Efecto de lufenuron sobre la germinación, el cremiento y la actividad entomopatógena de Lecanicillium lecanii en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÌA Y PARASITOLOGIA. DE. CI EN. Efecto de lufenuron sobre la germinación, el cremiento y la actividad entomopatógena de Lecanicillium lecanii en condiciones de laboratorio. TE. CA. TESIS PARA OPTAR EL TÍTULO DE. BI. BL. IO. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. AUTOR: Br. PAYANO LOPEZ WALDO KENNER ASESOR: Ms.C. WILSON KRUGG JUAN HECTOR TRUJILLO-PERÚ 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. G. IC. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGOMICROBIÓLOGO. LO. Dr. Orlando Gonzáles Nieves. AS. BI. O. RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. Dr. Rubén Vera Véliz. CI. VICE-RECTORA ACADÉMICA DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE. CA. DE. CI EN. TRUJILLO. Dr. Steban Ilich Zerpa. NACIONAL DE TRUJILLO. BI. BL. IO. TE. PROFESOR SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDAD. II Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO QUE OTORGAN EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO-MICROBIÓLOGO. G. IC. Dr. Freddy Mejía Coico. AS. BI. O. LO. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dr. William Zelada Estraver. CI. PROFESOR SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS. DE. CI EN. BIOLÓGICAS. CA. Dra. Luján Velásquez Manuela. TE. DIRECTORA DE LA ESCUELA PROFESIONAL DE. BI. BL. IO. MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. III Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. DEDICATORIA. G. A mis queridos padres, Cony y Teodoro, quienes desde muy pequeño me. LO. enseñaron que nada en esta vida es fácil, que para lograr las metas que nos. O. trazamos, se necesita mucho esfuerzo y sacrificio; y que el amor con que el juntos. CI EN. CI. AS. salir adelante…. BI. siempre han hecho las cosas me sirva de ejemplo para superar las adversidades y. A mi querida hermana, Talia, quien sabe cómo robarme una sonrisa, y que siempre se preocupa por mi bienestar, a pesar que muchas veces hemos. DE. intercambiado formas de pensar, pero que en el fondo lo hacemos porque. TE. CA. valoramos nuestras opiniones ella sabe lo mucho que la quiero…. IO. Expreso mi más profundo y sincero agradecimiento a mi asesor Ms. C. Juan. BL. Héctor Wilson Krugg, por haberme brindado su confianza, tiempo y sabios. BI. consejos, en el desarrollo de este proyecto de investigación como en el ámbito personal.. VIII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AGRADECIMIENTO. IC. Mi profundo agradecimiento a mi asesor Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg, por. G. brindarme su confianza, apoyo desinteresado y sobretodo su asesoramiento para la. O. LO. realización de este proyecto.. BI. A mis amigos, por su valiosísima y desinteresada ayuda, que me brindaron. CI. AS. información y su apoyo para poder cumplir con este objetivo.. CI EN. Finalmente, a cada una de las personas que contribuyeron con el desarrollo de este. BI. BL. IO. TE. CA. DE. trabajo.. IX Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN. Se determino el efecto de lufenuron sobre la germinación, el crecimiento y. AS. actividad entomopatógena de Lecanicillium lecanii y que no uno diferencia. IC. significativa sobre el crecimiento en condiciones de laboratorio. Para lo cual se. LO. G. trabajó con tres concentraciones de lufenuron (30 ppm, 37.5 ppm, 50 ppm). El porcentaje de germinación, se determinó adicionando 2 mL de cada dilución. BI. O. (doble concentrado) del químico a tubos que contenían 2 mL de suspensión de. AS. esporas estandarizada de L. lecanii con lo que se obtuvo una solución final de 1x105 esporas/mL, incubándose a 25°C por 18 a 24 horas. Luego se realizo el. CI EN. CI. recuento de esporas germinadas y no germinadas. El crecimiento micelial de L. lecanii se evaluó sembrando por puntura en la zona central en placas de Petri conteniendo Agar Papa Dextrosa con las diferentes concentraciones tanto de. DE. Lufenuron, estas se incubaron a 25°C durante 10 días, se midió el radio de. CA. crecimiento micelial (mm). Se encontró que lufenuron inhibe hasta un 100% la germinación de L. lecanii. En relación al crecimiento micelial lufenuron redujo el. TE. crecimiento a un porcentaje, en las concentraciones establecidas presenta un. IO. efecto inhibitorio sobre la germinación de L. lecanii, mientras en crecimiento no. BL. presenta efecto inhibitorio significativo en el crecimiento del hongo.. BI. Palabras claves: Lufenuron, Lecanicillium lecanii, Spodoptera frugiperda, Agar papa dextrosa.. X Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT. The effect of lufenuron on the germination, growth and entomopathogenic. AS. activity of Lecanicillium lecanii was determined and that no significant difference. IC. on growth under laboratory conditions. For which we worked with three. LO. G. concentrations of lufenuron (30 ppm, 37.5 ppm, 50 ppm). The germination percentage was determined by adding 2 mL of each dilution (double. BI. O. concentrate) of the chemical to tubes containing 2 mL of standardized spore. AS. suspension of L. lecanii, thus obtaining a final solution of 1x105 spores / mL, incubating at 25 ° C for 18 to 24 hours. Then the germinated and non-germinated. CI EN. CI. spore count was performed. The mycelial growth of L. lecanii was evaluated by seeding by puncture in the central area in Petri dishes containing Papa Dextrose Agar with the different concentrations of both Lufenuron, these were incubated. DE. at 25 ° C for 10 days, the mycelial growth radius was measured (mm) It was. CA. found that lufenuron inhibits up to 100% germination of L. lecanii. In relation to the mycelial growth, lufenuron reduced the growth to a percentage, in the. TE. established concentrations it has an inhibitory effect on the germination of L.. IO. lecanii, while in growth there is no significant inhibitory effect on the growth of. BL. the fungus.. BI. Keywords: Lufenuron, Lecanicillium lecanii, Spodoptera frugiperda, Papa dextrose agar.. XI Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE. Página …………………. ii. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo. …………………. iii. LO. G. iv. ……………………………………..…………. Presentación. IC. ………………………………………................ Asesor. AS. Autoridades de la Universidad Nacional de Trujillo. …………………………..………. O. Miembros del Jurado. ……………………………………………. Dedicatoria ……………………………………….................. AS. viii. ……………………………………………. ix. CI. Agradecimientos. …………………………………….…………....... CI EN. Resumen Abstract. ........................................................................ x xi. …………….………………………………. CA. INTRODUCCIÓN. DE. ……………………………………………………. Índice. ……………………………….. TE. MATERIAL Y MÉTODOS. 1. Material biológico. IO. 2. Procedimiento. vi vii. BI. Aprobación. v. ………….………….………….... ……………… …….………………….. xii. 1 8 8 8. BI. BL. 2.1. Evaluación del efecto de lufenuron sobre la germinación de esporas de L. lecanii.. …………….………………... 8. 2.1.1. Resiembra del cultivo de L. lecanii. ………... 8. 2.1.2. Propagación del cultivo de L. lecanii ……….. 9. 2.1.3. Preparación del inóculo de esporas…………. 9. XII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.4. Inoculación e incubación…………………... 10. 2.1.5. Lectura………………………………………. 10. 2.2. Evaluación del efecto de lufenuron sobre el crecimiento de L. lecanii …………………………………………… 2.2.1. Preparación del medio de cultivo….............. 10. 2.2.2. Siembra e incubación………………………. IC. AS. 10. G. 11. LO. 2.2.3. Lectura………………………………………. 11. O. 2.3. Evaluación del efecto de lufenuron sobre la patogenicidad L.. BI. lecanii…………………………………………………. 12. AS. 2.3.1. Recolección, identificación y crianza de Spodoptera. de. inóculo. de. esporas. CI EN. 2.3.2. Preparación. CI. frugiperda…………………………………….. lecanii………………………………………… 2.3.3. Inoculación de S. frugiperda…………... 12 de. L. 13. 13. DE. 2.3.4. Observación de síntomas y/o signos de Spodoptera. CA. frugiperda………………………………….. 14. TE. 2.3.5. Determinación del porcentaje de muerte de Spodoptera frugiperda…………………………………... 14. infectados experimentalmente…………. 2.3.7. Análisis de datos……………………. 14 15. BI. BL. IO. 2.3.6. Aislamiento de L. lecanii a partir de S. frugiperda. XIII Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. ………………………….………….. 16. DISCUSIÓN. ………………………………………. 23. ………………………… ……………………. 39. ……………. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 30. ………………………………………… ................. G. Anexo 1: Ficha técnica de Lufenuron 5% EC. 35. 36. LO. ANEXOS. AS. RECOMENDACIONES. 28. IC. CONCLUSIONES. O. Anexo 2: Estructura de la molécula de lufenuron (Nombre IUPAC: 1 -[ 2,5 -. BI. dicloro – 4 - (1,1,2,3,3,3 hexafluoropropoxi) fenil ] – 3 - (2,6 - difluorobenzoil) ……..…………………………………………….. AS. urea. 38. CI. Anexo 3: Lecanicillium lecanii a) Cultivo puro b) Observación microscopica. CI EN. …………………………………………………………….. 38. Anexo 4: Crecimiento radial promedio de L. lecanii (cm) a la concentración 0 ppm de lufenuron, durante 10 días de evaluación ………………... 39. DE. Anexo 5: Crecimiento radial promedio de L. lecanii (cm) a la concentración 30 39. CA. ppm de lufenuron, durante 10 días de evaluación …………. TE. Anexo 6: Crecimiento radial promedio de L. lecanii (cm) a la concentración 37.5. IO. ppm de lufenuron, durante 10 días de evaluación. …………. 40. BL. Anexo 7: Crecimiento radial promedio de L. lecanii (cm) a la concentración 50 ppm de lufenuron, durante 10 días de evaluación. ……. 40. BI. Anexo 8: Análisis de varianza (ANOVA) del crecimiento radial de L. lecanii frente a diferentes concentraciones del químico lufenuron, utilizando el método de Turkey Ba. …………. …………………………. 41. XIV Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 9: Porcentaje de germinación de L. lecanii frente a las diferentes concentraciones del insecticida lufenuron ……………... 42. Anexo 10: Analisis de varianza (ANOVA) del número de conidias germinadas. AS. por mililitro de L. lecanii frente a las diferentes concentraciones del químico 42. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. lufenuron, utilizando el método de Turkey Ba ……………. XV Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INTRODUCCIÓN. AS. A partir del desarrollo de la industria de los plaguicidas químicos. IC. sintéticos, en la década de los 40, estas sustancias se utilizan en gran escala. G. en actividades agrícolas, en las campañas de control de vectores de. O. LO. importancia sanitaria[1].. BI. Todos los plaguicidas son sustancias tóxicas, pudiendo su uso presentar o. AS. no peligro para el ser humano. Por lo tanto, el problema principal. CI. acarreado por los plaguicidas es su utilización indiscriminada, sin La protección de muchos. CI EN. preocupación alguna con la seguridad[2].. cultivos se ha centrado principalmente a partir de 1950 en el desarrollo de plaguicidas obtenidos por síntesis orgánica, siendo el DDT el primero de. DE. ellos con el que se consiguió un control muy eficaz de las principales. CA. plagas[3]. Por tanto, la finalidad de los plaguicidas es destruir ciertos organismos vivos, constituyéndose así como un grupo particular de los. IO. TE. biocidas que puede alcanzar una capacidad letal amplia.