Efecto del Tebuconazol en la capacidad antagónica de Trichoderma sp nativa sobre Botrytis cinerea en condiciones de laboratorio

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(1)Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. IC. AS. ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. CI. Efecto del Tebuconazol en la capacidad. CI EN. antagónica de Trichoderma sp. nativa sobre. DE. Botrytis cinerea en condiciones de laboratorio TESIS. CA. PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE:. TE. BIÓLOGO - MICROBIÓLOGO. Br. LIZARDO MANUEL FLORES NIEVES. BL. IO. AUTORES: Br. CRISTHIAN ROBERTO AYALA MIRANDA. BI. ASESOR : Ms.C. JUAN HÉCTOR WILSON KRUGG. TRUJILLO – PERÚ 2019. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(2) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AS. AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO. IC. Dr. Orlando Moisés Gonzales Nieves. BI. O. LO. G. RECTOR. AS. Dr. Rubén César Vera Véliz. DE. CI EN. CI. VICERRECTOR ACADÉMICO. Dr. Weyder Portocarrero Cárdenas. Dr. Esteban Alejandro Ilich Zerpa SECRETARIO GENERAL. BI. BL. IO. TE. CA. VICERRECTORA INVESTIGACIÓN. ii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(3) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. Dr. Freddy Rogger Mejía Coico.. AS. AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. AS. BI. O. LO. G. DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. CI. Dr. Willian Elmer Zelada Estraver. CA. DE. CI EN. SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS. Dr. Jaime Asunción Agreda Callirgos. BI. BL. IO. TE. DIRECTOR DE LA ESCUELA PROFESIONAL DE MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA. iii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(4) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA. AS. A Dios, el que me acompaña siempre y me levanta en cada tropiezo.. A ti madre, que con todo tu esfuerzo y amor logras cumplir mi meta, la meta que. IC. tú nunca pudiste cumplir por la falta de oportunidad, tú Nataly junto a mi abuela. G. Adriana me has educado, me has proporcionado todo y cada cosa que he. O. LO. necesitado. Sus enseñanzas las aplico cada día; gracias por tener fe en mí.. BI. A los “cullens” compañeros de aula y amigos en la vida, con ustedes se podía aprender de la forma más divertida cada día. Estos recuerdos que tengo con. AS. ustedes los atesoraré hasta el fin de mis días, gracias por elegirme como su. CI EN. CI. amigo.. A todas y cada una de las personas que me apoyaron para seguir adelante, se los. BI. BL. IO. TE. CA. DE. agradezco infinitamente.. iv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(5) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEDICATORIA A Dios, por ser la guía siempre en la toma de mis decisiones y por nunca dejarme. AS. solo, hasta los momentos que no encontraba solución.. IC. A mis queridos padres; Eva y Moisés, porque fueron y serán mis grandes guías en. O. LO. incondicional, los amo mucho.. G. mi vida tanto personal y profesional, gracias por su entera paciencia y apoyo. BI. A mi Abuelita Tico, que es como mi segunda madre, siempre regañándome y aconsejándome en la vida, para poder ser la persona que soy ahora; también a. AS. mi querida Hermana Carmen, por su cariño y apoyo, por la gran unión que desde. CI EN. CI. niños siempre tenemos. Te quiero mucho hermana.. A mi amada esposa y madre de mi hija, Maryori Rebeca que, a pesar de mis errores, siempre está conmigo dándome ánimos y para brindarme el gran apoyo. madre para Luana. CA. DE. en toda esta travesía de la tesis, la amo mucho y gracias por ser la estupenda. TE. A mi Luana Valentina, que llego a mi vida en el momento que menos esperé, pero. cosas pensando en ella.. BL. IO. que se convirtió en la fuerza enorme para poder salir adelante y hacer todas las. BI. En especial a mis Tíos: Lizardo, Héctor, Marco, Lucía, Pablo; por su apoyo de alguna y otra forma, los quiero mucho.. v Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(6) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. DEL ASESOR. AS. El que suscribe, Ms. C. Juan Héctor Wilson Krugg, asesor de la tesis. IC. titulada:. G. “Efector del tebuconazol en la capacidad antagónica de Trichoderma sp. nativa. BI. O. LO. sobre Botrytis cinerea en condiciones de laboratorio”. AS. CERTIFICA:. Que la investigación ha sido ejecutada de acuerdo al reglamento establecido. CI EN. CI. de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo, estando en conformidad con su correspondiente proyecto, y que el informe ha sido redactado acogiendo las observaciones y sugerencias alcanzadas.. DE. Por lo tanto, autorizo al Bachiller Cristhian Roberto Ayala Miranda y al. TE. sus fines.. CA. Bachiller Lizardo Manuel Flores Nieves, continuar con los procedimientos según. BI. BL. IO. Trujillo, Abril del 2019. __________________________________ Ms.C. Juan Héctor Wilson Krugg ASESOR. vi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(7) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. PRESENTACIÓN. AS. SEÑORES MIEMBROS DEL JURADO DICTAMINADOR:. IC. En cumpliendo con las disposiciones establecidas en el Reglamento de. G. Grados y Títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra. LO. consideración y elevado criterio la presente Tesis titulada: “Efecto del tebuconazol. O. en la capacidad antagónica de Trichoderma sp. nativa sobre Botrytis cinerea en. BI. condiciones de laboratorio”, con el objetivo de obtener el Título Profesional de. Trujillo, Abril del 2019.. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. Biólogo – Microbiólogo.. ______________________________. Br. Cristhian Roberto Ayala Miranda. Br. Lizardo Manuel Flores Nieves. BI. BL. _________________________________. vii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(8) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IC. AS. MIEMBROS DEL JURADO. LO. Dra. Manuela Luján Velásquez.. G. ___________________________________________. CI EN. CI. AS. BI. O. PRESIDENTE. ___________________________________________. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Dr. Eduardo Muñoz Ganoza.. ___________________________________________ Ms.C Juan Wilson Krugg. Vocal. viii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(9) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. APROBACIÓN. O. LO. G. IC. AS. Los profesores que suscriben, miembros del Jurados Examinador, declaran que el presente Informe de Tesis ha cumplido con los requerimientos formales y fundamentales, siendo APROBADO por UNANIMIDAD.. BI. ___________________________________________. AS. Dra. Manuela Luján Velásquez.. CI EN. CI. PRESIDENTE. DE. ___________________________________________. SECRETARIO. BI. BL. IO. TE. CA. Dr. Eduardo Muñoz Ganoza.. ___________________________________________ Ms.C Juan Wilson Krugg. Vocal. ix Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(10) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. AGRADECIMIENTOS Nuestro más profundo agradecimiento a nuestro asesor y amigo Juan Héctor. AS. Wilson Krugg, que sin su ayuda y conocimientos no hubiese sido posible realizar este proyecto. Gracias por su amistad, por la confianza brindada, sus enseñanzas. LO. G. IC. y por sus consejos que nos permitieron crecer como futuros profesionales.. O. A los profesores miembros del Jurado, de la Escuela Profesional de. BI. Microbiología y Parasitología, por