MICROBIANOS OBTENIDOS DE Plukenetia Volúbilis L PARA LA CONFORMACIÒN DE UN CONSORCIO MICROBIANO EN CONDICIONES IN VITRO.
CINDY PAOLA MORENO RIAÑO
UNIVERSIDAD DE SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, NATURALES Y AGROPECUARIAS PROGRAMA DE MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
EVALUACIÒN DEL ANTAGONISMO Y SINERGISMO DE AISLADOS DE Plukenetia
Volúbilis L PARA EL ESTABLECIMIENTO DE UN CONSORCIO MICROBIANO EN
CONDICIONES IN VITRO.
CINDY PAOLA MORENO RIAÑO
TRABAJO DE GRADO
Presentado como requisito Para optar al título de MICROBIÓLOGO INDUSTRIAL
Director
Bayron Enrique Agualimpia Valderrama M.Sc Química Ambiental
Codirector
Carlos Augusto Acevedo Isidro M.Sc Fito protección
Asesor
Wolfang Osma Castellanos Esp. Estadística
UNIVERSIDAD DE SANTANDER
FACULTAD DE CIENCIAS EXACTAS, NATURALES Y AGROPECUARIAS MICROBIOLOGIA INDUSTRIAL
Agradecimientos
A Dios por haberme permitido avanzar en este punto de mi carrera y darme la fuerza para no desistir en los días difíciles.
A mi madre, hermanos, amigos y demás familiares, por el apoyo incondicional y ofrecerme la oportunidad de culminar este largo proceso; por creer en mí y recibir todo el amor y comprensión, por haber estado conmigo siempre, muchas gracias.
A la Doctora Fabiola Aguilar, por creer en mí, por sus consejos y paciencia a lo largo de mi carrera. A mi director Bayron Agua limpia y codirector Carlos Acevedo, por las enseñanzas brindadas, apoyo, paciencia, exigencia, confianza, y esmero, por ser pilares en el proceso de cada línea de este libro. A cada profesor que hizo posible mi formación profesional aportando conocimientos y valores que están atados en mi mente y corazón.
Al personal del laboratorio (Esmeralda, Julián Navas, Martha,) por cada favor y facilidad que me brindaron oportunamente en el desarrollo de esta investigación. A la Universidad de Santander de Bucaramanga y la Facultad de Microbiología Industrial por darme la oportunidad de aprendizaje y por el apoyo financiero.
Dedicatoria
Dedico este trabajo de grado a mi padre Dios, quien me dio la salud, la fortaleza, la fe y la esperanza día a día para finalizar esta tesis. Por bendecirme en todo tiempo y ver su fidelidad cada mañana. A mi madre Stella Riaño Yepes; quien me dio la vida, el apoyo constante y está conmigo en todo tiempo, por su infinito amor, cariño y comprensión. Por acompañarme en los buenos y malos momentos en todo mi año. Por ayudarme a que este momento se hiciera una realidad.
A mi hijo Christian José Moreno y hermanito Carlos Andrés Riaño, quienes son el motor de mi vida y mi felicidad, por su comprensión y amor, por ser mi fuente de motivación e inspiración para llevar a cabo cada propósito.
A mi hermano Cristian Hernando Moreno por su apoyo incondicional, por creer en mí y por ser el cimiente para que esta etapa de mi vida se cumpliera, por ser mi figura paterna y estar presente en todo tiempo.
A mi Amor Erik Guaqueta quien con su esfuerzo y amor estuvo en este proceso llenándome de esfuerzos y motivaciones para finalizar y continuar en pie de lucha, junto a su papá milciades Guaqueta.
A mi abuela Rosario Yepes, por sus oraciones y confianza, por su amor y cada palabra sabia de fe que cautivaba mis ojos, dándome valor para seguir.
Contenido
Pág.
INTRODUCCIÓN ... 5
2. MARCO TEÓRICO... 7
2.1.2 Propiedades de la planta. ... 8
2.1.3 Usos y pontecial agroindustrial. ... 9
2.2 MICOORGANISMOS CON PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO VEGETAL PGPR .... 11
2.2.1 Micoorganismos pgpr productores de sustancias indólicas. ... 11
2.2.2 Micoorganismos biosolubilizadores de fosfatos. ... 13
2.3 CONSORCIOS MICROBIANOS ... 15
2.4 ANTAGONISMO Y SINERGISMO MICROBIANO ... 16
3. OBJETIVOS ... 18
3.1 GENERAL ... 18
3.2 ESPECÍFICOS ... 18
4. MATERIALES Y MÉTODOS ... 19
4.3. EVALUACIÓN DEL ANTAGONISMO ENTRE AISLADOS ... 20
4.3.1. Inhibición de crecimiento entre Bacterias... 20
4.3.2 Inhibición de crecimiento entre hongos. ... 21
4.3.3 Inhibición de crecimiento de Hongos hacia las bacterias. ... 22
4.3.4 Inhibición de crecimiento de Bacterias hacia los hongos. ... 23
4.4 DETERMINACIÓN DEL SINERGISMO ENTRE AISLADOS MICROBIANOS ... 24
4.4.1 Crecimiento en medio NBRIP. ... 25
4.4.2 Detección y cuantificación de fósforo solubilizado in vitro. ... 25
4.4.3 Producción de Ácido Indol Acético (AIA). ... 26
4.5. MÉTODOS UTILIZADOS. ... 26
4.5.1 Fósforo, Reactivo (Molybdovanadate Rapid Liquid Method) 31. ... 26
4.5.2 Salkowski. ... 27
4.6 ANALISIS ESTADÍSTICO... 27
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN ... 28
5.1.1 EVALUACIÓN GENERAL DEL ANTAGONISMO ENTRE LOS AISLADOS ... 28
5.1.2 Inhibición entre Bacterias. ... 28
5.1.3 Inhibición entre Hongos. ... 30
5.1.4 Inhibición de crecimiento de Hongos hacia las bacterias. ... 32
5.1.5 Inhibición de crecimiento de las Bacterias hacia los Hongos. ... 33
5.1.6 Evaluacion general del antagonismo de los aislados. ... 34
6 ENSAYO DE SINERGISMO A LOS CONSORCIOS MICROBIANOS ESTABLECIDOS . 36 6.1. Solubilización de fosfatos ... 36
6.1.1 Produccion de sustancias acido indol acético. ... 40
CONCLUSIONES ... 45
Anexos ... 46
Lista de tablas
Pág.
