Efecto del fosfito de cobre y fosfito de calcio sobre la germinación, crecimiento y la capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y. AS. BI O. LO. G. IC AS. PARASITOLOGÍA. EN CI. Efecto del fosfito de cobre y fosfito de calcio sobre la germinación, crecimiento y la capacidad antagonista de. DE. CI. Trichoderma asperellum en condiciones de laboratorio. TESIS. CA. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE. IO. TE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. Br. Akintui Aguilar Miriam Rosmery. BI. BL. Autor: Br. Aguilar Ramos Cecilia Margarita. Asesor: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg Trujillo – Perú 2019 i. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. DEDICATORIA. A Dios por su infinito amor, iluminarnos, guiarnos y ser. LO. AS. BI O. universitaria con éxito.. G. nuestra fuente de fortaleza para culminar esta etapa. A mis padres, María y Sixto, y hermanos por su. EN CI. cariño, su buen ejemplo y el apoyo en las decisiones que he tomado a lo largo de mi. CA. DE. CI. formación académica.. A mi amada madre Virgen y a mis hermanas,. TE. Sarita y Akemy, por ser mi significado de amor,. IO. fortaleza y sobre todo de fuerza, que me ha. BI. BL. empujado a ser mejor cada día. A mi padre José, por su apoyo constante y al angelito que ilumina mi vida Thiago.. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS. IC AS. Al Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg, Profesor del Departamento de. Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo, por su amistad, el. G. tiempo, y la predisposición brindada en el asesoramiento de nuestra tesis a lo largo de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. BI O. LO. todo este proceso.. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. BI O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE Dedicatoria........................................................................................................................ ii. IC AS. Agradecimiento ............................................................................................................... iii Jurado dictaminador ........................................................................................................ iv. G. .............................................................................................................................v. LO. Índice. BI O. Presentación ..................................................................................................................... vi. AS. Del Asesor ...................................................................................................................... vii. EN CI. Resumen ........................................................................................................................ viii Abstract ........................................................................................................................... ix. CI. I. Introducción ...................................................................................................................1. DE. II. Materiales y Métodos....................................................................................................9. CA. III. Resultados..................................................................................................................16. TE. IV. Discusión ...................................................................................................................25. IO. V. Conclusiones ...............................................................................................................32. BL. VI. Recomendaciones ......................................................................................................33. BI. VII. Referencias Bibliográficas .......................................................................................34 Anexos ...........................................................................................................................43. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. PRESENTACIÓN. G. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. LO. Cumpliendo con las disposiciones establecidas por el Reglamento de Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, presentamos a vuestra consideración y. BI O. elevado criterio la presente Tesis titulada: Efecto del fosfito de cobre y fosfito de calcio sobre la germinación, crecimiento y capacidad antagonista de Trichoderma asperellum. AS. en condiciones de laboratorio, con el objetivo de obtener el título profesional de. Trujillo, Diciembre 2019. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. Biólogo-Microbiólogo.. Br. Cecilia Margarita Aguilar Ramos. Br. Miriam Rosmery Akintui Aguilar. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC AS. DEL ASESOR. El que suscribe: Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la presente tesis titulada:. Efecto del fosfito de cobre y fosfito de calcio sobre la germinación, crecimiento y. LO. G. capacidad antagonista de Trichoderma asperellum en condiciones de laboratorio.. AS. BI O. CERTIFICA:. Que, la investigación ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento establecido por la. EN CI. Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con su correspondiente proyecto y que el informe ha sido redactado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. MIRIAM. ROSMERY,. para. continuar. con. los. procedimientos. DE. AGUILAR. CI. Por tanto, autorizo a las Bachiller AGUILAR RAMOS CECILIA Y AKINTUI. CA. correspondientes según sus fines.. BI. BL. IO. TE. Trujillo, Diciembre 2019. Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se evaluó el efecto del fosfito de cobre y fosfito de calcio sobre la germinación,. IC AS. crecimiento y capacidad antagonista de Trichoderma asperellum. Se empleó 4. tratamientos por fosfito: 3 experimentales, 17.2, 51.4 y 85.7 ppm de fosfito de cobre y 500, 2000 y 4000 ppm para fosfito de calcio, y un control para cada químico. Se. G. determinó la germinación mezclando 2 mL del fosfito doblemente concentrado en agua. LO. destilada y 2 mL de una suspensión de 1x107esp/ml de T. asperellum, incubándose a 25ºC por 24 horas; realizándose la lectura en cámara de Neubauer. Para evaluar el. BI O. efecto del fosfito sobre el crecimiento se sembró en placas de Petri con agar papa sacarosa (APS) y fosfito a las concentraciones empleadas, incubándose a 25 ºC, se. AS. midió diariamente el crecimiento radial durante 5 días. La capacidad antagonista se evalúo usando la técnica de cultivo dual, donde el cultivo de T. asperellum procedente. EN CI. de medio APS con fosfito y el cultivo puro del fitopatógeno, Fusarium oxysporum y Rhizoctonia solani, fueron sembrados en una placa de Petri con APS. Realizándose la lectura con la escala propuesta por Bell. Se obtuvo que, el porcentaje de germinación de. CI. T. asperellum fue de 71%, 73% y 76%, mientras que, el porcentaje de crecimiento fue de 86%, 85% y 72% a las concentraciones de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm respectivamente del. DE. fosfito de cobre. En las concentraciones de 500, 2000 y 4000 ppm de fosfito de calcio se obtuvo que, el porcentaje de germinación fue de 50%, 69% y 30%, y el porcentaje de. CA. crecimiento fue de 75%, 15% y 0% respectivamente. Se concluye que el fosfito de. TE. cobre disminuye significativamente la germinación, pero no el crecimiento ni la capacidad antagonista, mientras que el fosfito de calcio disminuye la germinación y. IO. crecimiento, pero no afecta la capacidad antagonista de T. asperellum.. BL. Palabras claves: Trichoderma asperellum, Fusarium oxysporum y Rhizoctonia solani.. BI. fosfito de cobre, fosfito de calcio, germinación, crecimiento, capacidad antagonista.. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. IC AS. It was evaluated the effect of copper phosphite and calcium phosphite on the germination, growth and antagonistic capacity of Trichoderma asperellum. Four treatments per phosphite were used: 3 experimental, 17.2, 51.4 and 85.7 ppm of copper. G. phosphite and 500, 2000 and 4000 ppm for calcium phosphite, and a control for each. LO. chemical. Germination was determined by mixing 2 mL of the phosphite doubly. BI O. concentrated in distilled water and 2 mL of 1x107 esp/ml of T. asperellum, incubated at 25 °C for 24 hours; the reading was made in Neubauer´s chamber. To evaluate the effect on the growth T. asperellum was sowed in Petri dishes with sucrose potato agar. AS. (APS) and phosphite to used concentrations, incubated at 25 °C, the radial growth was measured daily during 5 days. The antagonistic capacity was evaluated using the dual. EN CI. culture technique, where the culture of T. asperellum from APS medium with phosphite and the pure culture of the phytopathogen, Fusarium oxysporum and Rhizoctonia solani, were seeded in a Petri dish with APS. The reading was made with the scale proposed by. CI. Bell. It was obtained that, the germination percentage of T. asperellum was 71%, 73%. DE. and 76% while, the growth percentage was 86%, 85% and 72% at the concentrations of 17.2, 51.4 and 85.7 ppm respectively of the copper phosphite. In the concentrations of. CA. 500, 2000 and 4000 ppm of calcium phosphite it was obtained that, the germination percentage was 50%, 69% and 30%, and the growth percentage was 75%, 15% and 0%. TE. respectively. It is concluded that copper phosphite significantly decreases germination, but not growth and antagonistic capacity, while calcium phosphite decreases. IO. germination and growth, but the antagonistic capacity of T. asperellum does is not. BL. affected.. BI. Keywords: Trichoderma asperellum, Fusarium oxysporum, Rhizoctonia solani, copper phosphite, calcium phosphite, germination, growth, antagonistic capacity.. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I.. INTRODUCCIÓN. En la agricultura, gran cantidad de microorganismos son causantes de enfermedades. IC AS. en cultivos de hortalizas, cereales y frutas, siendo responsables de daños que no solo. se refieren a las pérdidas económicas, sino también a la alteración en el crecimiento y. G. desarrollo de las plantas hospedantes atacadas por estos microorganismos 1. Para. LO. satisfacer la demanda de alimentos a pesar del daño que causan estas plagas a los. BI O. cultivos, el hombre ha optado por la aplicación a gran escala de agroquímicos 2.. AS. La utilización de éstos juegan un rol importante en la mejora del rendimiento de los. EN CI. cultivos 2; sin embargo, el uso excesivo y las malas prácticas del manejo de plaguicidas durante la producción agrícola han llevado a la acumulación y a la. CI. contaminación de todos los ambientes debido a su dispersión, lixiviación y vo-. DE. latilización 3, 4, por lo que son un riesgo para la salud humana y otros organismos 5. Sin embargo, existe una alternativa al uso de fungicidas que son el empleo de sales 6. y. CA. inorgánicas, los cuales son eficaces en el manejo de enfermedades en los cultivos. TE. además poseen baja toxicidad para el medio ambiente 7. Al respecto, estudios reportan que se han utilizado 34 diferentes sales con esa finalidad, además indican que las sales. BL. IO. de fosfito destacan por su frecuencia de utilización y eficacia en el control 8.. BI. Los fosfitos empleados en la agricultura son compuestos que resultan de la reacción. del ácido fosforoso con iones metálicos como potasio, calcio, magnesio, manganeso, cobre, zinc, aluminio, entre otros. 9-11. .. Están considerados como fertilizante,. bioestimulante, y en algunos casos, como fungistáticos y fungicidas tanto en cultivos 1. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. extensivos como intensivos produciendo cambios anatómicos y bioquímicos dentro de la planta 9. Numerosos ensayos demuestran que estimulan los mecanismos de defensa de las. IC AS. plantas y por ello se los incluye en los llamados inductores de la resistencia de las. plantas. Si bien el uso de estos no puede sustituir a los fungicidas ante epidemias. G. severas, podrían constituir una estrategia complementaria y formar parte de un. BI O. LO. programa que fortalezca la sustentabilidad, protegiendo al ambiente 9.. Los fosfitos tienen doble circulación, es decir, se mueven a través del xilema y floema,. AS. por lo que su aplicación puede ser a cualquier órgano de la planta (hojas, tallo o raíz).. EN CI. La propiedad de transportarse por el floema permite que llegue a las raíces junto con los fotosintatos para el control de enfermedades causadas por hongos del suelo, a. CI. diferencia de los fungicidas tradicionales que solo se translocan por el xilema (ascendente), controlando solo a los hongos fitopatógenos del follaje. 9-11. .. Sin. DE. embargo, para lograr eficazmente el efecto biocida contra hongos como Phytophthora,. CA. Pseudoperonospora, Peronospora, Pythium, Albulgo, Bremia, etc, no deben existir deficiencias de fósforo en las plantas, de lo contrario se pueden presentan efectos. IO. TE. contraproducentes 12.. BL. El efecto biocida de los fosfitos se produce mediante una vía directa e indirecta. En la. BI. primera el ion fosfito entra en contacto con los organismos fitopatógeno afectando su crecimiento y reproducción al influir en la expresión de genes que codifican la síntesis de compuestos indispensables en la estructura y fisiología celular 6, también compite con el fosfato en diversas rutas metabólicas afectando los procesos de transferencia. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. energética del hongo. Como consecuencia se podría producir en el hongo un estado de ausencia total de fósforo disponible para cubrir las necesidades de construcción del ADN y estructuración de las membranas con fosfolípidos 13.. IC AS. Estudios realizados por Wong et al compararon el efecto del ion fosfito y el ion. fosfato sobre el crecimiento de Phythopthora cinnamomi en placa y comprobaron la 14. . Por su parte Hofgaard et al. G. susceptibilidad de los microorganismos al ion fosfito. LO. obtuvo disminuciones de 60, 80 y 90% en el crecimiento de micelio de Fusarium. BI O. culmorum, Fusarium graminearum y Microdochium majus, respectivamente, con 10µl. AS. ml-1 de fosfito de potasio 15.. EN CI. La vía indirecta está relacionada con el incremento de la resistencia de la planta. El ión fosfito provoca cambios en la pared celular, dando como resultado que fracciones. CI. de esta actúen a modo de elícitores externos, es decir se desencadena todo un proceso de activación de defensas de la planta, con lo cual se promueve la formación de. DE. peroxidasas, fitoalexinas y la acumulación de polímeros fenólicos, además de lignina,. CA. en el sitio de infección 13.. TE. Sin embargo, los reportes comparativos de la eficacia en el control entre fosfitos y. IO. fungicidas convencionales, indican que los primeros son menos eficaces y que no los. BL. podría sustituir por completo, pero su integración como parte de un programa de. BI. manejo integrado puede permitir disminuir el uso de fungicidas y reducir la posibilidad de generar resistencia por los organismos. 16. . Como una alternativa para. ello, se encuentra la aplicación de control biológico de fitopatógenos con hongos del. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. género Trichoderma, que son los microorganismos más utilizados y son aún objeto de investigación y desarrollo en muchos países 17-21.. (suelos agrícolas, pastizales, bosques y desiertos), y acuáticos. 22. IC AS. El género Trichoderma se caracteriza por predominar en los ecosistemas terrestres. . Algunas especies. G. son de vida libre en el suelo, oportunistas, simbiontes de plantas, y otras. 23,24. . Los requerimientos nutrimentales de estos hongos. BI O. capacidad reproductiva. LO. son micoparásitas. Además, pueden colonizar distintos ambientes, debido a su alta. filamentosos son pocos, aunque su crecimiento es favorecido por la materia orgánica,. AS. humedad y temperatura óptima que se encuentran en un rango de 25 a 30 °C. 25. . Sin. EN CI. embargo, se pueden adaptar y sobrevivir en condiciones extremas de temperatura, pH. CI. y salinidad 26,27.. Dentro de algunas ventajas del género Trichoderma spp. destacan que es un agente. DE. inofensivo con plantas o suelos, aumenta la capacidad de crecimiento de la planta,. CA. estimula el desarrollo radicular, su uso disminuye el daño al medio ambiente, se aplica. TE. fácilmente mediante formulación líquida o sólida pulverizándolo sobre el terreno o sobre la planta, es compatible con algunos fungicidas como el azufre, es de bajo costo,. IO. disminuye la necesidad de usar productos químicos y es considerado no tóxico ni. BL. alergénico. En su acción como control biológico de hongos fitopatógenos presenta. BI. ventajas como: especificidad, permanencia en el tiempo e inocuidad para el ser humano y el medio ambiente 28,29.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Las especies como T. viride, T. polysporum y T. harzianum son consideradas como los antagonistas más utilizados para el control de enfermedades de plantas producidos por hongos; debido a su ubicuidad, facilidad para ser aisladas y su crecimiento rápido 30-33. . A ello se suma que la mayoría de cepas. IC AS. en un gran número de sustratos. destinadas al control biológico poseen información relacionada con la susceptibilidad. G. o resistencia a un amplio rango de agroquímicos como en el caso de T. harzianum que. LO. posee resistencia a estos 34.. BI O. Es por ello, que antes de incorporar un producto biológico en el manejo de un cultivo es imprescindible evaluar la compatibilidad de este con los plaguicidas y otros. AS. compuestos químicos que se usaran o se han usado en el cultivo, con la finalidad de. EN CI. conocer sus potencialidades y limitaciones en la degradación de este tipo de compuestos orgánicos. Esto con el fin de conservar la capacidad controladora de. CI. Trichoderma y establecer medidas para su uso eficiente en el control de los organismos nocivos 35. Al utilizar en forma conjunta (químicos y biológicos) se busca. DE. que ambos controladores, siendo aplicados a un mismo sustrato, muestren. CA. compatibilidad, es decir que ninguno de ellos minimice o inhiba al otro. Cuando uno de ellos afecta al otro se dice que son incompatibles y por lo tanto no deben aplicarse. IO. TE. juntos 36, limitando la combinación de los métodos 37.. BL. Se ha descrito una inhibición del crecimiento de Trichoderma frente a fungicidas. BI. como fludioxonil+metalaxil, a una dosis letal, media e inferior a la recomendada para campo. También zineb, mancozeb y tiram mostraron ligera toxicidad y benomil se comportó como tóxico. En una investigación realizada sobre la compatibilidad de Trichoderma spp. y fungicidas utilizados en cultivos de tabaco se obtuvo que. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. propiconazol+piroquilon, y tebuconazol+triadimenol afectaron a la germinación y crecimiento en más de 90% a diferencia de carbendazim y azoxistrobina que afectan solo en un 60% a dos cepas de T. asperellum. Así mismo en esta, los fungicidas. IC AS. oxicloruro de cobre, metalaxil y dimetomorf fueron compatibles con diferentes. G. especies de Trichoderma 38.. spp.. con. fungicidas. obteniendo. como. resultado. que;. el. BI O. Trichoderma. LO. Por otro lado, en otra investigación se evaluó la compatibilidad de aislados nativos de. Carbendazim+Thiram produjo, mayor inhibición (43%) en el aislado A-5, sin. AS. embargo, la inhibición llega a tan solo 12% en el aislado A-107; el Carboxim+Thiram,. EN CI. produjo inhibiciones de entre 1% a 12%, siendo menor en el A-76 y mayor en el aislado A-5; el Metiltiofanato+Thiram produjo entre 4% a 21% de inhibición, siendo. CI. menor en A-106 y mayor en el aislado A-62; en cuanto al Tebuconazole, produjo entre 4% a 26% de inhibición de crecimiento micelial, teniendo menor efecto en los aislados. DE. en el A-76, A-90, A-106 y A-107 y mayor en el A-5, lo que demuestra que el nivel de. CA. resistencia difiere entre las cepas 39.. TE. Mishra et al. aislaron cepas nativas de Trichoderma sp, el cual se pusieron en. IO. tratamiento con dos pesticidas organofosforados y carbamatos, obteniendo resultados. BL. positivos en el antagonismo de patógenos frente a la presencia de estos pesticidas. 40. .. BI. Así mismo, Sarkar et al evaluaron el efecto de siete fungicidas sistémicos, dos fungicidas de contacto y cuatro biopesticidas crecimiento radial, y los niveles de esporulación de T. harzianum, obteniendo como resultado que los fungicidas. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. sistémicos derivados de los benzimidazoles resultaron más tóxicos que los de contacto 41. .. IC AS. En cuanto a la acción de insecticidas sobre este agente de control biológico reportan. que es variable. Insecticidas como forato o carbofurano pueden inhibir el crecimiento 42-44. , de igual modo cipermetrin y cihalotrin inhiben. G. de especies de Trichoderma. LO. significativamente el crecimiento de T. asperellum. Mientras que los insecticidas 38. .. Sin. BI O. quinalfos y dicofol mostraron toxicidad, incluso con baja concentración. embargo, algunas especies de Trichoderma son compatibles con insecticidas como. AS. mimetoato y el metamidofos 40.. EN CI. Los herbicidas también muestran diferentes grados de incompatibilidad con aislamientos de Trichoderma, investigaciones muestran que cuando se aplica 45. y que los. glifosato. inhiben. herbicidas. CI. Trichoderma al suelo en presencia de diclorán se afecta su viabilidad fenoxaprop-p-etilo,. 