[4]. BL. Los plaguicidas organoclorados (POC’s) y organofosforados (POF’s) son. BI. los dos tipos de plaguicidas más utilizados en la actualidad para el control de plagas. El uso desmesurado de estos compuestos en los cultivos, no solo genera desequilibrios ambientales, también afecta los ecosistemas, a. 1 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. los agricultores, y a los consumidores, esto es debido a la residualidad de estos compuestos orgánicos presentes en nuestros alimentos[5]. Lufenuron 5% EC es un insecticida regulador del crecimiento de los. AS. insectos interfiriendo en la formación de quitina en los estados inmaduros,. IC. no afectando los estados adultos. Las larvas afectadas no pueden mudar. G. adecuadamente debido a que no hay desprendimiento de la exubia vieja.. LO. La larva crece internamente pero la nueva exubia no se produce,. O. presentándose por lo tanto un revertimiento y la larva muere atrapada en la. AS. BI. cutícula[6].. CI. Básicamente un inhibidor de síntesis de quitina actúa específicamente. CI EN. sobre la incorporación de N-acetil Glucosamina en la quitina en el tegumento, resultando en la formación de nueva cutícula anormal y la. CA. DE. muerte de insectos[7,8].. Entre los insectos que controla Lufenuron tenemos: Spodoptera spp,. TE. Heliothis virescens, copitarsia turbata (en esparrago); Heliothis virescens, eridania,. Spodoptera. frugiperda,. Spodoptera. ochrea,. IO. Spodoptera. BI. BL. Spodoptera sp (en alcachofa); Heliothis virescens (pimiento)[9].. Sin embargo, el desarrollo de resistencia a insecticidas constituye el principal problema, lo que ha conducido a buscar nuevas alternativas como el control biológico[10].. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. El control biológico es una práctica agrícola en constante crecimiento que busca la destrucción total o parcial de patógenos e insectos plaga,. AS. frecuentemente mediante el uso de sus enemigos naturales[11]. Son los. IC. primeros agentes biológicos en ser utilizados para el control de plagas, son. LO. G. capaces de producir enfermedad y muerte de los insectos, el control biológico es necesario en las prácticas agrícolas en donde se manipule el. O. ambiente para beneficiar las poblaciones de entomopatógenos, donde el. BI. conocimiento de los aspectos ecológicos del hongo es necesario, tales. AS. como la humedad relativa, temperatura, patogenicidad, virulencia y. CI. hospederos a los que infecta activamente. [12] Dentro de los agentes de. CI EN. control biológico se encuentran los hongos entomopatógenos.[9] Sin embargo, para que un hongo entomopatógeno sea considerado como un. DE. potencial biocontrolador, debe tener como características básicas: alta virulencia contra insectos plagas, facilidad de producción masiva y la. TE. CA. resistencia a condiciones ambientales extremas[13].. IO. Los hongos entomopatógenos son de gran importancia dentro de los agro. BL. ecosistemas por su capacidad natural para regular las poblaciones de. BI. insectos, la cual depende de la susceptibilidad del hospedero o de la asociación patógeno-hospedero[14], la cual demuestran un considerable potencial en el control de insectos plaga, permiten el desarrollo de cultivos. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. más sostenibles, son más efectivos por tener blancos de acción más específicos que los productos químicos.[15]. AS. Aproximadamente el 80 % de las enfermedades que se producen en los. IC. insectos tienen como agente causal un hongo. La eficacia de los hongos es. G. limitada debido a que son dependientes de factores medioambientales que. O. LO. solo por momentos les pueden ser favorables.[16]. BI. Entre los hongos de más amplio uso contra insectos plaga en la agricultura. AS. sobre salen Beauveria bassiana y B. brongniartii, Lecanicillium lecanii,. CI. Isaria fumosorosea, Metarhizium anisopliae. [17,18] Son géneros fáciles. CI EN. de producir en masa y comercializados para control biológico. Sin embargo el grado de patogenicidad está en función de condiciones. DE. ambientales.[19]. CA. L. lecanii es un hongo de la división Deuteromycota, clase Hyphomycetes,. TE. orden Moniliales, familia Moniliaceae que produce colonias blanquecinas. IO. de crecimiento rápido, de superficie aterciopelada con aspecto algodonoso,. BL. luego pulverulenta.[20] Su conidióforo no se diferencia mucho de la hifas somáticas, pero de trecho en trecho sostiene a los fiálides (células. BI. conidiógenas) son erectos, anchos en la base y terminan en una punta delgada por donde salen las conidias. Generalmente en grupos de dos a seis, aunque también hay algunos solitarios. Miden de 11 a 30µ de largo por l.5 a 2µ de diámetro, son ligeramente anchos en la base y van. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. adelgazando hacia la punta. Las conidias salen del extremo de las fiálides en grupos formando cabezuelas en forma elipsoidales de 2 a 4µ de largo por 1 a 1.5µ de ancho. Son uniformes en cuanto a forma y tamaño. IC. AS. dependiendo del aislamiento.