Tabla 1 Sacha Inchi ... 8
Tabla 2 Aislados obtenidos de sacha inchi, seleccionados para la combinación microbiana. ... 19
Tabla 3 Resultados de inhibición de crecimiento bacterias vs bacterias. ... 28
Tabla 4 Resultados de enfrentamiento de los hongos hacia las cepas bacterianas. ... 32
Tabla 5 Resultados de inhibición de crecimiento de las bacterias hacia los hongos. ... 34
Tabla 6 Resultados de la evaluación de inhibición del conglomerado de las 11 cepas. ... 35
Tabla 7 Microorganismos con actividad promotoras de crecimiento vegetal individual ... 46
Pág.
Figura 1 Siembra masiva de la bacteria a ensayar (fondo oscuro) y bacterias adyacentes a la caja de Petri. (Bauer et al.1966). ... 21 Figura 2 Enfrentamiento de los hongos a ensayar de acuerdo con el método Plato dual propuesta
por Cundom, et al., 2003. ... 22 Figura 3 Esquema de la inoculación del hongo (centro) y siembra de las bacterias por estría
desde el micelio del hongo hasta el borde de la caja (Zafra G, et al.2016). ... 23 Figura 4 Siembra al tiempo del hongo (centro) y cepas bacterias (periferia) Zafra et al.2016. ... 24 Figura 5 Promedio en milímetros del halo de inhibición y su porcentaje de frecuencia. ... 30 Figura 6 Compatibilidad entre los hongos de ensayo TSEHH03-01 - TSEHR01-04... 31 Figura 7 Inhibición hongos hacia bacterias, A) Hongo TSEHR01-04 inhibiendo a las cepas
TSEBT04-03 y 01 B) Hongo TSEHH03-01 inhibiendo a la cepa TSEBFL01-01... 33 Figura 8 Evaluación de las actividades que presentaron las mezclas con respecto a la actividad
promedio individual. ... 36 Figura 9 Diagrama de caja de las diferencias de solubilización de fosfatos en mezcla con
respecto al promedio de la solubilización individual. ... 38 Figura 10 Evaluación de las actividades que presentaron las mezclas con respecto a la actividad
promedio individual. ... 40 Figura 11 Diagrama de caja de las diferencias de producción de sustancias indólicas (AIA) en
consorcios con respecto al promedio de la producción individual. ... 42 Figura 12 Concentración de solubilización de fosfato (PO4 mg/L) en los consorcios
conformados. ... 47 Figura 13 Concentración de producción ácido indol acético (AIA mg/L) en los consorcios
Resumen
TITULO: EVALUACIÒN DEL ANTAGONISMO Y SINERGISMO EN AISLADOS MICROBIANOS OBTENIDOS DE Plukenetia Volúbilis L PARA LA CONFORMACIÒN DE UN CONSORCIO MICROBIANO EN CONDICIONES IN VITRO.
AUTOR: CINDY PAOLA MORENO RIAÑO
PALABRAS CLAVES: Sacha inchi, PGPR, consorcios, solubilización fosfatos, producción AIA.
DESCRIPCIÓN:
finalmente se seleccionaron los microorganismos correlacionando las pruebas de antagonismo y sinergismo mediante el análisis estadístico.
Se logró determinar que el 81% de los microorganismos no presentaron antagonismo, destacándose la cepa bacteria TSEBT04-03 quien no inhibió el crecimiento en el enfrentamiento bacteriano y que el asilado microbiano TSEBR01-01 presentó mayor inhibición (36,4%) en los enfrentamientos y su frecuencia represento en más del 50% en los ensayos.
Finalmente se pudo establecer que el 35,93% de los microorganismos fueron
Abstract
TITLE: EVALUATION OF ANTAGONISM AND SYNERGISM IN MICROBIAL
ISOLATES OBTAINED FROM PLUQUENETIA VOLÚBILIS FOR THE
CONFORMATION OF THE MICROBIAN CONSORTIUM IN THE IN VITRO
CONDITIONS.
AUTHOR: CINDY PAOLA MORENO RIAÑO
KEY WORDS: Sacha inchi, PGPR, consortiums, phosphate solubilization, AIA
production.
DESCRIPTION:
Sacha inchi (Plukenetia volúbilis Linneo) that belongs PGPR activity, studied in the
previous phases of the macroproject of institutional aspect, with the purpose of a microbial
combinations that potentiate the activities of interest as solubilization of phosphates and
production of indole substances; To this end, the antagonism is evaluated by growth
inhibition tests using button tests on turf and dual plate. The microorganisms do not present
antagonism synergism is evaluated by the rate of change of their activity by colorimetric
techniques of salkowski and phosphoric moliddovanadato, and finally the microorganisms
were selected by correlating the tests of antagonism and synergism through statistical
It was determined that 81% of the microorganisms did not present antagonism, highlighting
the strain of the TSEBT04-03 bacteria that did not inhibit the growth in the bacterial
confrontation and the microbial asylee TSEBR01-01 showed the greatest inhibition
(36.4%) in the confrontations and their frequency represents more than 50% in the trials.
Finally, it could be established that 35.93% of the microorganisms were compatible, there
was no antagonism and increase their activity when evaluated as a whole, with the
consortiums in the increase for both activities of interest were the consortiums C2, C6, C21
And C31 of the 32 combinations evaluated. This is the work of a consortium made up of
three (3) microorganisms, which presents less antagonistic capacity and greater synergy
INTRODUCCIÓN
Es habitual que los microorganismos del suelo desarrollen actividades en conjunto relacionadas con la mineralización de complejos orgánicos y translocación de bioproductos y elementos minerales que conllevan al desplazamiento de nutrientes en el ecosistema suelo-planta (Vessey, 2003). Sin embargo, la conformación de consorcios microbianos que sean eficientes y efectivos, requieren de la realización de meticulosos estudios para determinar la compatibilidad y efectos sinérgicos sobre las variables agronómicamente importantes de los cultivos, en campo o invernadero (Aguado, 2012). Estas interacciones antagónicas y sinérgicas entre los microorganismos del suelo no han sido muy documentadas; sin embargo, crece el interés de utilizar morfotipos de microorganismos, con el objetivo de proporcionarle a la planta protección contra fitopatógenos y, al mismo tiempo, promover el crecimiento vegetal, (Cano, 2011).