2,4D. sal. de. amina. y. DE. significativamente el crecimiento de dos cepas de T. asperellum. 45. . Asimismo, las. CA. especies T. harzianum y T. longipilus son sensibles al herbicida fosfinotricina a una concentración de 1 mM. 46. . No obstante, productos como trifluralin, napropamida y. TE. bispiribac-sodio fueron considerados compatibles con diferentes especies de. BL. IO. Trichoderma 38.. BI. Por su parte, los iones metálicos también pueden interferir en la actividad enzimática de Trichoderma spp. y provocar cambios en el efecto antagonista de este hongo. Este es el caso del aluminio, que inhibió significativamente el crecimiento micelial del hongo pudiendo limitar el mecanismo de acción por competencia, y del mercurio que a. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. bajas concentraciones afectó la producción de enzimas extracelulares, lo que puede interrumpir en la actividad micoparasítica, antibiosis y otros modos de acción 47.. IC AS. La respuesta de Trichoderma depende de la concentración del metal y del aislamiento del antagonista, por lo que en estudios se ha comprobado que altas concentraciones de. G. manganeso (800ppm) inhibieron el crecimiento de T. harzianum y disminuyeron la. LO. germinación conidial de T. viride y T. harzianum, así como la actividad antagónica de. BI O. este último frente a B. cinerea y R. solani 48.. AS. Debido al frecuente uso de Trichoderma como biocontrolador de diversos. EN CI. fitopatógenos que habitan en el suelo, especialmente en los que atacan a partes subterráneas de los vegetales, y al aumento del uso de los fosfitos por sus efectos. CI. directos e indirectos en el control de fitopatógenos; es necesario realizar estudios sobre el efecto que puede tener este sobre T. asperellum, con el fin de determinar si ambos. DE. se pueden aplicar juntos dentro de un programa de control de plagas, además poder. CA. establecer una dosis de fosfito de cobre o fosfito de calcio adecuada y así planificar los tratamientos fúngicos o químicos adecuados para minimizar cualquier efecto nocivo. TE. en la eficacia de. T. asperellum. Teniendo en cuenta lo expuesto, este trabajo. IO. de investigación tuvo como objetivo determinar el efecto del fosfito de cobre en. BL. concentraciones de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm y del fosfito de calcio en concentraciones de. BI. 500, 2000 y 4000 ppm sobre la germinación, el crecimiento y capacidad antagonista de T. asperellum en condiciones de laboratorio.. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II.. Material de estudio. IC AS. 1.. MATERIAL Y MÉTODOS. En el presente trabajo se utilizaron: •. G. Cultivos puros de Trichoderma asperellum, Rhizoctonia solani y. LO. Fusarium oxysporum proporcionados por la cátedra de Fitopatología del. BI O. Departamento Académico de Microbiología Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo (Anexo 2). •. AS. Fungicida ACTIUM PLUS-CU, cuyo principio activo es el fosfito de. •. Fungicida PHOS PRO CALCIUM, cuyo principio activo es el fosfito de. CI. calcio (Anexo 1). Procedimiento 2.1. DE. 2.. EN CI. cobre (Anexo 1).. Evaluación del efecto del fosfito de cobre y calcio sobre la germinación. CA. de esporas de Trichoderma asperellum.. TE. 2.1.1 Preparación de las soluciones dobles concentradas del fosfito de. BI. BL. IO. cobre y fosfito de calcio Se preparó soluciones dobles concentradas de fosfito de cobre, mediante diferentes diluciones de este químico en agua destilada estéril hasta alcanzar las concentraciones de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm a partir del producto comercial; del mismo modo se procedió con el fosfito de calcio hasta alcanzar las concentraciones de 500, 2000 y 4000 ppm respectivamente. 9. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.2 Reactivación del cultivo de Trichoderma asperellum y obtención de cultivos monospóricos Para la reactivación de T. asperellum, a partir del cultivo puro, se. IC AS. sembró en frascos de vidrio con APS (Agar Papa Sacarosa) inclinado. y luego se incubó a 25 ºC durante 5 días, posteriormente se cosechó. G. las esporas con 10 mL de agua destilada estéril y se estandarizó a una. LO. concentración de 1x103 esp/mL mediante recuento en cámara de. BI O. Neubauer, luego se sembró por superficie en placas de Petri conteniendo APS, e incubó a 25 ºC por 5 días. Luego a partir de una. AS. colonia se resembró en 5 tubos conteniendo APS inclinado y se. EN CI. incubó a 25 ºC por 5 días (Anexo 6).. CI. 2.1.3 Preparación del inóculo de esporas. A partir de uno de los cultivos monospóricos se sembró en frascos. DE. planos de vidrio conteniendo Agar APS inclinado y se incubó a 25 °C. CA. por 5 días (Anexo 7). El inóculo de esporas se obtuvo agregando 20 mL de agua destilada estéril a cada frasco plano de vidrio y se agitó. BI. BL. IO. TE. moderadamente a fin de liberar las esporas del hongo. La suspensión resultante se colocó en un matraz estéril para determinar la concentración de esporas mediante recuento en cámara de Neubauer a fin de obtener una concentración final de 1 x 107 esp/mL (Anexo 8).. 2.1.4 Inoculación e incubación Se colocó 2 mL de cada dilución de sulfito de cobre doble concentrado en frascos de boca ancha, a los cuales se les agregó 2 mL. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. de la suspensión de esporas obtenida previamente, con lo cual se obtuvo una dilución de 5x107 esp/mL y concentraciones finales de sulfito de cobre de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm; del mismo modo se. IC AS. procedió con el fosfito de calcio obteniéndose concentraciones finales de 500, 2000 y 4000 ppm. Se preparó también una suspensión de. G. esporas control, agregándole 2 mL de la suspensión de esporas en 2. LO. mL de agua destilada estéril y luego se incubó a 25 °C por 24 horas,. BI O. cumplido el periodo de incubación se agregó 02 gotas de azul. AS. lactofenol a cada frasco y se procedió a realizar la lectura.. EN CI. 2.1.5 Lectura. Se procedió a contar el número de esporas germinadas, se consideró. CI. como tal aquellas cuya longitud del tubo germinativo sea mayor que el diámetro de la espora, en cada una de las concentraciones del sulfito. DE. de cobre y sulfito de calcio, así como también en el control. Los. CA. resultados se expresaron como porcentaje promedio de germinación, el cual se obtuvo comparando el número de esporas germinadas en las. grupo control, teniendo en cuenta: %G= N° esporas germinadas x〖 10 〗4 x I.D x 5. BI. BL. IO. TE. diferentes concentraciones de fosfito de cobre en relación a las del. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2. Evaluación del efecto del fosfito de cobre y fosfito de calcio a diferentes concentraciones sobre el crecimiento de Trichoderma asperellum.. IC AS. 2.2.1 Preparación del medio de cultivo. Se preparó Agar APS en ocho matraces, 80 mL de medio en cada uno.. G. El medio de cultivo se esterilizó en autoclave y se dejó enfriar hasta. LO. una temperatura aproximada de 50 °C. A tres matraces se le adicionó. BI O. el sulfito de cobre en cantidad suficiente para obtener una concentración final de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm., respectivamente, a los. AS. siguientes tres matraces se le incorporó fosfito de calcio en cantidad. respectivamente.. EN CI. suficiente para obtener la concentración final 500, 2000 y 4000 ppm. CI. A los dos últimos matraces no se le agregó ni fosfito de cobre ni fosfito de calcio con la finalidad de usarlo como control. Luego, el. DE. medio de cultivo de cada uno de los matraces se sirvió en placas de. CA. Petri estériles (cinco placas por cada concentración, incluyendo el. TE. control).. BI. BL. IO. 2.2.2 Siembra e incubación A partir del cultivo puro de T. asperellum, se realizó la siembra por puntura en la parte central de las placas de Petri de cada concentración de fosfito de cobre y fosfito de calcio preparadas en el paso anterior, además del grupo control. Luego se incubó a 25 ºC por 5 días.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.3 Lectura A partir del primer día de siembra, y hasta el quinto día, se midió el radio de crecimiento (cm) de la colonia del hongo en diferentes. IC AS. direcciones, y se obtuvo un radio promedio de crecimiento por día de. cada concentración de fosfito de cobre, fosfito de calcio y del control.. G. Los resultados de crecimiento de T. asperellum se expresaron en. LO. centímetros y en porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en cuenta. BI O. el crecimiento alcanzado por el control (100%), de la siguiente. 𝑹𝑨𝑫𝑰𝑶 𝑷𝑹𝑶𝑴𝑬𝑫𝑰𝑶 𝑫𝑬 𝑳𝑨 𝑪𝑶𝑳𝑶𝑵𝑰𝑨 𝑻𝑬𝑺𝑻𝑰𝑮𝑶. X 100. Evaluación de la capacidad antagonista de Trichoderma asperellum. CI. 2.3. 𝑹𝑨𝑫𝑰𝑶 𝑷𝑹𝑶𝑴𝑬𝑫𝑰𝑶 𝑫𝑬 𝑳𝑨 𝑪𝑶𝑳𝑶𝑵𝑰𝑨 𝑷𝑹𝑶𝑩𝑳𝑬𝑴𝑨. EN CI. %C=. AS. manera:. DE. frente a un fitopatógeno.. CA. 2.3.1 Técnica de cultivo dual. TE. La prueba de enfrentamiento se realizó empleando la técnica de. BI. BL. IO. cultivo dual. Para ello se utilizaron placas Petri conteniendo APS (Agar Papa Sacarosa). Donde el cultivo de Trichoderma asperellum procedente del medio APS con fosfito y el cultivo del fitopatógeno (Fusarium oxysporum y Rhizoctonia solani) fueron sembrados en una placa de Petri con APS. Se sembró al fitopatógeno a 2 cm del borde de la placa dejando incubar a 25 ºC hasta que se observe crecimiento micelial, luego se sembró al lado opuesto y equidistante, el 13. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. antagonista Trichoderma asperellum. Como control se colocó en un extremo de otra placa de Petri al fitopatógeno sin la presencia del antagonista. Posteriormente los. IC AS. cultivos se incubaron a 25 ºC.. G. 2.3.2 Lectura de resultados. LO. Para determinar la capacidad antagonista de Trichoderma asperellum. AS. Bell 59 a los 5 días de incubación.. BI O. sobre el fitopatógeno, se evaluó en función a la escala propuesta por. EN CI. Tabla1. Cuadro de antagonismo de T. asperellum según escala de Bell et al49 ESCALA. Trichoderma sobrecrece completamente al patógeno y cubre totalmente. CI. 1. DESCRIPCIÓN. la superficie del medio. Trichoderma sobrecrece las dos terceras partes de la superficie del. CA. medio. Trichoderma y el patógeno colonizan cada uno aproximadamente la. 3. TE. mitad de la superficie y ningún organismo parece dominar al otro El patógeno sobrecrece las dos terceras partes de la superficie del. IO. 4. DE. 2. BL. medio y parece resistir a la invasión por Trichoderma. BI. 5. El patógeno sobrecrece completamente a Trichoderma y ocupa la superficie total del medio.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.4. Análisis de datos Para determinar la compatibilidad de T. asperellum con el fungicida se realizó analizando el porcentaje de germinación y el porcentaje de. IC AS. crecimiento de T. asperellum, en las diferentes concentraciones de fosfito de cobre y fosfito de calcio, procesando los datos en base a la prueba de. G. análisis de varianza unidireccional (ANOVA), empleando el programa. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. BI O. LO. estadístico SPSS v.22.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III.. RESULTADOS. En la Fig. 1 se observa que existe diferencia significativa entre el número de esporas. IC AS. germinadas de T. asperellum tratadas a 17.2, 51.4 y 85.7 ppm de fosfito de cobre con respecto al control. Del mismo modo se muestra que entre estas concentraciones, no. LO. G. existe diferencia significativa, según análisis estadístico.. BI O. En la Fig. 2 se presenta que existe diferencia significativa en el número de esporas germinadas de T. asperellum frente a diferentes concentraciones de fosfito de calcio con. EN CI. AS. respecto al control.. En la Fig. 3 se refleja que no existe diferencia significativa en el porcentaje de crecimiento radial promedio de T. asperellum entre las concentraciones de fosfito de. DE. CI. cobre evaluadas con respecto al control.. En la Fig. 4 se muestra que sí hay diferencia significativa en el porcentaje de. CA. crecimiento radial promedio de T. asperellum a diferentes concentraciones de fosfito de. TE. calcio y el control.. IO. Así mismo se presenta el efecto antagónico de T. asperellum sobre el crecimiento de F.. BL. oxysporum (Fig. 5) y R. solani (Fig. 6), obtenidos a partir de las diferentes. BI. concentraciones de fosfito de cobre, mediante la técnica de cultivo dual. Presentando grado antagónico 1, según escala propuesta por Bell y col.. De igual forma en la Fig. 7 encontramos la evaluación de la capacidad antagónica,. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. mediante cultivo dual, de T. asperellum obtenido de los tratamientos a 500, 2000 y 4000 ppm de fosfito de calcio con F. oxysporum y en la Fig. 8 con R. solani. Presentando. IC AS G. 120%. LO. 100%. 100%. 73%. b. a. 76%. a. EN CI. 40%. a. AS. 60%. BI O. 71%. 80%. 20% 0% 0. CI. Porcentaje promedio de esporas germinadas de Trichoderma asperellum (%). grado antagónico 1, según escala propuesta por Bell y col.. 17.2. 51.4. 85.7. DE. Concentración de fosfito de cobre (ppm). CA. Fig. 1 Porcentaje promedio de esporas germinadas de T. asperellum frente a diferentes. TE. concentraciones de fosfito de cobre a las 24 h de incubación.. IO. a≠b: existe diferencia significativa (p<0,05). BI. BL. a: no existe diferencia significativa (p>0,05). 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) IC AS. 120%. 100%. 100% 69%. LO. 80%. 40%. b. 0% 0. c. 2000. 4000. EN CI. 20%. 500. 30%. b. AS. a. BI O. 50%. 60%. G. Porcentaje promedio de esporas germinadas de Trichoderma asperellum (%). Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI. Concentración de fosfito de calcio (ppm). DE. Fig. 2 Porcentaje promedio de esporas germinadas de T. asperellum frente a diferentes concentraciones de fosfito de calcio a las 24h de incubación.. CA. a≠b≠c: existe diferencia significativa (p<0,05). BI. BL. IO. TE. b: no existe diferencia significativa (p>0,05). 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100% 86%. 