Recomendaciones para el empleo de la micro injertación en cítricos

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(1)lrq3"l]. NECO},IEilDACTONES PAAA EL EI.IPIJO DE Iá ¡{ICRO-TNJMTACIOil EN CIIRrCOS Luz. I.. Amanda. Zanora *lt. IIIIRODIrcCIOI{. Ia aplicación de nétodos de cultivo para la obtención de tejidos de plantas ribres de vlrus, se inició con 1a" observación cle Lin¡naset y Cournuet (1949), según la cual Ia concentración de 1os virus oue invaden sistemáticanente una planta, decrece a1 acercarse a 1os neristenos_. Morel y l.lartín (1952) confirmaron esta observación aI regene_ rar dalias sanas, procedentes de neristenos de plant.as infectádas. A partir de este nonento, e1 cultivo de neristemos, solo o e¡ combinación con otras técnícae, se convirtió en Ia-basá para 1a obtención de plantas sanas (Figura 1). Una nodificación de Ia técnica de plantas meristemáticas es eI nicroinjerto in vitro, el cual consÍste en transferir una Dunta meristemática a plántulas provenlentes de se¡nil1as crecidas in vitro. ULtimanente 1a microinjertación para producÍr un se ha utilizado grupo de especies librée de virus, dontle el cultívo ds neristemos no ha dado resultados exitosos. De acuerdo con Navarro L. 1989, se ha reportado la aplicación de esta técnica por: 1. Murashigue et a1, en L9i2, para proclucir y propagar cítricos libres de vi¡us-. 2. Ftñ lgl|, ttauairo Lukas en "yiiroinjerto de ápices caulinares in vitro para 1a obtención de plantas de agrios libres de vj.rusr'. 3. AIskiel en Ig77, en "Injertación in vitro de duraznoÍ. 4. Lundergan en I97g, t'InjertacÍón in vitro de nanzanot'. 5. En 1979, NegurJ1es y JoneÁ, "M-icroin jertación de cfruela doméstica en patrones dé ciruelá nstitia cv. la. microinjer tación ha sido usada ultÍnamente obtención de cftricos Libres de virus.. *. Contribución Programa de Genética Agropecuario ICA.. ** Lic. Bioquínica.. Vegetal,. programa d e B i o t e c n o l o s í a .. r l.). con gran. fnstituto. éxito. en 1a. Colombiano. CNI - ICA Palnira.A.A.233.

(2) Mertstemoy 2-t pr¡ rnod¡os loltores O.P'ANTA MADRE. b.DEFOLIACION. d. BROTE COLECTADO e MERISTEMA Y DESINFECTADO. c.NUEVOS aFo¡ES. AISLAMIENTODE MERISTEMA. Anillo voscqtor. f. SEIvTILLA PELADA Y DEs'NFÉ€IADA. g.PLANTULA ,t EptCOTtLO CRECIDAE¡,t DECA9ITALA OSCURIDO MD. L MTCROTNJERTO. ¡. PLANTA INJERTAOA. cÉctDA. IN VITRO. I- PLANTA 7RA'VSPLÁiV. TAU AL SUELO. PREPARACION DEL PATRON?' N,]ERTO Y TRANSFLANTEAL SUELO. Fig.I- REPRESE,VTACION DE LA TECN'CADE MICRODIAGRAMATICA INJERTACION. '/[.

(3) las enfermedades de Los cít.ricos producidas por virus, viroides y ni_ coplasnas_y otros organismos siúilares (en general denominados virus) producen importantísimas pérdidas económicai en toclo el mundo. Algul nas enfermedades provocan la muerte cornercial de los árboles v 1as" otras producen una dÍsminución de 1a producción del l0 a1 2OT"-,baja calidad del fruto, pérdÍda de vigor y longeviilad de 1os árbo1ás y"en nuchos casos impiden 1a utitización de1 pátrón más adecuado a caáa huerto (Navarro, 1979). Ias investigaciones realizarlas princípalnente por Rastacher et aI, Navarro y Juérez, referentes a esias enieruedadei virales de 1os cíÉri.9":,1o: llevaron a adoptar esta t.écnica de los microinjertación, con er rtn de lograr efiminar 1a mayoría de estos virus en materiales va_ liosos.. II.. HEIODOI¡GIA PARA LA MICROITJM,TACION. Preparación del explante Se selecciona la variedad infeclada que se quiere limpiar Se toma Ia planta nadre del canpo o preierent.enente crecida en invernadero. Se poda severamente para inducir brotación. Bstos biotes nuevos se col-ectan en tamaño nás o menos de I Dentro de 1a cámara del flujo laminar y en lotal e1 meristerna más 2 o 3 primordios foliáres. R. asepsía se exlrae. - Preparación de1 patrón, el microinjerto y transplant.e al suelo Bl patrón debe ser de calldad Se siembran sus senillas luego de eliminar sus dos tegumentos, e s t o s e r e a l i z a a s é -más Dticanente Crecido e1 patrón o nenos a 1as 2 se¡nanas, se corEa una porci-ón del epicotilo y en una incisión en forna de T invertida se coloca el meristemo (Figura 2). - Alternativa&ente, los ápices son colocados directamente sobre el cambium de la superficle cortada.. fa sobrevivencia. de los ápices nicroinjertados,. Los. ápices muy -pequeños deben ser usados para nacrendo esta técnica dificil y poco confiable. los ápices grandes pueden ser usados si a cabo con propósit.os de propagación.. la. depende de su lamaño. eliminación. microin ierüación. i'i. tr7. ". de virus,. se lleva.