2. MARCO TEÓRICO
2.1 GENERALIDADES DE SACHA INCHI
2.1.1 Taxonomia.
De acuerdo con lo establecido por Mostacero et al, 2002 el sacha inchi se clasifica de la siguiente forma:
Tabla 1 Sacha Inchi
Reino Plantae
Subreino Fanerogamas División Angiospermae Clase Dicotyledoneae Subclase Archichlamydeae
Orden Generiales
Familia Euphorbiaceae
Genero Plukenetia
Especie Plukenetia Volubilis L
Fuente: (Mostacero, 2002)
2.1.2 Propiedades de la planta.
Las semillas de sacha inchi (Plukenetia volubilis L.) posee características nutritivas que realza su interés y que se caracteriza principalmente por su alto contenido de proteína que oscila entre 25 y 28%, siendo los aminoácidos esenciales más relevantes, entre los cuales se encuentran de mayor a menor aportando las sieguinetes cantidades; leucina (79 mg/g), lisina (72mg/g), fenilalanina más tirosina (67 mg/g), valina (62 mg/g), tirosina (58 mg/g), treonina (57 mg/g), metionina más cisteína (57 mg/g), isoleucina (50 mg/g), (Gutiérrez et al., 2011; Sathe et al., 2002; citado por Ramos, 2014).
un 48,60 %, el linoleico (omega 6) con un 36,80% y el oleico (omega 9), 8,28% (Ayala martinez, 2016). La almendra concentrada como alimento, contiene un alto contenido de grasa, más que la crema de leche, mayores calorías que el azúcar y más vitaminas, minerales y proteínas que la carne de res, además el aceite tiene alto contenido de vitamina A, 680 ug de retinol en 100 ml de aceite y se mantiene en 466 ug después de ser usado en frituras, y por ser un aceite vegetal, no contiene colesterol (Hammaker, 1992). El aceite de sacha inchi además de contar con altas propiedades de interés, también es rica tocoferoles (Follegatti-Romero et al., 2009) componente que actúan como antioxidantes por la capacidad de secuestrar los radicales de piróxilo de moléculas de lípidos insaturados, de esta forma evita la propagación de la peroxidación de lípidos, principalmente en los ácidos grasos poli-insaturados (Morales et al., 2012)
2.1.3 Usos y pontecial agroindustrial.
Los usos de sacha inchi (Plukenetia volúbilis Linneo) son variables, y se extienden desde su aplicación industrial hasta usos domésticos.
se pueden utilizar para tratar la artritis porque las prostaglandinas inflamatorias se producen en menores cantidades (Hanssen y Schmitz (2011).
Suplemento Nutricional: La semilla se sacha inchi contiene altos niveles proteicos (aproximadamente 33%) lo cual se ajusta a lo sugerido por la FAO y la OMS como nutriente para adultos, ya que está constituida la proteína albumina, la cual es soluble y de almacenamiento proteico, constituye alrededor de un tercio del contenido total de proteína, compuesta de dos polipéptidos glicosilados (32,8 y 34,8 kDa), con un ideal perfil de aminoácidos; además encontraron que el compuesto presenta un inusual alto contenido de triptófano (44 mg/g de proteína) (Gutiérrez et al., 2011; Sathe et al., 2002).
2.2 MICOORGANISMOS CON PROMOCIÓN DE CRECIMIENTO VEGETAL PGPR
Los grupos de bacterias relacionadas con la rizófora, son aquellos que tienen la capacidad de colonizar la raíz de la planta generando efectos benéficos sobre el crecimiento y desarrollo de la planta, actuando específicamente en el ciclo de nutrientes y como agentes de control biológico (Madhaiyan et al., 2009, Boiero, et al., 2007). Estos microorganismos se caracterizan por exhibir propiedades importantes como: la colonización de la raíz, sobrevivencia y multiplicación en la rizófora y promoción del crecimiento de las plantas. De acuerdo a las cualidades mencionadas, este conjunto microbianas se ha denominado PGPR (acrónimo del inglés Plant Growth Promoting Rhizobacteria) Rizobacterias promotoras del crecimiento vegetal (Barea et al. 2005; Yao et al., 2010; Glick et al., 2007; El-Tarabily, 2006; El-Tarabily, 2008).mejoran el crecimiento de las plantas por sus procesos microbianos tales como solubilización de fosfato, nitrógeno, movilización de potasio, la solubilización de zinc, la movilización de micronutrientes, y también la secreción de fitohormonas (auxina, citoquininas, giberelinas), deseables para el crecimiento y el desarrollo de plantas de un cultivo (Akhtar & Siddiqui, 2008).
2.2.1 Micoorganismos pgpr productores de sustancias indólicas.
mecanismo promotor de crecimiento, y está relacionada con la capacidad que poseen los algunos micoorganismos (PGPR) en producirla, aumentando el sistema radicular de la planta y el follaje (Bal et al., 2012). Las fitohormonas son moléculas orgánicas que regulan la expresión de genes implicados en el crecimiento y desarrollo vegetal. Estas moléculas realizan efectos específicos sobre la fisiología vegetal, incrementando el volumen radicular, aumentando la tasa de respiración de la raíz de la planta hospedera y el flujo de protones en la membrana de la raíz; en consecuencia, se aumenta la absorción de nutrientes y minerales solubles (Fibach-Paldi et al., 2012).
grupo de bacterias con potencial PGPR reportadas con capacidad de producir sustancias indólicas se ubican a G. Diazotrophicus (Ramírez et al., 1993), Aeromonas veronii, Alcaligenes piechaudii, A. brasilense, Comamonas acidovorans; Enterobacter cloacae,
Rhizobium leguminosarum y Bradyrhizobium sp. (Malik & Sindhu, 2011)
2.2.2 Micoorganismos biosolubilizadores de fosfatos.
Uno de los nutrientes primordiales que influyen en el crecimiento vegetal es el fósforo (P); y aunque se encuentre en cantidades elevadas en el suelo, solo puede ser soluble en las formas monobásicas H2PO-14 y dibásica HPO-24 (ortofosfatos) los cuales son los compuestos asimilables a la planta, pero su disposición en el suelo es limitada y en concentraciones bajas (Castagno et al., 2011). Estudios señalan que los microorganismos con capacidad solubilizadores de fósforos constituyen en un 40% de la microbiota del suelo y una concentración significativa de ellos es aislada de la rizósfera (Kucey, R. M. N. 1983). Algunas bacterias de tipo PGPR presentan la capacidad de mineralizar fosfatos a partir de la liberación de ácidos orgánicos, fosfatasas y quelación, los cuales son liberadas y excretadas al suelo (Singh y Satyanarayana, 2012) mecanismo utilizado para la obtención de este nutriente, ya que al producir ácidos orgánicos son capaces de quelar el fósforo biodisponible en el suelo utilizando sus radicales hidroxilo y carboxilo (Vyas & Gulati 2009). Algunos autores mencionan géneros y especies de bacterias de tipo PGPR con capacidad de solubilizar fosfatos que están dentro de los géneros Achromobacter sp., Acinetobacter sp., Azospirillum sp., Burkholderia sp., Flavobacterium sp., Microccocus
chroococcum, Bacillus circulans, Cladosporium harbarum, Bradyrhizobium japonicum,
Enterobacter agglomerans, Pseudomonas putida, Pseudomonas chlororaphis, Rhizobium
leguminosarum (Rodríguez & Fraga 2006).