85%. IC AS. 100%. 72%. a. a. a. a. LO. 60%. G. 80%. 20% 0% 0. 17.2. AS. BI O. 40%. 51.4. 85.7. Concentración de fosfito de cobre (ppm). EN CI. Porcentaje de crecimiento radial de Trichoderma asperellum (%). 120%. CI. Fig. 3 Porcentaje de crecimiento radial promedio de T. asperellum frente a diferentes concentraciones de fosfito de cobre a los 3 días de incubación.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. a: no existe diferencia significativa (p>0,05). 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100%. 100%. IC AS. 75%. 80% a. 60%. G. b. LO. 40% 20%. BI O. 15%. 0%. c. 0% 0. 500. 2000. AS. Porcentaje de crecimiento radial de Trichoderma asperellum (%). 120%. c 4000. EN CI. Concentración de fosfito de calcio (ppm). Fig. 4 Porcentaje de crecimiento radial promedio de T. asperellum frente a diferentes. CI. concentraciones de fosfito de calcio a los 3 días de incubación.. DE. a≠b≠c: existe diferencia significativa (p<0,05). BI. BL. IO. TE. CA. c: no existe diferencia significativa (p>0,05). 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. 0 ppm. G. F.o. BI O. T.a .. LO. F.o. T.a .. IC AS. B. 17.2 ppm. C. EN CI. AS. D. F.o. T.a .. 85.7 ppm. DE. 51.4 ppm. CI. F.o. T.a .. CA. Fig. 5 Cultivo dual. Enfrentamiento de T. asperellum (T.a) contra F. oxysporum (F.o) A) Crecimiento de T. asperellum en agar APS, utilizado. TE. como control; B) T. asperellum obtenido del tratamiento a 17.2 ppm de. IO. fosfito de cobre enfrentado a F. oxysporum; C) T. asperellum obtenido del. BL. tratamiento a 51.4 ppm de fosfito de cobre enfrentado a F. oxysporum; D) T.. BI. asperellum obtenido del tratamiento a 85.7 ppm de fosfito de cobre enfrentado a F. oxysporum.. .. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. R.s. G. T.a .. R.s. BI O. T.a .. IC AS. B. LO. A. 17.2 ppm. 0 ppm. D. EN CI. AS. C. T.a .. T.a .. R.s. CI. R.s. DE. 51.4 ppm. 85.7 ppm. CA. Fig. 6 Cultivo dual. Enfrentamiento de T. asperellum (T.a) contra R. solani (R.s). A) Crecimiento de T. asperellum en agar PDA, utilizado como control;. TE. B) T. asperellum obtenido del tratamiento a 17.2 ppm de fosfito de cobre. IO. enfrentado a R. solani; C) T. asperellum obtenido del tratamiento a 51.4 ppm. BL. de fosfito de cobre enfrentado a R. solani; D) T. asperellum obtenido del. BI. tratamiento a 85.7 ppm de fosfito de cobre enfrentado a R. solani.. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. A. F.o. T.a .. G. F.o. LO. T.a .. IC AS. B. 500 ppm. D. T.a .. F.o. T.a . 4000 ppm. DE. 2000 ppm. CI. F.o. EN CI. AS. C. BI O. 0 ppm. CA. Fig. 7 Cultivo dual. Enfrentamiento de T. asperellum (T.a) contra F.. TE. oxysporum (F.o). A) Crecimiento de T. asperellum en agar APS, utilizado como control; B) T. asperellum obtenido del tratamiento a 500 ppm de. IO. fosfito de calcio enfrentado a F. oxysporum; C) T. asperellum obtenido del. BL. tratamiento a 2000 ppm de fosfito de calcio enfrentado a F. oxysporum; D). BI. T. asperellum obtenido del tratamiento a 4000 ppm de fosfito de calcio enfrentado a F. oxysporum.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. R.s. R.s. T.a .. LO. T.a .. IC AS. B. G. A. 500 ppm. D. EN CI. AS. C. BI O. 0 ppm. 2000 ppm. CI. R.s. T.a .. R.s. T.a . 4000 ppm. DE. Fig. 8 Cultivo dual. Enfrentamiento de T. asperellum (T.a) contra R. solani. CA. (R.s). A) Crecimiento de T. asperellum en agar APS, utilizado como control; B) T. asperellum obtenido del tratamiento a 500 ppm de fosfito de calcio. TE. enfrentado a R. solani; C) T. asperellum obtenido del tratamiento a 2000. IO. ppm de fosfito de calcio enfrentado a R. solani; D) T. asperellum obtenido. BI. BL. del tratamiento a 4000 ppm de fosfito de calcio enfrentado a R. solani.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV.. DISCUSIÓN. Con respecto a los resultados obtenidos, en la Fig.1 se observa una disminución en el. IC AS. porcentaje de germinación de esporas de T. asperellum en las concentraciones de 17.2,. 51.4 y 85.7 ppm de fosfito de cobre en relación al control. Asimismo, el análisis. LO. BI O. evaluadas, por lo que tendrían el mismo efecto (Anexo 21).. G. estadístico nos indica que no existe diferencia significativa entre estas concentraciones. Las diferentes concentraciones de fosfito de cobre evaluadas inhiben parcialmente la. AS. germinación de T. asperellum, esto posiblemente se deba a que en el inicio del proceso de germinación las conidias de Trichoderma incorporan agua y nutrientes del medio. EN CI. externo ocasionando el hinchamiento hidrostático de estas 50. De este modo el fosfito de cobre agregado al medio de cultivo ingresa a las conidias provocando que estas se vean. CI. afectadas en su germinación generando un retardo de la misma 51.. DE. Investigaciones recientes demuestran que el grado del efecto producido por este. CA. compuesto está determinado por el organismo ensayado, la cantidad de fosfito usado, el tipo de ion unido al fosfito y el pH que se origine en el medio de cultivo 7. Es así, que al. TE. ser añadido el fosfito de cobre al medio de cultivo produce una acidez que logra la. IO. disociación del fosfito de cobre en iones (PO3)-2 y Cu+2 . Frente a esto las esporas. BL. liberan iones hidroxilo (OH-) al medio externo generando que el pH intracelular. BI. disminuya, lo que es compensado con la entrada de iones fosfito (PO3) -2 a través de simportadores de fosfato. Dentro de la célula el ion fosfito se une a los sitios de unión del fósforo, regulados por el fosfato, bloqueando el metabolismo de la pentosa fosfato,. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. interfiriendo así con la producción de energía, la biosíntesis de nucleótidos y ácidos nucleicos 52,53.. IC AS. Por otro lado, el ion Cu+2 que es reducido hasta Cu+1 en el medio extracelular por las reductasas Fre1 y Fre2 que se encuentran en la pared de la espora y es transportado por las proteínas de membrana Ctr1 y Ctr3 al citosol. 54. , produce especies de oxígeno. LO. G. reactivo que reaccionan con los grupos sulfhidrilo de varios aminoácidos generando así. la desnaturalización de las proteínas. De este modo, se obstaculiza el ingreso de. BI O. nutrientes que la espora necesita, se afectan las funciones metabólicas y síntesis. AS. enzimática que conllevan a una inhibición de la germinación 55-57.. EN CI. Podemos observar también que los tres tratamientos de fosfito de cobre evaluados, desencadenaron el mismo efecto sobre la germinación de T. asperellum, ya que después de haber realizado el análisis estadístico no se evidenció diferencia significativa entre. CI. ellos. Una explicación se encuentra en la posible existencia de un punto de saturación de. DE. iones de (PO3)-2 y Cu+2 a partir de la cual ya no se ejerce efecto sobre la germinación de. CA. T. asperellum.. TE. Referente a los resultados obtenidos con el fosfito de calcio, en la Fig. 2 se observa que el número de esporas germinadas de T. asperellum disminuye significativamente al ser. IO. expuesto a las diferentes concentraciones evaluadas de fosfito de calcio en comparación. BL. con el control, obteniéndose que entre la germinación a 500 ppm y 2000 ppm no existe. BI. diferencia significativa, pero sí entre éstas y la concentración de 4000 ppm (Anexo 23). En este caso el ion fosfito (PO3)-2 ingresa en la espora por procesos explicados anteriormente y ejerce un efecto directo sobre el metabolismo fúngico, pues compite con el fósforo en diversas rutas metabólicas catalizadas por diversas enzimas 26. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. fosforilativas; de esta manera, los procesos implicados en la transferencia energética del hongo sufren un considerable retraso e incluso pueden llegar a bloquearse se ve afectada la biosíntesis de nucleótidos, ácidos nucleicos. , así mismo. y los procesos. IC AS. relacionados con la función de la membrana plasmática 59,60.. 52,53. 58. El fosfito al interrumpir la biogénesis de la membrana genera estrés en esta y da lugar a. LO. G. la activación de una MAP quinasa (Slt2) que activa un sistema de entrada de Ca 2+ de alta afinidad (HACS; Cch1, Mid1, Ecm7) 61. El calcio es un mensajero secundario de. BI O. importancia crítica para la transducción de señales intracelulares en eucariotas, pero debe mantenerse a niveles bajos en el citoplasma de las células en reposo para evitar la. AS. toxicidad. Esto se logra mediante varias bombas que transportan activamente el exceso. EN CI. de Ca 2+ citoplasmático fuera de la célula a través de la membrana plasmática y hacia otros compartimentos intracelulares como las vacuolas que se encargan de la. CI. degradación de macromoléculas, almacenamiento de metabolitos y el secuestro de. DE. sustancias potencialmente tóxicas 62.. De acuerdo a los resultados obtenidos, en los tratamientos de 500 y 2000 ppm de fosfito. CA. de calcio es posible que al ingresar el Ca 2+ al citoplasma pueda haber sido tolerado y. TE. utilizado por T. asperellum para activar proteínas dependientes de Ca 2+. Sin embargo,. IO. al generarse altos niveles de este ion en el citoplasma y al ser deficiente la función de. BL. las bombas que transportan el exceso de Ca 2+ citoplasmático fuera de la célula se pudo. BI. haber generado una inhibición de la germinación de las esporas de T. asperellum, lo que explicaría el bajo porcentaje de germinación que se obtuvo a la concentración de 4000 ppm de fosfito de calcio.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La presencia de esporas que germinaron bajo el efecto del fosfito de cobre y fosfito de calcio posiblemente está relacionada con la variabilidad genética (heterocariosis), ya que pueden existir esporas con una versatilidad metabólica que otorga resistencia a. IC AS. inhibidores microbianos y a las condiciones adversas dadas por los agroquímicos. Por. otro lado, las diferencias estructurales que existen en la pared celular, la cual evita que. G. las sustancias del medio exterior puedan ingresar o que solo pequeñas concentraciones. LO. puedan lograrlo, alteran su comportamiento, interrumpiendo la transducción de las. BI O. señales de iniciación de la germinación 63.. Con respecto a los resultados del crecimiento radial de T. asperellum expuesto al fosfito. AS. de cobre (Fig. 3), se observa que no existe diferencia significativa (p > 0.05) entre el. EN CI. control y las diferentes concentraciones evaluadas, es decir, tienen el mismo efecto; por otro lado, también se observa que no existe diferencia significativa (p > 0.05) entre las. CI. concentraciones de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm lo que significa que al ir aumentando la. DE. concentración del químico el efecto es el mismo (Anexo 22). En los resultados se observa que los fosfitos no causaron una disminución significativa. CA. en el crecimiento del micelio, lo que probablemente se deba a que cepas de. TE. Trichoderma son generalmente más resistentes a muchos antimicrobianos, que la. IO. mayoría de los hongos, asociado con la presencia de sistemas de transporte ABC 64.. BL. Los sistemas de transporte ABC son sistemas asociados a la membrana con presencia de. BI. proteínas que encapsulan las moléculas y la ingresan o exportan de la célula, es un transporte entre membranas y es de tipo activo en contra del gradiente. 65. . Este sistema. de transporte confiere a Trichoderma spp. mayor tolerancia a compuestos como herbicidas, fungicidas, pesticidas como el DDT y compuestos fenólicos considerándose 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. un requerimiento esencial para la colonización efectiva de raíces de plantas y diversos sustratos 66.. IC AS. Los resultados concuerdan con Castellanos L. et al 67 que evaluaron a T. harzianum con el fungicida Abamectina, encontrando que éste no afecta el crecimiento de T. harzianum en condiciones in vitro, así mismo Muiño B. et al. 68. también realizo un estudio similar. LO. G. con Trichoderma spp. y oxicloruro de cobre donde pudo comprobar que el químico no. BI O. originó mortalidad en Trichoderma spp. a diferentes concentraciones.. En la fig. 4 se observa que el crecimiento radial de T. asperellum disminuyó. AS. significativamente a las diferentes concentraciones de fosfito de calcio en comparación. EN CI. al control, lo que obedece que a mayor concentración de fosfito de calcio se produce menor crecimiento radial. Mediante el análisis estadístico se logró determinar que el crecimiento entre 2000 y 4000 ppm fue igual pero diferente al obtenido a 500 ppm. CI. (Anexo 24).. DE. Estudios reportan que los fosfitos adicionados al medio de cultivo para organismos. CA. como Alternaria alternata 69, Colletotrichum gloeosporioides 70, Fusarium culmorum 71 72. originan una disminución en el crecimiento del micelio,. TE. y Phytophthora infestans. número de estructuras generadoras de esporas, cantidad de esporas producidas y la. IO. reproducción al influir en la expresión de genes que codifican la síntesis de compuestos. BL. indispensables en la estructura y fisiología celular 6. Esto concuerda con los resultados. BI. obtenidos donde se evidencia una disminución del crecimiento de T. asperellum a medida que se aumenta la concentración del fosfito de calcio, llegando a ser nula a la mayor concentración evaluada.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Por otro lado, los iones de calcio que se encuentran en el citoplasma son normalmente transportados a la vacuola mediante el intercambiador H + / Ca 2+ Vcx1p y la ATPase Pmc1p de tipo P. El primero, aprovecha la fuerza motriz de protones a través de la. tipo P utiliza la hidrólisis de ATP para translocar el Ca. 2+. IC AS. membrana vacuolar (generada por la V-ATPasa), mientras que la ATPasa Pmc1p de. a la vacuola. Este mecanismo. G. es necesario en los hongos para mantener la homeostasis celular y el crecimiento de. LO. hifas 62.. BI O. Sin embargo, cuando hay un exceso de Ca 2+ en el citoplasma la vacuola llega a ser deficiente para el almacenamiento de este y conlleva a una muerte celular. 