar dicha compatibilidad en condiciones reales de campo, ya que en algunas ocasiones se han evidenciado diferencias. BI. BL. IO. TE. CA. DE. entre lo determinado en laboratorio en caja de Petri y lo que pasa en ensayos in vivo.46. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CONCLUSIONES. AS. El insecticida Lufenuron, a las concentraciones de 75 ppm, 175 ppm y 350 ppm, disminuye. IC. significativamente la germinación de Trichoderma asperellum en condiciones de. LO. G. laboratorio, no existiendo diferencia significativa entre las concentraciones evaluadas.. O. El insecticida Lufenuron, a las concentraciones de 75 ppm, 175 ppm y 350 ppm, disminuye. BI. significativamente el crecimiento de Trichoderma asperellum en condiciones de. CI. AS. laboratorio.. CI EN. El insecticida Lufenuron, a las concentraciones de 75 ppm, 175 ppm y 350 ppm, disminuye. BI. BL. IO. TE. CA. DE. la capacidad antagonista de Trichoderma asperellum frente a Fusarium oxysporum.. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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