sus recomendaciones dadas para la. CI. AS. realización de esta tesis.. CI EN. Nuestro agradecimiento y consideración al señor Huber Díaz Sánchez y a la señora Soledad Castillo Julca por facilitar los terrenos de muestreo, así como. DE. también la amabilidad brindada, y ayuda necesaria para cumplir con todos los. TE. CA. objetivos específicos planteados en la etapa de muestreo.. Agradezco enormemente a nuestros amigos Edwar, Servio, Claudia y Keyla, por. IO. la gran amistad y solidaridad mostrada en estos años de estudios, decirles que los. BL. queremos muchos y que apreciamos mucho su amistad, gracias por todas esas. BI. vivencias juntos, hemos aprendido mucho los unos de los otros, gracias porque sabemos que se puede contar con los “Cullens” siempre.. x Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(11) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ÍNDICE AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO .................. ii AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS .................... iii DEDICATORIA ................................................................................................................iv. AS. DEDICATORIA ................................................................................................................ v. DEL ASESOR ...................................................................................................................vi. IC. PRESENTACIÓN ............................................................................................................vii. G. MIEMBROS DEL JURADO ......................................................................................... viii. LO. APROBACIÓN .................................................................................................................ix AGRADECIMIENTOS .................................................................................................... x. O. ÍNDICE ..............................................................................................................................xi. BI. INDICE DE FIGURAS................................................................................................... xiii RESUMEN....................................................................................................................... xiv. AS. ABSTRACT ...................................................................................................................... xv INTRODUCCIÓN .................................................................................................... 1. I.. MATERIALES Y MÉTODOS ............................................................................ 5. CI. II.. Material de Estudio............................................................................................... 5. 2.. Métodos. ................................................................................................................. 5. CI EN. 1.. Aislamiento de Botrytis cinerea. ................................................................... 5. 2.1.. Recolección de la muestra. ....................................................................... 5. 2.1.2.. Aislamiento y obtención de cultivo puro de Botrytis cinerea. ................ 5. 2.1.3.. Identificación de Botrytis cinerea. ............................................................ 6 Aislamiento de Trichoderma sp. nativa a partir de muestras de suelo. .... 6. CA. 2.2.. DE. 2.1.1.. Recolección y transporte de las muestras de suelo. ................................ 6. 2.2.2.. Aislamiento y determinación de Trichoderma nativa............................. 7. 2.2.3.. Obtención de cultivo puro e identificación de Trichoderma sp. nativa. 7. IO. TE. 2.2.1.. BI. BL. 2.2.4. Determinación de la velocidad de crecimiento (K) de los cultivos de Trichoderma nativos. ................................................................................................. 8 2.2.5. Determinación de la capacidad antagónica de Trichoderma nativos con Botrytis cinerea. ......................................................................................................... 8 2.2.6. Compatibilidad de aislados de Trichoderma nativa con Tebuconazol a diferentes concentraciones. .................................................................................... 10 2.3. Evaluación del Efecto del Tebuconazol en la Capacidad Antagónica de Trichoderma sp. nativa sobre Botrytis cinerea en condiciones de laboratorio ... 11 2.3.1.. Técnica de cultivo dual. .......................................................................... 11. xi Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(12) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.2.. Análisis de datos ...................................................................................... 11. III.. RESULTADOS ................................................................................................... 12. IV.. DISCUSIÓN ........................................................................................................ 20. V.. CONCLUSIONES................................................................................................... 24 REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS .............................................................. 25. AS. VI.. ANEXOS .......................................................................................................................... 32. IC. ANEXO 1. Cultivos de Vitis vinífera ubicado en el caserío de Palmira, distrito de. G. Cascas, región La Libertad. ----------------------------------------------- 33. LO. ANEXO 2. Observación de las características microscópicas a 40X. -------------- 34. O. ANEXO 3. Crecimiento de los doce aislamientos de Trichoderma spp. nativa. -- 35. BI. ANEXO 4. Observación de las características microscópicas a 40X. -------------- 36. AS. ANEXO 5. Cultivos de Trichoderma spp. aisladas de muestras de suelo colectadas. CI. de cultivo de Vitis vinifera. ----------------------------------------------- 37. CI EN. ANEXO 6. Cultivos nativos de Trichoderma spp. donde se muestran los radios promedios (cm/día) y la velocidad de crecimiento (cm2/día). --------- 38 ANEXO 7. Compatibilidad de Trichoderma sp. nativa (AT10) con el tebuconazol a. DE. diferentes concentraciones. ------------------------------------------------- 39 ANEXO 8. Observación microscópica del efecto antagónico de Trichoderma sp.. BI. BL. IO. TE. CA. nativa (AT10) sobre Botrytis cinerea. ------------------------------------ 40. xii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(13) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. INDICE DE FIGURAS Figura 1: Velocidad de crecimiento (K) de los diferentes cultivos de Trichoderma spp. --------------------------------------------------------------------------- 13. AS. Figura 2: Efecto antagónico in vitro de los diferentes aislamientos de Trichoderma spp. mediante técnica de cultivo dual ----------------------------------- 14. IC. Figura 3: Porcentaje de Inhibición de Crecimiento Radial (PICR) de los diferentes. LO. G. cultivos de Trichoderma spp. sobre Botrytis cinerea. ---------------- 15 Figura 4: Porcentaje de colonización micelial de los diferentes cultivos de. O. Trichoderma spp. sobre Botrytis cinerea. ------------------------------- 16. BI. Figura 5: Porcentaje de crecimiento de Trichoderma sp. frente a tebuconazol…. 