(4) Apice coulinor. Cg. AT'CA DEL T'PO DE 'NJERTO F Io,2. REPRESENTAC,OND,AGRAM EMPLEADOEN CITRICOS muestran a1 rnenos 2 hojas expandída's (5-7 Cuando las p1ántulas a materos en anvernaoese transPlantan semanas después del injerto) al campollevados ros, para luego ser LL éxito. del i.njerto. in vitro. depende en gran parte. a injertar Tarnaño de la punLa neristemática eI ñeristeno colocar a1 Tipo de corte empleado Conclición de la semiLla Patrón Edad de Ia plántula Fuente de yema Medio de cultivo Condiciones de incubación. de. en el Patrón. la variedad del patrón Es necesario estudiar Selección d.e patrones. ápices de algunas especies de citricos' nás adecuado para injertar a diferentes Una mejor adaptabllidad adecuado. del patrón Ventajas condiciones de suelo Y cllma. - Mayor uniformidad en calídad d e f r u t o y é P o c a d e P r o d u c c i ó n - E s p o s Í b 1 e o b t e n e r P l a n t a s más pequeñas y que producen más pronto que aquellas no injertadas.. I18.

(5) -. Es factible la obtención de conbinaciones resistentes o tolerantes a enfernedades fungosas, nemátodos o virales. - Ofrece 1a posibilidad de utilizar material de iniertación certificado libre de virus.. EI Citrange troyer (variedad) tiene 1a ventaja de sus hojas trifoliadas que sirven para identificar fácilmente los brotes adventicios producídos por e1 patrón. (Navarro, 1979). Una vez escogido el patrón se siguien los síguientes. pasos:. - las senillas se lavan con agua corriente - Se elininan los dos tegumentos - Se envuelven en gasa, en grupos de 10 semilLas - Se desinfecEan en superficÍe por inmersión durante I0 ninutos en hipoclorito sódico a1 0,52 más 0,1% del agente mojante Enen 20 - Se lavan con agua destilada estéril, 3 o 4 veces - El medio nás empleado es el de Murashigue y Skoog (1962) citado por Navarro et al (1975), adicionado con 12 de agar. Ajustando e1 pH a 5,7. - EL nedio se distribuye en tubos de 25 x 125 mn, conteniendo cada uno 25 ml. Se tapan y se l1evan a1 autoclave por 15 ninutos a 12toc. - Se siembra una semilla en cada tubo, se nantiene a una temperatura constante de 27aC y en conpleta oscuridad. Resultan planLas con nayor elongación, tal1o etiolado, hojas sin expandir. Se considera que este efecto está dado por un aumento en eI proceso metahó1ico, para restablecer e1 equilibrio, cuando se ca¡¡bia la condición de oscúrídad del patrón a fotoperíodo una vez injertadon fo cual se traduce en diferenciación del Eicroinierto. -. Caracteristicas del explante. que querenoe nicroinjertar,. -. Se toman ápices de 4-5 cm de longitud plantas cultivadas en invernadero.. De Ia. planta. nadre de 1a variedad. procedentes de brotes. - Dentro de 1a cámara de fl-ujo laminar se elininarán y s¡e reduce a 1 cm de longitud.. de. las hojas mayores. - Durante 5 minutos se esterilizan por innersión en hipocl.orito sódico O,252 nás twen 20. - Se lavan 3 o 4 veces en agua destilacta estéril. - Se aisla el ápi.ce coopuesto por el roerist ena apícaL y 2 6 3 prinordios foliares con unos tanaños conprendidos entre 0,14 y-deO,l8 nm. EI núoero de ápices prendidos aurerlta pero Ia proporcÍón plantas libres de virus disminuye. Los patógenos no se localizan en las nismas zonas de los ápices.. 119.