2.2.3 Mecanismo de fitoestimulación del microorganismo pgpr.
2.3 CONSORCIOS MICROBIANOS
Un Consorcio microbiano es la asociación natural de dos o más poblaciones de microorganismos, de diferentes especies, que conjuntamente actúan y funcionan como una comunidad en un sistema complejo, donde cada integrante se beneficia de las actividades de los demás. Este tipo de asociación refleja estilos de vida sinérgicos o sintróficos (que significa “comiendo juntos”) en el que el crecimiento y el flujo continuo de nutrientes se conduce más efectiva y eficientemente que en poblaciones individuales (López, Domínguez & García, 2007). Funcionalmente, un consorcio microbiano aumenta la suma de sus partes; sus miembros mantienen la compatibilidad metabólica y ecológica siempre y cuando las transformaciones ambientales que se generan permitan que ellos coexistan cercanamente. La ventaja de los consorcios microbianos es que pueden desempeñar funciones complicadas que poblaciones individuales no podrían; además, la vida en asociación puede generar mayor resistencia a las fluctuaciones del ambiente y favorecer la estabilidad de los miembros, en el tiempo (Ochoa, D. & Montoya, A. 2010)
Estos rasgos distintivos dependen de dos características, primero, los miembros de un consorcio se comunican el uno con el otro, ya sea por el intercambio de sustancias o por señales moleculares, cada población detecta y responde a la presencia de otras dentro del consorcio, ejerciendo sobre ellas un control positivo o negativo en su crecimiento y/o metabolismo, por tanto esta comunicación facilita una segunda característica importante, como es la division del trabajo (Ochoa, D. & Montoya, A. 2010)
célula existan rutas metabólicas eficientes e independientes que le permitan consumir entre cinco y seis átomos de carbono. Sin embargo, en un consorcio estas actividades se pueden dividir en otras de tal forma que se optimice las poblaciones individualmente, ya que tienen la capacidad de efectuar funciones que requieren diferentes pasos, lo cual sería posible cuando estos se han completado por diferentes tipos de células (Salazar, Y. & sanchez, E.2011).
La producción total de un consorcio depende de la combinación de funciones desempeñadas por los constituyentes individuales, es decir, por las poblaciones microbianas involucradas. Otra importante característica de los consorcios es su habilidad para desempeñar funciones actividades que requieren múltiples pasos, que son posibles cuando los diferentes pasos se completan, mediante especies microbianas especializadas (Brener, You & Arnold, 2008).
2.4 ANTAGONISMO Y SINERGISMO MICROBIANO
suelo-planta-microorganismos-ambiente, influyendo en el crecimiento y en el desarrollo de las especies vegetales. (Cano, 2011).
3. OBJETIVOS
3.1 GENERAL
Evaluar en condiciones in vitro el antagonismo y sinergismo en aislados microbianos asociados a plantas de sacha inchi (plukenetia volúbilis L) para la conformación de un consorcio microbiano.
3.2 ESPECÍFICOS
Determinar el antagonismo entre los aislados mediante pruebas de inhibición de crecimiento.
Estimar el sinergismo a los microorganismos no antagónicos mediante la tasa de variación de las actividades.
4. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1 UBICACIÓN
El estudio se realizó en el Laboratorio Agroecología de la Universidad de Santander (UDES), Bucaramanga, Colombia.
4.2 COMPONENTE BIOLÓGICO
Los microrganismos para el estudio provienen del cerapio de la universidad de Santander aislados de diferentes órganos de la planta de sacha inchi y evaluados en la fase anterior del macroproyecto, de los cuales se evaluaron 9 bacterias y 2 hongos (Tabla 2) que presentaron actividad PGPR.
Tabla 2 Aislados obtenidos de sacha inchi, seleccionados para la combinación microbiana.
MICROORGANISMOS
Bacterias
TSPBT07-01 TSEBT04-03 TSPBT01-02 TSPBT02-01 TSPBT02-04 TSEBT01-03 TSEBH01-01 TSEBR01-01 TSEBFL01-01
Hongos TSEHH03-01
4.3. EVALUACIÓN DEL ANTAGONISMO ENTRE AISLADOS
La evaluación in vitro del antagonismo entre los microorganismos se realizó mediante la determinación de inhibición de crecimiento entre estos, adoptando las pruebas de plato dual propuesta por (Cundom, et al. 2003), botón en césped de (Bauer et al.1966), y la metodología de (Zafra G, et al.2016). Todas las pruebas se realizaron por duplicado. Las concentraciones requeridas para cada microorganismo fueron estandarizadas por espectrofotometría, teniendo en cuenta los resultados de las curvas de crecimiento de la fase anterior del macroproyecto.
4.3.1. Inhibición de crecimiento entre Bacterias.
Figura 1 Siembra masiva de la bacteria a ensayar (fondo oscuro) y bacterias adyacentes a la caja de Petri.
(Bauer et al.1966).
4.3.2 Inhibición de crecimiento entre hongos.
El enfrentamiento entre hongos se realizó por duplicado y utilizando la técnica de “plato dual”, propuesta por (Cundom, et al., 2003), el cual consiste en colocar en cada extremo de la caja Petri un disco de 6 mm de diámetro inoculado con las cepas a enfrentar en una concentración de 106, sustituyendo el medio PDA por medio NBY, se incubo a temperatura ambiente hasta observar crecimiento de estos y determinar la presencia de inhibición de crecimiento o efectos antagonistas entre sí. Como control se utilizó el crecimiento libre de cada hongo colocando el disco colonizado en el centro de la caja registrando el crecimiento radial durante nueve días. Los resultados están dados mediante el criterio de inhibición de crecimiento y se mide en porcentaje (%) de inhibición del crecimiento radial mediante la ecuación (PICR) utilizada por Suárez et al. 2008.
Bacteria masiva
Donde R1 es el radio mayor (radio Hongo-testigo) y R2 es el radio menor (radio del Hongo en cultivo dual).
Figura 2 Enfrentamiento de los hongos a ensayar de acuerdo con el método Plato dual propuesta por
Cundom, et al., 2003.
4.3.3 Inhibición de crecimiento de Hongos hacia las bacterias.
Para detectar cualquier actividad inhibitoria de los hongos hacia el crecimiento de las bacterias, se realizó la inoculación centrada de un disco de 6mm, el cual contenía 10 µl a una concentración de 106 esporas fúngicas, se incubó a temperatura ambiente. Después de observar crecimiento hasta fase de esporulación (indicativo metabolismo secundario), 10 µl de concentraciones de 108 UFC/ml de cada cepa bacteriana fue sembrada radialmente
adyacente de la colonia del hongo, se incubo a 30°C hasta observar crecimiento bacteriano y si la cepa fúngica, inhibe el crecimiento de las bacterias. (Zafra G, et al.2016). La actividad inhibitoria por parte del hongo se consideró positiva cuando se verificó el crecimiento limitado o inexistente de la bacteria ensayada, reportando resultados en milímetros (mm)
Figura 3 Esquema de la inoculación del hongo (centro) y siembra de las bacterias por estría desde el
micelio del hongo hasta el borde de la caja (Zafra G, et al.2016).