17. AS. Figura 6: Efecto antagónico in vitro de Trichoderma sp. expuesto a diferentes concentraciones de tebuconazol sobre Botrytis cinerea a diferentes. CI EN. CI. concentraciones mediante la técnica de cultivo dual. ------------------ 18 Figura 7: Porcentaje de Inhibición de Crecimiento Radial (PICR) de los diferentes cultivos de Trichoderma spp. expuesto a diferentes concentraciones de tebuconazol sobre Botrytis cinerea a diferentes concentraciones. BI. BL. IO. TE. CA. DE. mediante la técnica de cultivo dual. --------------------------------------- 19. xiii Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(14) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. RESUMEN Se determinó el efecto del tebuconazol en la capacidad antagónica de Trichoderma sp. nativa sobre Botrytis cinerea en condiciones de laboratorio. El aislamiento de Botrytis cinerea fue a partir de frutos con signos y síntomas de podredumbre gris y. AS. para el aislamiento de Trichoderma sp. fue de muestras de suelo procedentes de. IC. cultivos de Vitis vinifera del Caserío de Palmira, Distrito de Cascas. Para la. identificación de Botrytis cinerea y Trichoderma sp. se aplicó el método de. G. microcultivo, la identificación microscópica se realizó teniendo en cuenta las claves. LO. taxonómicas de Barnett. Para determinar la velocidad de crecimiento de los. O. aislados de Trichoderma sp. se obtuvo sus radios promedios de cada cultivo. La. BI. determinación de la capacidad antagónica se realizó a través de la técnica de cultivo dual y fue medida con la escala propuesta por Bell. Para la compatibilidad. AS. con el tebuconazol, se sembró la Trichoderma sp. Seleccionada en el centro de. CI. las placas conteniendo Agar Papa Dextrosa (APD) más Folicur R 250 EW en concentraciones de 75, 162.5 y 250 ppm. El efecto del tebuconazol en la capacidad. CI EN. antagónica de Trichoderma sp, sobre Botrytis cinerea se realizó través de la técnica de cultivo dual y medida con la escala propuesta por Bell, donde el cultivo elegido de Trichoderma sp. Procedente de medio APD con tebuconazol y el cultivo puro. DE. de B. cinerea fueron sembrados en una placa de Petri con APD. Se aislaron doce cultivos de Trichoderma sp. y se encontró que estos cultivos no presentan diferencia. CA. significativa en la velocidad de crecimiento. El cultivo seleccionado fue el AT 10 ya que presenta el mejor tipo de antagonismo (tipo 1). Se observó que a medida. TE. que se aumenta la concentración del tebuconazol, disminuye el crecimiento de. IO. Trichoderma sp., pero que al analizar si tiene efecto en la capacidad antagónica el cultivo AT 10 seguía con su mismo tipo de antagonismo (Tipo 1).Se concluye que. BL. el tebuconazol en concentraciones de 75, 162.5 y 250, no afecta significativamente. BI. en la capacidad antagónica de Trichoderma sp. nativa aislada de campos de cultivo de Vitis vinifera, sobre Botrytis cinerea en condiciones de laboratorio. Palabras clave: Trichoderma, Botrytis cinerea, control biológico, antagonismo, cultivo dual.. xiv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(15) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. ABSTRACT The effect of tebuconazole on the antagonistic capacity of native Trichoderma sp. on Botrytis cinerea under laboratory conditions was determined. The isolation of Botrytis cinerea was from fruits with signs and symptoms of gray rot and for the. AS. isolation of Trichoderma sp. it was from soil samples from Vitis vinifera crops of the Caserío de Palmira, District of Cascas. For the identification of Botrytis cinerea. IC. and Trichoderma sp. the microculture method was applied, the microscopic. G. identification was made taking Barnett's taxonomic keys into account. To determine. LO. the growth rate of the Trichoderma isolates, their average radius of each culture. O. was obtained. The determination of the antagonistic capacity was carried out. BI. through the dual culture technique and was measured with the scale proposed by Bell. For compatibility with tebuconazole, the selected Trichoderma sp. was R. AS. seeded in the center of the plates containing Papa Dextrose Agar (APD) plus Folicur 250 EW in concentrations of 75, 162.5 and 250 ppm. The effect of tebuconazole. CI. on the antagonistic capacity of Trichoderma sp., on Botrytis cinerea was carried out. CI EN. through the technique of dual culture and measured with the scale proposed by Bell, where the chosen culture of Trichoderma sp. From APD medium with tebuconazole and the pure culture of B. cinerea were seeded in a Petri dish with APD. Twelve. DE. cultures of Trichoderma sp. were isolated and it was found that these cultures do not present a significant difference in the growth rate. The selected crop was the. CA. AT10 since it presents the best type of antagonism (type 1). It was observed that as the concentration of tebuconazole increases, the growth of Trichoderma sp.. TE. decreases, but when analyzing if it has an effect on the antagonistic capacity, the AT10 crop continued with the same type of antagonism (Type 1). It is concluded. IO. that tebuconazole in concentrations of 75, 162.5 and 250 does not significantly. BL. affect the antagonistic capacity of native Trichoderma sp. isolated from Vitis. BI. vinifera culture fields, on Botrytis cinerea under laboratory conditions. Key words: Trichoderma, Botrytis cinerea, biological control, antagonism, dual culture.. xv Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(16) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. I. INTRODUCCIÓN Uno de los principales problemas que enfrenta la agricultura es la presencia de plagas, y enfermedades vegetales provocadas por diversos microorganismos; tales. AS. como bacterias, algas, virus, nematodos, hongos, etc.1, 2. La vid “Vitis vinífera” es. IC. una de las plantas que desde épocas muy remotas es cultivada por el hombre el cual. G. presenta problemas fitosanitarios dados por especies plagas, entre ellas los. LO. fitonemátodos; como también hongos patógenos tales como Oídium y Botrytis.. BI. O. Una de las principales enfermedades de la vid es la pudrición gris, que es causada. AS. por Botrytis cinerea, ocasiona una considerable pérdida en la calidad y rendimiento de la cosecha no sólo a nivel de campo, sino también en el proceso de transporte. CI. del fruto y almacenamiento3. El control químico es efectivo en la mayoría de los. CI EN. casos, consiguiendo elevadas reducciones de la podredumbre gris, dependiendo de las condiciones meteorológicas y de una correcta aplicación del producto4.. DE. Los efectos nocivos que provocan los fungicidas es la alteración del equilibrio dinámico de los ecosistemas con la consiguiente pérdida de biodiversidad, la. CA. aparición de patógenos resistentes, la acumulación de residuos tóxicos y la. TE. eliminación de microorganismos responsables de la degradación de la materia. IO. orgánica5.. BL. Existe en el mercado fungicidas, como el tebuconazol, con actividad sistémica y de. BI. mayor eficacia en el control de B. cinerea; el tebuconazol pertenece al grupo de los triazoles, que inhiben la desmetilación de los precursores de los esteroles, sustancias básicas para la función de la membrana celular de los hongos; es eficaz contra carbones, Fusarium spp., B. cinerea y otros patógenos6.. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(17) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. B. cinerea ha sido capaz de desarrollar resistencia a gran parte de las moléculas de síntesis aplicadas7-9, Kretschmer et al.10, mencionan que en Francia y Alemania apareció un fenotipo de B. cinerea, que mostró los más altos niveles y amplios. AS. espectros de resistencia contra los fungicidas fenhexamid, cabandzazim, boscalid,. IC. iprodione y tebuconazol.. G. El uso excesivo y las malas prácticas del manejo de fungicidas durante la. LO. producción agrícola han llevado a la acumulación y a la contaminación de todos los. O. ambientes por fungicidas debido a su dispersión, lixiviación y volatilización11, 12.. BI. El control biológico con microorganismos antagonistas comenzó a ser investigado. AS. de forma constante a partir de los años 8013; representa una valiosa herramienta no. CI. química para la protección de los cultivos contra hongos fitopatógenos14.. CI EN. Una de las especies con capacidad antagónica es Trichoderma spp., que es un hongo imperfecto, cosmopolita y típico habitante del suelo cuyas colonias presentan un. DE. crecimiento rápido, siendo al comiendo el micelio de color blanco y de aspecto algodonoso para posteriormente tornarse de color verde oscuro o verde limón y de. CA. aspecto pulverulento, lo que es característico de este hongo14.. TE. Existen diversas especies de Trichoderma sp., como T. viride, T. harzianum, T.. IO. aureoviride, T. virens, T. atroviride, T. hanatum, T. koningii; de las cuales la. BL. primera es la más estudiada entre numerosos agentes de control biológico, por sus. BI. características de antagonismo en condiciones naturales15. Trichoderma harzianum se ha utilizado en el control de hongos como B. cinerea postcosecha en uvas, controlando parcialmente la enfermedad in situ16.. 2 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(18) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Bogumil et al.17, compararon 52 aislamientos de Trichoderma seleccionados por su actividad antagonista contra B. cinerea; comprobando que todos los aislamientos restringieron el crecimiento de las colonias del moho gris. En investigaciones donde. AS. se utilizó Trichoderma sp., como antagonista, se observó zonas de inhibición de. IC. crecimiento de B. cinera, lo cual se atribuye al efecto de antibiosis18, lo que. LO. G. menciona Seddik et al.19 en su investigación.. La compatibilidad de Trichoderma spp. con fungicidas tipo tebuconazol, es objeto. BI. O. de estudio debido a la interrogante que surge sobre la posible inhibición por estos. en el tratamiento de control biológico20.. AS. químicos, hecho que limitaría la combinación de los métodos químicos y biológicos. CI. Mishra et al.20, aislaron cepas nativas de Trichoderma sp, el cual se pusieron en. CI EN. tratamiento con dos pesticidas organofosforados, obteniendo resultados positivos en el antagonismo de patógenos frente a la presencia de estos pesticidas. Sarkar et. DE. al.21; evaluaron el efecto de fungicidas sistémicos, obteniendo como resultado que. CA. los fungicidas sistémicos derivados de los benzimidazoles resultaron más tóxicos. Franco y Orrego22, evaluaron la compatibilidad de aislados nativos de Trichoderma. TE. spp. con fungicidas obteniendo como resultado que; el Carbendazim+Thiram. IO. produjo, mayor inhibición; en cuanto al Tebuconazole, produjo entre 4% a 26% de. BL. inhibición de crecimiento micelial.. BI. Vasundara et al.23; evaluaron cepas de Trichoderma viridae para verificar su compatibilidad con dos insecticidad, tres fungicidas y sus combinaciones de ambos, obteniendo como resultado que los tratamientos con Carbendazim + clorpirifos,. 3 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(19) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. tebuconazol + imidacloprid y tebuconazol + clorpirifos mostraron una alta incompatibilidad con una inhibición del crecimiento del 100 por ciento.. AS. Samuels24, menciona que Trichoderma sp. solo o en combinación con fungicidas, se han utilizado para el tratamiento de enfermedades radiculares como en semillas;. IC. lo que comprueba Benites et al.25, que Trichoderma sp. en combinación con niveles. LO. G. reducidos de fungicida promueve el grado de supresión de la enfermedad, en. O. comparación a la dosis completa del fungicida.. BI. Rodríguez y col.26, evaluó la acción antagónica de Trichoderma harzianum Rifai. AS. ante siete fungicidas; en donde el patógeno Bipolaris oryzae mantuvo niveles bajos de inhibición frente al antagonista y al control, solo en el caso de tebuconazol +. CI. procloraz, se observó inhibición significativa de Trichoderma harzianum sobre. CI EN. Bipolaris oryzae.. La mayor parte de los problemas fitosanitarios en V. vinífera son causados por B.. DE. cinérea, los agricultores optan por el uso de productos fungicidas de manera. CA. indiscriminada; por ello, se propone el uso del control biológico, siendo una de las opciones la utilización de hongos controladores nativos de B. cinerea, como. TE. Trichoderma, por lo que se hace necesario realizar este estudio acerca del efecto. IO. que puede tener el tebuconazol sobre la capacidad antagónica de Trichoderma, a. BL. fin de poder establecer si ambos se pueden aplicar simultáneamente dentro de un. BI. programa de control de plagas, por ello la presente investigación, tiene como objetivo determinar el efecto del fungicida Tebuconazol en la capacidad antagónica de Trichoderma sp, nativa sobre B. cinerea en condiciones de laboratorio.. 4 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(20) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. II. MATERIALES Y MÉTODOS 1.. Material de Estudio. . Suelo procedente de campos de cultivo de Vitis vinifera ubicados en. Frutos con signos y/o síntomas contaminados por Botrytis cinerea. IC. . AS. el Caserío de Palmira, distrito de Cascas, región La Libertad.. LO. G. procedente de cultivos de V. vinífera ubicados en el Caserío de Palmira, distrito de Cascas, región La Libertad.. 2.. O. Folicur R 250 EW.. BI. . Métodos.. AS. 2.1. Aislamiento de Botrytis cinerea.. CI. 2.1.1. Recolección de la muestra.. CI EN. Se recolectaron frutos que presentaron síntomas y/o signos de la enfermedad causada por B. cinerea directamente de cultivos. DE. de V. vinífera, del Caserío de Palmira, distrito de Cascas, región La Libertad (ANEXO 1).. CA. 2.1.2. Aislamiento y obtención de cultivo puro de Botrytis cinerea.. BI. BL. IO. TE. Los frutos colectados se depositaron en bolsas de primer uso, las cuales fueron trasladadas al Laboratorio de Fitopatología del Departamento de Microbiología y Parasitología de la Universidad Nacional de Trujillo; se colocaron los frutos dentro de placas de Petri, con papel de filtro humedecido en agua destilada estéril (ADE), conformando una cámara húmeda para estimular la esporulación del patógeno. Una vez producida la esporulación, se colectaron las conidias mediante. 