(6) ento para el i-njerto. Todas estas a s é¿Procedihi pticamente y con la ayuda de estereoscoDio. -. -. Plántulas patrón de 2 semanas de edad Corte de una porcÍón d e e p i c o t i l o : 7,5 -. etapas. se. realizan. 2 cm y dejando wa. de 4-6 cms. El-iminación de cotiledones y yemas axilares Corte en Ia superficie de corte del epicotilo tida.. raíz. en for¡na de T inver-. Colocar ápice con su superficie basal- de corte en conLacto con la superficÍe de 1a corteza de1 patrón expuesto por el corte horí_ zon|uaL.. - llanteDi-qiento llicroinjerto las plantas microinjertadas "In vitro". se siembran en el nedio de Murashige & Skoog 1íquido previamente sellado y autoclavado. Ee necesario colocar pLataforma del para insertar el patrón.. papel. filtro. con 2 orificios. las plantas nicroinjertadas se mantienen en posición vertical, intensidad lumínica de 1000 lux, fotoperíocio de 12 horas día y una temperat u r a c o n s t a n t e . d e 2 7 e C . L o s brotes deben ser eliminados para evitar su influencia adversa en el d e s a r r o l l o d e 1 o s á p i c e s i n j e r t a d o s . ttln vLvor', Mantenimi eDto lticroi-njerto pLantas que nuestran al menos dos hojas expandidas procedentes del ápice, m-ás o menos 5-7 semanas después del injerto, se transplantan a maEeros de l0 cns de diámetro, con un suelo esterilizadio y Dreparad.o para cultivar cítricos y fertilizando con solución MS ai ¡nomento de1 transplante; los nateros se introducen en bolsas de polietileno durante una semana para rnÍnimÍzar la pérdida de hunedad o evitar deshidratación _ adaptacLon anvernadero, una segunda senana se elirni-nan y Ias plantas se cultivan en condj-ciones nornales de invernadero; cuando tengan un tanaño adecuado se hace una prueba de presencía de virus. I¿ indexación se realiza de acuerdo a la tecnología que disponible puede ser: pruebas serológicas, nicroscopia eleiirónicao planÉas indicadoras.. Veatajas de la microÍn jertación sobre otras técnicas. la técnica de nicroinjertación resultó superior a las tradicionalr¡ente utilizadas para lirnpieza de virus en cíLricos como son 1a ternoteraDia v 1as plantas nucelares. Se considera superior a la termoterapia, elimina trisCeza, psoriasis, etc., ya que elimina virosis que por esta técnica no se habíá logrado cono son: exacortis _ difundÍdas transnisión necánica y xiloporosj_s en todc¡ e1 nundo.. 120.

(7) a plantas .qucelargs que aunque vP?_-.t^ut¡^1"_1_ l - r u s , c o n s e _"lperior r v a n s u s c a r álas cterés ¡uvenilés, Lálés como: -. Falta producción en los Baja calidad del fruto Elevada espinosidad VÍgor excesivo. primeros. libres. de. años. Esto significa que la propagación comercial puede durar de 20 a 3O algunas v_ariedadei. En comparación la microinjertación en T:". "n presenta l-as siguientes clErtcos ventajas: -. Se pueden obtener plantas libres de algunos virus Ilo Erenen caracteres juvenÍIes Se pueden propagar conercialmente Para esto es solo necesario un tiemDo i.nferior a 2 años III.. RESIJMEil. la es una técnica derivada de 1os cultivos de tejidos -nicroinjertacÍón Eediante 1a'cua1 se transfiere una punta neristemática de 1a esiecÍe .rmññafrñnps. Adenás de las ventad de virus¡ pernite obt.ener plantas se pueden propagar cornercialmente ace 1a técnica de nicroÍnjertación superior a la termoterapia y a 1a producción de plantas nucelares. Es o-bvio que dicha nelodoiogía ofrece grandes posibitidarles para un país como Colombia donde 1os- virus son ]initantes no sólo en cftricos sÍno en oLras especies frutales. IV.. BIBLIOGMFI./T. l.. Navarro, L.; Roistacher, C.N. and.Murashige, T. 1975. Improvement of Shoot-tip Grafting in vitro for viius-free citrus. Journal of the American Society for Horticu.Itural Science. 100: 471479.. 2.. Navarro, L.; Roistacher, C.N. and Murashige, T. 1976. Effect of Size and Source of Shoot tips on psorosis-A and Exocortis Content of Navel Orange plants Obtained by Shoot-rip Grafting in vitro. In. E.C. Calavan (ed.) proc. 7- th. Conf. ÍnternaciónaL Organization Cit.rus Virol. . 10 C.V.. Riverside 1976.. I2I.

(8) Tissue culture techniques used Navarro, L. and harez, !977Acta Horticulin Spain to recover virus free citrus plants. tu¡e 78, L977.. 4.. 1979. MicroinJerto de ápices caulinares in vitro Navarro, L. de virus. para la obtención de plantas de agrios libres Bo1, Serv. P1agas.5t 127-148. 1977. RecoverY C - N . ¡ N a v a r r o , L . a n d Murashigue. Roístacher, and selections of citrus free of several Exocortis Viroid' RiversiSpiroplas¡¡a cÍtri by Shoot-tip Graftingl in vitro".. de, pp. 186-193.. r22.

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