62. . Esto. AS. sumado al efecto que genera el fosfito en la hifa, anteriormente explicado, pudo. EN CI. conllevar a un bajo crecimiento de T. asperellum a la concentración de 2000 y 4000 ppm. 73. determinaron que el fosfito ejerce un efecto inhibitorio sobre un. CI. Buchanan et al. DE. hongo fitopatógeno y su antagonista T. asperellum, evidenciando también cambios notorios en el crecimiento de la colonia fúngica, esto debido a que las sales inorgánicas. CA. han mostrado actividad microbiana contra varios hongos fitopatógenos, a través de la. TE. pérdida de la integridad de la membrana de los microorganismos afectados.. IO. Según los resultados obtenidos sobre la capacidad antagonista de T. asperellum, se. BL. determinó que este parámetro no fue afectado frente a las concentraciones 17.2, 51.4,. BI. 85.7 ppm de fosfito de cobre y 500, 2000, 4000 ppm de fosfito de calcio, ya que el crecimiento dual de T. asperellum - F. oxysporum (Fig. 5 y 7) y. T. asperellum - R.. solani (Fig. 6 y 8) presentó capacidad antagonista de grado 1 según la escala de Bell et al. 49. . Donde Trichoderma spp crece completamente sobre el patógeno y cubre 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. totalmente la superficie del medio, evidenciándose el mecanismo de competencia de Trichoderma sobre los fitopatógenos; cabe resaltar que este grado de antagonismo se. IC AS. mantuvo tanto en los tratamientos como en el control. La competencia constituye un mecanismo de antagonismo donde se muestra el. comportamiento desigual de dos o más organismos ante un mismo requerimiento de. LO. G. sustrato o nutrientes, siempre y cuando la utilización de este por uno de los organismos. reduzca la cantidad o espacio disponible para los demás. Este tipo de antagonismo se ve. BI O. favorecido por las características del agente control biológico como plasticidad ecológica, velocidad de crecimiento y desarrollo, y por otro lado por factores externos. Arzate et al. 76. EN CI. AS. como pH, temperatura, humedad, entre otros 74,75.. evaluaron aislamientos nativos de Trichoderma y describieron que los. cultivos con clases de antagonismo 1 y 2 presentan perspectivas para ser utilizados en 77. sostiene que el género Trichoderma es un agente de. CI. campo, además Infante et al. DE. control biológico muy eficiente puesto que presenta una alta velocidad de crecimiento, abundante esporulación y una amplia gama de sustratos donde pueden crecer debido a la. BI. BL. IO. TE. CA. riqueza de enzimas que posee.. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. •. CONCLUSIONES. El fosfito de cobre a las concentraciones de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm disminuyen. IC AS. significativamente la germinación de Trichoderma asperellum, siendo la concentración de 17.2 ppm donde se presenta el menor porcentaje de germinación.. G. El fosfito de cobre a las concentraciones de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm no afecta. LO. •. significativamente el crecimiento de Trichoderma asperellum.. El fosfito de calcio a las concentraciones de 500, 2000 y 4000 ppm disminuyen. BI O. •. significativamente la germinación y crecimiento de Trichoderma asperellum,. •. EN CI. ambos parámetros.. AS. siendo la concentración de 4000 ppm donde se presenta el menor porcentaje de. El fosfito de cobre a las concentraciones de 17.2, 51.4 y 85.7 ppm; y el fosfito de. CI. calcio a las concentraciones de 500, 2000 y 4000 ppm no afectan la capacidad. DE. antagonista de Trichoderma asperellum; en ambos casos se mantiene en grado 1. BI. BL. IO. TE. CA. según escala de Bell.. 32 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. Evaluar la compatibilidad de T. asperellum frente al fosfito de cobre y fosfito de. IC AS. •. RECOMENDACIONES. calcio en otros parámetros como esporulación, viabilidad de esporas y actividad. Realizar evaluaciones del efecto del fosfito de cobre y fosfito de calcio sobre otros. LO. •. G. entomopatógena.. Evaluar la compatibilidad en campo.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI. EN CI. AS. •. BI O. hongos controladores biológicos.. 33 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Agrios GN. Plant Pathology. Academic Press. Nueva York. 2005; 5-803. IC AS. 2. Gerald N, Rosegrant M, Y koo J. El cambio climático, el impacto en la agricultura y los costos de adaptación. IFPRI. Washington D.C. 2009.. G. 3. Linde C.D. Physico-chemical properties and environmental fate of pesticides.. LO. Environmental Protection Agency. 1994. EPA, CA. 1-53. EH 94-03.. BI O. 4. Arias-Estévez M., López-Periago E, Martínez-Carballo E, Simal-Gándara J, Mejuto JC. y García-Río L. The mobility and degradation of pesticides in soils and the. AS. pollution of groundwater resources. Agric. Ecosyst. Environ. 2008; 123:247-260.. EN CI. 5. Bohmont BL. The standard pesticide users guide. Pearsons Prentice Hall. Upper Saddle River, Nueva Jersey, EUA. 2007: 245.. CI. 6. Yáñez MG, López CA, Ayala F, Partida L, Velázquez TJ, Medina R. Phosphites as. DE. alternative for the management of phytopathological problems. Revista Mexicana de Fitopatología. 2017; 36(1): 79-94.. CA. 7. Lobato M, Olivieri F, Daleo G, Andreu A. Antimicrobial activity of phosphites. 109.. TE. against different potato pathogens. Journal Plant Disease Protection. 2010; 3:102-. IO. 8. Deliopoulos T, Kettlewell PS and Hare MC. Fungal disease suppression by. BL. inorganic salts: a review. Crop Protection. 2010; 29: 1059-1075.. BI. 9. Carmona M., Sautua F. Impacto de la Nutrición y de Fosfitos en el Manejo de Enfermedades en Cultivos Extensivos de la Región Pampeana. IPNI y Fertilizar. Rosario, Argentina. 2011:73- 82.. 34 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 10. Lovatt C J, Mikkelsen R. Phosphite Fertilizers: What are they? Can you use them? What can they do? Better Crops With. Plant Food. 2006; 90(4): 11:13. 11. Cruz GE, Sánchez AI. Efecto del Fosfito de Potasio y Oxicloruro de Cobre sobre el. IC AS. Grado de Colonización Micorrízica y el Estado Nutrimental del Jitomate. (Licopersicum esculentum Mill.). Tesis de Licenciatura. Universidad Autónoma. G. Chapingo. México. 2013; 77.. LO. 12. Thao H, Yamakawa T. Fosfito (ácido fosforoso): ¿Fungicida, fertilizante o. BI O. bioestimulador? Ciencia del suelo y nutrición de plantas. 2009; 55: 228-234. 13. Moreno W. Aplicación de dos fosfitos artesanales en el cultivo de fresa (Fragaria. AS. vesca L.) Tesis de pregrado. Ecuador. Universidad Técnica de Ambato. 2011; 45.. EN CI. 14. Wong MA, McComb BJ, Hardy BGEJ and O’Brien PA. Phosphite induces expression of a putative proteophosphoglycan gene in Phytophthora cinnamomi.. CI. Plant Pathology. 2009; 38: 235-241.. 15. Hofgaard IS, Ergon A, Henriksen B and Tronsmo AM. The effect of potential. DE. resistance inducers on development of Microdochium majus and Fusarium. CA. culmorum in winter wheat. European Journal of Plant Pathology. 2010; 128:269281.. TE. 16. Liljeroth E, Lankinen Å, Wiik L, Burra DD, Alexandersson E and Andreasson E.. IO. Potassium phosphite combined with reduced doses of fungicides provides efficient. BL. protection against potato late blight in large-scale field trials. Crop Protection. 2016;. BI. 86:42-55.. 17. Gómez F, Trejo L. Biostimulant activity of phosphite in horticulturae. Journal. 2015; 196: 1-134. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..