5 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(21) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. asa de siembra, las cuales fueron sembradas en placas de Petri conteniendo Agar Papa Dextrosa (APD) y sub cultivadas hasta obtener cultivos puros y mantenidos a temperatura de. AS. refrigeración hasta su evaluación27.. IC. 2.1.3. Identificación de Botrytis cinerea.. G. Para la identificación de Botrytis cinerea, se aplicó el método. LO. de microcultivo en cámara húmeda28. Posteriormente se. O. realizaron tinciones con azul de lactofenol y se observó al. BI. microscopio. La identificación microscópica se realizó. CI. (ANEXO 2).. AS. teniendo en cuenta las claves taxonómicas de Barnett29. suelo.. CI EN. 2.2. Aislamiento de Trichoderma sp. nativa a partir de muestras de. DE. 2.2.1. Recolección y transporte de las muestras de suelo. Se seleccionaron 10 puntos de muestreo de cultivos de Vitis. CA. vinifera, ubicado en el Caserío de Palmira, distrito de Cascas,. BI. BL. IO. TE. La Libertad; de cada punto de muestreo se recolectaron 100 g de suelo de rizósfera a una profundidad de 10 a 30 cm; las muestras fueron colectadas en bolsas plásticas de polietileno las fueron trasladadas al Laboratorio de Fitopatología del Departamento de Microbiología y Parasitología de la Facultad de Ciencias Biológicas de la Universidad Nacional de Trujillo.. 6 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(22) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.2.2. Aislamiento y determinación de Trichoderma nativa. De cada muestra colectada se pesó 10 g los cuales se colocados en frascos conteniendo 90 mL de ADE; se sembró 0.1 mL de. AS. cada una de las suspensiones de suelo en placas de Petri. IC. conteniendo APD incubándolo durante cinco días a 25 ± 1ºC30.. G. Transcurrido el tiempo de incubación, las posibles colonias. LO. fúngicas características Trichoderma que desarrollaron en. O. APD, fueron observados macroscópicamente.. AS. sp. nativa.. BI. 2.2.3. Obtención de cultivo puro e identificación de Trichoderma. CI. Las colonias identificadas como Trichoderma sp, fueron. CI EN. transferidos mediante puntura a tubos conteniendo APD inclinado, los cuales fueron incubados a 25° C durante siete días, para luego ser sub- cultivado hasta obtener cultivos. DE. puros31 (ANEXO 3).. CA. Para la identificación de Trichoderma spp. nativa, se aplicó el. BI. BL. IO. TE. método de microcultivo en cámara húmeda28. Posteriormente se realizaron tinciones con azul de lactofenol y se observó al microscopio. La identificación microscópica se realizó teniendo en cuenta las claves taxonómicas de Barnett29 (ANEXO 4).. 7 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(23) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. La selección de Trichoderma sp. nativa se realizó de acuerdo a los parámetros biológicos tales como la velocidad de crecimiento, la capacidad antagónica y la compatibilidad a. AS. diferentes concentraciones de tebuconazol.. IC. 2.2.4. Determinación de la velocidad de crecimiento (K) de los. LO. G. cultivos de Trichoderma nativos.. A partir de los cultivos puros de cada aislamiento, se sembró. BI. O. por puntura en el centro de una placa de Petri conteniendo APD y se incubó a 25 ± 1ºC. Los diámetros de las colonias. AS. fueron medidos a las 24, 48 y 72 horas (ANEXO 5), se midió. CI. el crecimiento micelial en cuatro diámetros de crecimiento de. CI EN. cada colonia obteniendo radios promedios de cada cultivo, se calculó la velocidad de crecimiento a partir de la de la fórmula. DE. de crecimiento micelial. 2.2.5. Determinación de la capacidad antagónica de Trichoderma. CA. nativos con Botrytis cinerea.. BI. BL. IO. TE. Se realizó la técnica de cultivo dual propuesta por El-Debaiky SA32, donde los cultivos puros de Trichoderma spp. nativa y el cultivos puro de B. cinerea fueron sembrados en placas de Petri con APD, se sembró B. cinerea a 2 cm del borde de la placa dejando incubar a temperatura ambiente hasta que se observe crecimiento micelial; luego de observar crecimiento del fitopatógeno, se sembró al lado opuesto y equidistante, el antagonista Trichoderma sp nativa a 2 cm del borde de la. 8 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(24) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. placa; en las placas control se sembró solo el fitopatógeno; cada tratamiento se realizó por triplicado a una temperatura de 25 ± 1ºC.. AS. Para evaluar la capacidad antagónica de Trichoderma spp. IC. nativa sobre B. cinerea, se realizó a través del Porcentaje de. G. Inhibición del Crecimiento Radial (PICR), mediante la. LO. fórmula propuesta por Rodríguez y col26, donde la actividad. O. antagónica es estimada a través de la escala de Sookchaoy33: 4. BI. - muy buena actividad antagónica (R > 75), 3 - buena actividad. AS. antagónica (R = 61 - 75), 2 - actividad antagónica moderada. CI. (R = 51 - 60), 1 - baja actividad antagónica (R < 51); y en 34. , a los 8 días de. CI EN. relación a la escala propuesta por Bell incubación; donde:. Antagonismo tipo 1: Trichoderma spp. crece. DE. completamente sobre la colonia de del patógeno y cubre la. BI. BL. IO. TE. CA. superficie del medio de cultivo. Antagonismo tipo 2: Trichoderma spp. crece al menos sobre las dos terceras partes de la superficie del medio del cultivo. Antagonismo tipo 3: Trichoderma spp. y el patógeno cubren aproximadamente la mitad de la superficie del medio de cultivo.. 9 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(25) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. Antagonismo tipo 4: El patógeno crece al menos en las dos terceras partes del medio de cultivo limitando el crecimiento de Trichoderma spp.. AS. Antagonismo tipo 5: El patógeno crece sobre la. IC. colonia de Trichoderma spp. ocupando toda la superficie. G. del medio de cultivo.. LO. 2.2.6. Compatibilidad de aislados de Trichoderma nativa con. O. Tebuconazol a diferentes concentraciones.. BI. Se realizó la metodología propuesta por Castellanos y col.35;. AS. se preparó APD para ser mezclado con el fungicida “Folicur R. CI. 250 EW”, el cual fue vertido en cuatro matraces rotulados,. CI EN. conteniendo 90 mL de medio de cultivo. Estando aun fundido el medio, se procedió a realizar la. DE. respectiva mezcla con el químico, de tal manera que a tres de los cuatro matraces se le adicionó el químico hasta obtener una. BI. BL. IO. TE. CA. concentración de 75, 162.5 y 250 ppm. Se sembró Trichoderma sp. nativa seleccionado con antagonismo tipo 1, en el centro de las placas conteniendo APD mas Folicur. R. 250 EW en concentraciones de 75, 162.5. y 250 ppm; se incubó a 25 ± 1ºC y la evaluación se realizó a los 10 días (ANEXO 7); utilizando la fórmula de Porcentaje De Inhibición Radial del crecimiento en placas de los tratamientos respecto del control35.. 10 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(26) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 2.3.. Evaluación del Efecto del Tebuconazol en la Capacidad Antagónica de Trichoderma sp. nativa sobre Botrytis cinerea en condiciones de laboratorio Técnica de cultivo dual.. AS. 2.3.1.. el cultivo de. G. propuesta por El-Debaiky SA32, donde. IC. Para la técnica de cultivo dual se siguió la metodología. LO. Trichoderma sp. nativa procedente de medio APD con. O. tebuconazol y el cultivos puro de B. cinerea fueron sembrados. BI. en una placa de Petri con APD, se sembró B. cinerea a 2 cm. AS. del borde de la placa dejando incubar a temperatura ambiente. CI. hasta que se observe crecimiento micelial; luego de observar. CI EN. crecimiento del fitopatógeno, se sembró al lado opuesto y equidistante, el antagonista Trichoderma sp nativa procedente de medio APD con tebuconazol, a 2 cm del borde de la placa;. DE. en las placas control se sembró solo el fitopatógeno y el. CA. antagonista; cada tratamiento fue realizado por triplicado a una temperatura de 25 ± 1ºC.. BI. BL. IO. TE. 2.3.2. Análisis de datos Para determinar la capacidad antagónica de Trichoderma sp nativa sobre B. cinerea, se evaluó en función a la escala propuesta por Bell 34, a los 8 días de incubación, y a través de la fórmula de Porcentaje de Inhibición del Crecimiento Radial (PICR), propuesta por Rodríguez y col26.. 