4.3.4 Inhibición de crecimiento de Bacterias hacia los hongos.
En la determinación de la inhibición de las bacterias hacia los hongos se realizó la inoculación de discos de 6mm con 10 µl de suspensiones bacterianas a concentración 108
UFC/ml sobre la periferia del medio y la inoculación centrada de un disco de 6mm con 10µl concentración 106 esporas fúngicas, siembras que a diferencia del ensayo anterior, se
realizan al mismo tiempo y posteriormente, se incubaron a 30 ° C, se observan cada 24 horas, hasta observar la existencia de inhibición por parte de las bacterias hacia el
A B
Hongo
crecimiento radial del hongo, ( Zafra G, et al.2016). Como control se utilizó el crecimiento libre del hongo colocando el disco colonizado en el centro de la caja registrando el crecimiento radial. La interpretación de los resultados se tuvo en cuenta la presencia o ausencia de inhibición de crecimientos reportados en milímetros (mm).
Figura 4 Siembra al tiempo del hongo (centro) y cepas bacterias (periferia) Zafra et al.2016.
4.4 DETERMINACIÓN DEL SINERGISMO ENTRE AISLADOS MICROBIANOS
La determinación del sinergismo se estimó mediante la tasa de variación de la actividad de los microorganismos que no presentaron antagonismo, para esto se conformaron combinaciones con respecto a los valores de actividad reportados por individual.
Se utilizó como inóculo, una mezcla liquida conformada por los microorganismos que presentaron actividades de interés como solubilizarían de fosfato y producción de sustancias indólicas. Se obtuvieron, concentraciones celulares en agua des-ionizada estéril, del orden de 108 UFC/ml para bacterias y 106 esporas, para las cepas fúngicas, las
concentraciones fueron determinadas por espectrofotometría. Posteriormente se realizó la mezcla en volúmenes iguales de cada suspensión, hasta formar un volumen final de 30ml, constituyendo así el inóculo de trabajo.
4.4.1 Crecimiento en medio NBRIP.
Para poder realizar la cuantificación del fosforo solubilizado por los inóculos mixtos, se llevó a cabo en frascos Scott, 27 ml caldo NBRIP (National Botanical Research Institute's phosphate) utilizando fosfato tricálcico (Ca3 (PO4)2) como fuente de fosforo, según
metodología utilizada por Nautiyal, 1999. Los cuales fueron inoculados con 3ml de las mezclas de microorganismos (inóculos mixtos) e incubados a 30ºC en agitación constante 150rpm, por 96 horas. (Alikhani et al., 2007).
4.4.2 Detección y cuantificación de fósforo solubilizado in vitro.
4.4.3 Producción de Ácido Indol Acético (AIA).
Para la verificación de la producción de ácido indol acético (AIA) promotor de crecimiento vegetal en las mezclas microbianas, se tomaron 3 ml de la mezcla o combinación microbiana, inoculado en 27 ml de medio TSB (Tripticasa Soya Broth), se incubo a 30°C y en agitación constante de 150 rpm, la confirmación de la producción del AIA se llevó a cabo por método colorimétrico reactivo de Salkowsky (Rahman et al; 2010). Posteriormente se realizó la lectura en el espectrofotómetro con una longitud de onda de 430nm (Hach DR2800).
4.5. MÉTODOS UTILIZADOS.
4.5.1 Fósforo, Reactivo (Molybdovanadate Rapid Liquid Method) 31.
4.5.2 Salkowski.
El reactivo de salkowski oxida el ácido indolacético formando un quelato con hierro a pH ácido y para así medir la formación de un compuesto de oxidación coloreado de ácido indolacético formado a pH muy ácido, en presencia de cloruro férrico, que se determina a una longitud de onda de 530nm en este caso en espectrofotómetro Hach DR 2800. Se utilizó un volumen de 3mL de sobrenadante y 2mL de reactivo, la reacción tiene una duración de 30 minutos a una temperatura de 30 °C, donde el desarrollo de una coloración roja-rosada indicó la presencia de ácido indolacético (Spaepen, Vanderleyden, & Remans, 2007; Sarwar, Arshad, Martens, & Frankenberger, 1992).
4.6 ANALISIS ESTADÍSTICO
Para la determinación del antagonismo microbiano se empleó un diseño estadístico por bloques, completamente al azar. Donde el bloque es la bacteria que se siembra masiva y el factor es el microorganismo sembrado en el sensi-disco (individual) y la variable de estudio fue la capacidad de producir el halo de inhibición.
5. RESULTADOS Y DISCUSIÓN
5.1.1 EVALUACIÓN GENERAL DEL ANTAGONISMO ENTRE LOS AISLADOS
5.1.2 Inhibición entre Bacterias.
La evaluacion de inhibición entre bacterias se realizo ediante la prueba de “botón en césped” de (Bauer et al., 1966), evidenciando que el (80,8%) promedio de los enfrentamientos no presentó inhibición de crecimiento bacteriano, destacándose la cepa TSEBT 04-03 quien no presento antagonismo o inhibición frente a las 8 cepas de ensayo.; Y solo el (19,2%) promedio presento halos de inhibición de crecimiento entre las bacterias de evaluadas, señalando a la cepa TSEBR 01-01 quien presento mayor antagonismo.
Tabla 3 Resultados de inhibición de crecimiento bacterias vs bacterias.
Fuente: Autor Actividad inhibidora: (+) Sin inhibición y (-) Con inhibición. INHIBICIÓN
CEPAS TSPBT07-01 TSEBT04-03 TSPBT01-02 TSPBT02-01 TSPBT02-04 TSEBT01-03 TSEBH01-01 TSEBR01-01 TSEBFL01-01 TSPBT
07-01 + + - - + + + +
TSEBT
04-03 + + + + + + + +
TSPBT
01-02 + + - + + - - + TSPBT
02-01 - + + + + + + +
TSPBT
02-04 - + + + + + - +
TSEBT
01-03 + + + + + + - +
TSEBH
01-01 + + + + + + + +
TSEBR
01-01 + + - + - - + - TSEBFL
Los resultados reportados en este estudio concuerdan con lo reportado por (Hernández A, 2016) en su estudio de compatibilidad de microorganismos aislados de sacha inchi, donde indica que ningúno de los microorganismos evaluados in vitro son compatbibles en la totalidad de los enfrentamientos, y difiere de otros autores, los cuales indican es sus investigaciones de antagonismo que los microorganismos aislados de un mismo microhábitat (planta) no presentan antagonismo, a diferencia que los microorhganismos de ensayo a pesar de que provienen de una misma planta, fueron aislados de diferentes órganos de la planta sacha inchi, dado a que la función primordial de muchos metabolitos secundarios (antibacteriana, antifúngica, inhibición de germinación de esporas) producidos, varía según su localización en los tejidos de las plantas (Jorge M, e et al; 2005). Sin embargo, solo una cepa (TSEBT 04-03) del presente estudio tuvo la capacidad de interactuar positivamente en todos los enfrentamientos realizados, esto debido que ciertos genes en algunas bacterias les confieren un incremento en la resistencia a péptidos antimicrobianos producidos por otras (Joerger, 2002). Las demás cepas evaluadas presentaron antagonismo e inhibición en los ensayos, debido a los mecanismos de acción que involucran la producción de enzimas líticas, antibiosis, entre otros, destacando que en general más de un mecanismo puede estar implicado en el efecto del crecimiento (Janisiewicz y Korsten, 2002).
Figura 5 Promedio en milímetros del halo de inhibición y su porcentaje de frecuencia.
La cepa TSEBT04-03 se perfiló en la selección para las combinaciones; seguida las cepa TSEBFL01-01 y TSEBT01-03 quienes presentaron halos de inhibición entre 2,5 y 4 mm (Figura 5), hacia una bacteria, en cuanto a la cepa TSPBT 01-02 quien presento inhibición frente a tres bacterias entre 1-2mm (Tabla3), (Figura 5), y con una frecuencia del 37% (Figura 5), y la cepa TSEBR01-01 la cual presentó mayor inhibición frente a cuatro cepas (2-4 mm) y su frecuencia estuvo en el 50% de los ensayos realizados (Figura 5), lo que indica que la actividad inhibitoria de estas dos cepas las hace menos selectivos para las combinaciones. Todos los halos inhibiciones fueron menor a 5mm, siendo un criterio para no eliminar cepas mayores a esta medida, como lo sugiere, (Barragán, 2003).
5.1.3 Inhibición entre Hongos.
El ensayo de antagonismo entre los hongos (TSEHH03-01 - TSEHR01-04) no se evidenció ninguna inhibición del crecimiento radial (Figura 6), Los valores del PICR en el tiempo de
1,25 0 2,65 1 2,65 3,9 2,1 3,4 2,9
25 0 37 25 25 12,5 12,5 50 12,5 TSPBT 07-01
TSEBT 04-03 TSPBT 01-02 TSPBT 02-01 TSPBT 02-04 TSEBT 01-03 TSEBH 01-01 TSEBR 01-01 TSEBFL 01-01 Bacterias
Halo de inhibición y porcentaje de
frecuencia
evaluación fue del 100% en el crecimiento de las dos cepas fúngicas. Dándose una interacción positiva.
Fuente: Autor
observacion del acercamiento y crecimiento de los hongos mostrando interacción positiva in vitro.
Figura 6 Compatibilidad entre los hongos de ensayo TSEHH03-01 - TSEHR01-04.
Estos resultados obtenidos contrastan con los reportes de (Carvajal, E et al.2012), en el estudio antagonico
de H6 frente a M. roreri señala que la esporulación de este último fue considerablemente superior en un
97% lo cual coincide con lo reportado en la literatura según (Melnick et al. 2008) donde menciona que
podría existir la posibilidad que determinados aislamientos microbianos, produzcan metabolitos
secundarios que en lugar de restringir estimulan la esporulación entre ellos, desarrollaron sin inhibir el
crecimiento entre ellos.
5.1.4 Inhibición de crecimiento de Hongos hacia las bacterias.
A partir de la evaluación del enfrentamiento entre las cepas fúngicas y las bacterias (Tabla 4) se evidenció que el que el 72,7% de las cepas no presentaron inhibición de crecimiento. Para el csaso específico de destacón la cepa fúngica TSEHH03-01 que inhibió el crecimiento de la bacteria TSEBFL01-01 y la cepa TSEHR01-04 frente a las cepas bacterianas TSEBT04-03 y TSEBFL01-01 se vieron afectadas en su crecimiento expresado en halos de inhibición.
Tabla 4 Resultados de enfrentamiento de los hongos hacia las cepas bacterianas.
Fuente: Autor Actividad inhibidora: (+) Sin inhibición y (-) Con inhibición.
Los resultados obtenidos en este ensayo contrastan con los resultados obtenidos por (Cano, A, 2011) en donde demostró en su estudio de interaccion benéfica de Micorrizas,
Trichoderma spp. Y Pseudomonas, resaltando que estos microorganismos normalmente mantienen relaciones antagónicas o sinérgicas en cuanto al establecimiento, adaptación y proliferación de las especies en la rizósfera, mediado o modulado por la producción de sustancias antibióticos por parte de los microorganismos. Por ejemplo, Trichoderma produce compuestos antifúngicos, que deprimen la colonización radicular por parte de los formadores de micorriza arbuscular y, por el contrario, exudados del micelio de estos,
INHIBICIÓN
CEPAS
pueden estimular la presencia de bacterias, como Pseudomonas, en la rizósfera (Cano, A, 2011).
Figura 7 Inhibición hongos hacia bacterias, A) Hongo TSEHR01-04 inhibiendo a las cepas TSEBT04-03 y
TSEBFL01-01 B) Hongo TSEHH03-01 inhibiendo a la cepa TSEBFL01-01.
Fuente: Autor observaciòn de halos de inhibición de bacterias frente a los hongos ensayados.
La inhibición de las cepas TSEBFL01-01 y TSEBT04-03 pudeo deberse a que, al sembrar primero la cepa fúngica, y en su fase de esporulación donde activamente exuda en el medio los metabolitos secundarios como por ejemplo antibióticos o sustancias inhibidoras; luego de esto y siguiendo la metodología de Zafra et al.2016. Se realiza la siembra de las bacterias a ensayar, estas resultan de acuerdo con el grado de sensibilidad afectadas en su crecimiento manifestado en halos de inhibición (Figura 7).
5.1.5 Inhibición de crecimiento de las Bacterias hacia los Hongos.
La inhibición in vitro entre las cepas bacterianas y hongos se aprecia, (Tabla 5) observándose que no existen diferencias en la inhibición del crecimiento radial fúngico entre las cepas analizadas con respecto al ensayo anterior, donde se evidencio que los hongos inhibieron a las bacterias (TSEBT04-03 y TSEBFL01-01).
TSEBT04-03
TSEBFL01-01 TSEBT04-03
Tabla 5 Resultados de inhibición de crecimiento de las bacterias hacia los hongos.
Fuente: Autor Actividad inhibidora: (+) Sin inhibición y (-) Con inhibición.
La capacidad de inhibición de las bacterias hacia los hongos incide con el estudio in vitro realizado por Orietta y Larrea (2001), en donde señalo que la cepa bacteriana de estudio posiblemente su mecanismo ejercido por la bacteria B3 hacia el hongo H20, fue el de antibiosis, debido a la producción de metabolitos secundarios, los cuales pueden ser volátiles o difusibles, pero que, en cualquiera de los casos, sin entrar en contacto físico con el patógeno, pueden inhibir o restringir su crecimiento.
Los resultados del ensayo de inhibición de las bacterias hacia los hongos, es asociado con la disminución de la producción de metabolitos antifúngica por parte de estos aislados Bacterianos o con la producción de compuestos por parte del hongo que inhiban el crecimiento bacteriano.
5.1.6 Evaluacion general del antagonismo de los aislados.
De las 11 cepas (bacterias y hongos) ensayadas se evidenció que el (81,8 %) de los enfrentamientos no presento inhibición de crecimiento, miestras que el (18,2%) presentó inhibición de crecimiento frente a las demás cepas (ver Tabla 6).
INHIBICIÓN
CEPAS TSEHH 03-01 TSEHR 01-04
TSPBT07-01 + +
TSEBT04-03 + -
TSPBT01-02 + +
TSPBT02-01 + +
TSPBT02-04 + +
TSEBT01-03 + +
TSEBH01-01 + +
TSEBR01-01 + +
Tabla 6 Resultados de la evaluación de inhibición del conglomerado de las 11 cepas.
Fuente: Autor Actividad inhibidora: (+) Sin inhibición y (-) Con inhibición.
Los resultados en este estudio indican que hay antagonismo entre las cepas mediante mecanismos de inhibición por medio de sustancias o competencia por sustratos, pero también se presentó interacciones positivas; estos datos son pioneros dado aque no se reportan investigaciones de microorganismos aislados de la oleoginosa de sacha inchi y que se hace importante destacar que a pesar que los enfrentamientos fueron in vitro, cabe la pososibilidad que el comportamiento en campo cambie totalmente, puesto que los factores abióticos alteran negativa o positivamente las interacciones, por eso se hace necesario seguir evaluando estos micooranismos en un posterior estudio in situ.
INHIBICIÓN
CEPAS TSPBT07-01 TSEBT04-03 TSPBT01-02 TSPBT02-01 TSPBT02-04 TSEBT01-03 TSEBH01-01 TSEBR01-01 TSEBFL01-01 TSEHH03-01 TSEHR01-04 TSPBT 07-01 + + - - + + + + + + TSEBT 04-03 + + + + + + + + + + TSPBT 01-02 + + - + + - - + + + TSPBT 02-01 - + + + + + + + + + TSPBT 02-04 - + + + + + - + + + TSEBT
01-03 + + + + + + - + + +
TSEBH
01-01 + + + + + + + + + +
TSEBR
01-01 + +
6 ENSAYO DE SINERGISMO A LOS CONSORCIOS MICROBIANOS ESTABLECIDOS
6.1. Solubilización de fosfatos
La evaluación de sinergimo a partir de solubilización de fosfatos permitió evidenciar que las combinaciones presentaron el 34,37% de sinergismo dando como resultado la potencialización de las actividades de estos microorganismos al encontrarse en conjunto, el 43,75% corresponde a los consorcios que disminuyeron su actividad y el 21,8% mantuvieron el rango promedio de la actividad individual con respecto en consorcio.
Figura 8 Evaluación de las actividades que presentaron las mezclas con respecto a la actividad promedio
Las mezclas que presentaron mayor actividad de destacan C2, C6, C11 demostrando un aumento en sus actividades con respecto a lo realizado por individual representando el 37,34% de aumento y los consorcios que disminuyeron su actividad corresponden a las mezclas C1, C8, C9, C10, C12, C13, C14, C17, C18, C20, C23, C24, C25 Y C30, los demás estuvieron en promedio con respecto a su promedio individual. Los resultados evidenciados en esta investigación se asimilan a la investigación realizada por (Mantilla C y Negrete P, 2015) en la evaluación de consorcios con efecto bioinoculantes, en donde señala que los resultados de la prueba demostraron que los índices de solubilización de fosfato de algunos consorcios fueron mayores en comparación con las cepas individuales, demostrándose un efecto sinérgico favorable.
El sinergismo positivo entre las cepas de este estudio fue dado por el aumento de la solubilización trabajado en conjunto y se debe a que comparten una compatibilidad metabolica en conjunto, donde se benefician de las actividades de los demás, reflejando intyeracciones sintróficas en el que el crecimiento y el flujo continuo de nutrientes se conduce más efectiva y eficientemente que en las poblaciones individuales (López, T et al., 2007)
Figura 9 Diagrama de caja de las diferencias de solubilización de fosfatos en mezcla con respecto al
promedio de la solubilización individual.
fosfatos en más del 40% de las combinaciones (Figura 8). Los anteriores resultados concuerdan con los datos encontrados por Hernández A, (2016) en el cual realizó la evaluación de cepas aisladas de sacha inchi donde puntualiza que la acción de dos o más microorganismos que actuaron en conjunto, registraron una respuesta mayor a la suma de los efectos que expresan por separado, los de más consorcios efectuaron una solubilización de fosfatos menor del 41 mg/L. no discriminando su efecto en consorcio, puesto que su actividad aumentó considerable en relación de la actividad independiente, y en algunos casos manteniendo o disminuyendo el potencial de interés; siendo esto similar a lo reportado por (Subba, 1992) donde la solubilización de fosforo en cepas de Rhizopus spp
los hongos fue significativo debido a la producción de enzimas fosfatasas y la interacción simultanea junto al principal mecanismo microbiológico por el cual los compuestos fosfatados son solubilizados es la disminución del pH del medio extracelular hasta valores aproximados a 2, 0 que son necesarios para que se pueda llevar a cabo la solubilización. Este fenómeno se origina debido a la liberación de ácidos orgánicos de bajo peso molecular por parte de los microorganismos, cuyas propiedades quelantes favorecen la formación de complejos insolubles con metales, con la consecuente liberación del fosfato (Beltrán, 2014).
6.1.1 Produccion de sustancias acido indol acético.
En el presente estudio se evaluó la biosíntesis de ácido indol acético (AIA) a 32 conformaciones microbianas, mediante la reacción colorimétrica de Salkowsky, y el indice de variación de la actividad, encontrándose rangos de concentraciones de 7, 0 a 34,0mg/L (Figura 10).
Figura 10 Evaluación de las actividades que presentaron las mezclas con respecto a la actividad promedio
Los resultados mostraron que las combinaciones presentaron el 34,38% de sinergismo dando como resultado la potencialización de las actividades de estos microorganismos al encontrarse en conjunto, el 37,5% corresponde a las mezclas que mantuvieron el rango promedio de su actividad y el 28,13% disminuyó la actividad en la mezcla con respecto a producción promedio individual. Los consorcios significativos en la producción sustancias indólicas se destacaron los siguientes: C2, C5, C6, C8, C19, C20, C21, C22, C24, C31 Y C32 (Figura 10). La producción máxima en el consorcio 20 reportando 34,05 mg/L y el consorcio 19 dando concentraciones de 31,25 mg/L, el consorcio con menor producción de AIA fue el C17, en donde mantuvo el rango de la actividad inicial (Figura 10).
Los microorganismos que tuvieron significancia en el aumento de la actividad productora de (AIA) Fueron TSPBT07-01, TSEBT04-03, TSPBT02-04, TSEBT01-03 y los hongos TSEHH03-01 y TSEHR01-04 participando cada uno de por lo menos en 5 y 7 combinaciones.
Figura 11 Diagrama de caja de las diferencias de producción de sustancias indólicas (AIA) en consorcios
con respecto al promedio de la producción individual.
La cepa bacteriana TSPBT02-04 estuvo presente en 7 combinaciones y de acuerdo con el diagrama de caja estaditico (Figura 11) esta cepa aumento la actividad en los consorcios que aumentaron aumentraon significativamente la actividad (Figura 13).
altas concentraciones inhiben y reducen la zona de alargamiento en la planta (Rodríguez et al., 2005; Hernández, 2002). El ácido indol acético (AIA) es la auxina más ampliamente distribuida en las plantas; los efectos demostrados en investigaciones llevadas a cabo contemplan, entre otras, la elongación, aumento en la respiración celular, promoción del crecimiento en raíces o incremento en la división celular, factores que favorecen el desarrollo vegetal. Las aplicaciones de inoculantes microbianos (biofertilizantes), en los cultivos cada día van en aumento debido a que sustituya en parte o totalmente la utilización de fertilizantes para disminuir los problemas ambientales y aprovechar los productos que conserven los ecosistemas naturales. La utilización de microorganismos con potencial biofertilizante productores de AIA ha demostrado ser eficientes gracias a que pueden aumentar los rendimientos y la calidad de las cosechas; así lo han demostrados los trabajos en campo realizado en Colombia (Moreno et al., 2006; Montoya, 2004).
Tal como se demostró en los resultados de los ensayos de sinergismo muestran índices de variación de actividad significativos de acuerdo con los resultados de la actividad por individual de solubilización de fosfatos y producción de sustancias indólicas de cada cepa de ensayo reportado por (Santos D, 2016). A partir de las pruebas de antagonismo se conformaron 32 mezclas.
CONCLUSIONES
Se evidencio que en promedio el 18,2 % de los microorganismos evaluados presentan actividad antagonica y que el 81% promedio son compatibles.
Se determinó mediante pruebas de antagonismo y bajo el criterio de inhibición de crecimiento que el asilado microbiano TSEBR01-01 presento mayor inhibición (36,4%) en los enfrentamientos y su frecuencia represento en más del 50%.
Se determinó el sinergismo entre los aislados de sacha inchi mediante el aumento de las actividades o tasa de variación de la actividad de interés como la solubilización de fosforo y producción de sustancias indólicas en los consorcios C2, C6, C21 Y C31.
Se determino que las combinaciones realizadas presentaron un 35,98% de sinergismo aumentando la actividad, el 35,94% de las combinaciones disminuyeron sus actividades y solo el el 26,65% mantuvieron el promedio de las actividades frente al pronmedio individual.
Anexos
Tabla 7 Microorganismos con actividad promotoras de crecimiento vegetal individual
Fuente: Santos D, 2016
Tabla 8 Conformación de 32 consorcios de acuerdo con ensayos de antagonismo.
Fuente: Autor
PRODUCCIÓN [AIA]mg/L SOLUBILIZACIÓN [PO4]mg/L
TSPBT07-01 7,51 31,88
TSEBT04-03 X 39,3
TSPBT01-02 18,29 X
TSPBT02-01 9,9 X
TSPBT02-04 3,37 46,48 TSEBT01-03 X 38,38 TSEBH01-01 X 42,98 TSEBR01-01 10,42 X TSEBFL01-01 13,74 X TSEHH03-01 X 18,74 TSEHR01-04 X 24,94
MICROORGANISMO
BACTERIAS
HONGOS
CONSORCIO
1 TSEBT04-03 TSPBT01-02 TSEHH03-01
2 TSEBT04-03 TSPBT02-04 TSEHH03-01
3 TSPBT01-02 TSEBT01-03 TSEHH03-01
4 TSPBT01-02 TSEBT01-03 TSEHR01-04
5 TSPBT07-01 TSPBT01-02 TSEHH03-01
6 TSPBT07-01 TSPBT01-02 TSEHR01-04
7 TSEBT04-03 TSEBR01-01 TSEHH03-01
8 TSEBT04-03 TSEBR01-01 TSEHR01-04
9 TSEBH01-01 TSEBFL01-01 x
10 TSEBH01-01 TSEBR01-01 TSEHH03-01
11 TSEBH01-01 TSEBR01-01 TSEHR01-04
12 TSEBH01-01 TSEBT01-03 TSEHH03-01
13 TSEBH01-01 TSEBT01-03 TSEHR01-04
14 TSPBT02-01 TSEBH01-01 TSEHH03-01
15 TSPBT02-01 TSEBH01-01 TSEHR01-04
16 TSPBT01-02 TSEHH03-01 TSEHR01-04
17 TSPBT07-01 TSEBH01-01 TSEHH03-01
18 TSPBT07-01 TSEBH01-01 TSEHR01-04
19 TSPBT01-02 TSPBT02-04 TSEHH03-01
20 TSPBT01-02 TSPBT02-04 TSEHR01-04
21 TSPBT02-04 TSEBT01-03 TSEHH03-01
22 TSPBT02-04 TSEBT01-03 TSEHR01-04
23 TSEBT04-03 TSPBT02-04 TSEBFL01-01
28 TSEBT04-03 TSPBT02-01 TSEBFL01-01
25 TSEBT04-03 TSPBT02-01 TSEHH03-01
26 TSPBT02-01 TSEBT01-03 TSEHH03-01
27 TSPBT02-01 TSEBT01-03 TSEHR01-04
24 TSPBT07-01 TSEBH01-01 TSEBFL01-01
29 TSPBT02-04 TSEBH01-01 TSEHH03-01
30 TSPBT02-04 TSEBH01-01 TSEHR01-04
31 TSPBT07-01 TSPBT02-04 TSEHH03-01
32 TSPBT07-01 TSPBT02-04 TSEHR01-04
Figura 12 Concentración de solubilización de fosfato (PO4 mg/L) en los consorcios conformados.
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