[21]. LO. G. Un hongo entomopatógeno que se encuentra frecuentemente atacando afidos y escamas en zonas tropicales y subtropicales[22], se reproducen. BI. O. asexualmente por esporas denominadas conidias, ubicadas en los extremos. AS. de los conidióforos erectos[23]. Se caracteriza por presentar conidióforos solitarios o verticilados que llevan apicalmente masas de conidias hialina,. CI EN. de latencia.[24,25]. CI. subglobosas, ovales, unicelulares, no adhesivos y no presentan estructura. DE. Se han realizado un gran número de trabajos referentes a la compatibilidad. CA. de sustancias químicas como herbicidas, fungicidas, nematicidas, insecticidas y coadyuvantes; con organismos que se consideran enemigos. TE. naturales de plagas como: depredadores, parasitoides y microorganismos. IO. entomopatógenos, encontrándose que algunos estos químicos disminuyen. BL. la actividad de estos organismos y alteran su fisiología cuando estos son. BI. utilizados sin un concepto de manejo integrado de plagas[26]. Hay varios estudios de compatibilidad de productos químicos con hongos entomopatógenos como L. lecanii[27], Metarhizium[28], Paecilomyces. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. fumosoroseus[29]y B. bassian[30].De acuerdo a estos estudios, el efecto que producen diversos agroquímicos está relacionado con la germinación,. AS. que es de carácter irreversible y el desarrollo micelial de estos hongos.[31]. IC. Se conocen muchos estudios sobre la compatibilidad entre L. lecanii con. productos. químicos. como. LO. G. un producto químico. El cual en un estudio realizado en cuba utilizando imidacloprid,. metamidofos,. dicofol. y. BI. O. abamectina, los dos últimos ocasionaron la inhibición de L. lecanii.. AS. También se probó combinaciones de L. lecaniicepa Y-57con quizalofop-petilo se clasificación como compatible y además manifestó 100% de. CI. inhibición de la germinación de los conidios del hongo a concentraciones. CI EN. iguales o superiores a 10 mg.L-1[32]. DE. En otra investigación se reportaron que los insecticidas pueden inhibir el. CA. crecimiento de L. lecanii, también se encontró que L. lecanii en. IO. TE. combinación con confidor hay compatibilidad con el hongo.[33]. Tanto lufenuron como L. lecanii son elementos que se aplican al follaje de. BI. BL. las plantas. Ambos son usados con el mismo fin, el control de insectos. Esto significa que es posible que tanto el lufenuron como L. lecaniiestén presentes en el follaje vegetal al mismo tiempo, por lo que es necesario conocer si el compuesto químico presenta algún tipo de efecto negativo sobre L. lecanii, ya que si fuera así, implicaría evitar la presencia de este. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. químico al aplicar L. lecanii, con la finalidad que el hongo sea más efectivo y no tenga un incremento el costo de su aplicación; este trabajo de investigación tiene como objetivo evaluar el efecto de la concentración. AS. de 30 ppm, 37.5 ppm, 50 ppm de lufenuron sobre la germinación,. IC. crecimiento y actividad entomopatógena de L. lecanii en condiciones de. LO. G. laboratorio.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. .. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. MATERIAL Y MÉTODO. IC. AS. 1. Material biológico. G.  Cultivos puros de Lecanicillium lecanii, proporcionados por el Laboratorio. LO. de Fitopatología de la Facultad de Ciencias Biológicas, Universidad. O. Nacional de Trujillo.. AS CI.  Larvas de Spodoptera frugiperda. BI.  Insecticida Lufenuron 5% EC. CI EN. 2. Procedimiento. 2.1 Evaluación del efecto de lufenuron sobre la germinación de. DE. esporas de L. lecanii.. CA. 2.1.1. Resiembra del cultivo de L. lecanii. puntura en tres tubos con Agar Papa Dextrosa el cual se incubará a 25ºC durante 7 a 10 días, y se obtuvo un cultivo joven.. BI. BL. IO. TE. A partir del cultivo puro de L. lecanii se sembró por. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.2. Propagación del cultivo de L. lecanii.. AS. A partir del cultivo joven de L. lecanii se sembró por suspensión en un frasco plano conteniendo Agar Papa. O. 2.1.3. Preparación del inóculo de esporas. LO. G. IC. Dextrosa el cual se incubará a 25ºC durante 7 a 10 días.. BI. El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de agua. AS. destilada estéril al frasco plano con Agar Papa Dextrosa. CI. que contiene a L. lecanii. Luego se trató de liberar las. CI EN. esporas del hongo y la suspensión resultante se colocó en un matraz estéril, donde se realizó diluciones si es. DE. necesario.. Se determino la concentración de esporas mediante el. CA. recuento en Cámara de recuento celular. Luego, esta. final de 105 esporas/mL en 50 mL de suspensión de esporas.. BI. BL. IO. TE. suspensión se estandarizó hasta obtener una concentración. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.1.4. Inoculación e incubación Se colocó 2 mL de medio líquido con las concentraciones de lufenuron (doble concentrado) en frascos pequeños de. AS. boca ancha, 3 de cada concentración; a estos frascos se le. IC. agrego 2 mL del inóculo de esporas de L. lecanii en cada. G. tubo de ensayo; obteniendo una concentración de. LO. lufenuron de 30 ppm, 37.5 ppm. 50 ppm y de 5 x 105. O. conidias/mL. Posteriormente cada frasco se incubó a una. CI. CI EN. 2.1.5. Lectura. AS. BI. temperatura promedio de 25ºC, durante 24 horas.. Transcurrido el tiempo de incubación se realizó el recuento en Cámara de recuento celular, se contó todas las esporas. DE. germinadas y esporuladas. Con el fin de determinar el. CA. porcentaje de germinación se realizó un recuento control. IO. TE. que será tomado como el 100 %.. BI. BL. 2.2. Evaluación del efecto de lufenuron sobre el crecimiento de L. lecanii. 