11 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(27) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. III. RESULTADOS Al evaluar la velocidad de crecimiento (k) en cm/día, de los aislados de. AS. Trichoderma spp. en donde se los diferentes aislamientos no presentan diferencia. IC. significativa en el crecimiento micelial (Figura 1).. G. El efecto antagónico in vitro de los aislamientos de Trichoderma spp, sobre el. LO. crecimiento de B. cinerea mediante la técnica de cultivo dual en placa durante ocho. O. días de incubación; se encontró que el aislamiento AT10 fue capaz de reducir el. BI. crecimiento del fitopatógeno presentando grado antagónico 1, según la escala. AS. propuesta por Bell y col (Figura 2).. CI. El Porcentaje De Porcentaje de Inhibición del Crecimiento Radial (PICR), se. CI EN. observa que el aislamiento de Trichoderma (AT10), presenta una PICR de 66 % obteniendo un puntaje de 3 en la escala de Sookchaoy (Figura 3).. DE. El Porcentaje de colonización de Trichoderma sobre B. cinerea, donde se aprecia que el aislamiento de Trichoderma (AT10), presenta un porcentaje de colonización. CA. del 94.52% sobre la superficie de B. cinerea (Figura 4).. TE. Al evaluar la compatibilidad del tebuconazol con Trichoderma (AT10) a. IO. concentraciones de 75, 162.5 y 250 ppm, se encontró que el crecimiento de. BL. Trichoderma disminuye significativamente conforme se aumenta la concentración.. BI. Se observa que el tebuconazol en la capacidad antagónica de Trichoderma (AT10) sobre B. cinerea, no presenta efecto significativo, ya que presenta antagonismo tipo 1 según escala de bells. (Figura 6); y un PICR a 75 ppm de 69.8 %, 162.5 ppm de 71.1% y a 250 ppm de 68.3% que se observa en la figura 7.. 12 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(28) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 0.8. 0.83 0.75 0.71 0.67. 0.7. 0.64. 0.82 0.76. 0.73. 0.71. 0.67. 0.58. 0.55. AS. 0.6 0.5. IC. 0.4. LO. G. 0.3 0.2. O. 0.1 0 AT1. AT2. AT3. AT4. AT5. AT6. BI. velocidad de crecimiento (K) en cm /día. 0.9. AT7. AT8. AT9. AT10 AT11 AT12. CI. AS. Cultivos de Trichoderma spp nativos Fig. 1. Velocidad de crecimiento (k) de los diferentes cultivos de. CI EN. Trichoderma spp. aislados de muestras de suelo de cultivos de. BI. BL. IO. TE. CA. DE. Vitis vinífera.. 13 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(29) b. a. a. b. b. b. O. a a. b. a. b. b. a. b. a. b. CI. a. EN. CI AS. b. BI. b. a. LO. a. a. b. G. a. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. a. b. DE. Fig.2. Efecto antagónico in vitro de los diferentes aislamientos de Trichoderma spp. (a) sobre el crecimiento de Botrytis cinerea (b) mediante la técnica de cultivo dual en placa presentando un grado de antagonismo según escala de Bell y col. de:  AT7: tipo 2.  AT2: tipo 3.  AT8: tipo 3.  AT3: tipo 3.  AT9: tipo 2.  AT4: tipo 3.  AT10: tipo 1.  AT5: tipo 3.  AT11: tipo 2.  AT6: tipo 3.  AT12: tipo 3. BI. BL I. O. TE CA.  AT1: tipo 2. 14 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(30) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 66.00%. IC. 66.00% 63.80%. 64.00%. 61.70%. 60.40%. 58.80%. O. 60.00%. 60.00% 59.70%. 59.70%. 59.40%. 61.70%. LO. 61.10%. G. 62.80%. 62.00%. AS. Porcentaje de Inhibición de Crecimiento Radial (PICR). 68.00%. 56.00% 54.00% CD2. CD3. CD4. CD5. CD6. CD7. CI. CD1. AS. BI. 58.00%. CD8. CD9. CD10. CD11. CD12. CI EN. Cultivos duales de los diferentes cultivos de Trichoderma spp. sobre Botrytis cinerea. Fig. 3. Porcentaje de Inhibición de Crecimiento Radial (PICR) de los diferentes. DE. cultivos de Trichoderma spp. sobre Botrytis cinerea a través de la técnica. BI. BL. IO. TE. CA. de cultivo dual durante 8 días de incubación.. 15 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(31) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 100.00%. 94.52%. AS. Porcentaje de Colonización micelial. 90.00%. IC. 80.00%. G. 70.00%. LO. 60.00% 50.00%. 30.00% 19.18%. 16.44%. 17.81% 12.33% 12.33% 12.33% 10.96%. 13.70%. 17.81%. 17.81% 13.70%. AS. 20.00%. BI. O. 40.00%. 10.00%. CD2. CD3. CD4. CD5. CD6. CD7. CD8. CD9. CD10. CD11. CD12. CI EN. CD1. CI. 0.00%. Cultivos duales de los diferentes cultivos de Trichoderma spp. sobre Botrytis cinerea. Fig. 4. Porcentaje de colonización milecial de los diferentes cultivos de. DE. Trichoderma spp. sobre Botrytis cinerea a través de la técnica de cultivo. BI. BL. IO. TE. CA. dual durante 8 días de incubación.. 16 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(32) AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 90.00%. Porcentaje de Crecimiento de Trichoderma sp.. G. 80.00%. IC. 84.06% 79.91%. LO. 70.00% 57.42%. 60.00%. O. 50.00%. BI. 40.00%. AS. 30.00%. CI. 20.00%. 0.00% 0.00% o ppm. CI EN. 10.00%. 75 ppm. 162.5 ppm. 250 ppm. DE. Concentración en ppm de Tebuconazol. Fig. 5. Porcentaje de crecimiento de Trichoderma sp. frente a tebuconazol a las. BI. BL. IO. TE. CA. concentraciones de: 0 ppm, 75 ppm, 162.5 ppm y 250 ppm.. 17 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(33) EN. CI AS. BI. O. LO. G. IC AS. Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. CI. Fig. 6. Efecto antagónico in vitro de Trichoderma sp. expuesto a diferentes concentraciones de tebuconazol. DE. sobre Botrytis cinerea a diferentes concentraciones mediante la técnica de cultivo dual:. TE CA. A: Trichoderma sp. nativa procedente de medio de cultivo a 75 ppm, presenta Antagonismo tipo 1. B: Trichoderma sp. nativa procedente de medio de cultivo a 162.5 ppm, presenta Antagonismo tipo 1.. BI. BL I. O. C: Trichoderma sp. nativa procedente de medio de cultivo a 250 ppm, presenta Antagonismo tipo 1.. 18 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(34) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 71.10%. AS. 71.00% 70.50% 69.80%. IC. 70.00%. G. 69.50%. LO. 69.00% 68.50%. 68.30%. O. 68.00%. BI. 67.50% 67.00% 66.50%. 162.5 ppm. 250 ppm. CI. 75 ppm. AS. Porcentaje de Inhibición de Crecimiento Radial (PICR). 71.50%. CI EN. Cultivos duales del aislamiento AT10 expuesto a diferentes concentraciones de tebuconazol sobre botrytis cinerea. Fig. 7. Porcentaje de Inhibición de Crecimiento Radial (PICR) del aislamiento AT10 expuesto a concentraciones de 75 ppm, 162.5 ppm y 250 ppm,. BI. BL. IO. TE. CA. DE. sobre Botrytis cinerea, mediante la técnica de cultivo dual.. 19 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(35) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. IV. DISCUSIÓN Las colonias de los cultivos de Trichoderma spp. nativa mostraron. AS. coloración verde- amarillenta, el cultivo AT10 fue blanca (Anexo 2), lo anterior concuerda con lo descrito por Infantes y col., de que la mayoría de las colonias de. IC. Trichoderma fueron blancas, algunas se tornaron verde ocsuro, verde amarillento o. LO. G. amarillo, el crecimiento del micelio de algunas cepas es ralo y muy fino, por lo que. O. su apariencia fue de colonia plana35.. BI. La velocidad de crecimiento es una características de las especies de. AS. Trichoderma, se afirma que al evaluar velocidad de crecimiento presentada por las especies de Trichoderma sirve de guía para su utilización como antagonista, en tal. CI. sentido la elección de las especies de Trichoderma se realizó de acuerdo al. CI EN. crecimiento presentado en relación al tiempo (figura 1), encontrándose que las especies nativas evaluadas, no presentan diferencia significativa, logrando cubrir la. DE. totalidad de la placa de Petri al cuarto día de incubación, corroborando con Denis y Wesbter, quienes manifiestan que un carácter ventajoso de Trichoderma spp., es. CA. colonizar el área de crecimiento rápidamente36.. TE. Con respecto a la inhibición del crecimiento in vitro de B. cinerea. IO. procedente de frutos de V. vinifera, por aislamientos nativos de Trichoderma, en la. BL. prueba de antagonismo (Figura 2), se obtuvo que el aislamiento AT10 presenta un. BI. antagonismo tipo 1 de acuerdo a la escala propuesta por Bell y col.33 , esto se debería a diversos mecanismos, destacándose la producción de compuestos inhibitorios al medio, antibiosis por producción de metabolitos entres los cuales se encuentran,. 20 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(36) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. pirones, isocianatos pépticos y tirchocinas; además, la producción de enzimas tales como peptinasas, cutinasas, glucanasas y quitinasas37.. AS. Las especies de Trichoderma durante el proceso de micoparasitismo crecen quimiotrópicamente hacia el patógeno, se adhieren a las hifas del mismo, se. IC. enrollan en ellas frecuentemente y las penetran en ocasiones; la degradación de las. LO. G. paredes celulares del patógeno se observa en los estados tardíos del proceso. O. parasítico, que conlleva al debilitamiento casi total del fitopatógeno38. (ANEXO 8).. BI. En el porcentaje de inhibición de crecimiento radial de los diferentes. AS. cultivos de Trichoderma spp. sobre B. cinerea, se observa que todos los aislamientos presentan una puntuación de 3 según la escala de Sookchaoy33, el cual. CI. el rango de porcentaje se encuentra entre 61 – 75 %, teniendo una buena actividad. CI EN. antagónica contra B. cinerea, como se muestra en la figura 3. Resultaron similares obtuvieron Astorga-Quirós39, al evaluar la capacidad. DE. antagónica de cepas de Trichoderma spp. sobre Penicillium spp. estos mostraron. CA. un PICR de 49 %. Asimismo, Calvo-Araya40, al evaluar in vitro diversos aislamientos de antagonistas sobre Borytis cinerea, encontraron que las cepas de. TE. Trichoderma spp. presentaron los valores más altos de crecimiento radial con. IO. respecto al patógeno, así como un PICR de B. cinerea superior al 90%, mostrando. BI. BL. que pueden ser potencial de control biológico para este patógeno. La competencia por nutrientes y sustrato es un importante mecanismo de. combate biológico contra los patógenos que dependen de alimentación externa, como es el caso de B. cinerea 41, 42. De acuerdo a Campbell, Botrytis es altamente. 21 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(37) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. vulnerable a la competencia de nutrientes y sustrato, lo cual le confiere cierta desventaja frente a Trichoderma spp43.. AS. Al evaluar el porcentaje de inhibición de crecimiento radial (PICR), de AT10, se encontró que frente a las concentraciones de tebuconazol al 75, 162.5 y. IC. 250 ppm; el PICR aumenta conforme aumenta la concentración del fungicida. LO. G. (figura 5); esto concuerda con lo descrito por Rodriguez y col., el cual evaluó la compatibilidad de T. harzianum con el fungicida tebuconazol + triadimenol,. O. presentando un PICR del 95%, el cual indica que el químico y el hongo, no son. AS. BI. compatibles e inhibe su crecimiento26.. Estos resultados obtenidos difieren a los reportados por Franco y Orrego, el. CI. cual el tebuconazol produjo entre 4% a 26% de inhibición de crecimiento micelial,. CI EN. teniendo menor efecto en los aislados de Trichoderma22. Mientras que May y Kimati, reportaron que el tebuconazol produjo interferencia in vitro con. DE. Trichoderma, resultado no compatible entre el antagonista y el químico44.. CA. En la figura 6, se muestra el aislamiento AT10, evaluado en la prueba de antagonismo, el cual, al ser sometido a concentración de 75 ppm, 162.5 ppm y 250. TE. ppm; presentaron una capacidad antagónica tipo 1 según escala de Bell y col. 34,. IO. AT10 cubrió completamente al patógeno B. cinerea. Arzate y col., describen luego. BL. de evaluar aislamientos nativos de Trichoderma que los cultivos con clases de. BI. antagonismo tipo 1 y 2 presentan perspectivas para ser utilizados en campo46. Los resultados obtenidos, están dados porque Trichoderma durante su. crecimiento micelial y germinación presenta características antibióticas y enzimáticas que determinan su capacidad biótica y antagónica, además son. 22 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(38) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. fácilmente cultivables y la gran mayoría tienen rápido crecimiento debido a que son competidoras por fuentes nutritivas44. esto corrobora lo informado por Zunino, quien indica que existe diferencias significativas en la tasa de crecimiento. AS. individual entre las cepas de Trichoderma spp. aisladas y comerciales47.. IC. El cultivo de Trichoderma sp. (AT10), después de estas expuesto a las. LO. G. concentraciones de 75, 162,5 y 250 ppm de tebuconazol, presentaron un PICR de B. cinerea de 69.8 %, 71.1 % y 68.3 % respectivamente, obteniendo una puntuación. O. de 3, que representa una actividad de antagonismo buena, según Sookchaoy33; esto. BI. concuerda con estudios realizados por El-Naggar48, que evaluaron a T. reesei,. AS. obteniendo un PICR de 30% sobre B. cinerea y un 40.2 % contra B. fabae; mientras. CI. que Fiume and Fiume49, observaron la actividad antagónica de T. harzianum el cual. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. presento un PICR contra B. cinerea del 75.76%.. 23 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(39) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. V.. El tebuconazol no presenta efecto significativo en la capacidad antagónica. AS. -. CONCLUSIONES. IC. de Trichoderma sp. nativa a medida que aumenta la concentración 75. G. ppm, 162,5 ppm y 250 ppm. manteniendo la capacidad tipo 1 según escala. BI. BL. IO. TE. CA. DE. CI EN. CI. AS. BI. O. LO. de Bell.. 24 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(40) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. VI.. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS. 1. Agrios G. Fitopatología. 2ª ed. México: Ed. Utecha; 1995. 2. French E. y Hebert T. Métodos de investigación fitopatológica. IICA. San. AS. José, Costa Rica. 1982.. IC. 3. García C, Mudarra I. Buenas Prácticas en Producción Ecológica Cultivo de. G. la Vid. España: ministerio de medio ambiente y medio ruraly marino; 2014.. LO. 4. Leroux P. Chemical control of Botrytis and its resistance to chemical. O. fungicides. En: Elad Y, Williamson B, Tudzynski P and Delen N, eds.. BI. Botrytis: biology, pathology and control. Dordrecht, the Netherlands:. AS. Kuwer academic publishers. 2004, 195-222.. CI. 5. Zapata R, Quiroga M, Murillo B, Agüero D, Lisi B y Mena P. Trichoderma. CI EN. spp. biocontrolador y promotor de crecimiento: una alternativa al uso de agroquímicos en cultivos intensivos. Avances en energías renovables y medio ambiente. 2012; 16.. DE. 6. Mathre DE, Johnston RH and Grey WE. Small graim cereal seed treatment.. CA. The Plant Health Instructor. 2001. DOI: 10.1094/PHI-I-2001-1008-01. 7. Petit AN, Vaillant-Gaveau N, Walker AS, Leroux P, Baillieul F, Panon ML,. TE. et. al. Determinants of fenhexamid effectiveness against grey mould on. BL. IO. grapevine: Respective role of spray timing, fungicide resistance and plant defences. Crop Prot. 2010; 29: 1162-1167.. BI. 8. Latorre BA and Torres R. Prevalence of isolates of Botrytis cinerea resistant to multiple fungicides in Chilean vineyards. Crop Prot. 2012; 40: 49-52.. 25 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