2.2.1. Preparación del medio de cultivo Para la evaluación del crecimiento se preparó Agar Papa Dextrosa en cuatro matraces conteniendo 40 mL de medio cada uno. El medio de cultivo se esterilizo y se dejó enfriar. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. hasta 50°C. Estando aún fundido el medio, a tres de los matraces se les adiciono lufenuron en cantidad suficiente para obtener una concentración final 30, 37.5 y 50 ppm,. AS. respectivamente. Al medio contenido en el matraz restante. IC. no se le agrego el adyuvante, a fin de utilizarlo como. G. control. Luego, el medio de cultivo de cada uno de los tres. LO. matraces se sirvió en placas de Petri estériles (tres placas. 2.2.2. Siembra e incubación. AS. BI. O. por cada concentración, incluyendo el control).. CI. A partir del cultivo joven de L. lecanii, se sembró por. CI EN. puntura en la parte central de las placas Petri conteniendo Agar Papa Dextrosa previamente preparadas en el paso. DE. anterior (cuatro placas por concentración incluidas las placas del control); estas placas se incubaron a temperatura. TE. CA. promedio de 25°C durante 7 a 10 días.. BI. BL. IO. 2.2.3.. Lectura A partir del tercer día después de la siembra y hasta el décimo día, se medió el radio de crecimiento (mm) de cada colonia en cuatro direcciones, obteniéndose un radio promedio de crecimiento diario para cada concentración de coadyuvante y el grupo control. Los resultados de crecimiento de L. lecanii se expresaron en milímetros (mm). 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. y en porcentaje de crecimiento (%C), teniendo en cuenta el crecimiento alcanzado por el grupo control (100%), de la. X 100. LO. G. IC. %C=. AS. siguiente manera. BI. O. 2.3. Evaluación del efecto de lufenuron sobre la patogenicidad de L.. AS. lecanii.. CI EN. frugiperda. CI. 2.3.1. Recolección, identificación y crianza de Spodopthera. Los ejemplares en su estado larval se recolecto en frascos de vidrio de boca ancha y se trasladó al laboratorio de. DE. Entomología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo para su identificación. BI. BL. IO. TE. CA. mediante claves taxonómicas.. Los insectos se colocaron en un insectario de vidrio de 14.7cm de diámetro por 19.7cm de alto, cubiertos por una malla y se observo diariamente por un lapso de cinco días (cuarentena).. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La alimentación consistió en pedazos de hojas, las cuales también sirvió para mantener la humedad. Estos alimentos se lavaron previamente con agua destilada. El insectario se. AS. limpió retirando los ejemplares muertos y colocándoles. LO. G. IC. alimento fresco.. O. 2.3.2. Preparación del inóculo de esporas de L. lecanii.. BI. El inóculo de esporas se obtuvo agregando 10 mL de agua. AS. destilada estéril al frasco plano con Agar Papa Dextrosa que contiene a L. lecanii. Luego se trató de liberar las esporas. CI EN. CI. del hongo y la suspensión resultante se colocó en un matraz estéril, donde se realizó diluciones si es necesario. Se determino la concentración de esporas mediante el. DE. recuento en Cámara de recuento celular. Luego, esta. CA. suspensión se estandarizó hasta obtener una concentración. IO. TE. final de 105 esporas/mL en 50 mL de suspensión de esporas.. BI. BL. 2.3.3. Inoculación de S. frugiperda. La inoculación de la suspensión de Lecanicillium lecanii a larvas de S. frugiperda, se aplicó por aspersión a una concentración la suspensión en ausencia del químico y el grupo restante de larvas se aplicó con el químico a las concentraciones de 30 ppm, 37.5ppm y 50 ppm. Luego se. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. continuó abasteciendo de alimentos a los ejemplares durante. AS. el periodo establecido.. IC. 2.3.4. Observación de síntomas y/o signos de S. frugiperda. G. Después de la inoculación, se evaluó durante 7 a 10 días a. LO. los cuatro grupos para determinar cambios en su. O. comportamiento como pérdida de apetito, parálisis, muerte. del. porcentaje. de. muerte. de. S.. CI. 2.3.5. Determinación. AS. BI. y momificación del insecto.. CI EN. frugiperda.. Para la determinación del porcentaje de muerte se usó la. DE. fórmula de Abbott.. BI. BL. IO. TE. CA. 2.3.6. Aislamiento de L. lecanii a partir de S. frugiperda infectados experimentalmente.. Se procedió a extraer con un asa bacteriológica, el micelio del hongo que invadió a larvas S. frugiperda, también se realizaron observaciones microscópicas (40 X) para identificar a L. lecanii.. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.7. Análisis de datos La determinación del efecto del insecticida lufenuron sobre Lecanicillium lecanii, se analizaron el porcentaje de y. el. porcentaje. de. crecimiento. de. AS. germinación. IC. Lecanicillium lecanii en las diferentes concentraciones del. LO. G. insecticida, y los datos se procesaron en base a la prueba de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. programa estadístico SPSS v.22. O. Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA), según el. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESULTADOS. En la Fig. 1, se observa que el insecticida Lufenuron inhibe. AS. significativamente la germinación de Lecanicillium lecanii respecto al. LO. G. y no germinadas en las diferentes concentraciones del quimico.. IC. control; En la Fig. 2, se obesrva en el microscopio las conidias germinadas. O. En la Fig. 3 se observa el porcentaje del insecticida Lufenuron, que no. BI. tiene diferencia significativa sobre el crecimiento de L. lecanii respecto al. AS. control;. CI EN. concentraciones del químico.. CI. Fig. 4, esto se corrobora al evaluar el crecimiento de L. lecanii a diferentes. Fig. 5, Se observa los signos y síntomas en Spodoptera frugiperda. DE. causados por L. lecanii, mientras que en la Fig.6, se observa en el. CA. microscópico las conidias y conidióforos característicos de L. lecanii en. BI. BL. IO. TE. las diferentes concentraciones.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) b. b. b. CI EN. CI. AS. BI. a. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig.1. Porcentaje de germinación de Lecanicillium lecanii frente a tres. DE. concentraciones (ppm) de lufenuron, durante 24 horas de incubación. CA. b: p<0.05 Si existe diferencia significativa. BI. BL. IO. TE. a: p>0.05 No existe diferencia significativa. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 30 ppm. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. 0 ppm. DE. CI EN. CI. 30 ppm. 50 ppm. CA. 37.5 ppm. TE. Fig.2. Observación microscópica (40x) de conidias germinadas y no de. Lecanicillium. lecanii. frente. a. diferentes. IO. germinadas. BI. BL. concentraciones del insecticida Lufenuron (ppm).. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) a. O. a. a. CI EN. CI. AS. BI. a. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Fig.3. Porcentaje de crecimiento de Lecanicillium lecanii frente a las tres. CA. DE. concentraciones (ppm) del Lufenuron a los 10 días de incubación.. BI. BL. IO. TE. a: p>0.05 No existe diferencia significativa. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. B. A. D. C. DE. Fig.4.Crecimiento en placa de Lecanicilliumlecanii a las diferentes concentraciones de Lufenuron a los 10 días de incubación:. BI. BL. IO. TE. CA. A. 0 ppm; B. 30 ppm; C. 37.5 ppm; D. 50 ppm.. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) A. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI. AS. BI. O. LO. G. B. C. CI EN. D. DE. Fig.5. A. Larva Spodopterafrugiperdacolonizada con L. lecaniiprocedente de un. CA. medio con 0 ppm de lufenuron. B. Larva S. frugiperdacolonizada con L. lecaniiprocedente de un medio con 30 ppm de lufenuron. C. Larva S.. TE. frugiperdacolonizada con L. lecaniiprocedente de un medio con 37.5 ppm de. IO. lufenuron. D. Larva S. frugiperdapresenta signo y sintoma ocasionada por L.. BI. BL. lecaniiprocedente de un medio con 50 ppm de lufenuron.. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) O. B. C. BI. A. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. Fig.6. Observación de conidias y conidióforos característicos de L. lecaniique. CI. proviene de medio de cultivo con:. CI EN. A. 0 ppm de lufenuron B. 30 ppm de lufenuron C.. BI. BL. IO. TE. CA. DE. lufenuron.. 37.5 ppm de. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DISCUSIÓN. La inhibición de la germinación de Lecanicillium lecanii manifiesta una. AS. dinámica ascendente en la medida en que aumenta las concentraciones de. IC. Lufenuron (Figura 1). Se observa que el químico posee un efecto inhibitorio sobre. G. el hongo; a medida que aumenta la concentración del producto disminuye el. LO. porcentaje de germinación del entomopatógeno, el agroquímico reduce el. BI. O. porcentaje de germinación hasta un 0 %.. AS. Respecto al porcentaje de germinación de conidias de Lecanicillium lecanii frente. CI. a las diferentes concentraciones de Lufenuron este posee un efecto inhibitorio,. CI EN. posee un efecto inhibitorio en sus concentraciones de 30, 37.5 y 50 ppm, presentan reducción en la germinación de conidias de Lecanicillium lecanii en un. DE. 0% con respecto al control (Fig. 1).. CA. El análisis estadístico nos muestra que, entre las concentraciones del agroquímico, existe una diferencia estadísticamente significativa entre las medias. TE. de los porcentajes de germinación obtenidos en todos los tratamientos realizados;. IO. es decir, que a medida que aumenta la concentración del agroquímico disminuye. BI. BL. el porcentaje de germinación.. Estos valores obtenidos por el agroquímico en la presente investigación. muestran valores muy por debajo de lo recomendado por el SENASA el cual establece que un biopreparado para poder ser usado debe tener un porcentaje de. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. germinación de conidias igual o mayor al 90%, de este modo resulta ser incompatible. en. relación. a. los. estándares. de. calidad. para. hongos. AS. entomopatógenos utilizados en el control de plagas23,24.. IC. La espora o conidia de Lecanicillium lecanii durante el proceso de. G. germinación atraviesa por dos etapas la primera es el hinchamiento hidrostático,. LO. en la cual la espora absorbe agua, luego le sigue el hinchamiento metabólico, en la. O. cual la conidia incorpora nuevo material que está presente en el medio externo. BI. para poder desarrollar el tubo germinativo25,26. Debido a estos procesos es que el. AS. químico disuelto en el agua fueron absorbidos e incorporados como parte del. CI EN. evidentemente su germinación25,27.. CI. medio externo al atravesar la pared celular de la conidia del hongo afectando. La disminución de la germinación del hongo podría deberse. DE. posiblemente a la variabilidad genética que existe entre ellos tal es así que pueden. CA. existir conidias con una versatilidad metabólica que le brinde resistencia a inhibidores microbianos y a las condiciones adversas dadas por el agroquímico,. TE. pues la heterocariosis le confiere deferencias estructurales que presentan aun. IO. cuando pertenecen a una misma especie29, una diferencia estructural sería la pared. BL. celular que actúa como barrera mecánica, evitando que las sustancias del medio. BI. exterior puedan ingresar o que solo pequeñas concentraciones puedan lograrlo30. Estas propiedades de permeabilidad y selectividad le confieren la constitución de la membrana citoplasmática que le brinda protección frente a sustancias tóxicas que se encuentren en el entorno de la membrana que puedan alterar su. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. comportamiento en respuesta a estímulos como la transducción de las señales de iniciación de la germinación y el reconocimiento del sustrato31,32.. AS. El efecto de Lufenuron sobre la inhibición de la germinación de. IC. Lecanicillium lecanii podría deberse a los constituyentes presentes en la espora. G. con alta hidrofobicidad, modificando su permeabilidad, transporte iónico y otras. LO. moléculas, lo que puede obstaculizar el ingreso de los nutrientes que la espora. O. necesita para su germinación, dependiendo de la concentración del aceite agrícola. AS. BI. presente en el medio externo de la espora se verá afectado su germinación33.. CI. Asimismo, los tensioactivos han demostrado ser buenos agentes. CI EN. antimicrobianos debido a su capacidad de interaccionar y perturbar las membranas citoplasmáticas por la naturaleza hidrófoba de sus cadenas apolares25,26. Así mismo, los tensioactivos se intercalan entre los lípidos dispuestos en la bicapa. DE. lipídica de la membrana celular. Como resultado de esta interacción, la parte. CA. hidrófoba del tensioactivo se fija en la fase lipídica de la membrana y la hidrófila permanece en la región polar30. De acuerdo a las características químicas de los. TE. tensioactivos como su forma molecular, tamaño, etc. Dicha interacción puede inducir alteraciones en la membrana celular, proceso en el que numerosos factores. IO. 26. BL. parecen estar implicados y que aún no se conoce bien. Por lo expuesto. BI. anteriormente y el alto contenido de lípidos en la membrana celular de los hongos31, se puede deducir que el químico agrícola Lufenuron actuó de esta manera para inhibir la germinación de L. lecanii.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(41) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. En cuanto al efecto no inhibitorio del agroquímico empleado sobre el crecimiento de L. lecanii (Fig. 3) y un efecto inhibitorio sobre la germinación (Fig. 1). Esto se debe a que, durante la crecimiento, L. lecanii presenta un mayor. AS. número de mecanismos de resistencia o evasión a condiciones adversas o a la. G. IC. presencia de sustancias toxicas para su desarrollo32.. LO. De acuerdo a los porcentajes de crecimiento de L. lecanii frente a las. O. diferentes concentraciones de Lufenuron (Fig. 3) se observa que el químico. BI. agrícola presenta un efecto no inhibitorio sobre el hongo evaluado; en tal sentido. AS. que, en el rango de 30 ppm hasta 50 ppm, el porcentaje de crecimiento varía entre. CI. 79.14% hasta 69.14% (Fig. 3). El análisis estadístico revela que el químico si. CI EN. tiene efecto sobre el crecimiento del hongo con respecto a su control, pero el efecto de cada concentración empleada de Lufenuron es el mismo, es decir que el. estadísticamente igual.. DE. efecto de las tres concentraciones evaluadas sobre el crecimiento del hongo es. CA. Los resultados obtenidos respecto a la capacidad entomopatógena, se obtuvo que Lecanicillium lecanii no se vio afectado por el químico lufenuron, ya. TE. que parasitó a Spodoptera frugiperda (Fig.5 y Fig. 6), dejando actuar también a. IO. las enzimas y toxinas que posee este27 hongo. El mecanismo de acción. BL. Lecanicillium lecanii sobre Spodoptera frugiperda, se manifestaron en signos y. BI. síntomas, como en la pérdida de sensibilidad, falta de coordinación, letargo, inapetencia, melanización y parálisis, antes de causarle la muerte.24,33 Con la muerte del insecto el beneficio se incrementa, ya que se produce esporulación y posterior dispersión del hongo. La resistencia de este hongo posiblemente se debe. 26 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. a que posee sistemas de defensa mecánicos y químicos que resisten la acción de defensa del insecto.32,33. AS. Existen pocos trabajos sobre compatibilidad de sustancias químicas de. IC. amplio uso en la agricultura en comparación con los numerosos trabajos que. G. investigan la compatibilidad de productos fitosanitarios como los fungicidas,. LO. nematicidas y herbicidas; de manera que hoy en día son más los investigadores. O. que se enfocan en realizar trabajos que comprueben el efecto y la compatibilidad. BI. de sustancias químicas utilizadas para el control de insectos y plagas, con. AS. microorganismos (entomopatógenos) capaces de ofrecer beneficios a los cultivos;. CI. de manera que sería recomendable realizar estudios para evaluar el efecto real que. CI EN. ejercen en campo, para poder tener un mayor conocimiento de la interacción se los productos y los microorganismos no solo de estas sustancias sino también otras ampliamente utilizadas; de manera que pueda mejorar el control de plagas y. BI. BL. IO. TE. CA. DE. el programa de manejo integrado de plagas.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. CONCLUSIONES. Con respecto al efecto de Lufenuron sobre la germinación y el crecimiento. Lufenuron en el rango de 30 ppm a 50 ppm, no presenta efecto no. O. •. LO. G. IC. de Lecanicillium lecanii se concluye lo siguiente:. •. AS. BI. inhibitorio significativa sobre el crecimiento de Lecanicillium lecanii.. Lufenuron en el rango de 30 ppm a 50 ppm, presenta efecto inhibitorio. •. CI EN. CI. sobre la germinación de Lecanicillium lecanii.. Las concentraciones de 30 a 50 ppm de lufenuron no afecta la capacidad. BI. BL. IO. TE. CA. DE. entomopatógena de L. lecanii sobre Spodoptera frugiperda.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RECOMENDACIONES. Realizar estudios en campo, acerca del efecto inhibitorio de Lufenuron. AS. sobre la germinación y crecimiento de Lecanicillium lecanii, pues los datos. IC. obtenidos en condiciones de laboratorio podrían no ser similares en campo debido. G. a la presencia de variables no manejables como la Humedad relativa,. O. LO. Temperatura, Composición del suelo, pH, flora microbiana presente en campo.. BI. Realizar estudios de laboratorio para poder determinar la concentración. AS. mínima fungistática y la concentración mínima fungicida de estos químicos. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. agrícolas sobre Lecanicillium lecanii.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(46) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. [9]. Gutiérrez A. J., Pinzón I. M., Londoño A., Blach D., Rojas M. A.. Residuos de plaguicidas organoclorados, organofosforados y análisis fisicoquímico en piña (Ananas comosus L.). Universidad del Quindío.. Vázquez-Martínez. MG.. COMPATIBILIDAD. DE. HONGOS. G. RP,. Mendoza-Ledesma MN, Rodríguez-Ramírez AD, Penilla-Navarro. IC. [10]. AS. Colombia. Agro Sur. (2010) Vol. 38(3) 199-211.. LO. ENTOMOPATÓGENOS E INSECTICIDAS ORGANOFOSFORADOS. Téllez-Jurado A, Cruz Ramírez MG, Mercado Flores Y, Asaff. BI. [11]. O. PARA EL CONTROL DE Aedes aegypti (DIPTERA: CULICIDAE) n.d.. AS. Torres A, Arana-Cuenca A. Mecanismos de acción y respuesta en la. CI. relación de hongos entomopatógenos e insectos. Rev Mex Micol 2009;. [12]. CI EN. 30:73–80.. Motta-Delgado PA, Murcia-Ordoñez B. Hongos entomopatógenos. como alternativa para el control biológico de plagas. Ambiente Água-. Santos Díaz AM, De Brito Brandão PF, Villamizar Rivero LF.. CA. [13]. DE. Interdiscip J Appl Sci 2011;6.. Efecto de estrés térmico y de irradiación con luz ultravioleta (UV-B) sobre. TE. características de Nomuraea rileyi Nm006. Rev Colomb Biotecnol 2017;. IO. 19:81–91. doi: 10.15446/rev.colomb.biote.v19n1.55943.. BL. [14]. Pucheta Díaz M, Flores Macías A, Rodríguez Navarro S, De la. BI. Torre M. Mecanismo de acción de los hongos entomopatógenos. Interciencia 2006;31. [15]. Gallego-Velásquez J, Cardona-Bustos NL, Restrepo-Betancur F.. Compatibility of the entomopathogenic fungus Purpureocillium sp. cepa. 31 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(50) AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. ANEXOS. 35 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(51) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 36 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(52) BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Anexo 1. Ficha técnica de Lufenuron 5% EC. 37 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(53) 511,15 g · mol - 1. Punto de fusion. 174 ° C (345 ° F, 447 K). G. Masa molar. LO. C 17 H 8 Cl 2 F 8 N 2 O 3. AS. BI. O. Fórmula química. IC. AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI EN. CI. Anexo 2. Estructura de la molécula de Lufenuron. (Nombre IUPAC: 1[2,5 - dicloro - 4- (1,1,2,3,3,3 - hexafluoropropoxi) fenil] - 3-. BI. BL. IO. TE. CA. DE. (2,6 - difluorobenzoil) urea). a) Cultivo puro. b) Observación microscópica. Anexo 3. Lecanicillium lecanii a) Cultivo puro y b) Observación microscópica.. 38 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(54) 37.5 pm Radio de la colonia (cm) Día 2. Día 3. Día 4. Día 5. Día 6. Día 7. Día 8. Día 9. Día 10. 0.30 0.25 0.30 0.35 0.33. 0.48 0.43 0.48 0.45 0.50. 0.63 0.45 0.53 0.50 0.60. 0.70 0.65 0.70 0.70 0.70. 0.78 0.70 0.80 0.80 0.75. 1.05 0.80 0.90 0.88 0.88. 1.20 0.95 1.05 1.00 1.05. 1.33 1.00 1.13 1.10 1.15. 1.40 1.10 1.20 1.18 1.23. 1.45 1.23 1.28 1.28 1.28. 0.30. 0.48. 0.60. 0.70. 0.78. 0.90. 1.00. 1.05. 1.13. 1.23. 0.31. 0.47. 0.55. 0.69. 0.77. 0.90. 1.04. 1.13. 1.21. 1.29. BI. O. LO. G. IC. AS. Día 1. 30ppm. DE. Día 3 0.53 0.53 0.63 0.55 0.53 0.58 0.56. CA. Día 2 0.38 0.40 0.45 0.43 0.40 0.40 0.41. Radio de la colonia (cm) Día 4 Día 5 Día 6 Día 7 0.65 0.75 0.88 0.98 0.63 0.80 0.90 1.05 0.75 0.90 0.95 1.13 0.68 0.83 0.88 1.00 0.70 0.78 0.83 1.05 0.70 0.83 0.85 1.05 0.69 0.82 0.88 1.04. Día 8 1.13 1.10 1.20 1.13 1.15 1.15 1.14. Día 9 1.23 1.18 1.28 1.23 1.23 1.25 1.23. Día 10 1.30 1.23 1.33 1.33 1.30 1.35 1.31. IO. 1 2 3 4 5 6 Promedio. Día 1 0.25 0.30 0.35 0.28 0.20 0.28 0.28. TE. Ensayo. CI EN. CI. AS. Anexo 4. Crecimiento radial promedio de Lecanicillium lecanii (cm) a la concentración 0 ppm de lufenuron, durante 10 día de evaluación.. BL. Anexo 5. Crecimiento radial promedio de Lecanicillium lecanii (cm) a la concentración 30 ppm de lufenuron, durante 10 día de evaluación. BI. ntrol. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 39 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..