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(42) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 16. Latorre BA, Agosin E, San Martín R and Vasquez GS. Effectiveness of conidia of Trichoderma harzianum produced by liquid fermentation against Botrytis bunch rot table grape in Chile. Crop Prot. 1997; 16: 209-14.. AS. 17. Bogumił A, Sas Paszt L, Lisek A, Trzciński P and Harbuzov A.. G. Botrytis cinerea. Folia Hort. 2013; 25(2):123-132.. IC. Identification of new Trichoderma strains with antagonistic activity against. LO. 18. Schirmbock M, Lorito M, Wang Y, Hayes C, Arisan-Atac I, Scala F, et al.. O. Parallel formation and synergism of hydrolytic enzymes and peptaibol. BI. antibiotics, molecular mechanisms involved in the antagonistic action of. AS. Trichoderma harzianum against phytopathogenic fungi. Appl Environ. CI. Microbiol. 1994; 60(12):4364-4370.. CI EN. 19. Seddik B, Mahiout D, Elkhalil I and Youcef M. Antagonism of three Trichoderma species against Botrytis fabae and B. cinerea, the causal agents of chocolate spot of Faba bean (Vicia faba L.) in Algeria. World Appl Sci. DE. J. 1012; 17(3):278-283.. CA. 20. Mishra N, Khan S and Krishna S. Native isolate of Trichoderma: a biocontrol agent with unique stress tolerance properties. World J Microbiol. TE. Biotechnol. 2016; 32:130.. BI. BL. IO. 21. Sarkar S, Narayanan P, Premkumar R, Balamurugan A and Premkumar R. The in vitro effect of certain fungicides, insecticides and biopesticides on mycelial in the control fungus Trichoderma harzianum.Turk J Biol. 2010; 34: 399- 403.. 27 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(43) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 22. Franco Ortellado BM y Orrego Fuente AL. Compatibilidad in vitro de aislados nativos de nativos de Trichoderma spp. con fungicidas para el tratamiento de semillas. Investig Agrar. 2013; 15(1):15-22.. AS. 23. Vasundara P, Rangaswamy V and Johnson M. Compatability Studies with. IC. fungicides, insecticides and their combinations on Trichoderma viridae in. G. invitro conditions. IJSER. 2015; 6 (2): 310-316.. LO. 24. Samuels GJ. Trichoderma una revisión de la biología y sistemática del. O. género. Mycol Res.1996; 100: 923-935.. BI. 25. Benitez T, Rincón AM and Antonia C. Biocontrol mechanisms of. AS. Trichoderma strains. Int Microbiol. 2004; 7:249-260.. CI. 26. Rodríguez Saldaña MF, Milanés Virelles P, Peréz Torres E y Sierra Reyes. CI EN. Y. Compatibilidad de Trichoderma harzianunm Rifai con fungicidas del arroz y su efecto sobre tres fitopatógenos fúngicos. Agrisost. 2016; 22 (2): 54-67.. DE. 27. Krauss U and Ince J. Isolation preliminary evaluation of mycoparasites as. CA. biocontrol agents of crown rot of banana. Biol Control. 1998; 13: 111-119. 28. Riddell RW. Permanent stained mycological preparations obtained by slide. TE. culture Mycologia. 1950; 42 (2): 265-270.. BL. IO. 29. Barnett L, Hunter B. Illustrated Genera of Imperfect Fungi. 4° Ed. The American Phytopathological Society Minnesota. USA. 1998.. BI. 30. Vargas Gil S, Pastor S and March GJ. Quantitative and isolation of biocontrol agents Trichoderma spp., Gliocladium spp. and actinomycetes from soil with culture media. Microbiol Res. 2009; 164 (2): 196 – 205.. 28 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(44) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 31. Ja´afaru MI. Screening of fungi isolated from environmental samples for xylanase and cellulose production. ISRN Microbiol. 2013; 2013: 1-7. 32. El-Debaiky SA. Antagonistic studies and hyphal interactions of the new. AS. antagonist Aspergillus piperis against some phytopathogenic fungi in vitro. IC. in comparison with Trichoderma harzianum. Microb Pathog. 2017. doi:. G. 10.1016/j.micpath.2017.10.041.. LO. 33. Sookchaoy K, Panthachode S, Tripchu J. Screening of Trichoderma spp. for. O. Phytophthora root and foot rot on Citrus sinensis biocontrol. Intl Conf. on. BI. the Role of Universities in Hands-On Education. 2009; 23-29: 356-363.. AS. 34. Bell DK, Well HD and Markham CR. In vitro antagonism of Trichoderma. CI. species against six plant pathogens. Phytopathology. 1982; 72: 379-382.. CI EN. 35. Castellanos Gonzáles L, Lorenzo Nicao ME y Lina Muiño B. Efecto in vitro de plaguicidad comerciales sobre Trichoderma harzianum cepa A-34. Rev FCA UNCUYO. 2015; 47(2): 185 – 196.. DE. 36. Infantes D, Martínez B. Gonzáles N y Reyes Y. Mecanismo de acción de. CA. Trichoderma frente a hongos fitopatógenos. Rev Protecc Veg. 2009; 24: 1421.. TE. 37. Dennis L, Webster J. Antagonistic properties of species groups of. BL. IO. Trichoderma. III Hyphal interaction. Trans Br Mycol Soc. 1971; 57: 363369.. BI. 38. Hoyos-Carbajal L, Chaparro P, Abramsky M, Chet I y Orduz S. Evaluación de aislamientos de Trichoderma spp. contra Rhizoctonia solani y Sclerotium rolfsii bajo condiciones in vitro y de invernadero. Agr Colom. 2008; 26 (3): 451 – 458.. 29 Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..

(45) Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo. 39. Astorga-Quirós K, Meneses-Montero K, Zúñiga-Veja C, Brenes-Madriz J y Rivera-Méndez W. Evaluación del antagonismo de Trichoderma sp. y Bacillus subtilis contra tres patógenos del ajo. Tecnología en Marcha. 2013;. AS. 27: 82 – 91.. IC. 40. Calvo-Araya J, Rivera-Soto G, Orozco-Cayasso S, Orozco-Rodriguez R.. G. Aislamiento y evaluación in vitro de antagonistas de Botrytis cinerea en. LO. mora. Agrom Mesoam. 2012; 23: 225 – 231.. O. 41. Harman GE and Kubicek CP. Trichoderma and Gliocladium. Vol 2.. AS. Francis. London. 393 pp. 2004.. BI. Enzymes, biological control and commercial applications. Taylos &. CI. 42. Elad Y, Chet I. Possible role of competition for nutrients in biocontrol of. CI EN. Pythium damping-off by bacteria. Phytopathology. 1987; 77:190-195. 43. Roberts R. Postharvest biological control of gray mold of apple by. DE. Cryptococcus laurentii. Phytopathology. 1990; 80:526-530.. CA. 44. Campbell R. Biological control of microbial plant pathogens. Cambridge. TE. University Press. New York. USA. 218. 1989.. IO. 45. May LL, Kimati H. Controle de Phytophthora parasítica com fungicidas e. BI. BL. efeito desses produtos no crescimento micelial de Trichoderma. Phytopathologica. 2000; 26(1): 52-57.. 46. Arzate J, Casimiro A, Domingo V y Santos O. Antagonismo de Trichoderma spp. sobre Mycospharella fijensis Morelet, Agentes causal de la Sigateca Negra del Plátano (Musa sp.) in vitro e invernadero. Rev Mex Fito. 2006; 24(2): 98-104. 30. Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis..